真菌产生的新核苷转运抑制剂增强药物的抗肿瘤活性

从南极土壤中分离的一株真菌所产生的抗生素Ｃ３３６８－Ｂ（ＣＢ）有较强的核苷转运抑制活性。ＣＢ显著抑制艾氏腹水癌（ＥＡＣ）细胞的胸苷和尿苷转运，ＩＣ５０分别为７．５和９．６μｍｏｌ·Ｌ－１。用克隆生成法测定，ＣＢ在本身无明显细胞毒性剂量下，能显著增强氨甲蝶呤（ＭＴＸ）、５－氟脲嘧啶（５ＦＵ）和丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）等抗癌药物对人口腔鳞癌ＫＢ细胞和人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞的杀伤。生长抑制法结果显示，ＣＢ还能部分逆转小鼠白血病Ｌ１２１０／ＭＤＲ细胞对长春新碱（ＶＣＲ）和放线菌素Ｄ（ＡＣＤ）的抗药性。结果提示新核苷转运抑制剂ＣＢ可能应用于肿瘤联合化疗的前景。

丹酚酸A抑制核苷转运并增强化疗药物的抗肿瘤作用

目的 观察丹酚酸A(SAA)的抑制核苷转运活性及其抗肿瘤作用。方法 用3H TdR和3H UR转运测定法 ,克隆生成测定法以及小鼠移植性肉瘤 180模型。结果 SAA抑制艾氏腹水癌细胞的胸苷和尿苷的转运 ,其IC50 分别为 18 1和 17 1μmol·L- 1 。SAA能明显增强 5 FU、丝裂霉素C、MTX对KB细胞、肝癌BEL 74 0 2细胞的细胞毒性。体内试验 ,SAA 2 0 0mg·kg- 1 和 5 FU 10mg·kg- 1 单独使用的抑瘤率分别为 4 1%和 2 7% ;SAA和 5 FU联合使用的抑瘤率为 6 3% (CDI=0 86 )。结论 SAA有抑制肿瘤细胞核苷转运的活性 ,可增强 5 氟尿嘧啶等药物的抗肿瘤作用 。

潘生丁抑制平衡型核苷转运蛋白对5氟尿嘧啶在胰腺癌细胞内浓聚的影响

目的 :研究阻断平衡型核苷转运蛋白 (ENTs)后对胰腺癌细胞膜转运 5氟尿嘧啶 (5 FU)能力的影响。方法 :培养的PANC 1细胞分为ENTs阻断组和ENTs非阻断组 ,阻断组用潘生丁将ENTs阻断 ,非阻断组则未用潘生丁。两组培养基中均加入 5 FU 10 0 μg/ml。温育 15,3 0min ,1,2 ,4h后细胞用橡皮刮取收集。取等量细胞刮取液 2份各 10 0 μl ,一份用毛细管区带电泳测定细胞内 5 FU总量、另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据平行样本细胞总蛋白来确定细胞数 ,再依细胞体积计算单细胞内药物浓度。结果 :ENTs非阻断组细胞内 5 FU浓度在 15min内上升较快 ,达 66 99± 10 16pg/nl,为培养基中 5 FU浓度的 67% ,3 0min为 83 75± 5 3 3 3pg/nl,1h达高峰 (92 86± 1 60 4pg/nl) ,为培养基中 5 FU浓度的 93 % ,以后处于平台。ENTs阻断组细胞内 5 FU浓度上升较慢 ,15min仅为ENTs非阻断组浓度的 68 65% ;3 0min为ENTs非阻断组浓度的 70 66% ;1h达ENTs非阻断组的最高浓度 ;但此后ENTs阻断组细胞内 5 FU浓度仍继续升高 ,2h达 13 8 3± 9 769pg/nl,为ENTs非阻断组的1 64倍 (P <0 0 1)。结果提示 ,完全阻断ENTs后早期细胞内 5 FU浓度上升较慢 ,但随着细胞在 5 FU内暴露时间延长 ,5 FU在细胞内浓聚作用明显。结论 :阻断胰腺?

阿糖胞苷作用下白血病细胞膜人核苷转运体1基因表达变化研究

目的检测肿瘤细胞膜上人平衡型核苷转运体1(human equilibrative nucleoside trans-porter 1,hENT1)基因表达及其变化,探索影响阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病(AL)疗效的相关因素。方法根据目前临床采用的低剂量、中剂量和大剂量Ara-C(HD-AraC)治疗时所能达到的血浆药物浓度,分别采用0.5～100μmol/L中的6种不同剂量(0.5、1.0、5.0、15、50、100μmol/L)体外作用于白血病细胞株Jurkat和NB4,经4～48 h的5个时间段(4、8、12、24、48 h)作用后,采用定量RT-PCR方法测定hENT1 mRNA表达及其变化。结果 (1)Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA原始相对表达量(ΔCt值)分别为5.21±0.02和5.34±0.05,两者差异无显著性(P>0.05)。(2)在较低剂量Ara-C(0.5～15μmol/L)作用下,hENT1 mRNA表达恒定,与阴性对照组差异无显著性(P>0.05);但在高浓度Ara-C(50μmol/L和100μmol/L)作用48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1 mRNA表达明显增强,ΔCt分别为2.02±0.17和2.19±0.02,与对照组(5.21±0.02)比较差异均有显著性(P<0.05)。(3)同一种细胞在50μmol/L和100μmol/L两个剂量组的hENT1mRNA表达增高程度,差异无显著性(P>0.05);分别来源于ALL和AML的Jurkat和NB4细胞的表达量间差异亦无显著性(P>0.05)。结论 HD-AraC处理48 h后,Jurkat和NB4细胞的hENT1mRNA表达可明显提高,有利于药物进入细胞,以增强抗白血病效应,推测临床HD-AraC疗法采用48～72 h的疗程是必要的。

核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系

背景与目的核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因。本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上海市肺科医院就诊的原发性肺癌患者351例和同期住院的非肿瘤患者207例,应用AllGloTM探针结合实时荧光PCR方法分析肺癌组和对照组ENT3基因rs10999776多态位点的基因型分布情况,比较不同基因型与肺癌易感性的关系以及不同基因型联合吸烟对肺癌易感性的影响。肺癌组与对照组基因型和等位基因分布比较用χ2检验,以调整比值比及95%CI表示相对危险度,所有统计检验均为双侧概率检验,所有资料均用SPSS软件进行统计。结果肺癌患者rs10999776多态位点的CC、TC、TT基因型和C、T等位基因频率分布与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。与非吸烟的野生型纯合子个体比较,携带突变等位基因T(TC+TT)的吸烟个体罹患肺癌的风险性明显增加,且吸烟≥30包/年者风险性更高,调整OR值分别为2.848(95%CI:1.536-4.879,P=0.005)、3.076(95%CI:2.308-6.741,P=0.001)。而对肺癌不同组织类型的分析发现,三种基因型的吸烟个体罹患肺鳞癌的风险性均增加,且携带突变等位基因T的个体风险性更高,调整OR值为6.066(95%CI:2.884-12.758,P<0.001)。而rs10999776(C>T)多态性联合吸烟对肺腺癌则无显著影响。结论核苷转运蛋白基因ENT3rs10999776多态性可能与肺鳞癌的发病风险相关,且与吸烟环境暴露存在一定的相互作用。

双嘧达莫等核苷转运抑制剂增强抗癌药物疗效的研究进展

核苷转运抑制剂(NTI)是指能抑制细胞外核苷跨膜转运进入细胞内的物质。近年来的研究表明,NTI通过抑制核苷酸合成的补救途径,降低细胞内核苷酸含量,影响药物流入或流出细胞,增加细胞内药物浓度等机制在体内外增加多种抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤能力,包括逆转肿瘤细胞的抗药性。虽然NTI同时也可能增加抗癌药物对宿主和正常细胞的毒性,但增加的程度是不及对恶性细胞的。NTI的应用为抗癌药物的增效提供了新的途径。

与核苷类化疗药相关的平衡型核苷转运体研究进展

核苷类化疗药物是临床上常见的抗癌药,用于多种癌症的治疗。此类药物需要通过细胞膜上的核苷转运体进入细胞,为提高药物的抗癌效果及研究癌细胞的耐药性机制,开发新的抗肿瘤药物,就需对核苷转运体及其跨膜转运机制有充分的认识。核苷转运体有两类,即平衡型核苷转运体(ENT)和浓度型核苷转运体(CNT)。其中ENT是主要的转运蛋白,分布广,底物选择性低,起着十分重要的作用。本文对ENT在细胞水平的研究进展作一综述。

酸枣仁皂苷A对小鼠前额叶皮层腺苷释放及核苷转运体的影响

目的研究酸枣仁皂苷A(JuA)(40、80 mg/kg)对小鼠前额叶皮层腺苷释放的影响。方法采用在体脑微透析观测JuA对前额皮质细胞外腺苷含量的影响,并同时观察小鼠的自主活动;Western blot考察JuA对平衡型核苷转运蛋白(ENT)和浓度型核苷转运蛋白(CNT)2种蛋白质表达。结果 JuA腹腔注射能在90 min内剂量依赖性地增加小鼠前额叶皮层细胞外腺苷含量,并降低其自主活动。对CNT1和ENT1蛋白表达无显著性影响。结论 JuA可以促进小鼠前额叶皮层腺苷的释放,但可能与核苷酸转运蛋白无关。

细胞膜上平衡型核苷转运体基因表达与阿糖胞苷敏感性的关系

目的探讨细胞膜上平衡型核苷转运体基因表达与阿糖胞苷(Ara-C)敏感性的关系。方法采用实时荧光定量PCR法检测血液病细胞系中平衡型核苷转运体(hENT)四种亚型基因(HL-60、NB4、U937、MOLT4、JURKAT)的表达,并观察髓系细胞株HL-60和NB4经Ara-C处理后hENT1表达的变化。以未加药处理细胞株作为对照组。结果四类亚型hENT中仅hENT1基因表达与Ara-C的敏感性相关(r=0.939,P=0.018),且hENT1基因在髓系细胞膜上的表达高于它在淋系细胞膜上的表达。经Ara-C作用4 h内,髓系细胞株hENT1基因表达均下调(P<0.05或P<0.01),而8 h后HL-60细胞膜上hENT1的基因表达又上调达对照组水平(P>0.05)。结论介导Ara-C转运的hENT1参与了细胞株对药物的敏感性,其基因表达的变化是Ara-C耐药的重要原因之一。

人类平衡型核苷转运蛋白1高表达晚期非小细胞肺癌患者术后应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果观察

目的 观察晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中人类平衡型核苷转运蛋白1（hENT1）高表达患者应用不同剂量吉西他滨治疗的临床效果.方法 选取2008年7月至2013年12月于浙江金华广福医院行晚期NSCLC手术后,病理确诊晚期NSCLC患者,采用免疫组织化学SP法检测肺癌组织中hENT1抗体的表达水平.62例hENT1高表达患者入组,按随机数字表分组法分为对照组（30例）和观察组（32例）.对照组采用常规剂量吉西他滨（1 000 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察组用低剂量吉西他滨（250 mg/m2）联合顺铂进行化疗,观察2组近期疗效、化疗不良反应.采用生活质量调查核心量表QLQ-C30和肺癌专用量表QLQ-LCl3比较2组化疗后生活质量.结果 对照组和观察组近期有效率和疾病控制率差异无统计学意义[43.3％ （13/30）比46.9％ （15/32）,76.9％ （23/30）比81.2％（26/32）]（x2 =0.08,x2 =0.20,P＞0.05）.观察组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少、血小板减少及恶心、呕吐发生率低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;除角色功能外,观察组化疗后总体生活评分及躯体功能、情绪功能、认知功能、社会功能、经济状况各项评分均优于对照组[（54±20）分比（54±16）分,（72±25）分比（62 ±20）分、（85 ±20）比（72±19）分、（76±28）分比（62±25）分、（61 ±24）分比（49 ±30）分、（36±24）分比（56±21）分],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.观察组除乏力症状外其他症状评分均优于对照组（P＜0.05）.结论 对于晚期NSCLC术后hENT1高表达患者,在保证化疗效果的同时,相对于常规剂量吉西他滨,低剂量用药可有效降低化疗过程中不良反应,提高患者的生活质量.

人类平衡型核苷转运蛋白3的功能及与疾病的研究进展

平衡型核苷转运蛋白(equilibrative nucleoside transporter,ENT或SLC29)作为非浓度依赖型的核苷和核碱基转运体,以低亲和性结合核苷及其类似物跨膜向相对浓度较低的一方扩散;作为真核生物体内核苷、核碱基、抗肿瘤和抗病毒感染的核苷类似物转运体,在遗传物质的合成、抗肿瘤和抗病毒感染发挥着重要的作用。人类平衡型核苷转运体3(human balanced nucleoside transporter 3,hENT3)是溶质载体29(SLC29)基因家族中主要的细胞内转运体,该蛋白具有非常长的亲水性N-末端区域,内含溶质体、双亮氨基酸,强烈依赖于pH值。hENT3蛋白主要存在于细胞内溶酶体和线粒体中,对胞内核苷、核碱基及核苷类似物转运有重要的研究意义。但目前对于hENT3的研究还处于探索阶段,其转运模式及其与疾病发生发展的关系需要进一步研究。本文将对hENT3及其与疾病的研究进展进行论述,期待对hENT3有一个全面的了解,有助于后期的进一步研究。

细胞外腺苷介导核苷转运体ENT1阻断cAMP/p-PKA信号通路抑制肝脏糖异生

糖尿病的关键特征是葡萄糖和脂质代谢紊乱。目前,糖尿病已成为沉重的全球疾病负担。越来越多的证据表明,腺苷系统在调节胰岛素和葡萄糖平衡中发挥关键作用。腺苷是一种重要的细胞代谢调节剂,通过激活G蛋白偶联受体和核苷转运体参与能量代谢、免疫调节、氧化应激等多个生理病理过程。然而,腺苷在肝脏糖异生调控中的角色尚未被阐明。该文从多层面验证了腺苷通过核苷转运体(equilibrative nucleoside transporter,ENT)转运入胞内后对胰高血糖素刺激引起的肝脏糖异生通路的影响。结果显示,在体内模型中,外源性腺苷显著抑制小鼠血糖升高。在细胞模型中,腺苷以剂量依赖的方式抑制肝脏糖异生进而降低葡萄糖输出水平,且无细胞毒性。肝脏组织及细胞中ENT广泛表达,其中1型核苷转运体(equilibrative nucleoside transporter 1,ENT1)介导了腺苷抑制的肝糖输出。此外,腺苷介导的糖异生抑制并非依赖于AMP依赖的蛋白激酶[adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]通路的激活。最后发现,细胞外腺苷刺激后,细胞内的环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)浓度显著降低,磷酸化蛋白激酶A(phospho-protein kinase A,p-PKA)下游蛋白表达受抑制,细胞糖输出能力显著下降,该抑制作用可被ENT抑制剂有效逆转,但不能被AK抑制剂削弱。以上结果表明,细胞外腺苷通过ENT1转移入胞内后,抑制AC活性,从而抑制cAMP合成和p-PKA底物蛋白的表达,抑制肝脏糖异生功能,最终降低糖输出水平。

人体平衡型核苷转运蛋白的结构及应用研究进展

通过参与合成和转运核苷及其类似物,人体中的平衡型核苷转运蛋白在生物体内参与了细胞发育、能量代谢和信号转导等众多生理生化过程,其研究对于癌症、病毒感染等相关疾病的治疗有着极为重要的意义。该文综述了该类蛋白质在人体内的发现历程、分类、结构和作用机制,并对于其在一些疾病治疗和药物开发方面的前景进行了展望。

白细胞介素-28B和平衡性核苷转运载体1基因多态性与HIV／HCV合并感染者HCV自发清除的关系研究

目的分析湖南省HIV／HCV合并感染者的白细胞介素-28B（IL-28B）和平衡性核苷转运载体1（ENT1）基因多态性与HCV自发清除的关系。方法对湖南省107例HIV／HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点（rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs760370）进行分型，比较其在慢性肝炎组和自发清除组的基因多态性分布。结果在HIV／HCV合并感染者中，IL-28B基因rs12980275、rs12979860和rs8099917位点的主要基因型分别为AA、CC和TT型，均占84．1％。3个位点高度连锁不平衡（r2〉0．94），慢性肝炎组和自发清除组基因型分布差异有统计学意义（P〈0．05），携带IL-28B主要基因型的感染者更易发生HCV自发清除。ENT1基因的rs760370位点基因型分布在两组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-28B基因AA、CC和TT型与HCV自发清除有关。

转运蛋白NupC与NupG微生物胞内核苷分泌的作用研究进展

核苷用途广泛,微生物发酵法是其主要的生产方法之一。微生物细胞内核苷的分泌对于高产核苷有重要的作用,其细胞膜上存在多种起运输作用的转运蛋白参与代谢产物的分泌。主要阐述核苷转运蛋白NupC和NupG在微生物细胞内核苷分泌过程中的作用。此外,介绍了转运蛋白的修饰改造对于核苷生物合成的影响,旨在为构建高产菌株的育种策略提供依据。

阻断胰腺癌平衡型核苷转运载体对5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡及细胞周期改变的影响

目的研究应用潘生丁(DP)阻断平衡型核苷转运载体(hENTs)后,5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌细胞株Panc-1凋亡及细胞周期的影响。方法将Panc-1细胞分为hENTs未阻断组和hENTs阻断组,hENTs阻断组再根据DP浓度分为5μmol/L DP组和10μmol/L DP组。各组细胞分别在含有1.5×106ng/L 5-FU或不含5-FU的培养液中培养24 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡率和细胞周期改变。结果①各组细胞凋亡检测结果:在含有1.5×106ng/L 5-FU培养液中培养24 h后,5μmol/L及10μmol/L DP组的细胞凋亡率明显高于未阻断组(P<0.05),10μmol/L DP组又明显高于5μmol/L DP组(P<0.05);在不含5-FU的培养液中培养24 h后,各组之间细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。②各组细胞周期检测结果:在含有1.5×106ng/L 5-FU培养液中培养24 h后,未阻断组细胞进入合成期(S期)的比例减少,停滞在合成前期(G1期),5μmol/L DP组及10μmol/L DP组的细胞进入合成期(S期)的比例较未阻断组进一步减少(P<0.05),且随着DP浓度的增加,细胞进入合成期(S期)的比例减少得更多(P<0.05),5μmol/L DP组和10μmol/L DP组进入合成期(S期)的比例分别是未阻断组的87.09%和74.06%。5-FU对细胞合成后期(G2期)的影响较小,除5μmol/L DP组较未阻断组G2期细胞数量增加有统计学意义(P<0.05)外,其余各组之间差异均无统计学意义(P>0.05);在不含5-FU的培养液中培养24 h后,各组细胞周期中各期无明显改变,各组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在胰腺癌细胞株Panc-1中,DP阻断细胞膜上hENTs后,能显著增强5-FU对胰腺癌细胞促凋亡作用及抑制胰腺癌细胞分裂增殖的作用,这种增强作用可能与阻断hENTs后细胞内5-FU浓度提高有关,而与DP本身作用无关。

人类平衡型核苷转运蛋白1预测吉西他滨治疗胰腺癌患者预后的价值:一项Meta分析

目的:采用Meta分析探讨人类平衡型核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside transporter1,hENT1)预测接受吉西他滨治疗的胰腺癌患者预后的价值。方法:检索Cochrane Library、Medline和Embase等数据库,筛选有关hENT1表达与胰腺癌预后的相关文献,分析hENT1低表达和高表达与接受吉西他滨治疗的胰腺癌患者的总生存期和无病生存期的关系,采用Meta分析合并风险比(hazard ratio,HR)。结果:共纳入9篇合格文献。在接受吉西他滨治疗的胰腺癌患者中,hENT1低表达组有较高的死亡风险(HR=2.61,95%可信区间:2.03～3.34)和复发风险(HR=2.62,95%可信区间:1.94～3.54)。在接受吉西他滨术后辅助治疗的患者中,hENT1低表达组同样有着较高的死亡风险(HR=2.49,95%可信区间:1.86～3.33)和复发风险(HR=2.79,95%可信区间:1.98～3.94)。hENT1蛋白或mRNA低表达均预示着较高的死亡和复发风险。结论:hENT1表达水平在接受吉西他滨治疗的胰腺癌患者中具有预测预后的价值。

人平衡核苷转运体1与胰腺癌化疗耐药性的关系

吉西他滨是临床胰腺癌化疗首选药物之一，然而患者对吉西他滨的化疗敏感性并不相同，部分患者对吉西他滨原发或继发耐药。人平衡核苷转运体1是介导吉西他滨进入肿瘤细胞的主要转运体，人平衡核苷转运体1在在不同患者肿瘤细胞中的表达差异性是造成胰腺癌吉西他滨化疗耐药的原因之一。

核苷转运蛋白的研究进展

生物膜构成了细胞与外界环境之间的一道天然屏障, 细胞生存所需的各种营养物质或其代谢产物必须通过这道屏障才能进入或输出细胞. 无论是原核还是真核细胞, 细胞膜上都存在多种起运输作用的膜蛋白分子, 它们以各种不同的机制参与营养物质或代谢产物的转运. 根据跨膜转运蛋白(transmembrane solute transporter)起运输作用时的底物特异性、转运机制及转运蛋白间的同源性, Paulsen等人[1]将真核细胞中的跨膜转运蛋白进行了系统分类, 有关这个分类系统的详细内容和最新进展可以从互联网(http:// biology.ucsd.edu/(msaier/transport/titlepage.html)中获得. 在这个分类系统中, 有两类核苷转运蛋白: 扩散型核苷转运蛋白和富集型核苷转运蛋白. 它们的生化功能是跨膜运输核苷. 众所周知, 核苷不仅是细胞合成核苷酸的一种重要前体, 而且在生物体内还参与调节许多重要的生理过程, 如神经传递和心血管活性的调节等[2,3]. 核苷转运蛋白通过介导核苷的转运和吸收, 在许多不同的生理过程中发挥重要作用. 在植物基因组中也存在编码核苷转运蛋白的基因, 但有关植物核苷转运蛋白的功能还远未被人们所知. 本文根据已有的研究成果并结合我们实验室的工作阐述核苷转运蛋白的功能及其研究进展.