基于细胞代谢组学的柴胡皂苷b2对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100~800μmol·L^(-1)孵育24 h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μmol·L^(-1)孵育24 h)组,MTT法检测细胞存活率。②将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),模型组(CORT 400μmol·L^(-1)孵育24 h)和模型+SSb2组(SSb21.5625,3.125,6.25,12.5和25μmol·L^(-1)预处理3 h,去上清,然后加入CORT 400μmol·L^(-1)及对应浓度SSb2共孵育24 h)。MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。③将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb212.5μmol·L^(-1)组,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)的代谢组学技术检测PC12细胞代谢轮廓变化;比色法检测谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性。结果①与细胞对照组相比,当CORT浓度为400μmol·L^(-1)时,细胞存活率降低至(55±6)%(P<0.01);SSb2浓度>50μmol·L^(-1)时,对PC12细胞有显著的细胞毒性(P<0.01)。②与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),LDH释放率显著降低(P<0.01)。③与细胞对照组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。代谢组学结果表明,SSb2能显著回调谷氨酸、肌酸、N-乙酰天冬氨酸、L-酪氨酸、柠檬酸、L-异亮氨酸、乳酸、谷氨酰胺和胆碱9个差异代谢物。对SSb2调控的关键代谢物进一步富集分析表明,SSb2主要影响5条代谢通路,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,酪氨酸代谢和精氨酸生物合成。与细胞对照组相比,模型组谷氨酸含量和谷氨酰胺酶活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2组细胞谷氨酸含量(P<0.01)和谷氨酰胺酶活性显著升高(P<0.05)。结论SSb2对CORT诱导的PC12细胞损伤具有神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡和调节代谢紊乱有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。

柴胡皂苷B2对LPS诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响研究

目的探讨柴胡皂苷B2对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响。方法将50只SD大鼠分为空白对照组、模型组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组。空白对照组大鼠腹腔内注射等体积生理盐水;模型组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS;柴胡皂苷B2低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS后,分别注射5、10、20 mg/kg的柴胡皂苷。末次给药24 h后,麻醉处死大鼠,检测肺组织湿干比;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;Western blotting检测肺组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2同源二聚体X蛋白(Bax)、p53蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果与空白对照组相比,模型组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白表达、MDA含量、TNF-α、IL1β、IL-6含量明显升高,Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性明显降低。与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6明显降低,Bcl-2蛋白、SOD活性、GSH-Px活性明显升高。结论柴胡皂苷B2能减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激和炎性反应,并减少细胞的凋亡。

UPLC法测定加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2含量研究

目的:建立加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2的含量测定方法。方法:采用UPLC法,ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相:乙腈(A)-水(B);流速:0.3 mL/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃。结果:柴胡皂苷b2线性范围为2.902~87.06μg(R2=0.9999),加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2平均加样回收率为100.65%、102.05%,RSD分别为1.35%、2.61%,不同批次提取物至制剂柴胡皂苷b2转移率均在95%~110%。结论:该方法简便、稳定、快速、重现性好,可用于加味逍遥提取物及制剂中柴胡皂苷b2的含量测定,且方法准确可靠,可表征工艺稳定性,为完善加味逍遥片的质量评价体系提供依据。

柴胡皂苷B2(Saikosaponin B2)对四氯化碳损伤HepG2细胞的保护作用

目的初步探讨柴胡皂苷B2(SSB2)对CCl4肝细胞损伤的保护作用。方法用CCl4诱肝HepG2细胞损伤,设立正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度SSB2保护组;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力以及流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的方法,观察SSB2对CCl4诱导的肝细胞损伤的保护作用。结果 MTT检测显示SSB2保护组细胞活性明显高于损伤组,以SSB2浓度为100μg/mL保护组细胞活性最高;流式细胞仪测定细胞凋亡率显示SSB2保护组(终浓度为100μg/mL)凋亡率明显低于CC14损伤组,细胞周期各期细胞分布比例无明显变化。结论 SSB2对CCl4诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。

柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量检测分析

目的 根据柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量,提供评价质量的方法。方法 根据HPLC方法对5批柴胡口服液进行测定,并根据中药色谱指纹图谱相似度评价系统,建立柴胡口服液标准指纹图谱,并测定每批制剂柴胡皂苷b2的含量以及制剂的相似度。结果 5批柴胡口服液的HPLC指纹图谱共有5个峰,相似度〉0.945,柴胡皂苷b2在0.0395~0.7935μg显示存在良好的线性关系。结论 柴胡口服液制剂与标准指纹图谱对比评价质,操作方便,可有效用于评价柴胡口服液的质量。

柴胡皂苷b2通过调控沉默信息调节因子6介导的糖代谢通路减轻二乙基亚硝胺诱导的小鼠原发性肝癌

目的探讨柴胡皂苷b2(SSb2)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的原发性肝癌小鼠的肝癌抑制作用及对沉默信息调节因子6(SIRT6)介导的糖代谢通路的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、肝癌模型组(DEN 50 mg·kg^(-1))、模型+SSb21.5,3.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+多柔比星(DOX)1 mg·kg^(-1)组。除正常对照组外,其余组小鼠ip给予DEN 50 mg·kg^(-1),每周2次;第5周开始DEN给药减为每周1次,同时按分组给予SSb2和DOX,正常对照组在建模期间给予等体积生理盐水,给药持续19周。第19周末,收集小鼠血清和肝。计算肝指数,采用HE染色观察肝组织病理变化,试剂盒检测血清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)和甲胎蛋白(AFP)水平;Western印迹法检测肝组织中SIRT6、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(PDK1)和乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠肝指数明显升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各剂量组和模型+DOX组小鼠肝指数显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示,模型组肝细胞异形性明显,癌巢组织多发,模型+SSb26.0 mg·kg^(-1)组和模型+DOX组细胞坏死增多,异形核及癌巢减少。血清指标结果显示,与正常对照组相比,模型组血清中GOT,GPT,LDH和AFP水平均显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb23.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+DOX组小鼠血清中GOT,GPT,LDH和AFP水平均显著降低(P<0.01),模型+SSb21.5 mg·kg^(-1)组GOT,LDH和AFP水平显著降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,与正常对照组相比,模型组肝组织中SIRT6蛋白的表达显著降低(P<0.01),HIF-1α,GLUT1,PDK1和LDHA蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,模型+SSb2各剂量组和模型+DOX组肝组织SIRT6蛋白的表达显著升高(P<0.01),而模型+SSb23.0和6.0 mg·kg^(-1)组及模型+DOX组肝组织HIF-1α,GLUT1,PDK1和LDHA蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),模型+SSb21.5 mg·kg^(-1)组HIF-1α,GLUT1和LDHA蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论SSb2对DEN诱导的原发性肝癌小鼠的肝癌发展有抑制作用,其作用与其调控SIRT6介导的糖代谢通路有关。

柴胡皂苷b2通过抑制线粒体凋亡通路减轻过氧化氢诱导的L-02细胞损伤

目的探讨柴胡皂苷b2(SS-b2)对过氧化氢(H2O_2)诱导的L-02细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法将L-02细胞分为正常对照组、模型组(H2O_2100μmol·L^(-1)孵育12 h)和SS-b2组(SS-b212.5,25,50和100 mg·L^(-1)孵育24 h后,再加入H2O_2继续孵育12 h)。MTT法检测L-02细胞存活率;罗丹明123染色检测L-02细胞线粒体膜电位变化;Hoechst33258荧光染色法和流式细胞术检测L-02细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测线粒体凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素c(Cyt-c)、胱天蛋白酶9和3表达水平。结果与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01);细胞线粒体膜电位水平降低(P<0.01)且细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Bax(P<0.01)、Cyt-c(P<0.01)、胱天蛋白酶9(P<0.05)和3(P<0.05)蛋白表达水平显著升高,而Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,SS-b2各浓度组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性(r=0.9804,P<0.05);线粒体膜电位水平升高(P<0.01);Hoechst染色和流式细胞检测结果均显示,细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);Bax、Cyt-c、胱天蛋白酶9和3蛋白水平显著下调(P<0.01),且Bcl-2蛋白水平上调(P<0.01)。结论 SS-b2可减轻H2O_2诱导的L-02细胞损伤,其机制与抑制线粒体凋亡有关。

柴胡皂苷b2对大鼠体内柴胡皂苷a肝组织分布的影响

研究柴胡皂苷b2对柴胡皂苷a在大鼠肝脏组织中分布的影响。将Wistar大鼠随机分为两组,分别灌胃给药柴胡皂苷a(25mg/kg)和柴胡皂苷a+柴胡皂苷b2(25+3.125mg/kg)混合药液,然后于0.25、0.5、1、2、4h收集肝脏,肝组织匀浆经液液萃取处理后通过LC-MS/MS法测定肝组织中柴胡皂苷a的含量。给药后0.5h,柴胡皂苷a在肝组织中分布量最大,并随时间延长其含量迅速下降。柴胡皂苷b2显著增加0.5h时柴胡皂苷a在肝组织的累积量,而对其他时间点柴胡皂苷a在肝组织的累积量无显著性影响。本研究表明柴胡皂苷b2增加了柴胡皂苷a在大鼠肝脏的分布,可能对药效产生影响。

柴胡皂苷b2对肝癌细胞增殖的影响及机制

目的研究柴胡皂苷b2(SSb2)对肝癌细胞增殖的影响,并进一步探讨柴胡皂苷b2抑制肝细胞癌发生发展的分子机制。方法将细胞分为空白对照组(NC)、SSb2组、沉默信息调节因子6(SIRT6)si-RNA组(si-SIRT6)、si-SIRT6+SSb2组,NC组与SSb2组分别加入含阴性质粒的转染溶液,si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2组加入含si-SIRT6质粒的转染溶液,转染24 h后,SSb2组和si-SIRT6+SSb2组加入80 mg·L^(-1)的SSb2,各组继续转染24 h。检测各组HepG2细胞中腺苷三磷酸(ATP)含量、细胞上清液中葡萄糖以及乳酸的含量,用蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SIRT6、缺氧诱导因子1α(HIF1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达水平变化。结果NC组、SSb2组、si-SIRT6组和si-SIRT6+SSb2组细胞的ATP含量分别为(36.81±2.42)、(26.22±2.09)、(74.16±2.65)和(33.95±2.00)μmol·gprot^(-1),葡萄糖摄取量分别为(1.41±0.07)、(0.49±0.05)、(1.86±0.10)和(1.06±0.12)mmol·L^(-1),乳酸生成量分别为(7.09±0.30)、(4.13±0.25)、(11.49±0.68)和(5.76±0.27)mmol·L^(-1),SIRT6蛋白相对表达水平分别为0.29±0.06、0.70±0.06、0.06±0.03和0.17±0.04,HIF1α蛋白相对表达水平分别为0.18±0.03、0.06±0.03、0.44±0.04和0.22±0.04,GLUT1蛋白相对表达水平分别为0.63±0.05、0.30±0.09、1.34±0.12和0.51±0.09。上述指标,SSb2组与NC比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);si-SIRT6组与NC比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);si-SIRT6+SSb2组与SSb2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论SSb2在体外可以抑制肝癌细胞的增殖,其作用可能是通过调控SIRT6介导的糖代谢通路实现的。

柴胡醋制前后柴胡皂苷a、b_2、c、d的LC-MS/MS法测定及比较

采用LC-MS/MS法对醋制前后柴胡中的Ⅰ型柴胡皂苷a、c、d与Ⅱ型柴胡皂苷b2进行含量测定,色谱柱为KinetexTMC18(50 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱;检测系统为电喷雾离子源(ESI)-三重四级杆质谱仪,ESI负离子模式检测,待测成分与内标均采用负离子加合物作为选择性反应监测(SRM)的前体离子,以[M+HCOO]-/[M-H]-作为SRM检测离子对。方法学验证结果显示,所建立的方法灵敏度高、专属性好,可作为柴胡生品及醋炙品的质量控制方法。含量测定结果表明,醋制过程引发了由Ⅰ型柴胡皂苷向Ⅱ型的转化,醋制后柴胡皂苷b2的含量明显增加,对柴胡醋炙品的质量控制应同时考虑对Ⅰ、Ⅱ型柴胡皂苷柴胡皂苷进行测定。

HPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷b_2的含量

目的建立小柴胡颗粒中柴胡皂苷b2含量的测定方法。方法采用HPLC法，phenomenexLuna色谱柱，以乙腈-0．2％二乙胺（35：65）为流动相，流速为1．0mL·min-1，柱温30℃，检测波长254nm。结果柴胡皂苷b2线性范围0．3632～3．6320μg，R2=1．00；平均加样回收率为102．2％，RSD为2．5％。结论该方法准确、稳定，重现性好，可用于小柴胡颗粒的质量控制。

HPLC-ELSD法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a、b_2、c的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法同时测定四逆散不同配伍中柴胡皂苷a,b_2,c的含量。方法:采用Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1),ELSD检测器,漂移管温度:100℃,气体:空气,气体流速:2.0 L·min^(-1),柱温:室温。结果:柴胡皂苷a,b_2,c分别在7.74~129.00,7.86~131.00,5.12~85.30μg的范围内线性关系良好(r分别为0.999 2,0.999 2,0.999 3);平均回收率分别为98.6%,99.3%,100.7%,RSD分别为2.5%,1.8%,2.7%(n=6)。结论:白芍中的成分可降低柴胡皂苷a、c的煎出量;枳实中的成分可提高柴胡皂苷a、b_2、c的煎出量;与单味柴胡药材相比,配伍组合中柴胡皂苷b_2的含量均显著增加。

HPLC-MS/MS法测定柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量

目的建立测定柴葛解肌汤中I型柴胡皂苷a与Ⅱ型柴胡皂苷b2的HPLC—MS／MS方法。方法采用Hypersil GOLDaQ色谱柱（150mm×2．1mm，3txm），乙腈-0．1％甲酸溶液为流动相，流速为300μL.min^-1，柱温：25℃，以液相色谱分离、电喷雾离子化串联进行检测。结果柴胡皂苷a、b2分别在44．8-672ng·mL～、47．2～708ng·mL。线性关系良好（r=0．9992、r=0．9993），平均回收率分别为98．53％和99．47％，RSD分别为2．01％和2．08％（n=6）。结论该方法快速简便、准确、灵敏度高，可用于柴葛解肌汤中柴胡皂苷a、b2的含量测定。

柴胡皂苷b_2降解产物结构研究

目的研究柴胡皂苷b2降解产物的结构。方法采用各种分离技术和光谱技术对柴胡皂苷b2降解产物的结构进行分离和结构鉴定。结果柴胡皂苷b2在保存过程中形成的降解产物的结构为Saikogenin D。结论为进一步研究其降解的过程动力学过程,进而更好地保存柴胡皂苷b2奠定基础。

薄层扫描法测定小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b_2的含量

目的 :建立小儿解热宁口服液的含量测定方法。方法 :采用薄层扫描法对小儿解热宁口服液中柴胡皂苷b2 进行定量。结果 :柴胡皂苷b2 在 0 .6～ 2 .8μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系 ,平均回收率为 97.0 9% ,RSD =1.2 4 % (n =5 )。结论 :本法简便、快速、准确 ,可作为小儿解热宁口服液质量控制的方法。

柴胡皂苷b2对LPS/GalN诱导的小鼠急性肝损伤炎症和能量代谢的影响

该研究旨在探讨柴胡皂苷b2(SS-b2)对注射脂多糖/氨基半乳糖(LPS/Gal N)诱导的小鼠急性肝损伤炎症因子的调控和对能量代谢的影响。将小鼠随机分为空白对照组(等量生理盐水),模型组(100μg·kg-1LPS+400 mg·kg-1Gal N),SS-b2低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1·d-1)和阳性对照组(地塞米松,10 mg·kg-1)。除空白对照组外,其余各组每天腹腔注射LPS/Gal N建立急性肝损伤小鼠模型。计算脏器指数;血清生化指标检测ALT和AST的含量和肝脏ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中TNF-α,IL-1β,IL-6的含量;微量酶标法测定肝脏LDH的含量;HE染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法测定LDH-A的蛋白表达;Western blot法检测肝脏Sirt-6和NF-κB蛋白表达情况。结果显示,与模型组相比,SS-b2高剂量组小鼠脏器指数均有明显变化(P<0. 05);SS-b2中、高剂量组能明显降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,TNF-α,IL-1β,IL-6的水平及LDH活性(P<0. 01),随着SS-b2剂量的增加,小鼠肝脏病变范围减少,损伤程度减轻,各剂量组能够显著增强小鼠肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性(P<0. 01);SS-b2中、高剂量组能够显著下调肝组织NF-κB的蛋白表达(P<0. 01),同时,各剂量组能够显著提高急性肝损伤小鼠肝脏中Sirt-6蛋白表达量(P<0. 01)。综上,SS-b2对LPS/Gal N诱导的小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用,该作用可能与其下调NF-κB蛋白表达以及上调Sirt-6蛋白表达改善炎症损伤以及能量代谢有关。

HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷含量

目的用HPLC-ELSD同时测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分的含量。方法 Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.2%醋酸溶液(B),梯度洗脱(0~8 min, 8%A;8~15 min, 8%~20%A;15~30 min, 20%~35%A;30~40 min, 35%~45%A;40~60 min, 45%~75%A),柱温30℃,流速1.0 mL·min^(-1),载气为氮气,体积流量2.3 L·min^(-1),漂移管温度70℃,增益2。结果柴胡皂苷C、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷B1、山奈苷在5.48~109.6 mg·L^(-1)(r=0.999 4)、9.76~195.2 mg·L^(-1)(r=0.999 6)、11.98~239.6 mg·L^(-1)(r=0.999 9)、0.532~10.64 mg·L^(-1)(r=0.999 7)、0.35~7.0μg·mL^(-1)(r=0.999 5)、0.254~5.08μg·mL^(-1)(r=0.999 6)范围内的线性关系良好。平均回收率分别为99.1%、99.4%、97.2%、100.4%、100.7%、98.6%。21批北柴胡样品含量范围:柴胡皂苷C 0.093 2%~0.243%、柴胡皂苷A 0.103 8%~0.889 6%、柴胡皂苷D 0.288%~1.084 3%、柴胡皂苷B2 0~0.032 6%、柴胡皂苷B1 0~0.031 26%、山奈苷0~0.010 33%。结论该方法测定北柴胡中柴胡皂苷A、C、D、B1、B2及山奈苷6种苷类成分含量灵敏、准确,分离效果较好,无干扰,可作为完善北柴胡中苷类成分的质量标准评价提供依据。

UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4的含量及药动学研究

目的建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4,并对柴胡皂苷B2、B4静脉给药后的药动学进行研究。方法以柴胡皂苷F为内标,采用UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×50 mm,1.7μm)柱,柱温为40℃。流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.4mL·min^(-1),洗脱时间为4min,使用氮气作为去溶剂化气体(800L·h^(-1))和锥形气体(50 L·h^(-1))。MRM模式对柴胡皂苷B2 m/z 825.4→617.5、柴胡皂苷B4 m/z 957.6→649.6和柴胡皂苷F(内标)m/z 973.7→119.0进行定量分析。大鼠血浆用乙腈沉淀法去除蛋白。结果在5～5 000 ng·mL^(-1)内,大鼠血浆中柴胡皂苷B2、B4线性良好(r>0.995),定量下限为5ng·mL^(-1)。柴胡皂苷B2日内精密度RSD<12%,日间精密度RSD<15%。柴胡皂苷B4日内精密度RSD<14%,日间精密度RSD<15%。柴胡皂苷B2、B4的准确度范围为89.3%～110.2%。结论该分析方法灵敏、快速、选择性良好,并成功应用于柴胡皂苷B2、B4静脉给药后的大鼠药动学研究。

高效液相色谱法测定逍遥丸中柴胡皂苷a、b_2的含量

目的:建立逍遥丸中柴胡皂苷a、b_2含量测定。方法:采用HPLC法,乙腈-水(34:66)为流动相,C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);检测波长为210 nm。结果:柴胡皂苷a在0.227 5~1.820 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999),平均回收率97.71%,RSD=1.97%。柴胡皂苷b_2在0.233 5~1.868 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999),平均回收率102.50%,RSD=1.11%。结论:HPLC法准确、可靠,可用于逍遥丸的质量控制。