柠檬苦素对溃疡性结肠炎大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制

目的探究柠檬苦素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制。方法构建UC大鼠模型,将建模成功的70只大鼠随机分为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组(12.5、25、50 mg/kg)以及柳氮磺胺吡啶组(阳性对照组,500 mg/kg),每组14只;另取14只大鼠作为对照组。各组大鼠灌胃相应药液或等量生理盐水,每天1次,连续2周。末次给药结束24 h后,观察大鼠一般情况并称重,取结肠组织进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;检测大鼠结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察大鼠结肠组织病理学变化;检测大鼠结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达水平;基于16S rRNA检测大鼠肠道菌群的相对丰度。结果与对照组相比,模型组大鼠精神状态不佳、皮毛较暗、情绪烦躁易发怒,结肠组织腺体排列杂乱,出现炎症细胞浸润和细胞坏死、水肿现象;CMDI评分和结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,HMGB1、RAGE蛋白表达水平以及肠道变形菌门、拟杆菌门菌群的相对丰度均显著升高(P<0.05);体重和结肠组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达水平以及肠道厚壁菌门菌群的相对丰度均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,柠檬苦素各剂量组大鼠一般情况和结肠组织病理损伤均改善,上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05);柳氮磺胺吡啶组与柠檬苦素高剂量组大鼠各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柠檬苦素可改善UC模型大鼠肠道损伤及肠道菌群紊乱,其作用机制可能与下调HMGB1/RAGE信号通路活性有关。

基于STAT3信号通路研究柠檬苦素对胃癌模型小鼠免疫因子表达的影响

目的 分析柠檬苦素对胃癌小鼠模型免疫因子表达的影响并探索其作用机制。方法 选取50只SPF级小鼠,随机分为5组各10只,构建MFC胃癌荷瘤模型,建模成功后随机分为模型组、阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组并给予对应药物灌胃,1次/d,连续14 d。计算脾指数、胸腺指数及抑瘤率;流式细胞术检测CD4^(+)、CD8^(+) T细胞及其比值;酶联免疫吸附试验检测血清免疫因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ的表达水平;免疫组化法检测胃癌组织磷酸化信号转导与转录激活因子(p-STAT3)、基质金属蛋白酶(MMP)-9阳性表达率;Western印迹法检测胃癌细胞STAT3磷酸化水平。结果 与模型组相比,阳性对照组脾指数、胸腺指数显著降低(P<0.05),柠檬苦素低、中、高剂量组脾指数、胸腺指数显著升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、柠檬苦素低、中、高剂量组抑瘤率均显著增加(P<0.05)。柠檬苦素低、中、高剂量组CD4^(+)、CD8^(+) T淋巴细胞百分数和CD4^(+)/CD8^(+)比值较模型组显著上升(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组IL-2、IL-10水平显著下降,IFN-γ显著上升(P<0.05);而柠檬苦素低、中、高剂量组IL-2、IFN-γ水平显著增加,IL-10显著降低(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组p-STAT3、MMP-9的阳性表达率均显著下降(P<0.05)。与模型组相比,阳性对照组及柠檬苦素低、中、高剂量组第705位点酪氨酸的磷酸化STAT3蛋白(pTyr^(705)-STAT3)水平均显著降低(P<0.05)。结论 柠檬苦素能抑制胃癌小鼠模型肿瘤组织的发展,这与其提高小鼠免疫水平与抑制STAT3通路激活密切相关。

天然低共熔溶剂提取柑橘籽类柠檬苦素的工艺优化

为建立柑橘籽中柠檬苦素类化合物的绿色环保提取方法,该研究制备了13种天然低共熔溶剂,并对其理化性质进行了测定。采用超声辅助提取法从柑橘籽中提取柠檬苦素类化合物,并应用超高效液相色谱检测3种主要的柠檬苦素类化合物(柠檬苦素、诺米林和黄柏酮)。与传统乙醇溶剂(体积分数80%)相比,由氯化胆碱和甲酸(物质的量之比1∶4)组成的天然低共熔溶剂具有较好的提取效率。在此基础上,采用响应面法对含水量、液固比、提取温度和提取时间进行优化。结果显示,含水量12%(体积分数)、液固比10∶1(mL∶g)、提取温度60℃、提取时间34 min为最佳提取工艺,类柠檬苦素得率为13.87 mg/g。该研究表明,制备的天然低共熔溶剂可以作为从柑橘籽中提取类柠檬苦素的替代溶剂,为进一步应用天然低共熔溶剂从天然产物中提取生物活性物质提供参考。

分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定不同品种柑橘果实不同部位中3种柠檬苦素类似物的含量

提出了分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定4个品种柑橘果实的4个部位(油胞层、白皮层、囊衣、果肉)中柠檬苦素、诺米林、黄柏酮含量的方法。取5.0 g均质后的样品,加入5 mL水,涡旋混匀后加入20 mL体积比5∶5的丙酮-乙腈混合溶液,混匀后超声提取10 min,离心5 min。用3 mL水活化2 g EMR-Lipid吸附剂,加至上清液中,涡旋30 s,加入5 g质量比1∶4的氯化钠-硫酸镁混合物和15 mg石墨化碳黑,迅速摇匀后离心1 min。吸取全部上清液,于40℃氮吹至近干,残渣用10.0 mL体积比9∶1的0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液和乙腈的混合溶液复溶,过0.22μm滤膜,滤液按照优化的仪器工作条件测定。进行色谱分析时,以CAPCELL PAK ADME HR色谱柱作固定相,以不同体积比的0.1%甲酸溶液和乙腈的混合溶液作流动相进行梯度洗脱分离;进行质谱分析时,以电喷雾离子源正离子(ESI+)和多反应监测(MRM)模式检测。结果显示:3种柠檬苦素类似物的质量浓度在0.10~10.0 mg·L^(-1)内和对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)均为0.01 mg·kg^(-1);按标准加入法进行回收试验,回收率为83.1%~90.5%,测定值的相对标准偏差(n=6)为2.6%~5.6%;方法用于30个实际样品的分析,柠檬苦素类似物在不同品种柑橘果实及其不同部位中的含量分布差异显著,柚类品种中柠檬苦素类似物总测定值较高且主要分布在囊衣部位,其他品种主要分布在白皮层和油包层。

光谱法结合分子对接技术研究柠檬苦素与牛血清白蛋白的相互作用

为研究柠檬苦素(Limonin,LM)与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)相互作用,本文采用紫外光谱法、荧光光谱法及分子对接技术研究LM与BSA的相互作用机制。结果表明:LM能有效淬灭BSA的内源荧光,其淬灭类型为静态淬灭;两者发生相互作用可形成1个结合位点,分子间作用力主要为氢键和范德华力,该相互作用过程为自发反应;紫外光谱及同步荧光光谱表明,LM与BSA发生相互作用后,可以增加BSA上酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)残基微环境的疏水性;通过竞争位点实验及分子对接,发现LM与BSA的结合位点在siteⅠ附近,LM可以与BSA上的Trp-213形成氢键,与Tyr-340/451等残基之间存在范德华力。

柠檬苦素白蛋白纳米粒制备工艺优化及其分子表征

[目的]构建柠檬苦素白蛋白纳米粒,为进一步应用柠檬苦素提供理论依据。[方法]以牛血清白蛋白为纳米载体,通过去溶剂化—化学交联法制备柠檬苦素白蛋白纳米粒,以包埋率为指标,通过单因素试验和响应面试验确定最佳制备工艺,并对纳米粒进行表征。[结果]当牛血清白蛋白添加量为64 mg,柠檬苦素添加量为4 mg,醇水体积比为5∶1,交联剂添加量为125μL时,交联固化后得到的柠檬苦素白蛋白纳米粒平均粒径为(152.2±0.5)nm,多分散指数为0.196±0.026,包埋率为(79.21±0.36)%;通过低压透射电子显微镜观察到的柠檬苦素白蛋白纳米粒呈现圆球形,而傅里叶红外光谱及X射线衍射结果表明柠檬苦素以无定型或者无序状态被成功包裹在白蛋白中;该柠檬苦素白蛋白纳米粒悬浮液具有良好的贮藏稳定性。[结论]采用去溶剂化—化学交联法制备的柠檬苦素白蛋白纳米粒贮藏稳定性良好。

HPLC法测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

目的:建立用高效液相色谱法(HPLC)测定泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三种成分的含量。方法:色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6×250mm,5μm),流动相:A乙腈,B甲醇,C 0.05%磷酸溶液,各流动相配比为30∶20∶50,流速:1.000mL·min^(-1),检测波长:215nm,柱温:30℃。结果:柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱三者依次在0.1303~1.6291μg(r=0.9995)、0.0500~0.6251μg(r=1.0000)、0.0354~0.4429μg(r=0.9999)范围内与其峰面积有良好的线性关系,且三者的平均加样回收率和RSD值分别为100.11%(RSD=0.7%)、100.74%(RSD=1.4%)和99.39%(RSD=1.3%)。结论:该方法操作简单,结果稳定,有着高准确度,适用于泡吴茱萸中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的测定。

柠檬苦素类化合物生物活性研究进展

柠檬苦素类化合物是一类高度氧化的四环三萜类次生代谢产物,主要存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)植物中,包括柠檬苦素、诺米林和黄柏酮等物质。本文对柠檬苦素类化合物的生理活性进行概述,总结其各类生物学活性及作用机制,为柠檬苦素进一步用于健康保护、食品开发和农业生产等提供参考。

柠檬苦素对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响及机制研究

目的探讨柠檬苦素(Limonin)对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响及机制。方法采用改良Hulth法制备KOA大鼠模型,造模成功后将大鼠分为模型组、硫酸氨基葡萄糖组、柠檬苦素低剂量组和柠檬苦素高剂量组,另设置假手术组,每组10只。灌胃给予硫酸氨基葡萄糖或柠檬苦素,1次/天,连续8周。测量膝关节肿胀程度;HE染色观察软骨组织病理改变,并进行Mankin’s评分;ELISA检测滑膜液中IL-1β、TNF-α及MMP-13水平;实时荧光定量PCR、Western blot检测软骨组织中TLR4、MyD88及NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠软骨细胞排列紊乱,边缘结构破坏严重,Mankin’s评分显著升高(P<0.01),膝关节肿胀明显(P<0.01),滑膜液中IL-1β、TNF-α及MMP-13水平显著增加(P<0.01),软骨组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,柠檬苦素低、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组大鼠软骨细胞分布偶见不均,但结构趋于正常,Mankin’s评分均显著降低(P<0.05),膝关节肿胀改善明显(P<0.05),滑膜液中IL-1β、TNF-α及MMP-13水平均显著降低(P<0.05),软骨组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论柠檬苦素能明显改善KOA大鼠关节软骨损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

柑橘中类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术研究进展

柑橘是世界第一大类水果,每年有大量的柑橘加工副产品产生,这些副产品中含有丰富的类柠檬苦素化合物,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种生理作用,已被应用于食品、医药和农业等领域。开发高效的类柠檬苦素提取、分离纯化技术,研发快速的类柠檬苦素分析检测方法,有着重要的理论和实践价值。本文介绍了柑橘中类柠檬苦素结构特征及含量,重点综述了类柠檬苦素的提取、分离纯化及检测技术。总结发现新兴技术如超声辅助、超临界流体提取类柠檬苦素的提取效率较好,联合应用大孔树脂吸附、高速逆流色谱、制备型高效液相色谱法分离效果好。在检测技术方面,液相色谱是柑橘中类柠檬苦素使用最广泛的分析方法,可以准确检测出柑橘中所含类柠檬苦素的种类和含量,但高效、绿色、快速的前处理技术和便捷、高通量的检测技术还有待开发。本文为柑橘中类柠檬苦素的深入研究和综合开发利用提供参考,为促进柑橘副产物资源的利用提供依据。

柠檬苦素的苯甲酰腙衍生物在治疗细粒棘球蚴的应用

柠檬苦素存在的水溶性不佳的问题,极大影响了该化合物的生物利用率。为解决其水溶性不佳的问题,本研究在柠檬苦素的C-7处引入水溶性的苯甲酰腙基团。与柠檬苦素单体相比,合成的化合物在体外抗细粒棘球蚴原头节的活性有一定程度的减弱,但可以通过在合成化合物的苯环上引入吸电子基团,来提高母核的抗细粒棘球蚴原头节的活性。其中化合物7m的体外抗细粒棘球蚴原头节的活性与柠檬苦素相当,且水溶性比柠檬苦素更佳。

井冈蜜柚果实中3种柠檬苦素类化合物含量分析

建立了柚类果实中柠檬苦素、诺米林、黄柏酮3种柠檬苦素类化合物的液相色谱-串联质谱检测方法,分析了井冈蜜柚果实中3种柠檬苦素类化合物含量以及金沙柚成熟期前后果实中3种柠檬苦素类化合物的含量变化规律。样品经乙腈超声提取后定容,通过Agilent Eclipse Plus C_(18)色谱柱分离,液相色谱-串联质谱法测定。结果表明,3种柠檬苦素类化合物在各自范围内线性关系良好,相关系数大于0.99,添加回收率为81.47%~98.75%,相对标准偏差为1.82%~9.22%。不同品种柚类果实中3种柠檬苦素类化合物含量存在较大差异,井冈蜜柚果实中3种柠檬苦素类化合物含量高于其他柚类,且柠檬苦素和诺米林含量高于黄柏酮含量;金沙柚成熟期内柠檬苦素含量先增加后减少,诺米林含量逐渐减少,黄柏酮含量先增加后减少,3种物质整体变化幅度较小。本研究可为井冈蜜柚品质评价及苦味物质的开发利用提供理论基础。

柠檬苦素磷脂复合物制备及其体内药动学研究

目的制备柠檬苦素磷脂复合物,并考察其体内药动学。方法采用溶剂挥发法制备磷脂复合物。以磷脂用量、制备温度、制备时间为影响因素,复合率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。X射线粉末衍射、扫描电镜分析磷脂复合物存在状态,测定其油水分配系数。将磷脂复合物制成油制剂,考察其稳定性。12只大鼠随机分为2组,分别灌胃给予柠檬苦素及其磷脂复合物的0.5%CMC-Na混悬液(60 mg/kg),于0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、16 h采血,LC-MS法测定柠檬苦素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳条件为柠檬苦素用量80 mg,磷脂用量142 mg,制备温度47℃,制备时间4.5 h,平均复合率达99.6%。柠檬苦素在磷脂复合物中以无定形状态存在,油水分配系数升高,油制剂中柠檬苦素含量在6个月内无明显变化。与原料药比较,磷脂复合物t_(max)延长(P<0.05),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度增加至5.98倍。结论磷脂复合物可有效改善柠檬苦素口服吸收,其油制剂稳定性良好。

柠檬苦素通过激活AMPK减轻高脂饲料诱导的小鼠肾损伤

旨在研究柠檬苦素(Limonin,LM)对高脂饲料诱导的小鼠肾损伤的保护作用。选用体重21~23 g雄性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组(n=5):对照组、LM组、高脂组、高脂+低剂量LM组(60 mg·(kg·d)^(-1))和高脂+高剂量LM组(120 mg·(kg·d)^(-1))。12周后称量各组小鼠体重;使用自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);使用试剂盒检测肾组织TG、TC;通过苏木精-伊红(HE)、糖原(PAS)染色观察肾组织病理组织学变化;通过免疫组织化学检测肾中脂肪酸合成酶(FAS)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白含量;通过蛋白免疫印迹检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化的AMPK(P-AMPK)、FAS、SREBP1、ATGL、HSL及肾损伤分子1(KIM1)的表达;通过分子对接检验LM、阿卡地新(AICA Riboside,AICAR)以及多索吗啡(Dorsomorphin,Compound C)与AMPK蛋白结合能力。结果显示,与高脂组相比,LM干预显著降低了小鼠血清和肾中甘油三酯含量(P<0.05),改善了高脂饲喂引起的肾组织病理学损伤,促进AMPK磷酸化(P<0.05),显著上调ATGL、HSL蛋白的表达(P<0.05),抑制SREBP1、FAS蛋白的表达(P<0.05)。分子对接结果显示LM能与AMPK紧密结合且存在多个与AICAR结合AMPK的相同位点。结果提示,LM通过激活AMPK减轻肾脂肪异位沉积从而改善高脂饲料诱导的小鼠肾损伤。

柠檬苦素诱导塔宾曲霉UA13高产柠檬苦素转化酶的研究

以柠檬苦素为代表的三萜化合物是柑橘类水果在加工过程中产生“后苦味”的主要原因,采用酶法转化使柠檬苦素的含量降低是目前较适合果汁加工业的方法。该研究以实验室前期分离并经等离子体(atmospheric room temperature plasma,ARTP)诱变获得的塔宾曲霉UA13为出发菌株,采用柠檬苦素作为诱导物对其进行产酶诱导,并对菌株的发酵产酶工艺和酶的底物亲和性进行研究。结果表明,在1 L发酵罐培养基中,接种量10%(体积分数)、初始pH值5.0、搅拌转速250 r/min、30℃的最适条件下发酵,柠檬苦素转化酶活力最高可达48.52 U/mL。酶对柠檬苦素的底物亲和性研究结果表明,柠檬苦素转化酶的K m值为0.622 mmol/L,说明诱导后的菌株UA13所产酶对柠檬苦素的亲和力增强。同时研究结果显示,柠檬苦素转化酶具有较好的耐热性和耐酸性,在柑橘果汁加工业中具有非常好的应用前景。

柠檬籽中类柠檬苦素反胶团萃取工艺优化及抑菌活性分析

目的 探究羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose, HPMC)辅助反胶团萃取柠檬籽中类柠檬苦素的可行性,并对提取物质的抑菌活性进行分析。方法 以初提液中类柠檬苦素含量为响应值,通过正交试验确定初提液制备的最优参数;以Placktett-Burman(P-B)试验筛选影响类柠檬苦素反胶团萃取效率的主要因素,并结合Box-Behnken(B-B)试验确定最优工艺条件;通过测定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)活性考查类柠檬苦素对青霉菌和绿霉菌的抑菌活性。结果 初提阶段影响类柠檬苦素提取效率的最优条件为提取时间1.5 h、液料比30:1(mL/g)、HPMC添加量0.5%、pH 6.5,该条件下提取率为(3.34±0.02) mg/g。P-B试验结合B-B试验结果表明,类柠檬苦素萃取的最优配方为双十八烷基二甲基氯化铵(dioctadecyl dimethyl ammonium chloride,DODMAC)44.29mmol/L、正己醇13.86%、溴代十四烷3.88%,校正工艺条件下类柠檬苦素萃取率达(87.64±1.12)%。抑菌试验表明,类柠檬苦素对绿霉菌的MIC和MBC分别为1250.00μg/mL、2500.00μg/mL,对青霉菌的MIC和MBC分别为1250.00μg/m L、5000.00μg/mL;通过测定AKP活力发现,当加入抑菌活性物质后,随着药物作用时间延长及药物纯度的提高,AKP活性逐渐增加。结论 通过HPMC辅助反胶团能有效提取柠檬籽中的类柠檬苦素,提取条件温和、提取效率高,该方法具有一定应用前景。采用该方法提取的类柠檬苦素对绿霉菌和青霉菌具有明显的抑制作用,其可通过破坏细胞壁扰乱细胞的正常生理活动,阻碍其正常生长。

川楝柠檬苦素类化学成分及其细胞毒活性研究

目的:研究川楝Melia toosendan Sieb.et Zucc.果实中的柠檬苦素类化学成分及其细胞毒活性。方法:采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶等多种柱色谱分离技术对川楝果实90%乙醇提取物进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构,利用MTT法测定10个化合物对不同肿瘤细胞的细胞毒活性。结果:从川楝果实的醇提物中分离得到10个柠檬苦素类化合物,分别鉴定为:sendanin(1)、1,7-diacetylsendanin(2)、1-acetylsendanin(3)、7-acetylsendanin(4)、pentaol(5)、meliarachin C(6)、12-O-acetylazedarachin B(7)、azedarachin B(8)、川楝素(9)、meliatoosenin D(10)。10个化合物对5株肿瘤细胞的体外增殖具有不同程度的抑制作用。结论:其中,化合物2~6为首次从该植物中分离得到,且化合物6、9、10对人胃癌细胞MGC803和人结肠癌细胞COLO205表现出较强的细胞毒活性。

柠檬苦素通过调节JAK2/STAT3信号通路对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨柠檬苦素调节JAK2/STAT3信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响。方法CCK-8法检测不同浓度的柠檬苦素(0、5、10、25、50、75、100µmol/L)干预对A549细胞存活率的影响;将A549细胞分为NC组(正常培养)、柠檬苦素低剂量组(10µmol/L柠檬苦素干预细胞24 h)、柠檬苦素中剂量组(25µmol/L柠檬苦素干预细胞24 h)、柠檬苦素高剂量组(50µmol/L柠檬苦素干预细胞24 h)、Coumermycin A1组(10μmol/L JAK2激活剂Coumermycin A1+50μmol/L柠檬苦素干预细胞24 h)、AG490组(10μmol/L JAK2抑制剂AG490+50μmol/L柠檬苦素干预细胞24 h);克隆形成实验检测各组细胞克隆情况;Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、E-Cadherin、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达情况。结果与0μmol/L柠檬苦素组相比,A549细胞存活率呈柠檬苦素浓度依赖性降低(P<0.05),IC50为(45.16±1.66)μmol/L,选择10、25和50μmol/L进行后续实验;与NC组相比,柠檬苦素低、中、高剂量组A549细胞克隆数、迁移和侵袭数以及IL-6、p-JAK2、p-STAT3、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达降低,细胞凋亡率和E-Cadherin蛋白表达升高(P<0.05);JAK2激活剂Coumermycin A1减弱了柠檬苦素对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的抑制能力,减弱细胞凋亡能力;JAK2抑制剂AG490增强了柠檬苦素对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的抑制能力,增强了细胞凋亡能力。结论柠檬苦素可通过抑制JAK2/STAT3通路进而抑制NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为。

柠檬苦素体外代谢的种属差异

目的研究柠檬苦素代谢的种属差异,为柠檬苦素体内代谢研究提供实验动物选择的依据。方法代谢组用人、狗、猪、猴、兔、大鼠、小鼠7种肝微粒体分别与柠檬苦素孵育。对照组用灭活的肝微粒体与柠檬苦素孵育。空白组不加柠檬苦素。用高效液相紫外检测器检测柠檬苦素标准品溶液和上述样品,观察代谢组样品有无代谢产物峰。通过酶动力学实验结果计算不同种属肝微粒体酶对柠檬苦素的清除率。用高效液相高分辨质谱检测器检测代谢产物,推测代谢产物结构及反应类型。结果HPLC图谱显示人、犬、猪、兔、大鼠、小鼠有共同的代谢产物峰M1(RT13.3min);大鼠还有两个代谢产物峰M2(RT10.6min)和M3(RT8.6 min);猴的代谢产物峰为M4(RT8.1 min)和M5(RT10.1 min)。柠檬苦素在人、犬、猪、大鼠、小鼠肝微粒体中的清除分别为0.608、0.454、0.501、4.249、1.831μL/(min·mg)。高分辨质谱检测结果推测M1为柠檬苦素的C-16位羰基被还原为羟基的化合物。结论猪、犬、大鼠、小鼠清除率与人类接近。我们推测柠檬苦素的人肝微粒体酶主要代谢产物是其16位碳羟基化化合物。

类柠檬苦素生物转化与脱苦研究进展

类柠檬苦素中柠檬苦素的苦味是世界柑橘属果汁加工业的一大障碍,类柠檬苦素生物脱苦法是目前改善苦味的首选方法。本文主要概述类柠檬苦素的结构与分类、自然生物转化与"后苦"现象、酶法脱苦、固定化细胞脱苦和基因工程脱苦等方面的国内外研究进展。