基于心脾相关理论从脾论治柯萨奇病毒B3感染的病毒性心肌炎

病毒性心肌炎是年轻人心源性猝死、扩张型心肌病和急性心力衰竭的常见原因之一,目前缺乏针对柯萨奇病毒B3感染的病毒性心肌炎的特异性治疗方法。中医学认为心与脾五行相关、经脉相通、功能相济、共调神志、气机升降相因,在生理、病理等方面关系密切。基于心脾相关理论,结合现代医学对柯萨奇病毒B3感染的病毒性心肌炎的研究进展,探讨柯萨奇病毒B3感染的病毒性心肌炎的中医病机并针对该病机提出相应的治法,从而为中医药防治柯萨奇病毒B3感染的病毒性心肌炎提供思路和措施。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的 以HeLa细胞为模型，观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m（CVB3m）的作用。方法 ①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性。②用细胞病变效应（CPE）抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用。③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用：在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1h，加入不同浓度的槐果碱，并设立病毒、细胞、槐果碱对照，培养15h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数。结果 ①槐果碱稀释到〈391μg／mL，对HeLa细胞无毒性；≥783μg／mL引起HeLa细胞CPE。②槐果碱6．25～50μs／mL有直接抗病毒作用，减轻CPE；〉100μg／mL反而会加重、加快CPE。③槐果碱1．56～25μg／mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用，用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加（P〈0．05）；槐果碱在50、100μg／mL时反而加重病毒对细胞的抑制，使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降（P〈0．05）。结论 一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用，对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用。

黄芩茎叶提取物与生脉饮抗柯萨奇病毒B3的体外研究

目的:探讨黄芩茎叶提取物及生脉饮体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用。方法:应用细胞感染模型按照药物对Hela细胞及CVB3不同作用方式设直接抗病毒作用组、增强细胞抗病毒作用组、对感染细胞保护作用组及正交设计组。采用光镜观察并结合MTT测定的方法进行综合判断。结果:与病毒对照组比较黄芩茎叶提取物、生脉饮对细胞病变有抑制作用(P<0.05)。结论:黄芩茎叶提取物、生脉饮均有直接抗病毒作用以及对未感染或已感染Hela细胞的保护作用。生脉饮与黄芩茎叶提取物之间有交互作用。

空心莲子草微乳体外抗柯萨奇病毒B3的实验研究

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳的稳定性,通过细胞实验评价药物的抗病毒作用。结果:微乳的平均粒径为32 nm,具有很好的稳定性,有明显抑制CVB3的作用,治疗指数27.31。结论:空心莲子草微乳有显著的抗CVB3的作用,微乳化的空心莲子草安全性比未经微乳化的高。

雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达的调控作用

目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的心肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)表达的调控,探讨mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)的作用。方法:CVB3感染原代培养的SD大鼠心肌细胞建立病毒性心肌炎的细胞模型。根据细胞毒力实验筛选10 nmol/L的雷帕霉素干预CVB3感染的心肌细胞,采用RT-PCR和Western免疫印迹方法检测mTOR和eIF-4E mRNA表达及蛋白质水平。结果:CVB3诱导心肌细胞变性,雷帕霉素可减轻其变性;CVB3使大鼠心肌细胞的mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达上调,与对照组比较,有统计学差异(P<0.05),雷帕霉素可使CVB3感染的心肌细胞mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达明显下调,与CVB3组比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能明显抑制CVB3感染的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达,提示mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎中可能起重要作用。

柯萨奇病毒B3诱导的病毒性心肌炎C57BL/6J小鼠模型的建立

目的：建立由柯萨奇病毒B3（CVB3）Nancy株诱导的病毒性心肌炎（VMC）C57BL/6J小鼠模型。方法：4周龄、6周龄C57BL/6J小鼠各50只,每个年龄组随机选取15只作为对照（腹腔注射PBS）,剩余35只腹腔接种含CVB3 Nancy株的病毒悬液（1×10^5PFU/只）,于感染后第14天取心脏,行HE染色和CD3、CD45免疫组化染色,进行病理学评价,检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,并做心肌组织中病毒滴度检测,采用Western blot法检测磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β的表达。结果：4周龄小鼠造模过程中有19只（54.3%）死亡;与对照小鼠比较,模型小鼠心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和片状心肌细胞变性坏死,CD3、CD45阳性细胞弥漫浸润于心肌间质,血清IL-1β、TNF-α水平明显升高（P〈0.05）,心肌组织中磷酸化AKT、Ik Bα、GSK3β表达增高（P〈0.05）。6周龄小鼠造模过程中有3只（8.6%）死亡,模型小鼠心肌组织中炎症反应轻于4周龄模型小鼠（P〈0.05）。结论：成功建立了VMC的C57BL/6J小鼠模型,4周龄C57BL/6J小鼠更适用于模型的建立。

柯萨奇病毒B3的VP1 DNA疫苗与蛋白或重组腺病毒疫苗不同组合免疫方式的免疫效果观察

目的观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略的免疫效果。方法用CVB3VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强免疫2次。检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体、中和抗体滴度以及脾脏细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)杀伤活性;致死量CVB3攻击后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果 pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠血清IgG抗体、中和抗体滴度以及动物生存率明显高于pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05);pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠脾脏CTLs杀伤活性明显高于pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05)。结论质粒pcDNA3/VP1初次免疫后,VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略有较好的免疫效果,两者比较pcDNA3/VP1+VP1蛋白prime-boost免疫策略的效果更为明显。

柯萨奇病毒B3感染HeLa细胞后Bax和Bim的表达

目的:观察HeLa细胞感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后Bax和Bim mRNA和蛋白的表达。方法:将HeLa细胞分为未予以CVB3感染的对照组和予以CVB3感染的病毒组,取3 h、6 h、9 h、12 h和24 h的细胞,采用RT-PCR和Western blotting分别检测Bax和Bim mRNA和蛋白的表达。结果:Bax和Bim mRNA在对照组和病毒组HeLa细胞中均有表达,在病毒组和对照组中Bax和Bim mRNA的表达在各自组内均无显著差异(P>0.05),但在24 h Bax和Bim在病毒组mRNA的表达低于对照组(P<0.05)。Bax和Bim蛋白表达在对照组中各时点均有表达,但无显著差异(P>0.05)。病毒组Bax蛋白在24 h表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),且病毒组表达明显低于对照组(P<0.05);Bim蛋白的表达随感染时间延长而下降(P<0.05),9 h、12 h和24 h表达病毒组低于对照组(P<0.05)。结论:Bax和Bim在CVB3感染诱导的HeLa细胞凋亡早期发挥作用。

27种南药有效部位体外抗柯萨奇病毒B3活性测定

目的:探讨27种南药有效部位体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用。方法:采用观察细胞病变效应法(CPE法)检测10种南药(岗梅根、溪黄草、南板蓝根、叶下珠、叶下珠(广西)、两面针、广藿香、土牛膝、沙姜和青天葵)的27个有效部位在HeLa细胞中的抗CVB3活性,从中筛选出有抗CVB3活性的有效部位。结果:从27种有效部位中筛选出土牛膝的醋酸乙酯提取物和青天葵的甲醇提取物2种有抗CVB3活性的有效部位,其半数抑制浓度(IC50)分别为12.06 mg/L和77.67 mg/L。结论:27种南药有效部位中有2种具有抗CVB3活性。

小鼠β防御素2与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗的构建和免疫效果研究

目的:构建小鼠β-防御素2(Mouse beta-defensin-2,mBD2)与柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因疫苗,并观察其对小鼠的免疫效果。方法:克隆mBD2基因,构建重组质粒pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1。将4～6周龄BALB/c雄性小鼠随机分为5组,分别于股四头肌注射PBS(A组)、pcDNA3(B组)、pcDNA3/mBD2(C组)、pcDNA3/VP1(D组)、pcDNA3/mBD2-L-VP1(E组),每次接种剂量100μg/只,3周免疫1次,共3次。每次免疫后第14天眼眶静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价。第三次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞悬液,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度。结果:成功克隆了mBD2基因,构建了pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1两种重组质粒;D组和E组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P<0.01);E组血清中和抗体滴度和脾细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他组(P<0.01),血中CVB3病毒滴度显著低于其他组(P<0.01)。结论:pcDNA3/mBD2-L-VP1能诱导小鼠对CVB3产生较强的体液免疫和细胞免疫,能有效抑制病毒在体内增殖。

黄芪注射液联合左卡尼汀治疗柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎的临床研究

目的:探讨黄芪注射液联合左卡尼汀治疗柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎(CVB3-VMC)的效果。方法:选取2017年5月-2020年6月我院CVB3-VMC患者114例,按照随机数字表法分为研究组和对照组,每组57例。对照组予以左卡尼汀,研究组予以黄芪注射液配合左卡尼汀,均治疗4周。比较两组疗效、不良反应与治疗前后细胞免疫功能,IL-35以及sIL-2R炎性因子水平。结果:治疗4周后研究组总有效率高于对照组(92.98%vs 73.68%,P<0.05);研究组血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、NK细胞、IL-35水平均高于对照组且sIL-2R水平低于对照组(P<0.05);两组患者不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:黄芪注射液联合左卡尼汀治疗CVB3-VMC效果显著,且安全性较好。

益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB_3 mRNA复制及相关细胞因子的影响

[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制。[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平。[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌。益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3 mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P<0.01),同时低于利巴韦林组(P<0.05),均有统计学意义;D组、E组之间P>0.05,无统计意义。[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用。

四种靶向因子与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗免疫效果的比较

目的:比较巨噬细胞源趋化因子(MDC)、补体片段C3d3、志贺毒素B亚单位(STxB)和小鼠β-防御素2(mBD2)分别与柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1构建的融合基因疫苗及VP1基因疫苗对小鼠的免疫效果。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组22只,分别于股四头肌注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3、pcD-NA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1,接种剂量为每次100μg/只,3周免疫1次,共3次。每次免疫后第14天内眦静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体滴度。第3次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LDLD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度;其余小鼠以5LDLD50的CVB3攻击,观察各组的生存情况。结果:除了pcDNA3对照组,其他各组的中和抗体滴度均随免疫次数的增加而提高(P<0.01),第3次免疫后,pcD-NA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组的抗体滴度明显高于pcDNA3/VP1组(P<0.01);pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/mBD2-VP1组CTL杀伤活性显著高于其他各组(P<0.01)。致死量病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/VP1-C3d3和pcDNA3/mBD2-VP1组小鼠血中病毒滴度显著低于其他组(P<0.01);pcDNA3/MDC-VP1和pcD-NA3/VP1-C3d3组小鼠生存率显著高于其他各组(P<0.05)。结论:pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/VP1-C3d3能诱导出较强的体液免疫和细胞免疫,能有效降低血中病毒滴度,获得较高的小鼠生存率;整体效果优于其他组。

LY294002和Rapamycin对柯萨奇病毒B3诱导的HeLa细胞Bim和Bax表达的调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导细胞凋亡中的作用。方法体外培养的HeLa细胞通过CVB3感染建立病毒性心肌炎模型,根据细胞毒力实验筛选10 nmol/L的雷帕霉素(Rapamycin)和25μmol/L的PI3K抑制剂(LY294002)干预CVB3感染的HeLa细胞,采用RT-PCR和Western blot免疫印迹法检测Bim和Bax的mRNA及蛋白质表达。结果感染CVB3 12和24 h后,LY294002和Rapamycin促进CVB3诱导的HeLa细胞产生CPE。与Sham组比较,CVB3可以诱导Bim mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05),Bax mRNA表达早期降低而蛋白表达逐渐增强,而与对照组比较,LY294002和Rapamycin可以使Bim mRNA和蛋白的表达增强(P<0.05);LY294002使Bax mRNA表达逐渐减弱而蛋白表达逐渐增强,Rapamycin则使Bax蛋白表达随感染时间延长呈3 h增强(P<0.05),6和12h减弱,24 h增强的动态改变(P<0.05)。结论 PI3K和mTOR信号通路可能通过调控Bim和Bax的表达,在CVB3感染诱导的VMC中扮演重要角色。

柯萨奇病毒B3型诱导的免疫偏离与心肌炎发病关系的研究

目的研究2种近交系小鼠在柯萨奇病毒B3型(CVB3)感染后辅助性T细胞(Th)免疫偏离对心肌炎发病的影响。方法用CVB3腹腔感染BALB/c和C57BL/62种近交系小鼠,感染后7d通过检测小鼠血清肌酸激酶(CK)活性,观察心脏外观变化以及心脏石蜡切片H.E染色观察心脏病理改变,比较2种小鼠心肌炎的发病情况;通过体外感染心肌细胞观察病毒复制情况以及体内心脏组织病毒载量的分析,比较2种小鼠对病毒感染和复制的差异;通过检测感染小鼠细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-12和γ干扰素(IFN-γ)的表达,抗CVB3VP1抗体的亚型以及T-bet和Gata-3的表达,比较2种小鼠Th免疫偏离的情况。结果CVB3在体外和体内都可以感染BALB/c和C57BL/6小鼠心肌细胞,但仅BALB/c小鼠感染后可发生明显的病毒性心肌炎,C57BL/6小鼠则不能;BALB/c小鼠感染后表现为Th1型免疫反应而C57BL/6小鼠则偏向于Th2型免疫反应。结论CVB3感染2种品系小鼠表现为不同的心肌炎发生率,与其诱导了不同类型的免疫偏离密切相关。

鞘磷脂酶在柯萨奇病毒B3感染心肌细胞中的作用

目的检测柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞后鞘磷脂酶活性的变化、鞘磷脂酶mRNA、CVB3RNA的表达、病毒滴度的变化及心肌细胞表型的变化。初步探讨鞘磷脂酶在CVB3感染的心肌细胞中的作用。方法 CVB3感染心肌细胞后不同时间点,用薄层色谱法(TLC)检测鞘磷脂酶活性;用Real time-PCR检测心肌细胞中鞘磷脂酶mRNA与CVB3RNA的表达;同时取细胞培养上清液检测CVB3滴度。用Annexin V-FITC,PI双染法观察心肌细胞表型变化。设正常心肌细胞对照组,每个时间点设三个复孔。结果病毒感染组与正常心肌细胞相比,酸性鞘磷脂酶在4h、12h时活性有升高,其mRNA表达在2h时有升高趋势(P<0.05);中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶活性在4h时有明显升高,在12h时活性下降,而其mRNA表达在20h时升高(P<0.05);中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶活性于病毒感染后4h、12h无明显变化,其mRNA表达在各组间也无明显变化。心肌细胞内病毒RNA表达在4h时有升高趋势,8h后开始明显升高(P<0.01)。CVB3病毒滴度在2h时明显升高(P<0.05)。心肌细胞在病毒感染2h后早期凋亡及坏死开始增加,4h时凋亡坏死增加更明显,到24h时坏死心肌细胞明显增多。以上实验均重复3次。结论中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶与酸性鞘磷脂酶在CVB3侵入心肌细胞及病毒的扩散增殖过程中可能起重要作用;而中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶在此过程中可能不起作用。