核桃炭疽病生防菌的分离鉴定及生防潜力研究

炭疽病是一种对核桃品质和产量造成严重影响的毁灭性病害。在病害防治中,生物防治因其对环境友好、不易产生抗药性和安全性高等优点,有望替代化学防治发挥优势。本研究采用平板对峙法,从核桃叶片内生细菌中筛选出一株对核桃炭疽病菌(包括Colletotrichum gloeosporioides、C.fructicola、C.siamense、C.fioriniae和C.aenigma)具有较强抑制作用的菌株GYX7,该菌株对核桃炭疽病菌抑制率在70.56%~80.78%,镜检发现对峙培养下的炭疽菌菌丝出现畸形和裂解现象。菌株GYX7具有较广的抑菌谱,对其他13种供试植物病原菌也表现出明显的拮抗效果。通过对其形态学、生理生化特性以及16Sr DNA和gyrB基因序列进行系统发育分析,鉴定该菌株为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。对菌株GYX7的抑菌机理研究表明,该菌株可产生对核桃炭疽病菌菌丝生长具有抑制作用的挥发性物质,抑制率最高可达51.39%;浓度为20%的菌株GYX7无菌滤液对果生刺盘孢菌丝生长和孢子萌发具有良好的抑制效果,抑制率分别为82.24%和98.17%;菌株GYX7能产生多种胞外水解酶,如蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、β-1,3-葡聚糖酶;该菌株具有编码多种抗菌化合物的基因。此外,离体接种试验结果显示,菌株GYX7能有效降低核桃炭疽病的发病率和严重程度,防效高达86.53%。这些结果表明菌株GYX7在防治核桃炭疽病方面具有较高的潜在应用价值。

基于MaxEnt模型的核桃炭疽病适生性分析

[目的]根据核桃炭疽病的已知分布情况,对它在中国范围内和云南省范围内的适生区分别进行预测分析,明确核桃炭疽病在我国潜在的分布区范围,有助于生产上采取科学高效的监测和预防措施,降低潜在的生态和经济损失。[方法]利用MaxEnt物种分布模型,通过筛选生物气候变量和优化模型参数构建表现最佳的模型,进而应用于核桃炭疽病在中国和云南省范围内的适生区的预测。利用ArcGIS软件对预测结果进行可视化处理和面积统计,并利用模型的结果对影响核桃炭疽病的主要环境因素进行分析。[结果]MaxEnt模型预测结果显示:影响核桃炭疽病适生性的主导环境因子主要有年降雨量、最干月份降雨量、温度季节性、最冷季度平均温度、年平均温度、等温性、平均日较差和最暖季度平均降雨量等。核桃炭疽病在中国生态适宜区总面积约为317.12万平方公里,占国土总面积的33.03%,主要分布在我国华中、华东、华南的全部地区以及西南大部分地区和“三北”(西北、华北、东北)少部分地区;核桃炭疽病在云南的适生区主要集中在滇西地区,约为22.64万平方公里,占省总面积的57.44%。[结论]核桃炭疽病在中国有着较为广泛的适生区域,尤以云南省核桃炭疽病发生点数量最多和高度适生区分布区域最广泛,预测适生区与已经获取核桃炭疽病分布点结果相一致,未来应结合当地核桃炭疽病菌的生物学特征和实地分布情况进一步加强核桃炭疽病的预测和防治。

8种杀菌剂对核桃炭疽病病原菌胶孢炭疽菌的室内毒力

由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的核桃炭疽病是目前危害山东省核桃生产的主要病害。为筛选防治该病害的高效药剂,在确定了最适菌丝生长和分生孢子萌发温度的基础上,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,测定了8种常用杀菌剂对胶孢炭疽菌的毒力,评估了温度对咪鲜胺和戊唑醇毒力的影响,检测了17个胶孢炭疽菌菌株对咪鲜胺和戊唑醇的敏感性,同时评价了这2种杀菌剂的预防和治疗作用。结果显示:在胶孢炭疽菌菌丝生长和孢子萌发的最适温度28℃下,供试8种杀菌剂中,咪鲜胺、戊唑醇和三唑酮对供试菌株菌丝生长的抑制作用最强,平均EC50值分别为0.07、1.45和3.04 mg/L;异菌脲、代森锰锌和咪鲜胺对分生孢子萌发的抑制作用最强,平均EC50值分别为21.07、25.14和25.18 mg/L。咪鲜胺对菌丝生长的抑制作用受温度影响较小,而戊唑醇对菌丝生长的抑制作用随温度降低而增强;供试17个菌株对咪鲜胺和戊唑醇均有较高敏感性,平均EC50值分别为0.08和1.03 mg/L。建议在核桃炭疽病发病的不同时期,轮换使用咪鲜胺、戊唑醇、三唑酮、异菌脲和代森锰锌等杀菌剂,以有效控制该病害。

吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑对核桃炭疽病菌的联合毒力及林间防治效果

【目的】明确吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑混配对核桃炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的联合毒力和林间防治效果,为核桃炭疽病综合防控提供科学依据。【方法】采用菌丝生长速率法测定吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑单剂及其不同配比混剂对核桃炭疽病菌菌丝生长的毒力;利用喷雾法进行林间防治试验,评价吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑混剂对核桃炭疽病的林间防治效果。【结果】室内联合毒力测定结果表明,吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑按质量比3∶2和1∶1进行复配对核桃炭疽病菌菌丝生长的毒力表现为增效作用,增效系数分别为1.61和1.57;其他配比的增效系数在0.91~1.41,表现为相加作用。林间对核桃炭疽病的防治试验结果表明,250 g/L吡唑醚菌酯乳油与250 g/L苯醚甲环唑乳油以质量比3∶2进行混配(吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑的含量分别为150和100 g/L),施用剂量为有效成分125.0、166.7和250.0 mg/L时对核桃炭疽病有很好的防治效果,施药3次后防治效果均在80.0%以上,分别与325 g/L苯甲·嘧菌酯悬浮剂(苯醚甲环唑125 g/L+嘧菌酯200 g/L)施用剂量为有效成分162.5、216.7和325.0 mg/L时的防治效果相当;250 g/L苯醚甲环唑乳油125.0 mg/L的林间防治效果也较好,而250 g/L嘧菌酯悬浮剂166.7 mg/L和250 g/L吡唑醚菌酯乳油166.7 mg/L的防治效果稍低。【结论】吡唑醚菌酯与苯醚甲环唑以质量比3∶2混配具有较好的增效作用,林间对核桃炭疽病具有良好的防治效果,可作为防治核桃炭疽病的药剂推广应用。

核桃炭疽病病原菌鉴定及生物学特性

本文从表现炭疽病症状的核桃果实上分离到一株具有强致病性菌株（TS-09）,并进行了鉴定和生物学特性研究。经形态特征观察、培养性状以及r DNA-ITS、ACT、β-tub2、GPDH四种保守基因序列分析,TS-09菌株为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。生物学特性测定结果表明：TS-09菌株在PDA培养基上生长最好;25~30℃之间适宜菌株生长及产孢,28℃是菌株最适宜的生长及产孢温度;弱酸性环境（p H4.0）有利于产孢,中性环境（p H7.0）适宜菌丝生长;长时间光照抑制菌丝生长,黑暗条件有利于菌丝生长;菌丝的抗逆性较强,60℃处理15 min、62℃处理10 min,菌丝死亡。研究结果将为核桃炭疽病的预测及有效控制提供理论依据。

陕西省核桃炭疽病病原鉴定

通过常规组织分离法对采自陕西省陕南和关中的核桃(Juglans regia)炭疽病样品进行了分离,采用形态学、培养特性并结合核糖体内转录间隔子(rDNA-ITS)、β-微管蛋白(TUB2)、钙调蛋白(CAL)、谷氨酰胺合成酶(GS)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的多基因系统发育分析方法以及致病性测定,明确了引起陕西省核桃炭疽病病原菌的种类。结果显示:12个代表性菌株被鉴定为胶孢刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides),4个代表性菌株被鉴定为尖孢刺盘孢复合种(C.acutatum)中的C.sp.,C.sp.与古代稀刺盘孢(C.godetiae)在系统进化关系上最接近,自展支持率为91%。致病性测定显示,胶孢刺盘孢和C.sp.能够侵染核桃果实并产生典型的炭疽病症状。

核桃炭疽病在山东地区季节流行动态及防治措施

为阐明核桃炭疽病在山东省的季节流行规律,明确清园、药剂防治等措施的防治效果,2013年在山东省核桃主产区进行林间调查取样,开展清园、休眠期、生长期药剂防治等田间试验。结果表明,核桃炭疽病在山东省的季节流行动态先缓慢后快速增长,Richards模型能够较好地反映核桃炭疽病时间流行动态。病果率增长最快达到1.17%/d。秋末春初清园处理,园内核桃病叶率、病果率减少52.3%和58.3%,是减轻炭疽病危害的经济有效措施之一。落叶后以及萌芽前及时喷2次波尔多液,防治效果在65%以上。核桃生长期合理使用多菌灵、甲基托布津、氟硅唑等化学农药,防治效果在85.0%以上,能够有效控制炭疽病的危害。

9种杀菌剂对核桃炭疽病菌的抑制作用及联合毒力

为室内筛选出防控核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌的高效杀菌剂,采用菌丝生长速率法室内测定9种杀菌剂对胶胞炭疽菌的抑制作用,以及40%咪鲜胺水乳剂和1%申嗪霉素悬浮剂复配后对胶胞炭疽菌的抑制作用及联合毒力。结果表明,9种杀菌剂中40%咪鲜胺水乳剂对胶胞炭疽病菌抑菌作用最强,EC50为0.048 2 mg/L;1%申嗪霉素悬浮剂次之,EC50为0.139 3 mg/L;47%春雷·王铜可湿性粉剂抑菌作用最差。40%咪鲜胺水乳剂和1%申嗪霉素悬浮剂在7∶1～1∶3范围内复配有明显的增效作用,比例为3∶1的共毒系数CTC最大,为214.296 6。40%咪鲜胺水乳剂和1%申嗪霉素悬浮剂可有效抑制胶胞炭疽病菌菌丝生长,2种杀菌剂复配对胶胞炭疽菌具有明显的增效作用,可进一步用于田间试验。

坚强芽孢杆菌Bf-02对核桃炭疽病的防治效果

为了测定坚强芽孢杆菌Bf-02菌株对核桃炭疽病的防治效果,采用室内对峙培养、发酵液离体防治、林间喷雾防治等方法,开展了Bf-02防治核桃炭疽病的试验。结果表明,Bf-02通过分泌各种代谢产物破坏病原菌菌丝壁结构,引起菌丝膨大、畸变、扭曲、菌丝壁消解;分生孢子中间缢缩,细胞壁溶解,原生质外泄等。室内对峙培养可使菌丝生长抑制率达到83.33%。离体防治试验结果表明,Bf-02对核桃炭疽病具有防治功效。利用15亿cfu/g坚强芽孢杆菌可湿性粉剂400、600倍液对核桃炭疽病进行林间喷雾防治,防治效果均达80%以上,效果良好。

核桃炭疽病生物防治菌株YB-4-15的筛选和鉴定

核桃炭疽病给云南核桃产业的发展造成了严重的影响。为给核桃炭疽病生物防治制剂的开发提供理论支撑,以核桃炭疽病菌为指示菌,采用土壤稀释平板法及对峙培养法,对生防菌株进行了分离与筛选,结果表明：菌株YB-4-15、YB-8-11-1、YB-7-9-1对核桃炭疽病菌均有80%以上的抑菌活性,其中,抑菌作用最稳定、抑菌效果最佳的菌株为YB-4-15。然后对YB-4-15菌株进行了形态学鉴定和ITS分析,鉴定结果表明：YB-4-15菌株为钩状木霉菌。最后,对该木霉菌的生物学特性及次生代谢产物的性质进行了研究,结果表明：该菌最适温度为28℃,其菌丝生长对光照条件不敏感,适合在p H为4~8的PDA培养基上生长,其无菌滤液的热稳定性较差,仅在45℃及以下温度条件下才有较好的抑菌效果。

山东省核桃炭疽病发生规律及危害情况调查

为了掌握山东省核桃炭疽病发生规律及危害情况,2018年,对山东省泰安市新泰市汶南镇、临沂市费县芍药山乡、泰安市道朗镇、潍坊市昌邑市下营镇、济宁市邹城市石墙镇核桃园进行调查。结果表明,在山东省核桃炭疽病于7月初开始发病,7月中下旬至8月中旬是快速增长期,8月中下旬至核桃采收前达到发病高峰期。可见,6月底是预防核桃炭疽病的关键时期,应及时使用保护性药剂。

核桃炭疽病空间分布格局及抽样技术

采取随机取样和Iwao回归分析法研究核桃炭疽病病果的空间分布型、抽样技术。结果表明,核桃炭疽病病果的空间分布类型为聚集型分布,病果密度越大,聚集程度越高,分布的基本成分是个体群,这种空间分布是由炭疽病致病菌自身的生物学特性与林间环境因素共同作用的结果。应用Iwao统计方法,确定了理论抽样数和序贯抽样模型。以病果率10%为防治阈值,置信水平为1.96,确定防治上下限方程为T0(n)=10 n±13.4691n(1/2)。

核桃炭疽病的发生与防治

核桃作为河北省优势特色干果树种,2000年以来一直保持高速迅猛发展态势,截止2016年栽培面积已达27.55万hm^2,产量18.5万t。目前核桃生产中,炭疽病是导致果农经济损失的重要病害,严重郁闭管理粗放的果园落果率可高达60%,甚至绝收。本文针对冀东地区核桃炭疽病的发病规律,提出综合防治方法,以期为生产提供指导。

核桃炭疽病重发原因及防治对策

核桃炭疽病是主要危害核桃果实的一种真菌病害,近年来,随着农业产业结构的调整以及山区退耕还林工程的实施,核桃栽培面积不断扩大。截至2018年,河北省核桃栽培面积达9.7万公顷,产量97万吨。但随着规模的扩张和集中栽植程度的提高,炭疽病危害程度也日益严重。据2017~2019年在河北邢台、平山、赞皇等地的调查,一般果园发病率在40%~50%,管理粗放的果园病果率甚至可达100%。感病后果实变黑(俗称黑核桃)、腐烂、落地,造成大量减产,严重影响核桃果实品质和种植效益。

核桃炭疽病的发生与综合防治措施

核桃炭疽病是由真菌侵染引起的病害,主要危害核桃树叶片、果实和嫩梢,该病具有潜伏期长、发病时间集中、爆发性强的特点。进入7月份以来因高温多雨影响,各地核桃园区不同程度地爆发此病。植株染病后易引起落果、烂果及果仁干瘪,果实的病果率20%-50%,发病严重果园病果率在80%以上,极大地影响了核桃的产量和品质。1危害症状（1）果实受害后,果皮上出现褐色至黑褐色、圆形或近圆形的病斑,中央稍凹陷,病部产生黑色小粒点,呈同心轮纹状排列。

两种混配剂防治核桃炭疽病的研究

为有效控制核桃炭疽病田间为害势头,提高核桃产量和品质,本文利用壳聚糖盐为载体,创制了溴氰菊酯原液为核心药剂的两种混配剂,经过室内抑菌试验和大田防治测定发现,B1GA和XLCH对核桃炭疽病均有较好的防治效果,分别达到80.68%和54.77%。两种混配剂对果实生长均无负面影响,其中B1GA田间防效和稳定性优于XLCH。

核桃炭疽病病原菌越冬方式及场所的研究

为明确河北省邢台市核桃炭疽病的越冬方式及越冬场所,于2018年12月和2019年3月越冬季节采集核桃树上发病的带芽枝条、带果柄果实、落果、落叶以及林下土壤,观察子实体着生情况,测定越冬子实体内孢子萌发率,对采集的组织以及土壤进行室内病原菌的分离培养。结果表明,核桃炭疽病病原菌可以子实体的形式在树上果壳和落果上越冬,越冬后子实体萌发率分别达96.82%,94.36%。该病菌也可以菌丝体的形式在果壳、果仁、果柄、芽鳞、枝条、落果果壳、落果果仁中越冬,越冬后病原菌分离率达60%~82%,少数可以在叶柄中越冬,越冬后分离率为27.59%。土壤也是其重要越冬场所,1 g土壤中病原菌数量为2.0×10^5个。

核桃炭疽病的综合防治

由胶孢炭疽菌引起的核桃炭疽病是目前危害山东核桃产业的主要病害,本文从核桃炭疽病的病原、致病特点、危害症状及其对该病的综合防治方面,结合国内对核桃炭疽病的研究进展,总结核桃炭疽病的发病规律,期望根据其生物学特性,针对核桃炭疽病不同发病时期,采取化学、生物、人工技术措施物理防治相结合的办法,有效控制该病害,为提升核桃品质,推广丰产抗病良种核桃,提供理论依据.

“香玲”核桃炭疽病果与健果的青皮微生物多样性比较

采用高通量测序分析"香玲"核桃炭疽病病果与健果青皮的微生物多样性,以期为病害的科学防治提供新的思路。结果表明,"香玲"核桃感染炭疽病后,病果青皮真菌多样性及优势度显著提高。相对丰度分析发现,炭疽病果不仅刺盘孢属Colletotrichum(炭疽病菌)相对丰度提高,赤霉Gibberella(赤霉病菌)、葡萄座腔菌属Botryosphaeria(干腐病菌)、链格孢属Alternaria(叶斑病菌)和月盾霉属Peltaster(煤污病菌)等病原菌的相对丰度也明显提高。在选用化学药剂防治时,需兼顾多种病原菌。对细菌而言,病果青皮中鞘氨醇杆菌Sphingobacterium、根瘤菌Rhizobium、假单胞菌属Pseudomonas等的相对丰度明显提高。可见病原菌丰度的增加,可在一定程度上提高核桃青皮益生细菌的含量。

核桃炭疽病新型生防木霉的筛选及生物学特性研究

为防治由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的核桃炭疽病,从核桃叶、茎、根等组织中分离出9种内生真菌。分别对分离得到的内生真菌与胶孢炭疽菌进行平板对峙试验和田间致病性检测,筛选得到一株抑制效果较好的菌株Chen-P20。经分子学和形态学鉴定为木霉属真菌Trichoderma sp.。研究表明:平板对峙培养条件下Trichoderma sp. Chen-P20菌丝对胶孢炭疽菌抑制率为83.3%,其孢子悬浮液对胶孢炭疽菌的抑制率为84.7%。Trichoderma sp. Chen-P20在核桃叶、茎和幼苗植物体内拮抗活性显著,对胶孢炭疽菌的防治率分别为62.6%、55.6%和66.8%。Trichoderma sp. Chen-P20菌丝生长和产孢的最适培养基为PDA,最佳碳源和氮源分别为麦芽糖和甘氨酸,最适环境条件为25℃,持续光照,pH在5~6之间。