脱氧核苷酸钠注射液治疗化疗引起的白细胞减少症临床观察

目的观察脱氧核苷酸钠注射液对恶性肿瘤化疗引起的白细胞减少症的疗效及不良反应。方法将85例肿瘤患者随机分为试验组、对照组和空白对照组。试验组于化疗药物结束后48小时予脱氧核苷酸钠200 mg静脉滴注,每天1次连用14天,对照组予利血生20 mg,每日3次;鲨酐醇100 mg,每日3次,连用14天。空白对照组不予升白治疗。结果试验组30例在用药14天内显效10例,有效15例,有效率83.3%,对照组用药14天内显效2例,有效5例,有效率23.3%。结论脱氧核苷酸钠注射液具有提升化疗引起的白细胞减少和提高化疗耐受性的良好作用,且不良反应轻微。

IGF-IR反义硫代磷酸型寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡的病理学研究

目的 :探讨IGF IR基因的反义硫代磷酸型寡核苷酸对胶质瘤细胞的形态学影响。方法 :根据IGF IRcDNA序列设计正义、反义寡核苷酸片段 ,并对其部分碱基进行硫代磷酸修饰。体外培养的胶质瘤细胞分别经正义寡核苷酸和反义寡核苷酸处理 ,应用倒置显微镜活细胞观察、HE染色光镜观察、透射电镜及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法研究IGF IR反义硫代磷酸型寡核苷酸诱导胶质瘤细胞凋亡作用。结果 :经反义寡核苷酸转染的胶质瘤细胞中 ,呈现典型的凋亡形态学改变。凋亡细胞最早期表现为细胞体积、容量减少 ,染色质凝聚 ,继之染色质集聚于核膜下成新月状或块状 ;细胞核内染色质可完全固缩成团呈“黑洞”样或萎缩的核破裂形成一些较小的膜包绕的球体位于胞质内 ,最后出泡形成凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳分析经反义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞DNA降解片段 ,可见有明显的小分子量DNA梯状条带 ,而野生型和正义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞未见DNA梯状条带。结论 :IGF IR所介导的分泌环路IGF I/IGF IR ,在胶质瘤细胞增殖和维持恶性表型中起重要作用 ;IGF IR反义硫代磷酸型寡核苷酸能诱导胶质瘤细胞凋亡。

脱氧核苷酸与G-CSF联合干预骨髓抑制多中心临床试验

目的:观察脱氧核苷酸与重组人粒细胞集落刺激因子联合预防恶性肿瘤化疗所致的白细胞减少症的有效性与安全性。方法:将144例恶性肿瘤患者随机分为治疗组和对照组各72例,均采用常规一线化疗方案治疗,对照组化疗同时给予重组人粒细胞集落刺激因子。治疗组在对照组基础给予脱氧核苷酸注射液(200mg/d)。结果:治疗组WBC恢复正常所需的时间快于对照组,治疗组白细胞水平高于对照组。治疗组白细胞恢复正常87.5%,对照组白细胞恢复正常63.8%,对照组III度、IV度骨髓抑制达17.1%,治疗组5.6%,两组比较差异有统计学意义。治疗组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞水平均明显高于对照组。治疗过程中,治疗组肌肉疼痛/乏力、肝损伤不良事件发生率分别为4.2%、1.4%,对照组为19.4%、9.7%,两组具有统计学差异。治疗组及对照组感染发生率分别为2.8%、12.5%。化疗后给予脱氧核苷酸治疗,可明显增强患者的体重,平均增加2.1±0.4kg,对照组体重平均下降-0.3±0.1kg,两组比较具有统计学差异。结论:脱氧核苷酸联合粒细胞集落刺激因子联合干预可以明显提高血小板水平,增加患者体重,减轻粒细胞集落刺激因子的不良反应。

Livin基因反义寡核苷酸诱导肺腺癌A549细胞的凋亡

目的:探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法:用阳离子脂质体介导LivinASODN转染A549细胞后,MTT法检测对A549细胞增殖抑制率的影响;RT-PCR法和细胞免疫荧光化学检测LivinASODN转染前后,A549细胞中Livin mRNA和蛋白表达的变化;吖啶橙/溴乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)复合染色检测A549细胞的凋亡率。结果:在A549细胞中同时有Livinα和Livinβ的表达,Livin蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。Livin基因ASODN可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.01),且作用具有剂量依赖性。终浓度为400nmol/L的Lip-ASODN转染后,A549细胞Livin mRNA和Livin蛋白的表达均被明显抑制,细胞凋亡率达(31.25±5.75)%,与对照组(3.23±1.98)%相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LivinASODN可下调Livin基因表达,有效抑制A549细胞的增殖,并促进A549细胞凋亡。因此,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对Hep-2细胞侵袭力抑制的研究

目的探讨乙酰肝素酶(heparitinase,HPSE)反义寡核苷酸(antisense oligodexyribonucle-otides,AS-ODN)对Hep-2细胞HPSE mRNA、HPSE蛋白的表达及其侵袭力的活性抑制。方法设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSEAS-ODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人喉癌Hep-2细胞进行培养,采用流式细胞分析技术和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测Hep-2细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验分别对HPSEAS-ODN对Hep-2细胞侵袭力的抑制进行检测。结果AS-ODN各组与正常对照组和脂质体组比较及AS-ODN各组间比较HPSEmRNA和HPSE蛋白的表达及细胞侵袭力均有明显抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01);AS-ODN在终浓度为100、200、400nmol/L时对Hep-2细胞侵袭力的抑制率分别为60.1%、80.8% and 94.0%。结论HPSEASON通过下调HPSE mRNA和HPSE蛋白的表达可显著抑制Hep-2细胞的侵袭力并呈剂量依赖性。

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的 观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。 方法 以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。 结果 细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。 结论 联合用药较单独用药对 NCI- H4 4

bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的 探讨 bcl- 2基因反义寡核苷酸 (ASODN)对白血病细胞药物敏感性的影响。 方法 MTT法测bcl- 2 ASODN对 U 937细胞足叶乙甙 (VP1 6 )敏感性 ,计算细胞存活率 ,绘制剂量 -效应曲线 ,直线回归求半数致死量 IC50 ;DNA电泳、AO/ EB荧光染色测定细胞凋亡率。 结果 VP1 6与 bcl- 2 ASODN联合作用比单独用 VP1 6或 VP1 6与 SODN细胞存活率显著减少。 bcl- 2 ASODN作用后 VP1 6对 U 937细胞的 IC50 由 7.93μoml/ L降至2 .6 7μom l/ L。与单独 VP1 6作用组相比 ,bcl- 2 ASODN与 VP1 6联合作用后梯状 DNA片段明显增加 ,细胞凋亡率增高。 结论 bcl- 2 ASODN能促进 VP1 6诱导的白血病细胞凋亡 ,提高白血病细胞对 VP1 6的敏感性。bcl- 2反义寡核苷酸在克服化疗药物耐药性方面 ,具有良好的应用前景。

Survivin反义寡核苷酸联合AsI_3-cys对K562细胞凋亡的影响

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸(ASODN)联合AsI3-cys对K562细胞增殖的抑制作用和细胞凋亡的诱导作用。方法:K562细胞体外培养,人工合成并硫代修饰Survivin ASODN,通过脂质体转染进入K562细胞,同时与AsI3-cys联用,MTT法检测细胞增殖抑制程度,Tunel法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中Survivin mRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞周期的变化和细胞凋亡率。结果:Survivin ASODN各浓度组对K562细胞的增殖有明显的抑制作用,能明显诱导细胞凋亡,联用组诱导K562细胞凋亡的能力与其他组相比在统计学上差异有显著性。结论:Survivin ASODN能够诱导K562细胞凋亡,并提高K562细胞对AsI3-cys的敏感性。

生存素反义寡脱氧核苷酸对人胃癌细胞株凋亡的影响

背景:生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白(IAP)基因家族成员之一,在多数肿瘤组织中高表达。目的:观察生存素反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对人胃癌细胞株凋亡的影响。方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901分为不同浓度生存素ASODN组、无关寡脱氧核苷酸(N-ODN)组和对照组。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测生存素ASODN对SGC-7901细胞生长的影响;通过形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪分析反映细胞凋亡情况;以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定(TRAP-ELISA)方法检测端粒酶活性。结果:生存素ASODN能抑制SGC-7901细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制端粒酶活性。凋亡细胞形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;DNA电泳呈现凋亡特征性阶梯状条带;流式细胞仪分析显示G1期前出现亚二倍体凋亡峰。结论:生存素ASODN能诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡,抑制细胞生长及其端粒酶活性。

长链非编码核糖核酸在心血管疾病发生机制的研究进展

长链非编码核糖核酸(lncRNA)是转录本大于200个核苷酸长度、无蛋白编码功能的非编码核糖核酸(ncRNA),在转录、转录后及表观遗传学等细胞水平调控基因的表达。随着研究进展,发现lncRNA的表达量异常与心血管疾病(如动脉粥样硬化、慢性心力衰竭)的发生、发展密切相关,并且在人体血浆中已成功检测到lncRNA,其有望成为心血管疾病的新型诊断学标记物或药物治疗靶点。本文就近年来对lncRNA在心血管疾病发生机制的研究进展作一综述。

核苷酸还原酶M1在晚期非小细胞肺癌治疗和预后中的作用

肺癌是最常见和死亡率最高的恶性肿瘤之一,75%-80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。且绝大部分患者就诊时已处晚期,失去了根治性手术或放疗的机会,化疗是主要的治疗手段。但由于肿瘤生物学行为的多样性和对化疗药物的耐药等,使得晚期NSCLC的化疗不容乐观。近年来,分子标志物的个体化化疗在晚期NSCLC的应用,使得这些患者生存期有所延长,生活质量有所提高。针对晚期NSCLC,根据分子标志物选择合适的药物,达到个体化化疗是临床中所要面对和解决的问题。本文就核苷酸还原酶M1(ribonucleotide reductase subunit 1,RRM1)在晚期NSCLC治疗和预后中的作用做一简要综述。由RRM1指导的个体化化疗并不能作为晚期NSCLC的常规决策,还需进一步研究。

脱氧核苷酸钠防治初治继发性肺结核合并乙型肝炎患者药物性肝损伤的效果

目的 观察和评价脱氧核苷酸钠注射液防治初治继发性肺结核合并乙型肝炎抗原阳性患者抗结核药物性肝损伤的疗效.方法 选取2012年1月至2014年3月广东省汕头市结核病防治所门诊就诊、经实验室和临床诊断为初治继发性肺结核合并乙型肝炎抗原阳性的患者112例,按数字表法随机分为实验组和对照组,各56例.对照组的治疗方案为：2 HRZE/4 HR,并常规应用肝泰乐片（葡醛内酯片）进行保肝治疗;实验组在上述治疗方案的基础上在强化期加用脱氧核苷酸钠注射液,疗程为1个月,比较两组患者的肝损伤情况及细胞免疫功能指标.采用SPSS 11.0软件进行数据处理和分析,计量资料以“（x）±s”表示,组间比较采用t检验,“率”的比较采用χ2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 治疗后第2、4周,实验组肝损伤的发生率分别为10.71％（6/56）和23.21％（13/56）,明显低于对照组的32.14％（18/56）和48.21％（27/56）,差异有统计学意义（χ2值分别为7.64、7.62,P值均＜0.01）;实验组中度肝损伤1例（1.79％,1/56）,而对照组中、重度肝损伤有11例（19.64％,11/56）.在肝功能指标方面,治疗后第2周,对照组丙氨酸转氨酶[（45±23）U/L]、天冬氨酸转氨酶[（46±18）U/L]较实验组[分别为（24±12）U/L、（20±13）U/L]明显升高（t值分别为6.06、8.76,P值均＜0.01）;血清总胆红素[对照组：（9.6±4.7） μmol/L;实验组：（8.7±4.5）μmol/L]和血清白蛋白[对照组：（40.9±4.2）g/L;实验组：（41.3±4.6）g/L]差异无统计学意义（t值分别为1.04、0.48,P值均＞0.05）.治疗后第4周,对照组丙氨酸转氨酶[（102±36）U/L]、天冬氨酸转氨酶[（94±39）U/L]、血清总胆红素[（36.1±10.5） μmol/L]均明显高于实验组[分别为（33±16）U/L、（32±12）U/L、（9.8±5.1） μmol/L],血清白蛋白则明显下降[对照组：（32.7±5.3）g/L;实验组：（40.7±3.9）g/L],两组比较差异均有统计学意义（t值分别为13.11、11.38、16.88、9.11,P值均＜0.01）.在细胞免疫方面,治疗4周后,实验组CD4＋T淋巴细胞[（39.5±8.1）％]、CD4＋/CD8＋值（1.5±0.3）明显高于治疗前[分别为（33.5±5.2）％、1.2±0.2],而CD8＋T淋巴细胞则明显降低[治疗前后分别为（33.1±4.8）％、（30.3±4.7）％]（t值分别为4.67、3.12、6.25,P值均＜0.01）,且与对照组[治疗4周后分别为（33.5±5.9）％、（33.4±6.2）％、1.2±0.6]比较,差异也有统计学意义（t值分别为4.48、2.98、3.33,P值均＜0.01）.结论 脱氧核苷酸钠注射液能改善肺结核合并乙型肝炎抗原阳性患者在抗结核治疗中出现的肝损伤,且能增强机体的细胞免疫功能.

CpG-ODN对鼠巨噬细胞TLR-9及Th1／Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)及Western blot检测Cp-ODN,鸟嘌呤胞嘧啶二核苷酸序列(Non-CpG-ODN),CpG-ODN+氯喹刺激24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-12(IL-12)的表达水平。结果刺激24h后,CpG-ODN与CpG-ODN+氯喹组巨噬细胞TLR-9 mRNA及蛋白的表达明显增加(P<0.01,P<0.05);细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组明显高于其他组,差异有显著性(P<0.05);各组IL-6、IL-12水平无显著性差异(P>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,调节Th1/Th2类细胞因子的分泌。

弹丸注射不同剂量三磷酸腺苷的冠状动脉血流储备分数比较

目的测定冠状动脉血流储备分数(FFR),探讨冠状动脉内注射三磷酸腺苷(ATP)的最佳剂量。方法选取冠心病患者50例,52处临界病变(狭窄程度为40%~70%)为研究对象进行FFR测量。将不同剂量的ATP[60μg(IC1)、100μg(IC2)、150μg(IC3)、200μg(IC4)、250μg(IC5)]以弹丸注射至靶血管,然后肘静脉以140μg·kg-1·min-1速度泵入ATP(IV组),分别测定并记录FFR值、心率、血压、不良反应等情况。结果随着冠脉内弹丸注射剂量的增加,FFR值逐渐减小,但IC4组与IC5组的FFR值差异无统计学意义。IC1组FFR值明显大于IV组的FFR值[差值为(0.021±0.012)分,P<0.05];IC4、IC5组的FFR值明显小于IV组[差值分别为(-0.030±0.015)分,P<0.05及(-0.031±0.017)分,P=0.001]。各组间血压、心率差异无统计学意义。13例患者出现ATP相关不良反应。结论在安全性相同前提下,相比于静脉泵入ATP,冠脉内弹丸注射ATP的剂量为200μg时诱发最大充血状态效果更佳。

反义核酸逆转Hep-2v细胞多药耐药的研究

目的 :探讨克服肿瘤细胞的多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)的有效方法。方法 :用反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸 (asODN)对Hep - 2v细胞进行多药耐药 (MDR)逆转实验 ,(1)将Hep - 2细胞经长春新碱(VCR)筛选建立Hep - 2v耐药细胞株为靶细胞 ;(2 )针对mdr1mRNA序列计算机辅助设计人工合成两个15mer反义寡聚脱氧核苷酸序列 :asODNⅠ、Ⅱ ,以硫代法修饰 ,其中序列Ⅰ和Ⅱ的作用位点相邻接 ,互补位点为MDR -mRNA的 330～ 35 9碱基 ;(3)MDR逆转实验 :两个反义序列分别或联合作用于Hep - 2v细胞 ,MTT法测定反义核酸作用前后VCR对Hep - 2v细胞IC50 ,比较其细胞毒作用 ;用流式细胞仪 (FCM )检测反义核酸作用后各实验组细胞表面糖蛋白P - 170的阳性率 ;RT -PCR法检测mdr1mRNA表达水平。结果 :两个反义核酸均使Hep - 2v细胞的P - 170阳性率下降 ,mdr1mRNA水平低调 ,VCR对Hep - 2v的细胞毒作用IC50 从90 0nmol L降至 <2 0 0nmol L。结论 :两个反义核酸用于Hep - 2v的MDR均获得明显的逆转效果 ,序列Ⅰ +Ⅱ联合作用的效果更强 。

地氯雷他定联合卡介菌多糖核酸治疗慢性荨麻疹疗效观察

【目的】探讨地氯雷他定联合卡介菌多糖核酸治疗慢性荨麻疹的疗效和安全性。【方法】99例的慢性荨麻疹患者随机分为治疗组和对照组。两组均口服地氯雷他定5mg，每日1次，治疗组同时给予卡介菌多糖核酸注射液肌肉注射1mg，隔日1次，疗程均为36d。【结果】治疗组和对照组的治愈率分别为84．3％和62．5％，复发率分别为11．6％和43．3％，两组比较具有统计学差异。两组仅个别患者有轻度嗜睡、头晕、口干现象，均能耐受，不影响继续治疗。【结论】地氯雷他定联合卡介菌多糖核酸可提高慢性荨麻疹的临床疗效且未见严重不良反应。

寡脱氧核糖核苷酸致敏树突状细胞对OVCAR-3卵巢癌细胞株杀伤作用的实验研究

目的探讨含有未甲基化"胞嘧啶-磷酸二酯键-鸟嘌呤(CpG)基序"的寡脱氧核糖核苷酸(CpG ODN)致敏人外周血来源树突状细胞(DC)在卵巢癌免疫治疗中的作用。方法应用 CpGODN2006联合肿瘤相关抗原 CA125体外冲击致敏 DCs,流式细胞技术检测 DC 膜表面 CD_(1α)、CD_(83)、CD_(86)和人白细胞 DR 抗原(HLA-DR)的表达,用 ELISA 测定 DC 培养上清液中白细胞介素(IL)-12的分泌水平;四唑盐(MTT)比色试验法检测活化 DCs 对细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)杀伤 OVCAR-3卵巢癌细胞株作用的影响。结果 CpG ODN2006联合 CA125在体外可明显激活人外周血来源 DCs,DC表面分子 CD_(83)、CD_(86)和 HLA-DR 表达的阳性细胞百分率[(85±4)%、(87±12)%和(92士7)%]明显高于未致敏组[(19±4)%、(67±9)%和(63±6)%](P<0.01);联合致敏后 DCs 培养上清液中白细胞介素(IL)-12分泌水平为(467±84)ng/L,与未致敏组[(60±9)ng/L]和单纯 CA125致敏组[(97±16)ng/L]相比差异有统计学意义(P<0.01);联合刺激后的 DCs 可以促进 T 淋巴细胞的增殖,增殖活性显著高于未致敏组和单纯 CA125致敏组(P<0.01),且相同效靶比下所诱导的 CTLs 对OVCAR-3卵巢癌细胞的杀伤活性显著强于未致敏组、单纯 CA125致敏组和单纯 CpG ODN 致敏组(P<0.01)。结论 CpG ODN 联合 CA125体外致敏 DC 可诱导产生对 OVCAR-3卵巢癌细胞的免疫杀伤作用,是一种临床应用前景良好的肿瘤免疫治疗方法。

细菌外泌体DNA的来源与生物学功能研究进展

细胞可通过细胞外囊泡,也称为外泌体(extracellular vesicles)将自身物质或代谢产物释放到细胞外。随着研究的深入,研究人员发现,细菌也可以产生包裹许多大分子物质(包括蛋白质、脂类、DNA和RNA等)的外泌体,并且细菌外泌体与细菌生存发育及细菌介导的种内和种间相互作用等多种生物学活动有着密切联系。研究人员还发现,革兰阴性菌与革兰阳性菌均可产生包含DNA的外泌体,细菌外泌体DNA可发挥介导水平基因的转移、协助生物膜形成及刺激免疫调节机制等生物学功能。本文针对细菌外泌体DNA的产生方式及其生物学功能进行阐述,使读者更为深入地了解细菌外泌体DNA,推动对细菌外泌体DNA的进一步研究和发展。