气相色谱-质谱联用技术分析梅花入骨丹挥发油的化学成分

目的分离鉴定梅花入骨丹挥发油的化学成分。方法用药典记载的提取方法提取梅花入骨丹的挥发油,经过气相色谱-质谱联用分析,应用峰面积归一化法测定各组分的相对含量。结果从梅花入骨丹中共分离出78个峰,通过与软件中的质谱标准谱图库比较鉴定出其中的24种化合物。结论本研究为梅花入骨丹的物质基础研究和进一步开发应用提供了实验依据。

梅花入骨丹多糖对SW1353软骨肉瘤细胞活性的影响

目的研究梅花入骨丹多糖对SW1353细胞活性的影响。方法体外培养SW1353细胞,用MTT法检测其在梅花入骨丹多糖剂量为50、100、200、400、800μg/mL中的细胞活性。结果 SW1353细胞在50～200μg/mL多糖剂量范围内细胞活性增加,400～800μg/mL时受抑制。结论低剂量的梅花入骨丹多糖溶液对SW1353细胞活性有促进作用,高剂量有抑制作用。

梅花入骨丹多糖含量的测定

目的测定梅花入骨丹多糖含量。方法采用苯酚一硫酸法。结果本法建立的标准曲线为Y=8.1249X-0.0067(r2=0.9991),检测波长为490 nm,多糖含量为2.98%,平均回收率为99.15%,RSD为1.73%(n=5)。结论此方法简便可行,重现性较好,可作为梅花入骨丹的质量评价依据,为合理开发该药提供参考。

HPLC法测定梅花入骨丹中的没食子酸和槲皮素含量

目的测定梅花入骨丹中没食子酸和槲皮素的含量。方法用HPLC法,以SinoChromC18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,流速为1 mL/min,检测波长为255 nm,柱温为30℃,梯度洗脱。结果没食子酸在0.162～3.24μg,槲皮素在0.002052～0.041μg内呈良好的线性关系,没食子酸平均回收率为103.9%,RSD为1.20%;槲皮素平均回收率为100.5%,RSD为0.97%。结论 HPLC法测定没食子酸和槲皮素,方法简便可行,重复性和分离效果好。

梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制

目的:探讨梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NK-κB)信号通路调节退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制。方法:体外培养大鼠软骨细胞并鉴定,采用CCK-8法检测梅花入骨丹水提物(BCAE)对体外软骨细胞的增殖-毒性,筛选药物作用的最佳浓度和时间。采用10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症退变模型,将软骨细胞分为空白对照组、模型对照组、BCAE组、抑制剂TAK-242组和抑制剂PDTC组,分别进行相应干预后,qRT-PCR及Western blot法检测各组基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、IκBα、p-p65、ColⅡ的mRNA、蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,模型对照组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达下降(P<0.01);与模型对照组比较,TAK-242组、PDTC组、BCAE组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显减少(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达升高(P<0.01)。结论:梅花入骨丹通过TLR4/NK-κB信号通路抑制MMPs的关键调控因子表达,从而抑制IL-1β介导的退变软骨细胞外基质代谢紊乱,发挥抗炎和保护软骨细胞的作用。

梅花入骨丹总黄酮对人软骨肉瘤细胞活性的影响

梅花入骨丹总黄酮是从龙须藤的藤中提取的总黄酮类成分，我们采用MTT法检测不同浓度梅花入骨丹总黄酮干预48h后的SW1353细胞活性，旨在研究梅花入骨丹总黄酮对SW1353细胞活性的影响．为进一步开发利用梅花入骨丹提供依据。

基于网络药理学研究梅花入骨丹治疗骨性关节炎的潜在靶点和作用机制

目的采用网络药理学和生物信息学方法探讨中药梅花入骨丹治疗骨性关节炎的主要成分、潜在作用靶点和作用机制。方法收集获取梅花入骨丹化学成分及SDF结构,利用Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库筛选其有效活性成分并预测其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、TTD数据库检索骨性关节炎发病相关基因,应用Venny 2.1.0构建梅花入骨丹治疗骨性关节炎作用靶点;应用Cytoscape 3.7.2软件构建药物-成分-靶点-疾病调控网络;通过STRING构建PPI网络图并进行拓扑及聚类分析,筛选核心靶点;将药物-疾病关键靶点蛋白进行KEGG通路富集分析。结果梅花入骨丹治疗骨性关节炎的主要活性成分为黄酮类和槲皮素,AKT、VEGFA、RELA、TNF、STAT3、MARK、MMPs、TLR4是梅花入骨丹治疗骨性关节炎的关键靶点,蛋白聚糖与肿瘤、PI3K-Akt、MARK、IL-17、TNF和Toll样受体介导的信号通路是梅花入骨丹治疗骨性关节炎的主要机制通路。结论梅花入骨丹可以通过多成分、多靶点、多通路机制协同治疗骨性关节炎。

梅花入骨丹多糖中蛋白含量的测定

目的建立梅花入骨丹多糖中蛋白含量的测定方法。方法用水提醇沉法提取梅花入骨丹多糖,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,比较Sevage法、木瓜蛋白酶-Sevge法、三氯乙酸-Sevage法、三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白的效果。结果 Sevage法、木瓜蛋白酶-Sevage法、三氯乙酸-Se-vage法、三氯乙酸-正丁醇法蛋白去除率分别为46.21%、71.43%、81.12%、88.11%,多糖损失率分别为33.73%、18.51%、43.40%、28.15%。结论木瓜蛋白酶-Sevage法脱蛋白较好。