乙型肝炎病毒基因B型及基因C型两种国家标准品研制

目的研制乙型肝炎病毒(HBV)基因B型及基因C型两种国家标准品。方法收集我国不同地区的HBV感染者血浆样品,经HBV五项、DNA病毒检测,从中筛选出11份基因分型标准品候选品样品。经HBV序列测定,进化树分析,初步确定2份样品分别为HBV B型及C型标准品候选品。分别将2份候选品离心、分装后,进行HBV基因分型验证测定,并进行定量的协作标定测定。结果确认筛选出HBV基因B型及基因C型标准品,其HBV DNA浓度分别为4.67×10~7IU/mL(CV为3.6%)及3.66×10^(8)IU/mL(CV为2.9%)。装量检查,大于0.5 mL/支,符合规定。均匀性检查,两者P值分别为0.428(F值为1.140)及0.420(F值为1.173),分装的标准品支与支之间浓度均匀无差异。将两种标准品在不同方式保存(反复冻融、4℃保存、室温及37℃放置)后,测定结果与-80℃保存样品测定结果相比较,绝对偏差均在±0.2的范围内,方差分析P值均大于0.1;另外,-20℃保存12个月后与-80℃保存样品两者测定数据分析,B型P值为0.237(F值为1.934)、C型P值为0.173(F值为2.737),P值均大于0.1,稳定性验证符合规定。结论制备了HBV基因B型及基因C型两种国家标准品,为我国HBV基因分型试剂的质量控制和标准化提供了依据。

我国作物病菌标准品的研究进展

作物在生长发育过程中,容易受到病菌侵染,造成巨大的经济损失。及时准确地对作物感染病菌的情况进行检测,有助于为制定病害的防治措施提供参考依据。作物病菌标准品是作物病害检测工作中的重要参考,在作物病菌的定性和定量检测工作中具有十分重要的地位。目前,作物病菌标准品相关研究的报道较少,因此有序开展作物病菌标准品的研制工作极为迫切。本文通过对作物病菌检测方法、检测标准及作物病菌标准品研究进展进行梳理总结,以期为我国作物病菌标准品的研制提供理论参考。

利用|En|值评价不同厂家标准品测定结果的差异性

选取三个厂家生产的白酒中主要的26种骨架成分的标准品,分析对比三个厂家的标准品的保留时间、单位浓度的峰面积以及推算出的白酒中各组分的含量的差异性。结果表明,三个厂家标准品定性结果一致,定量结果存在差异,三个厂家26个标准品中其中8个推算出的样品含量的|En|值>1,则影响检测结果的对比和共享,所以检测用标准品应统一生产厂家。

基于农产品及食品元素分析使用的标准品现状与管理对策研究

随着人们生活水平的不断提高,农产品及食品质量安全问题备受社会关注,从而使农产品、食品检测工作变得尤其关键。在现代农产品和食品质量安全检验检测中,元素分析是重要的内容之一,包括营养成分及有毒有害物质是否存在、含量有多少。监测农产品及食品中的元素水平有助于评价其营养价值、了解被污染状况以及提高绿色、安全生产管理水平。现如今,检测手段越来越精准,检测技术要求也愈来愈高。标准品作为分析测量的“器具”,与检测技术密不可分。标准品的管理水平是检测实验室的能力体现之一,它的使用是保证分析测量可靠性的重要手段。本文从农产品及食品元素分析使用标准品的研制、管理程序包括采购、验收、贮存与使用、期间核查以及废弃物处置等方面以及发展趋势进行探讨,对标准品管理中的关键点提出了相关的建议与对策,以期为农产品与食品标准品的研制、发展和实验室质量控制管理与能力建设提供有价值的参考。

分子动力学模拟研究利妥昔单抗国际标准品中人血清白蛋白的活性保护机制

目的研究利妥昔单抗(rituximab)国际标准品中不同比例人血清白蛋白(HSA)作为冻干保护剂对蛋白分子的保护作用及其作用机制。方法使用Gromacs5.0.5工具包,在300 K的温度条件下,运用计算机模拟的方法,搭建模型,分别模拟分析HSA与利妥昔抗原结合片段(Fab)的分子数比分别为1:1、2:1和3:1状态下的分子结构,从结构生物学的角度比较并分析不同比例人血清白蛋白对利妥昔分子的保护机制。结果不同比例的HSA保护剂在一定程度上可以通过与rituximab Fab分子的相互作用来改善蛋白分子表面的亲疏水性质,阻止无规则卷曲结构的形成,从而保护rituximab Fab的天然构象不被破坏,且在1:1、2:1和3:1三种模拟体系中,HSA与rituximab Fab的分子数比例为2:1时保护效果最好。结论当人血清白蛋白与利妥昔Fab的分子数比为2:1保护效果最佳,可为其他单抗标准品的开发提供参考依据。

不同品牌标准品对LC-MS/MS法检测血浆25(OH)D_(3) 结果的影响

目的评估不同品牌的标准品对LC-MS/MS法检测血浆25-羟基维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]结果的影响。方法收集北京航天总医院2023年1月至4月住院患者剩余血浆作为研究对象,选择美国国家标准与技术研究院(NIST)生产的SRM2972a标准品(记为系统A)和Cerilliant公司的25(OH)D_(3)标准品(记为系统B)分别作为校准品,采用LC-MS/MS法分别检测45例单人份血浆样本和2022年国际参考实验室间质量评价样本(2022RELA),参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP9-A3文件,评估两种不同标准品对25(OH)D_(3)测量结果的影响。结果两个系统对RELA样本的测量值均在其等效范围内,偏倚小于7.5%。系统A、B的批内重复性分别为2.17%~3.04%、2.35%~3.38%,总不精密度分别为2.56%~3.85%、2.74%~4.05%。两个系统对应的标准曲线方程分别为Y=0.0866 X+0.0302(r=0.9992)、Y=0.0827 X+0.0429(r=0.9998),线性良好。45例血浆标本测量结果可比,Passing-Bablok回归分析方程为Y=1.019 X+0.232,斜率的95%CI为1.0000~1.0455,截距的95%CI为-0.3818~0.7000。将医学决定水平12、20、30带入方程,得到的相对偏倚为3.76%、3.01%和2.64%。结论这2种品牌的标准品对LC-MS/MS法检测血浆25(OH)D_(3)结果的影响差异没有统计学意义,均适用于临床实验室血浆25(OH)D_(3)的定量分析。

首批单核细胞活化反应检查法专用细菌内毒素国家标准品的建立与应用

目的 为《中华人民共和国药典》(2020年版)9301单核细胞活化反应检查法建立专用的细菌内毒素国家标准品,保障注射剂的质量安全。方法 通过生产制备、协作标定、均匀性考察等研究,建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法专用)。结果 全国5家药品检验所使用3种方法进行协作标定,标定结果间经方差分析无显著性差异,加权平均值为每支152.0 EU,95%置信区间为每支136.2~169.5.0 EU,可信限率为10.96%。均匀性研究符合规定。待标品使用单核细胞活化反应检查法检测结果平均值为每支144.6 EU。最终确定待标品为细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应测定用),效价为每支150 EU。结论 建立了首批细菌内毒素国家标准品(单核细胞活化反应检查法用,批号:150608-202101)。

细菌内毒素国家标准品的协作标定

目的:标定中国食品药品检定研究院细菌内毒素工作标准品(细菌内毒素检测用)。方法:以细菌内毒素国家标准品(9000 EU/支,细菌内毒素检测用)为标准,采用2020年版《中华人民共和国药典》四部1143细菌内毒素检查法中凝胶法和动态浊度法分别对给定的6支细菌内毒素工作标准待标品进行效价标定。结果:待标品预估效价为90 EU/支,标定结果除1支存在偏差外,其余5支效价均在可接受范围。结论:本批待标品采用动态浊度法进行检测时效价较凝胶法测定结果和预估效价均偏低,是否因环境或运输因素使其效价衰减,还有待进一步的实验研究。采用量反应平行线法对动态浊度法测定结果进行尝试计算,结果显示其试品间存在差异,其他全部符合平行,可能是配制时的浓度需要调整。

人胰岛素免疫测定用国家标准品研制

一批人胰岛素原料，经高效液相、聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射免疫分析证实是具有较高生物活性和免疫活性的单组分人胰岛素，适宜作为国家免疫标准品原料。用含蔗糖和人血清白蛋白的醋酸溶液将此原料配制成１０ＩＵ／Ｌ溶液，按每支１ｍＬ分装，经冻干制备成待标品。用ＷＨＯ人胰岛素免疫测定用国际标准品为对照品，进行免疫活性标定，２２组结果的均值为１０．０４ｍＩＵ／支。分别以国际标准品和待标品为对照测定同一组质控血清，其均值接近，且在统计学中无显著差异。证明本待标品可做为免疫测定用国家标准品。

第六批细菌内毒素国家标准品和第二批细菌内毒素国际标准品致热活性的比较

本文首次报道了我国第六批细菌内毒素国家标准品(981)的致热活性结果，并与第二批细菌内毒素国际标准品(IS2)的致热活性进行了比较。981的致热闽是7．6EU／ml，IS2的致热阈是13．9EU／ml，结果表明我国现行细菌内毒素国家标准品与现行细菌内毒素国际标准品的致热活性是一致的。

rhTSH第一次生物测定用国际标准品国际合作研究

在回顾了促甲状腺素(TSH)国际标准品建立和发展历史的基础上,报告了重组人促甲状腺素(rhT-SH)第一次生物测定用国际标准品(03/192)国际协作研究的情况。基于在本次协作研究中03/192在不同的分析系统中表现的适当的一致性和其热加速降解品表现的稳定性,世界卫生组织(WHO)已推荐重组制剂03/192作为rhTSH第一次生物测定用国际标准品使用,并定义为9.5IU/安瓿。本实验室用5种不同的标记免疫分析方法参加协作研究,并对TSH免疫测定用国家标准品(150530-0312)进行了评估,以WHO提供的几支TSH国际标准物质为对照品综合评价TSH免疫测定用国家标准品,其标定结果是0.557mIU/安瓿,相当于现标示值(0.600mIU/安瓿)的92.8%,说明TSH国家标准品与国际标准品相符。

水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建

采用细胞培养和T-A克隆技术,在轮状病毒主要结构蛋白VP7基因序列上设计合成引物,经PCR扩增后将特异性产物连接入pGEM-T-easy载体中,经过酶切鉴定和测序分析获得轮状病毒cDNA标准品.利用常规PCR和实时定量PCR方法对所获得的cDNA标准品进行特异性、稳定性和重复性指标的检验.结果表明,利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系（斜率为-3.353,R^2=0.995）;实时定量PCR熔解曲线分析表明,温度在81℃±0.5℃的PCR产物是轮状病毒VP7序列上的特异性产物,表明此标准品是轮状病毒特异性的;同时,所制备的标准品在实时定量PCR检测中具有较大的线性范围（9×10^0～9×10^11copies/μL,每个反应最低可以检测到9个拷贝数的轮状病毒cDNA,表明利用该标准品进行实时定量PCR分析时具有较高的检测灵敏性;此外,该标准品具有较高的稳定性和重复性（3次独立实验CV值在0.2%～0.9%之间）,可长期稳定保存.构建的标准品可用作检测水环境中轮状病毒的实时荧光定量PCR的外标准品.

第4批蛋白含量测定国家标准品的制备和标定

目的:建立蛋白含量测定用国家标准品。方法:按2005年版中国药典三部、WHO 和 ICH 标准品有关要求,对标准品进行制备、分装、冻干、质量检测并开展协作标定。结果:批号为2002/04的蛋白含量测定标准品经检测,外观、无菌实验合格。pH 为7.5,水分含量为0.7%。蛋白含量经过6家单位共计39次的凯氏定氮法协作标定后,确定其含量为21.24 mg·支^(-1),标准差为0.694 mg·支^(-1),总体 RSD 为1.06%。采用 Lowry 法对第3批蛋白含量测定国家标准品与该批蛋白标准品进行比较后,结果表明两者无显著差异。结论:该批蛋白含量测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准用于 Lowry 法蛋白含量测定,特定为第4批蛋白含量测定国家标准品。

反相高效液相色谱法制备松果菊苷标准品

利用反相制备高效液相色谱结合溶剂萃取、大孔吸附树脂柱色谱和葡聚糖凝胶LH 2 0柱色谱方法 ,从管花肉苁蓉的乙醇提取物中纯化制备了苯乙醇苷类化合物松果菊苷的标准品 ,纯度达到 98%以上。方法操作简便 ,重现性好 。

胆酸类成分HPLC/ELSD单一标准品替代法含量测定研究

目的 :对 5种胆汁酸类成分的含量测定进行研究。方法 :采用HPLC/ESLD方法 ,通过单一标准品替代法对 5种胆汁酸成分进行定量测定 ,比较添加基质 (兔血清、尿液和清开灵提取物 )对测定结果的影响。结果 :利用 5种胆酸类成分中任一标准品就可以测定全部 5种胆酸类成分的含量。结论 :方法简单可靠 ,为复杂基质中成分的定量 。

油茶皂苷标准品的制备及定量方法的比较

比较研究了2种常用的茶皂苷的定量方法,分析了它们的优缺点,并用自制油茶皂苷纯品为标样,绘制了油茶皂苷定量的标准曲线,相关系数分别为0.9996和0.9933。

甲基苯基碳酸酯标准品的制备及其定量分析

利用甲基苯基碳酸酯(M PC)歧化反应的可逆性及逆反应在热力学上有利进行的特点,提出了以碳酸二甲酯(DM C)和碳酸二苯酯(DPC)为原料,在T iO2/S iO2催化下合成DM C与苯酚酯交换反应的中间产物M PC的新方法。反应产物经减压精馏、碱洗、水洗、干燥等精制处理,得到了纯度较高的M PC标准品。采用气相色谱-质谱法对所制备的M PC样品进行定性分析,结果表明其中还含有少量的苯酚和DPC杂质。卡尔.费休水分测定结果表明,M PC样品中的含水量为0.26%(质量分数)。使用常规气相色谱仪,采用OV-101毛细管色谱柱,以苯甲酸乙酯为内标物,对自制的M PC标准品中的微量苯酚和DPC进行定量分析,苯酚和DPC的含量分别为2.04%和1.59%(均为质量分数)。根据杂质分析结果可知自制的M PC标准品的纯度为96.11%。以此作为标准品,解决了对DM C与苯酚酯交换反应的中间产物M PC的准确定量问题。

抗戊型肝炎病毒IgG抗体定量线性标准品的标定及初步应用

目的建立抗戊型肝炎病毒(Anti-HEV)IgG抗体的定量线性标准品,并进行初步应用。方法利用抗-HEV IgG和抗-HEV IgM ELISA检测试剂筛选出1份抗-HEV IgG阳性血清L9,经基因1型和4型的HEV ORF2C-端抗原及239抗原进行Western blot确认后,用WHO定量标准品,由3个实验室协作标定,利用量反应平行线法计算其抗-HEV IgG的含量。考察已标定的L9血清的稳定性,并用所标定的1.5倍系列稀释的血清对国内外6家抗-HEV IgG试剂的灵敏度进行检测。选择一灵敏度较高的试剂,在其线性范围内取L9的5个稀释度作为抗-HEV IgG抗体定量线性标准,对高、中、低浓度的3份临床血清重复检测5次,考察其重复性;对实验感染猴的系列血清中抗-HEV IgG含量进行定量检测,考核该定量线性标准品的应用效果;并对每次定量试验中的线性方程进行分析,确定相关系数r值和斜率k值的范围。结果经国内外试剂检测筛选出的阳性血清L9与基因1型和4型的HEV ORF2 C-端抗原及239抗原均有阳性反应。经协作标定,L9血清抗-HEV IgG含量为16.9U/ml。L9血清在-20℃下保存6、12、18个月,2～8℃保存24、48、96h后,定量结果均在95%置信区间内,且抗-HEV IgG含量均未明显下降。6家抗-HEVIgG检测试剂灵敏度差异较大,范围为0.03～5.00U/ml。确定L9血清从0.42U/ml开始的5个1.5倍系列稀释度,作为某一试剂抗-HEVIgG抗体定量线性标准品。利用该线性定量标准检测高、中、低浓度的3份临床血清,定量结果重复性较好;对实验感染猴系列血清进行定量检测,结果可有效地反映抗体水平变化趋势;94%的定量检测试验,r≥0.98,1.15≥k≥0.95。结论已建立了抗-HEVIgG抗体定量线性标准品,可用于疫苗免疫原性评价和流行病学调查。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子国家标准品的研制

目的 建立效价测定用的重组牛碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）国家标准品。方法 按ＷＨＯ有 关要求制备标准品，分装、冻干后进行检定，以ｂＦＧＦ国际标准品为标准进行协作标定。结果 经检测外观、无菌实 验合格，水分为０．９９％，于－２０、４和２５℃条件下放置２３个月其生物活性稳定。该标准品经３家实验室协作标定， 共２３次测定，平均效价为６９７１支。实验均数的９５％可信区间为６２６６－７７５３ＩＵ／支，单次实验的９５％参考值范围 为３３９４－１０９６５ＩＵ／支，平均可信限率为 １０．９９５％。结抡 该批重组牛ｂＦＧＦ国家标准品各项指标均符合要求，可作 为国家标准品使用，效价定为７０００ＩＵ／支，批号为０１／９６。

RNA荧光定量标准品制备新方法的探讨

目的以丙型肝炎病毒(HCV)为例,介绍一种简便快速的RNA定量标准品的制备方法。方法RT-PCR扩增目的片段,产物以pGEM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH 5α,经筛选和测序鉴定,阳性质粒体外转录合成cRNA,准确定量后作为标准品。结果RNA标准品具有较大的线性范围(109cop ies/m l^10 cop ies/m l),批内和批间重复性也较好,CV分别为1.68%~5.97%和6.40%~10.58%。结论此法制备的RNA标准品具有较好的检测灵敏度和特异性,适合临床推广应用。