柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠尿酸及相关酶活性的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对高尿酸血症大鼠体内尿酸水平及相关酶活性的影响。方法:柴胡皂苷D用0.9%氯化钠溶液溶解,配制成5、10、20 mg/mL药液。将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组及柴胡皂苷D大、中、小剂量组。除对照组外,其余大鼠每天上午灌胃腺嘌呤0.2 g/kg+乙胺丁醇0.25 g/kg,建立高尿酸血症模型。柴胡皂苷D各剂量组大鼠均以10 mL/kg的剂量灌胃给药,对照组大鼠与模型组大鼠灌胃同等剂量0.9%氯化钠溶液。检测给药前、给药后14、21、28 d大鼠血尿酸、尿尿酸以及黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)、肌酐和尿素氮的水平。结果:给药后21 d,与对照组比较,模型组大鼠血尿酸水平明显升高;与模型组相比,柴胡皂苷D中剂量组血尿酸水平显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);给药后28 d,与模型组相比,柴胡皂苷D大剂量组、中剂量组血尿酸水平显著下降,中剂量组及小剂量组大鼠尿尿酸水平显著降低;柴胡皂苷D各剂量组大鼠的ADA、XOD、肌酐及尿素氮水平均显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可以通过降低ADA以及XOD水平,抑制尿酸生成,起到降尿酸的作用,具有显著的肾脏保护功能。

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的:研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果:与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立100 mg/L PTX作为MCF-7/PTX细胞的给药质量分数。0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞无明显毒性,MCF-7/PTX细胞增殖抑制率随柴胡皂苷D质量分数增加而升高。与PTX组对比,0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D组MCF-7/PTX细胞IC 50、YAP和p-YAP蛋白、P-pg mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与PTX组对比,柴胡皂苷D处理的MCF-7/PTX细胞积累更多Rh123,降低Rh123外排速度(P<0.01)。结论:柴胡皂苷D可能通过下调Hippo/YAP通路逆转P-gp介导的乳腺癌耐药。

柴胡解表退热功效相关生物活性指标与柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量相关性分析

目的:寻找与柴胡解表退热功效相关的生物活性指标,并探明此功效的生物活性量化值与柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d (SSd)含量是否具有相关性。方法:采用临床煎药方式获得柴胡水煎液,并通过醇沉去除多糖和蛋白质等大分子物质,得到适宜体外实验的柴胡提取物。从抗炎、抗过敏、抗氧化应激及解热这4类与柴胡解表退热功效相关的体外模型中筛选量效关系明确的生物活性指标,并赋予各项指标不同的权重系数,对7个柴胡样品在各项指标上的作用强弱进行排序打分;分数与相应指标权重的积为该项得分;每项得分之和为该样品解表退热之生物活性量化值;采用CCK-8法检测细胞活力;Griss法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平;ELISA法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)及补体活化水平;铁离子还原能力法(FRAP)测定总抗氧化能力;高效液相色谱法测定柴胡中的SSa和SSd含量。结果:筛选得到4项关联柴胡解表退热功效的量效关系明确的生物活性指标,分别为脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO、LPS诱导THP-1细胞分泌TNF-α、总抗氧化能力及酵母多糖介导的替代途径补体活化。相关性分析显示,7个样品的SSa和SSd总量与解表退热的生物活性量化值不相关。结论:柴胡解表退热可能与其抑制促炎因子(NO)生成、压制内生性致热原(TNF-α)生成、抗氧化及抗补体C5a活化有关,而《中华人民共和国药典》 2020年版柴胡指标性成分SSa和SSd可能并非柴胡该功效的物质基础。

柴胡皂苷D诱导内质网应激增强胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的机制

目的探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D,SSD)联合替莫唑胺(temozolomide,TMZ)对神经胶质瘤细胞(glioblastoma,GBM)的协同增敏作用及分子机制。方法CCK-8法结合HE染色分析RG-2、U251、LN-4283种GBM细胞系对SSD、TMZ敏感性差异并筛选最佳配伍浓度。通过克隆形成实验、HE染色结合Hoechst荧光染色检测联合给药对GBM细胞增殖影响。单丹磺酰胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察GBM细胞自噬小体形成。Western blot结合ICC法检测内质网应激相关因子及凋亡、自噬蛋白表达与分布变化。结果GBM细胞对TMZ敏感性顺序为RG-2>U251>LN-428。SSD联合TMZ给药结果显示出对GBM细胞系增殖的协同抑制作用,并经细胞克隆形成实验证实。与TMZ组相比,Hoechst荧光染色显示联合给药组细胞核亮染数目明显增加。MDC荧光染色发现SSD/TMZ组胞质出现致密浓染绿色颗粒,且较TMZ组相比明显增多。Western blot结果显示,较TMZ组相比,SSD/TMZ组内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP、p-PERK、ATF6表达增高(P<0.05);凋亡蛋白caspase-12、caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax及自噬蛋白LC3、Beclin-1表达均明显增高(P<0.05)并经ICC实验验证。结论SSD可协同TMZ抑制GBM细胞增殖且诱导其发生凋亡与自噬,通过激活内质网应激途径提高GBM细胞对TMZ化疗敏感性。

柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路介导ICCs细胞自噬的机制

目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。

柴胡皂苷D抑制肝星状细胞活化及PSME3表达的实验研究

目的观察柴胡皂苷D对人肝星状细胞LX-2活化及蛋白酶体激活子亚基3(PSME3)mRNA和蛋白表达的影响,探讨柴胡皂苷D治疗肝纤维化的可能作用机制。方法将生长期良好的LX-2细胞分为正常组、模型组和柴胡皂苷D组,空白组不加药物,模型组以10 ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)处理,柴胡皂苷D组以1μmol/L柴胡皂苷D+10 ng/mL TGF-β1联合处理24 h,采用CCK8检测各组细胞活力,qPCR和Western blot检测纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(COL1A1)和PSME3 mRNA相对表达水平和蛋白表达量。结果与正常组比较,模型组细胞增殖活力显著增加(P<0.05),α-SMA、COL1A1和PSME3的mRNA表达水平和蛋白表达量均显著增加(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷D组细胞增殖活力下降(P<0.05),α-SMA、COL1A1和PSME3 mRNA表达水平和蛋白表达量均显著下降(P<0.05)。结论柴胡皂苷D对LX-2细胞活化有抑制作用,其机制可能与抑制PSME3 mRNA表达水平和蛋白表达量有关。

柴胡皂苷D调控miR-34a对胶质瘤细胞C6增殖与自噬的影响

目的:探讨柴胡皂苷D调控miR-34a对胶质瘤细胞C6增殖与自噬的影响。方法:分别以终浓度为0、3、6、9、12、15μmol/L的柴胡皂苷D作用胶质瘤细胞C6后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;Western blot和RT-qPCR检测胶质瘤细胞C6中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin1表达情况。将胶质瘤细胞C6分成4组:对照组(Control组)、柴胡皂苷D组(Ssd组)、柴胡皂苷D+miR-34a阴性对照转染组(Ssd+miR-34a NC组)、柴胡皂苷D+miR-34a inhibitor转染组(Ssd+miR-34a inhibitor组),CCK-8法检测miR-34a NC和miR-34a inhibitor在柴胡皂苷D处理后对胶质瘤细胞C6增殖能力的影响;Western blot检测各组胶质瘤细胞C6中自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达情况。结果:经过不同浓度的柴胡皂苷D处理48 h后,胶质瘤细胞C6增殖能力明显下降,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin1表达水平均升高(P<0.05);胶质瘤细胞C6中miR-34a表达水平升高(P<0.05)。转染后,Ssd组胶质瘤细胞C6增殖率、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin1表达水平与Ssd+miR-34a NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ssd组、Ssd+miR-34a NC组胶质瘤细胞C6增殖率低于Control组和Ssd+miR-34a inhibitor组,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin1表达水平均高于Control组和Ssd+miR-34a inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ssd+miR-34a inhibitor组胶质瘤细胞C6增殖率低于Control组,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值高于Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可能是通过调控miR-34a来抑制胶质瘤细胞C6增殖和诱导自噬发生。

柴胡皂苷D通过NLRP3介导细胞焦亡抑制未分化甲状腺癌细胞增殖的机制研究

目的研究柴胡皂苷D通过NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)介导细胞焦亡,抑制未分化甲状腺癌细胞增殖的作用及机制。方法培养未分化甲状腺癌细胞株HTh83和KMH2,不同浓度柴胡皂苷D(1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37μmol/L)作用48 h后检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50);细胞分为对照组(0μmol/L柴胡皂苷D)、低浓度组(2.2μmol/L柴胡皂苷D)、中浓度组(11μmol/L柴胡皂苷D)、高浓度组(22μmol/L柴胡皂苷D)、si-NC组(转染NC siRNA)、高浓度+si-NC组(22μmol/L柴胡皂苷D联合转染NC siRNA)、高浓度+si-NLRP3组(22μmol/L柴胡皂苷D联合转染NLRP3 siRNA),处理48 h后检测克隆形成数目,NLRP3、裂解型Caspase-1、GSDMD氨基末端片段(GSDMD N terminal fragment,GSDMD-N)的表达水平及培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的水平。结果柴胡皂苷D以浓度依赖的方式降低HTh83细胞和KMH2细胞的存活率(P<0.05);低浓度组、中浓度组、高浓度组的细胞克隆数目低于对照组(P<0.05),NLRP3、裂解型Caspase-1、GSDMD-N的表达水平及培养基中IL-1β、IL-18的水平高于对照组(P<0.05);高浓度+si-NLRP3组细胞的存活率及克隆数目高于高浓度+si-NC组(P<0.05),NLRP3、裂解型Caspase-1、GSDMD-N的表达水平及培养基中IL-1β、IL-18的水平低于高浓度+si-NC组(P<0.05)。结论柴胡皂苷D能显著抑制未分化甲状腺癌细胞增殖,其作用机制可能与激活NLRP3,介导细胞焦亡有关。

响应面法优化真菌CHS3发酵产物中柴胡皂苷d的提取工艺

目的确定从真菌CHS3发酵产物中提取柴胡皂苷d的最优工艺。方法以柴胡皂苷d产量为指标,利用单因素分析与响应面分析相结合,优化乙醇浓度、料液比、超声功率、超声时间和超声温度的实验条件。结果真菌CHS3发酵产物中提取柴胡皂苷d的最佳提取条件为:72%的乙醇超声提取,料液比为1∶22(g∶m L),超声功率为300W,超声温度为56℃,超声时间为28min。该工艺条件下柴胡皂苷d的平均产量为3.928μg·g^(-1)。结论所得工艺条件稳定可靠,研究结果为利用发酵工程生产SSd提供理论与实验参考。

Wnt/β-catenin通路介导柴胡皂苷D治疗IgA肾病的疗效及作用机制研究

目的观察柴胡皂苷D治疗IgA肾病模型大鼠的疗效,基于Wnt/β环形蛋白(β-catenin)信号通路探究其作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组(牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖)、阳性对照组(贝那普利,10 mg/kg)、柴胡皂苷D组(1.5 mg/kg)和柴胡皂苷D+Wnt/β-catenin通路激活剂组(氯化锂,60 mg/kg)。连续给药8周后,测定24 h尿蛋白含量和血清肌酐、尿素氮含量,采用HE染色观察肾组织病理变化,Masson染色观察肾纤维化程度,RT-PCR、Western Blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Wnt-1、β-catenin及糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达。结果与模型组比较,阳性对照组和柴胡皂苷D组24 h尿蛋白含量、肌酐、尿素氮含量、肾组织纤维化程度评分、α-SMA、Vimentin、Wnt-1、β-catenin mRNA及蛋白表达、GSK-3β磷酸化水平明显降低,E-cadherin mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);添加Wnt/β-catenin通路激活剂氯化锂后,可逆转柴胡皂苷D对模型大鼠生理指标的改善作用。结论柴胡皂苷D可能通过抑制Wnt/β-catenin通路,改善IgA肾病模型大鼠的肾组织损伤,减轻肾纤维化程度。

柴胡皂苷D对人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的探讨柴胡皂苷D(SSD)对人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法将人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为对照组、空白溶剂对照组、肾间质纤维化(RIF)组(5μg/L TGF-β1)、阳性对照组(5μg/L TGF-β1+10μmol/L贝那普利)、SSD组(5μg/L TGF-β1+10.00μmol/L SSD)、SSD+DKK-1组(5μg/L TGF-β1+10.00μmol/L SSD+100μg/L DKK-1)。光学显微镜观察各组细胞形态变化,免疫荧光检测细胞E-钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,Western blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达,qRT-PCR检测细胞胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)相对表达量。结果对照组、空白溶剂对照组细胞有序、紧密排列,RIF组细胞呈现出长梭形且细胞排列分散;阳性对照组、SSD组和SSD+DKK-1组中长梭形细胞较RIF组减少且细胞分散程度降低。RIF组E-cadherin荧光斑低于对照组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、E-cadherin、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量高于对照组(P<0.05)。阳性对照组、SSD组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于RIF组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量低于RIF组(P<0.05)。SSD+DKK-1组E-cadherin荧光斑和蛋白表达高于SSD组(P<0.05),α-SMA荧光斑和MMP-7、Snail、α-SMA、β-catenin蛋白表达、CollagenⅠ基因相对表达量低于SSD组(P<0.05)。结论SSD可抑制人肾小管上皮细胞转分化,可能与抑制Wnt/β-catenin途径活化有关。

柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及FoxO1/PGC-1α通路的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及叉头框蛋白O1(FoxO1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路的影响。方法:以高脂饮食联合小剂量链脲佐霉素腹腔注射诱导建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、柴胡皂苷D低剂量、中剂量、高剂量(50、100、150 mg/kg)组、二甲双胍(24.2 mg/kg)组,每组12只,另取12只SD大鼠以基础饲料喂养,并腹腔注射等剂量生理盐水,设为对照组。大鼠经药物分组处理后,测定大鼠空腹胰岛素(FINS)水平、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI);行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),计算血糖曲线下面积(AUC);检测大鼠肝糖原及肝脏脂肪合成情况;ELISA检测大鼠血清致炎因子水平;Western blot检测大鼠肝组织FoxO1/PGC-1α通路蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝糖原显著减少,脂肪合成显著增多,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平显著升高,ISI水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷D各剂量组与二甲双胍组大鼠肝糖原增多,脂肪合成减少,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平降低,ISI升高,且柴胡皂苷D各剂量组间呈剂量依赖性(P<0.05);柴胡皂苷D高剂量组与二甲双胍组比较,大鼠各指标无明显差异(P>0.05)。结论:柴胡皂苷D可能通过抑制FoxO1/PGC-1α信号通路激活从而降低血糖,抑制炎症,降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。

JAK2/STAT3信号通路在柴胡皂苷D调控非小细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡过程中的作用研究

目的观察柴胡皂苷D对非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞增殖、凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期H460细胞,随机分为对照组,实验A、B、C组,对照组常规培养,实验A组加入柴胡皂苷D(20μmol/L),实验B组加入colivelin[Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活子3(STAT3)通路激活剂](0.5μmol/L),实验C组加入柴胡皂苷D(20μmol/L)与colivelin(0.5μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)mRNA表达量;Western blotting法检测细胞p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达量。结果与对照组比较,实验A组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量升高(P<0.05),实验B组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3升高,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量降低(P<0.05);与实验A组比较,实验C组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3升高,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量降低(P<0.05);与实验B组比较,联合组24、48、72 h MTT实验吸光度值、细胞IL-10 mRNA表达量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,细胞凋亡率、IL-2 mRNA表达量升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可抑制NSCLC细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

基于Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路探讨柴胡皂苷D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的:基于NADPH氧化酶4(Nox4)/蛋白激酶C_(α)(PKC_(α))/半乳糖凝集素3(Gal-3)通路探讨柴胡皂苷D对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柴胡皂苷D组(50 mg/kg)、Apocynin组(10 mg/kg)、柴胡皂苷D+Apocynin组(柴胡皂苷D 50 mg/kg+Apocynin 10 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余各组制备心肌梗死模型。经药物处理后,采用超声测量各组大鼠心室功能指标左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS);苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠心肌组织形态;Masson染色检测各组大鼠心肌组织纤维化改变,并计算心肌组织胶原容积积分(CVF);酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、转化生长因子(TGF)-β_(1)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠心肌组织Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路相关蛋白表达含量。结果:相较于假手术组,模型组大鼠心肌组织有严重的病理损伤,胶原增生明显,心肌CVF、LVEDD、LVESD及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平升高,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达升高(P<0.05),LVEF及LVFS降低(P<0.05)。相较于模型组,各药物组大鼠心肌组织病理损伤减轻,胶原增生减少,CVF、LVEDD、LVESD及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平降低,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF及LVFS升高(P<0.05)。相较于柴胡皂苷D组、Apocynin组,柴胡皂苷D+Apocynin组大鼠心肌组织病理损伤进一步减轻,且胶原增生进一步减少,CVF、LVEDD、LVESDE及血清IL-1β、IL-6、TGF-β_(1)水平降低,心肌组织Nox4、PKC_(α)及Gal-3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF及LVFS升高(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可抑制Nox4/PKC_(α)/Gal-3通路激活,减轻心肌梗死大鼠心肌组织炎症损伤,缓解心肌纤维化,改善心功能。

柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经保护作用的机制研究

目的评价柴胡皂苷D对脑出血大鼠神经元损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法SD大鼠通过尾状核注入尾静脉自体血建立大鼠脑出血模型,分为假手术组、模型组、柴胡皂苷D组(8 mg/kg)、Toll样受体4(TLR4)激活剂(RS09)组(25μg/只)、TLR4抑制剂(TAK-242)组(0.5 mg/kg)、柴胡皂苷D+TLR4激活剂组,每组20只。各组干预给药结束后,进行神经功能缺损评分;干-湿重法检测脑含水量;伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性;取血肿周围组织,ELISA法检测凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物水平;HE染色及TUNEL染色检测神经元损伤及凋亡率;免疫荧光共定位法检测M1型激活小胶质细胞(标记抗体为CD11b)与小胶质细胞(标记抗体为Iba-1)共表达水平;Western blotting法检测IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4、髓样分化因子88(MyD-88)、核转录因子-κB(NF-κB)、蛋白酶激活受体-1(PAR-1)、B类清道夫受体(CD36)表达水平。结果与假手术组相比,模型组EB含量、脑含水量、神经功能缺损评分、TAT复合物水平均明显升高,CD11b+Iba-1+水平、IL-10、CD36表达明显降低,TLR4、MyD-88、p-NF-κB/NF-κB、PAR-1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。阻断TLR4活化及给予柴胡皂苷D干预处理,均可同等程度的改善脑出血大鼠病理症状,M1促炎相关因子IL-6、IL-1β表达明显下降,M2型抗炎相关因子IL-10、CD36表达明显升高(均P<0.05)。TLR4激活剂可明显削弱柴胡皂苷D的上述作用(P<0.05)。结论柴胡皂苷D可改善脑出血大鼠脑水肿、神经元炎性损伤凋亡等病理症状,且其改善作用可能与阻断TLR4通路介导的小胶质细胞M1型活化有关。

柴胡皂苷d对SH-SY5Y细胞体外抑制作用及机制

目的探究柴胡皂苷(SS)d对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外抑制作用及分子机制。方法体外常规培养神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别在浓度0、4、8、10μmol/L SSd的杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)中作用48 h,设为对照组及4、8、10μmol/L SSd组,荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中活性氧(ROS)的产生情况,试剂盒检测不同浓度SSd对SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;Western印迹法检测细胞内细胞周期蛋白(Cyclin)D1、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X基因(Bax)表达水平。结果与对照组相比,8、10μmol/L SSd组ROS水平、MDA含量显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),且有浓度依赖趋势;4、8、10μmol/L SSd组LDH活性、Bax蛋白表达明显升高,CyclinD1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd能够通过提高细胞的氧化应激水平,抑制CyclinD1信号转导通路而促进SH-SY5Y细胞凋亡。

柴胡皂苷D调节Th1/Th2平衡对小鼠急性中耳炎的治疗作用及其机制研究

目的:探究柴胡皂苷D对小鼠急性中耳炎的治疗作用,并探讨其可能机制。方法:采用听泡穿刺法建立急性中耳炎模型,以随机数字表法将30只急性中耳炎小鼠分为模型组、柴胡皂苷D组、联合组,每组各10只;另取10只小鼠设为假手术组。联合组小鼠腹腔注射柴胡皂苷D(2 mg/kg),尾静脉注射脂多糖[Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)通路激活剂](0.58 mg/kg);柴胡皂苷D组小鼠腹腔注射柴胡皂苷D(2 mg/kg),尾静脉注射等体积生理盐水;假手术组、模型组腹腔注射等体积生理盐水,尾静脉注射等体积生理盐水。1次/d,持续3 d。检测中耳灌洗液(MELF)炎症细胞计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平;流式细胞术检测外周血Th1、Th2构成比;Western bloting法检测中耳组织IL-33、TLR4、MyD88蛋白相对表达量。结果:柴胡皂苷D组小鼠MELF炎症细胞计数,TNF-α、IL-1β水平,外周血Th2构成比,以及中耳组织IL-33、TLR4、MyD88蛋白相对表达量均低于模型组,外周血Th1构成比及Th1/Th2均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组小鼠MELF炎症细胞计数,TNF-α、IL-1β水平,外周血Th2构成比,以及中耳组织IL-33、TLR4、MyD88蛋白相对表达量均高于柴胡皂苷D组,外周血Th1构成比及Th1/Th2均低于柴胡皂苷D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可抑制炎症反应,调节Th1/Th2平衡,从而对急性中耳炎小鼠产生治疗作用。其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88信号通路活性有关。

柴胡皂苷d抗肝纤维化大鼠脂质过氧化作用的研究

目的:探讨柴胡皂苷d(SSd)对肝纤维化过程中脂质过氧化的影响。方法:采用腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)10 mg.kg-1诱导大鼠肝纤维化,以柴胡皂苷d(1.8 mg.kg-1)同时预防给药4周,检测正常组、模型组和SSd组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、IV型胶原(IV-C)及丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及肝组织中MDA的含量和SOD的活性。结果:SSd能显著降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST水平和HA,LN,IV-C的含量,并可提高肝组织中SOD的活性,降低血清和肝组织中的MDA的含量。结论:SSd具有很明显的保护肝细胞、抗肝纤维化的作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关。

柴胡皂苷d在小鼠体内的类雌激素样作用

目的:探讨柴胡皂苷d在小鼠体内是否具有类雌激素样作用。方法:40只雌性BALB/c小鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组和大剂量(50mg/kg)、小剂量(5mg/kg)柴胡皂苷d组,每组8只。除假手术组外,各组小鼠行双侧卵巢切除术造模。卵巢切除术后第10天,予相应药物腹腔注射治疗2周,观察小鼠阴道涂片细胞角化情况和体质量变化;末次给药12h后眼眶取血,放射免疫法检测小鼠血清雌二醇水平;剥离子宫、肾上腺,称取质量,计算子宫和肾上腺指数。结果:大、小剂量柴胡皂苷d组上皮细胞角化率高于模型组(P<0.05),低于雌二醇组(P<0.05);大、小剂量柴胡皂苷d组血清雌二醇水平高于模型组(P<0.05),小剂量柴胡皂苷d组低于雌二醇组(P<0.05);大、小剂量柴胡皂苷d组子宫指数和肾上腺指数高于模型组(P<0.05),低于雌二醇组(P<0.05);大剂量柴胡皂苷d组和雌二醇组体质量低于模型组(P<0.05)。结论:柴胡皂苷d在体内具有弱雌激素样作用,可能是一种潜在的植物雌激素。

柴胡皂苷d对大鼠实验性肝癌形成的预防作用

目的研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对大鼠实验性肝癌形成的预防作用。方法采用间断小剂量二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)灌胃诱发大鼠肝癌模型,将90只清洁级雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(10只)、肝癌模型组(20只)、SSd大、中、小剂量组(2.0、1.5、1.0 mg/kg,各20只),SSd治疗组在建立肝癌模型的同时,腹腔注射不同剂量的SSd,实验16周后停止给药,实验第18周处死所有大鼠,比较各组大鼠体重的改变,检测血清肝功指标丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltransferase,GGT)、α-L-岩藻糖苷酶(alpha-L-fucosidase,AFU),并进行肝脏病理组织学检查。结果SSd各剂量组与肝癌模型组比较,血清各项肝功指标水平明显下降,差异有统计学意义,特别是SSd大剂量组(P<0.01);同时SSd治疗组与肝癌模型组相比,肝脏病理组织学镜下观察,癌细胞分化程度高,异型性低。结论SSd对大鼠实验性肝癌形成具有一定的防治作用。