旋转培养通过YAP核转位调节HepaRG来源肝脏类器官的形成

目的肝脏是人体碳水化合物和脂质代谢、解毒和蛋白质合成的主要枢纽,太空微重力环境可以造成肝脏生理力学环境变化,影响肝脏组织形态、细胞的增殖分化,甚至导致肝脏功能异常,但其影响机制尚不完全清楚。肝脏类器官是肝脏生理、病理研究的有效体外模型,结合地面旋转培养装置可研究微重力条件对肝脏类器官构建的影响。方法使用自行研制的扁平腔室旋转培养系统(RFC)研究地面旋转条件对肝祖细胞(Hepa RG细胞系)来源肝脏类器官构建的影响。将Hepa RG与基质胶混匀后接种到RFC培养腔室中,以10 r/min的速度培养7天,同时以静止腔室培养的肝脏类器官作为对照。使用免疫荧光、q PCR、组学分析等方法阐明地面旋转条件对肝脏类器官构建的力学-生物耦合规律和机理。结果旋转组中肝脏类器官较对照组生长速度更快,形成的类器官投影面积更大。RNA-seq结果表明旋转组中肝脏类器官干性标志物(如SOX9和CD44)表达增加,该结果与q PCR和Simple western检测结果一致。旋转组中细胞表面整合素α6β4表达上升,由此介导YAP表达与核转位增强。使用维替泊芬(VP)抑制YAP核转位不利于肝类器官的干性维持。结论旋转培养可促进肝脏类器官的生长;通过促进细胞表面整合素α6β4表达增强YAP表达和核转位进而增强Hepa RG细胞来源肝脏类器官的多潜能性。

缺血性脑卒中后促进转录因子EB核转位改善神经元自噬流障碍的分子机制

脑卒中(cerebral stroke)是由脑动脉出血或梗塞引起的急性脑血管病,约80%的脑卒中临床病例为缺血性脑卒中。自噬流障碍是导致神经元缺血性损伤的重要致病因素,而如何改善自噬流障碍从而减轻缺血性脑损伤的策略仍需深入探究。研究表明,转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)是自噬-溶酶体信号通路的关键调节分子。TFEB的活性由其磷酸化水平决定,磷酸化的TFEB通过与14-3-3黏附蛋白结合存留于胞质,当其去磷酸化后则快速向核内转位,进而上调“协同溶酶体表达与调控(coordinated lysosomal expression and regulation,CLEAR)”信号,促进溶酶体生成及自噬相关基因转录,从而增强自噬流。本文重点就TFEB核转位改善缺血性脑卒中神经元自噬流障碍的分子机制进行详细阐述,旨在为脑卒中治疗及脑缺血病理研究提供参考。

25-OH维生素D通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制对新生儿感染性肺炎的抗炎作用研究

目的探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制。方法选取2022年1月~2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子PDZ结合基序(nucleus-transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P45027B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达。结果与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18μg/L,2.63±0.27μg/L vs 1.05±0.12μg/L),IFN-γ(1.73±0.13μg/L,2.18±0.19μg/L vs 1.03±0.07μg/L),TNF-α(1.79±0.08μg/L,2.38±0.13μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和IL-1β(2.18±0.07μg/L,2.59±0.11μg/L vs 0.96±0.02μg/L)含量以及TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02μg/L)含量和VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983~56.782,均P<0.001)。细胞实验结果显示,与Control组相比,LPS组细胞存活率在12h(76.23%±0.73%vs 116.72%±2.14%),24 h(57.23%±0.94%vs 125.76%±1.67%)和48 h(41.23%±0.56%vs 138.56%±1.35%)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP阳性细胞数(47.35±3.47个vs 12.46±1.34个)和YAP/TAZ复合物核转位率(2.56%±0.32%vs 1.01%±0.06%)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P<0.001),而两组间CYP27B1和VDR mRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+VD组在12 h(85.23%±0.36%),24 h(79.82%±0.63%),48 h(76.28%±0.72%)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDR mRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和YAP/TAZ复合物核转位率(1.47%±0.26%)降低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均P<0.01)。结论血清25-OH-VD水平与NIP严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤。

癌相关成纤维细胞通过Gro-α激活NF-кB核转位和VEGF表达促进卵巢癌的生长

背景与目的：卵巢癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAF）促进上皮肿瘤的发生，其分泌的趋化因子即生长调节致癌基因α（growth-regulated oncogene alpha，Gro-α）蛋白在肿瘤间质微环境中促进上皮卵巢癌的发生，但其作用机制并不清楚。本研究拟测定Gro-α蛋白是否通过激活间质成纤维细胞中NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌的生长。方法：本研究采用ELISA法测定了两株卵巢癌CAF和两株正常卵巢组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NF）条件培养基（conditioned medium，CM）中Gro-α的表达；用CAF-CM或Gro-α分别处理NF，并以NF-кB抑制剂处理作为对照；用蛋白质印迹法（Western blot）测定样品处理前后NF-кB和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等分子的变化；然后用CAF或NF分别与卵巢癌细胞系OVCA429混合接种BALB/c裸小鼠，或在有、无NF-кB抑制剂PS1145处理的NF中，用CAF-CM或Gro-α处理后，分别与OVCA429混合接种动物，观察和比较动物移植瘤生长及移植瘤组织中微血管形成情况。结果：Gro-α在CAF中比在NF中高5-6倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或Gro-α处理的NF中NF-кB p65的核转位升高，且VEGF上升，但血管生成抑制因子-血小板反应蛋白1下降；用NF-кB抑制剂同时处理NF，可以逆转其VEGF和TSP-1的表达水平；动物试验结果发现CAF要比NF更易促进肿瘤生长，而CAF-CM或Gro-α处理的NF细胞可以促进动物移植瘤的快速增长和移植瘤组织中微血管的生成，但用NF-кB抑制剂处理的NF则抑制肿瘤生长和血管形成能力。结论：卵巢癌CAF在肿瘤微环境中通过自分泌Gro-α，激活NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌组织血管增生和肿瘤的生长。

结肠癌细胞中CacyBP/SIP的表达及核转位现象

目的:拟明确CacyBP/SIP在结肠癌细胞中的表达及定位,探讨CacyBP/SIP在结肠癌发生发展中的意义.方法:采用Westernblot对3种结肠癌细胞系中CacyBP/SIP的表达进行检测;间接免疫荧光细胞内染色检测CacyBP/SIP在结肠癌细胞中的定位以及给予KC1、胃泌素(10-8mol/L)刺激后CacyBP/SIP的定位;激光共聚焦检测胃泌素刺激后结肠癌细胞中Ca2+浓度的变化.结果:HT29及SW480结肠癌细胞中均表达CacyBP/SIP,Lovo细胞中未检测出CacyBP/SIP.间接免疫荧光显示CacyBP/SIP主要位于结肠癌细胞的胞质中,给予KC1刺激后CacyBP/SIP转位至细胞核,洗脱KC1后,CacyBP/SIP位于胞质;给予胃泌素刺激后亦可观察到CacyBP/SIP转位至细胞核;与无胃泌素刺激的细胞相比,给予胃泌素刺激的细胞内Ca2+浓度显著高于对照组f25.33±0.57vs21±1,P<0.05).结论:CacyBP/SIP在结肠癌细胞中表达,且主要定位于胞质,当细胞内Ca2+浓度升高后转位至细胞核,提示CacyBP/SIP可能通过入核来参与结肠癌的发生发展.

二氯化钴致人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位

目的观察和探讨低氧可否引起人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位。方法用人结肠癌细胞系HCT-116的cDNA序列,用分子克隆法构建过表达CacyBP/SIP的绿荧光慢病毒载体,转染至结肠癌SW480细胞,用CoCl2作为刺激因子,激光共聚焦显微镜和Western blot检测CacyBP/SIP的表达及定位。结果构建了过表达CacyBP/SIP的慢病毒载体,转染至结肠癌细胞,CoCl2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,刺激后CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核。结论 CoCl2刺激后可致CacyBP/SIP核转位。

HeLa细胞中LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB核转位

前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚.大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用.为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫荧光技术检测电离辐射刺激后不同时间点NF-κB的核转位情况;然后分别过表达和抑制LRP16的表达,采用Western印迹方法检测NF-κB在核蛋白与浆蛋白中的表达情况、IκB-α总体蛋白水平及磷酸化水平.结果发现,电离辐射后1 h,可见NF-κB明显入核;过表达LRP16可以促进NF-κB入核、提高IκB-α的磷酸化水平、促进IκB-α的降解;反之,抑制LRP16的表达可以抑制NF-κB入核、降低IκB-α的磷酸化水平、阻碍IκB-α的降解.上述研究结果表明,在HeLa细胞中LRP16可以影响电离辐射诱导的NF-κB核转位,该研究为LRP16参与肿瘤细胞产生辐射抵抗现象提供一种可能的机制.

神经元型一氧化氮合酶的核转位现象

目的:研究神经元型一氧化氮合酶(neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)的亚细胞分布。方法:以体外培养的大鼠星形胶质细胞以及神经细胞株PC12、R2为研究对象,应用共聚焦激光扫描显微镜及WesternBlotting技术检测nNOS的亚细胞分布。结果:次传代后的前6天,nNOS主要分布于星形胶质细胞的细胞质内,细胞核内几乎没有分布。在次传代后的第7天,nNOS主要分布于细胞核内,且持续时间近10h。此后,nNOS又主要分布于细胞质内。然而,在神经细胞株PC12、R2没有发生nNOS核转位。结论:在一定的体外培养时间,星形胶质细胞发生nNOS核转位,并且nNOS核转位是原代培养神经细胞特有的一种生物学行为。

Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用

研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用。培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Westernblot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异。结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显著受到抑制。表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。

大鼠局灶脑缺血/再灌注后脑组织中核因子-κB的核转位现象及其意义

目的 研究Wistar大鼠局灶脑缺血 /再灌注 (I/R)后脑组织中核因子 κB(NF κB)活化的基本规律及其意义。方法 线栓法闭塞大鼠右侧大脑中动脉 ,制备局灶I/R模型 ,分别于缺血 2h再灌注后 3、6、12、2 4h取脑组织做冰冻切片 ,用免疫组织化学法检测脑组织中NF κB核转位细胞。结果 正常大鼠脑组织中可见少许NF κB核转位细胞 ;R3h脑组织中NF κB核转位细胞较正常组有增加趋势 (P >0 .0 5 ) ,R6h增加明显 (P <0 .0 5 ) ,R12h增加达高峰 (P <0 .0 5 ) ,R2 4h明显回降并趋于正常水平 (P >0 .0 5 )。结论 I/R后脑组织中NF κB活化明显 ,R12h为活化高峰 ;I/R后脑组织中NF κB活化可能加剧了脑缺血损伤。

前列腺素E_2对结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响

目的用前列腺素E2刺激结肠癌细胞,观察和探讨可否引起CacyBP/SIP核转位。方法根据hCacyBP/SIP序列设计引物,PCR扩增、酶切、连接、转化等分子克隆法构建含有钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)的慢病毒重组质粒,PCR鉴定、测序;将构建好的带有绿荧光蛋白的CacyBP-Lentivirus载体转染至结肠癌SW480细胞,用激光共聚焦显微镜检测CacyBP/SIP表达定位;前列腺素E2刺激后激光共聚焦显微镜、Western blot观察CacyBP/SIP在细胞中的定位。结果激光共聚焦和Westernblot发现:前列腺素E2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,用100μmol/L前列腺素E2刺激1h,CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核。结论前列腺素E2刺激可以引起CacyBP/SIP由胞质转位至细胞核。

人结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位差异表达基因的验证

目的验证细胞周期聚合酶链反应(PCR)芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组,无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹(Western blot)法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)表达定位进行检测;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对细胞周期PCR芯片筛选出的差异表达基因周期素依赖性蛋白激酶8(CDK8)和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2(CKS2)进行验证。结果胃泌素刺激前CacyBP/SIP主要表达于细胞质,刺激后可同时表达于细胞质和细胞核;同细胞周期PCR芯片结果一致,基因CDK8和CKS2在实验组的表达量较对照组明显上调(P<0.05)。结论胃泌素刺激可使CacyBP/SIP发生核转位;基因芯片筛选出的差异基因大体可靠,对筛选出的差异基因可以进行进一步研究。

表皮生长因子对CacyBP/SIP过表达慢病毒载体转染的结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响

目的观察和探讨表皮生长因子对钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)过表达慢病毒载体转染结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响。方法构建含有CacyBP/SIP的慢病毒重组质粒并转染至结肠癌SW480细胞。采用激光共聚焦显微镜及Western blot法观察100 ng/mL表皮生长因子刺激前后CacyBP/SIP蛋白在胞质、胞核中的定位及表达变化。结果激光共聚焦和Western blot检测结果发现,表皮生长因子刺激前CacyBP/SIP均主要定位和表达于细胞质,刺激1 h后CacyBP/SIP定位和表达于细胞胞质和胞核。结论表皮生长因子刺激过表达CacyBP/SIP慢病毒载体转染的结肠癌细胞可引起CacyBP/SIP由胞质转位至细胞核。

受体内化和核转位参与的细胞信息传递

近年来，对肽类物质信息的细胞内传递过程有了进一步的认识，发现这些物质除了可经第二信使系统引起生物效应外，尚可通过激动剂介导的受体内化（ｉｎｔｅｒｎａｌ－ｉｚａｔｉｏｎ）＃和核转位（ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）＃反应直接引起配体特异性的核基因表达改变。本文对受体内化和核转位过程及其影响因素作一概述。

卒中后抑郁大鼠海马区芳烃受体核转位蛋白2的表达

目的探讨卒中后抑郁(PSD)大鼠海马区芳烃受体核转位蛋白2(ARNT2)的表达。方法 24只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、单纯抑郁组、单纯卒中组和PSD组,每组6只。采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,在此基础上综合孤养、不可预测应激处理复合制备PSD大鼠模型。采用半定量反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法检测大鼠海马区ARNT2 mRNA和蛋白的表达。结果单纯卒中组和PSD组大鼠海马区ARNT2 mRNA的相对表达量均高于假手术组(P<0.05),PSD组大鼠海马区ARNT2 mRNA的相对表达量高于单纯卒中组和单纯抑郁组(P<0.05)。单纯抑郁组与假手术组大鼠海马区ARNT2蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05),单纯卒中组和PSD组大鼠海马区ARNT2蛋白表达均高于假手术组(P<0.05),PSD组大鼠海马CA2区ARNT2蛋白表达显著高于单纯抑郁组和单纯卒中组(P<0.05)。结论 ARNT2参与了PSD发生的生物学过程。

海洋天然产物Epoxysorbicillinol通过诱导Nrf2核转位对APP/PS1转基因AD小鼠的保护作用

目的海洋化合物是治疗阿尔茨海默(Alzheimer disease,AD)的最新候选药物来源,化合物Epoxysorbicillinol是从Haliclona sp.海绵的共生真菌Trichoderma longibrachiatum(长梗木霉)中提取的一种新的聚酮类化合物。本实验通过观察了Epoxysorbicillinol对APP/PS1转基因AD模型小鼠大脑中氧化应激水平和β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)斑块沉积的影响,揭示Epoxysorbicillinol对AD的治疗作用和可能的作用机制。方法给予5月龄APP/PS1转基因AD小鼠不同剂量的Epoxysorbicillinol和阳性对照药石杉碱甲Epoxysorbicillinol 3个月。水迷宫法检测小鼠的学习记忆能力;ELISA法检测小鼠脑内Aβ1-42和Aβ1-40含有量,并观察脑内MDA水平。为阐明Epoxysorbicillinol的抗氧化机制,检测Epoxysorbicillinol对Aβ1-42诱导损伤的SH-SY5Y细胞内氧化应激水平的影响,并检验其对Nrf2蛋白核转位的作用。结果实验数据显示Epoxysorbicillinol可以有效的降低AD转基因小鼠脑内的Aβ生成,降低脑内的氧化应激水平;并能有效降低Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,其机制可能是通过促进转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位而增强了细胞抗氧化酶的表达。结论 Epoxysorbicillinol可以抑制AD小鼠中枢过高的氧化应激水平,减少中枢Aβ的形成,其作为一种抗AD的候选化合物,具有进一步深入研究开发的潜力。

芳香烃受体核转位蛋白的结构及相关功能

芳香烃受体核转位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)是碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族中新发现的PAS亚家族的成员之一。它是体内许多bHLH-PAS蛋白共同的专性配偶体,可以与芳香烃受体、低氧诱导因子、果蝇SIM蛋白等形成异二聚体并介导许多信号转导过程,从而使个体对环境污染物(如二恶英)、低氧状态等外界因素的改变产生相应的生物学效应,本文就ARNT的基本结构及其在体内的主要生理功能等方面作一综述。

二苯乙烯苷对肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB核转位的影响

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞损伤的保护性作用及其对内皮细胞NF-κB核转位的影响。方法取新生儿脐带分离原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用因子Ⅷ鉴定内皮细胞。按照分组,HUVEC分别与TNF-α60μg·L-1,TNF-α+TSG 1,10,25,50和100μmo·lL-1进行孵育,TSG预孵24 h,再加TNF-α处理3 h。显微镜观察TSG对TNF-α诱导HUVEC的保护性作用,MTT法检测细胞存活率,免疫荧光法检测细胞NF-κB的核转位现象。结果因子Ⅷ相关抗原检测显示,分离的细胞为内皮细胞。显微镜观察显示,TSG对TNF-α诱导的HUVEC损伤具有明显的抑制作用,TSG 100μmo·lL-1使内皮细胞形态几乎接近正常组水平。MTT结果显示,TSG可显著提高TNF-α诱导后的细胞存活率,并呈浓度依赖性(r=0.9657,P<0.01)。免疫荧光检测表明,TNF-α诱导NF-κB发生核内转移,TSG作用后可抑制这种核转位,TSG 100μmol·L-1处理组的核转位抑制作用最明显。结论TSG可能通过抑制NF-κB的激活发挥保护血管内皮的作用。

CNTF对NMDA引起大鼠海马神经元蛋白激酶C核转位的影响

目的 :探讨睫状神经营养因子 (CNTF)对N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)引起大鼠海马神经元蛋白激酶C(PKC)发生核转位的影响。方法 :以NMDA及CNTF处理原代培养的大鼠海马神经元 ,PKCγ、PKCε免疫细胞化学并结合图象分析方法测定PKC阳性神经元胞核的灰度。结果 :①给予不同浓度NMDA处理不同时间后 ,神经元核内有不同程度的PKCγ及PKCε表达 ,其中以 10 0 μmol/LNMDA 30min组表现尤为显著 ;②CNTF +5 0 0 μmol/LNMDA组神经元胞核PKC灰度与对照组相似。结论 :NMDA可引起海马神经元PKCγ、PKCε的核转位 ,而CNTF则抑制其转位的发生 ,提示CNTF对海马神经元的保护作用与抑制PKC的核转位有关。

核因子-κB在乙型肝炎病毒相关性肾炎中的核转位表达及其意义

目的:了解乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中核因子-KappaB(NF-κB)核转位表达并探讨其在HBVGN肾病发生中的作用。方法:采用微波免疫组织化学染色的方法,对30例HBVGN和5例正常肾组织中的NF-κB亚基p65表达进行检测。结果:在HBVGN病例中,有80%(24/30)的肾组织表现为不典型膜性肾病;NF-κB的核转位表达较正常肾组织显著升高(P<0.05),位于肾小球上皮细胞、内皮细胞及系膜细胞和肾小管上皮细胞的胞核内。结论:肾组织内NF-κB的核转位表达增多可能与HBV的感染有关,NF-κB可能参与了HBV引发HBVGN的发生过程。