梓醇对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤的影响及机制

目的探究梓醇对H_(2)O_(2)诱导成骨细胞损伤的影响及机制。方法将小鼠成骨细胞MC3T3-E1分为对照组、模型组、空载组(转染空载质粒)、梓醇组(100μmol/L)、梓醇+叉头框蛋白O3(FoxO3)过表达组(100μmol/L梓醇+转染FoxO3过表达质粒),经梓醇和转染处理后,除对照组细胞不作处理外,其余各组细胞以H_(2)O_(2)诱导建立成骨细胞氧化应激模型。检测各组细胞活力、凋亡率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙结节光密度(OD)值、活性氧(ROS)的平均荧光强度(MFI)、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平、FoxO3/Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组细胞活力、ALP活性、钙结节OD值、抗氧化酶活性和Wnt、β-catenin蛋白表达水平均显著降低,凋亡率、ROS的MFI、炎症因子水平和FoxO3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,空载组细胞上述指标均无明显变化(P>0.05),梓醇组细胞上述指标均显著逆转(P<0.05);与梓醇组比较,梓醇+FoxO3过表达组细胞上述指标的逆转效果均被显著削弱(P<0.05)。结论梓醇可通过下调FoxO3激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制H_(2)O_(2)诱导的MC3T3-E1细胞氧化应激和炎症反应,提高细胞活力与成骨分化能力,抑制细胞凋亡。

梓醇调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究梓醇调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1/核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养口腔鳞癌细胞Tac8113;CCK-8法筛选梓醇最佳作用水平;将Tac8113细胞分为对照组、梓醇组(24μg/mL)、sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh-Keap1组(转染sh-Keap1慢病毒质粒)、梓醇+sh-NC组(转染sh-NC+24μg/mL梓醇)、梓醇+sh-Keap1组(转染sh-Keap1+24μg/mL梓醇);CCK-8法检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平;采用试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Western Blot分别检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。结果与0μg/mL组比较,随着梓醇剂量增加Tac8113细胞存活率显著降低(P<0.05),因此,选择24μg/mL梓醇作为后续实验的干预条件;与对照组比较,梓醇组Tac8113细胞OD450值、划痕愈合率、ROS水平、MDA水平及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Nrf2、HO-1表达显著降低,细胞凋亡率、SOD水平及Keap1、胱天蛋白酶3(caspase3)表达显著升高(P<0.05);Keap1低表达后Tac8113细胞恶性生物学行为程度加重,且逆转了梓醇对Tac8113细胞恶性生物学行为的影响。结论梓醇抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡发挥抑癌作用,可能与上调Keap1表达,下调Nrf2和HO-1表达有关。

梓醇对2型糖尿病大鼠心肌纤维化及心肌细胞形态学的影响

目的:探讨梓醇对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠心肌纤维化及形态学的影响。方法:采用随机数字表法将90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组10只和实验组80只。实验组大鼠高脂高糖饲料喂养8周后,腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液15 mg/kg制备T2DM模型。将成模大鼠根据空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、体质量随机分为模型组、二甲双胍组与梓醇低、中、高剂量组。二甲双胍组灌胃二甲双胍混悬液90 mg/kg,梓醇低、中、高剂量组分别灌胃梓醇2.5、5、10 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,均灌胃12周。末次给药后,测定各组大鼠FPG;免疫组化法检测心肌组织转化生长因子β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))表达;HE染色观察心肌组织结构情况。结果:与模型组比较,梓醇高、中、低剂量组大鼠FPG及心肌TGF-β_(1)降低(P<0.05);梓醇高剂量组与正常组比较,心肌纤维、胞质、胶原纤维、细胞核均无显著差异。模型组与梓醇低剂量组心肌纤维排列紊乱或不规整,部分溶解、断裂,甚至呈小片状分布,胞质染色不均匀,中度或轻度肿胀;部分细胞核变形,固缩,甚至碎裂消失;心肌间隙显著增宽,可见大量或少量炎性细胞或成纤维细胞。二甲双胍组与梓醇中剂量组心肌纤维排列略规整,心肌细胞核极少部分变形;心肌间隙略增宽,炎性细胞较少。结论:梓醇可降低T2DM大鼠FPG与心肌纤维化水平,可能为保护T2DM大鼠心肌细胞的有效手段。

梓醇调节cGAS-STING信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨梓醇(Catalpol)通过调节GMP-AMP合酶/干扰素基因刺激物(cGAS-STING)信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:培养肺癌细胞A-427,使用1μmol/L~20μmol/L的梓醇处理细胞,选择最佳药物浓度。将细胞分为对照组(Control组)、梓醇低浓度组(Catalpol-L组,5μmol/L Catalpol)、梓醇中浓度组(Catalpol-M组,10μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度组(Catalpol-H组,15μmol/L Catalpol)、梓醇高浓度+cGAS通路抑制剂RU.521组(Catalpol-H+RU.521组,15μmol/L Catalpol+1μmol/L RU.521)。MTT法检测细胞存活率;Edu法检测细胞增殖;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白表达;将CD8^(+)T细胞与各组处理的细胞共培养,台盼蓝染色检测CD8+T细胞存活率;ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平。结果:1~20μmol/L的梓醇处理A-427细胞,细胞存活率降低(P<0.05),选择5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的梓醇浓度进行实验。与Control组相比,Catalpol-L组、Catalpol-M组和Catalpol-H组Edu阳性率、细胞克隆形成数、S期细胞占比、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平及Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞占比、CD8^(+)T细胞存活率、IFN-γ水平及Bax、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白水平显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性;与Catalpol-H组相比,Catalpol-H+RU.521组Edu阳性率、细胞克隆形成数、S期细胞占比、IL-4、IL-10、TGF-β和PD-L1水平及Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期细胞占比、CD8^(+)T细胞存活率、IFN-γ水平及Bax、Cleaved-caspase-3、cGAS和STING蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:梓醇可能通过激活cGAS-STING信号通路抑制肺癌细胞的增殖和免疫逃逸,促进细胞凋亡。

梓醇抗氧化作用机制的研究进展

梓醇作为天然抗氧化剂,其抗氧化作用对生物体发挥重要保护作用,尤其在治疗糖尿病、肿瘤、神经损伤等疾病有明显作用且已被研究证实。通过搜索中国知网(CNKI)、万方数据库、Pubmed、Web of Science等中英文数据库,整理近年国内外对梓醇的抗氧化机制研究成果,总结梓醇抗氧化作用的研究现状。研究发现,梓醇可以直接捕捉和中和自由基,阻止其对细胞和组织的氧化损伤。其次,梓醇还通过激活抗氧化酶系统,增强细胞内的抗氧化能力。此外,梓醇能调节氧化应激相关的信号通路,抑制氧化应激引发的炎症反应,从而减少氧化损伤的发生。这些机制共同作用使得梓醇成为一种具有潜力的抗氧化剂,并且在预防癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等发挥重要作用。因此梓醇在医药业的开发和利用有待评估和深入挖掘。

梓醇干预PKM2/LDHA表达调控Th17细胞分化的机制研究

目的研究梓醇通过干预丙酮酸激酶M2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)表达进而影响辅助性T细胞17(Th17)分化的机制。方法从C57BL/6小鼠脾脏中分选出naive CD4^(+)T细胞,通过加入定向分化刺激剂诱导72 h使naive CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化。在诱导分化的同时,分别用0(定向对照)、20、40、80μg/mL梓醇对细胞进行处理。采用流式细胞术检测细胞中Th17细胞分化比例,采用比色法检测细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、PKM2、LDHA mRNA表达情况,采用Western blot法检测细胞中PKM2、LDHA、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。结果与定向对照组比较,经20、40、80μg/mL梓醇作用72 h后,细胞中Th17细胞分化比例分别降低了6.74%、8.41%、9.24%;细胞培养上清液中丙酮酸、乳酸水平,细胞中PKM2、LDHA、RORγt mRNA表达水平以及细胞中PKM2、LDHA蛋白表达水平和STAT3磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。结论梓醇可通过下调PKM2、LDHA表达来降低糖酵解水平,进而抑制Th17细胞分化。

梓醇-川芎嗪方对SAMP8小鼠认知功能的改善作用及机制

目的:探讨梓醇-川芎嗪方(CT)对快速老化(SAMP8)小鼠认知功能的改善作用及其机制。方法:将50只14周龄SAMP8小鼠随机分为模型(Model)组、梓醇-川芎嗪方低剂量(CT-L)组、中剂量(CT-M)组、高剂量(CT-H)组、盐酸多奈哌齐组(DH组),10只14周龄快速衰老模型对照(SAMR1)小鼠作为对照(Control)组。Control组及Model组均以生理盐水灌胃,各用药组以相应药物灌胃,每日1次,连续8周。采用自主活动实验、筑巢行为实验、新物体辨别实验、Morris水迷宫实验等行为学观察。行为学观察后,检测各组小鼠海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42、p-Tau、核因子-κB(NF-κB)p65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及活性氧(ROS)水平,检测各组小鼠血清NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS含量。结果:与Model组比较,DH、CT-M、CT-H组小鼠自主活动次数、筑巢行为评分升高、对新物体辨别时间增加、新旧物体辨别时间比值升高、逃避潜伏期明显缩短、跨平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05)。与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、DH组小鼠的自由活动次数、筑巢行为评分升高、探索新物体辨别时间明显增加、新旧物体辨别时间比值升高、逃避潜伏期明显缩短、跨平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05)。与CT-M组比较,CT-H组小鼠的自由活动次数、筑巢行为评分升高、探索新物体辨别时间增加、新旧物体辨别时间比值升高、逃避潜伏期明显缩短、跨平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05)。与DH组比较,CT-H组小鼠的自由活动次数、筑巢行为评分升高、探索新物体辨别时间增加、新旧物体辨别时间比值升高、逃避潜伏期明显缩短、跨平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05)。与Model组比较,DH组和CT-M、CT-H组小鼠海马组织中SOD及GSH水平升高,Aβ_(1-42)、p-Tau、NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降,小鼠血清NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降(P<0.05)。与CT-L组比较,CT-M组、CT-H组、DH组小鼠海马组织中SOD及GSH水平升高,Aβ_(1-42)、p-Tau、NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降,小鼠血清NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降(P<0.05)。与CT-M组比较,CT-H组小鼠海马组织中SOD及GSH水平升高、Aβ_(1-42)、p-Tau、NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降,小鼠血清NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降(P<0.05)。与DH组比较,CT-H组小鼠海马组织中SOD及GSH水平升高、Aβ_(1-42)、p-Tau、NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降,小鼠血清NF-κB p65、NLRP3、TNF-α、IL-1β及ROS水平下降(P<0.05)。结论:梓醇-川芎嗪方可能通过改善氧化/还原失衡状态,抑制脑内炎症反应从而改善SAMP8小鼠的认知功能障碍,且其量效关系呈正相关。

梓醇在神经退行性疾病中的神经保护作用研究进展

神经退行性疾病(如阿尔茨海默病和帕金森病),其病理特征是神经元进行性丧失。神经退行性疾病常见于老年人,且发病率逐年上升,给社会及家庭带来沉重负担。梓醇是一种中草药内提取的活性成分,大量的体内外实验研究已证实,梓醇具有抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡、促血管生成及神经保护等多种功能,对神经退行性疾病有显著的防治作用,梓醇可能成为一种较理想的神经退行性疾病治疗药物。因此,该文在此基础上就梓醇在神经退行性疾病的作用机制进行综述。

梓醇对肝肺综合征大鼠肝肺损伤的保护作用研究

目的 探索梓醇通过增强TGR5表达和降低肝胆汁酸水平对胆总管结扎术(CBDL)大鼠肺损伤的保护作用。方法 将大鼠随机分为三组[Sham组、CBDL组和梓醇(Catalpol)组],评估生存率、动脉血氧分压(PO2)和肺泡-动脉血氧分压差P(A-a)O2、肝功能、肝肺组织病理变化差异;进一步分析胆汁酸表达水平和TGR5的关系以及相关机制。结果 梓醇治疗改善CBDL导致的肝功能损伤,提高CBDL的生存率和改善了低氧血症;减少了肝、肺血管新生。同时,梓醇通过增强TGR5和降低FXR的表达,减轻BAs水平过高引起肺损伤。结论 梓醇通过上调TGR5和降低FXR的表达,改善BAs水平过高引起的肺损伤,发挥对CBDL大鼠的肝肺保护作用。

梓醇对糖尿病肾病大鼠肾内质网通路PERK、CHOP表达影响

目的观察梓醇对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织结构改变及内质网应激通路相关蛋白PERK、CHOP表达的影响,探讨梓醇对肾脏内质网应激通路的调控作用及其对肾损伤的保护作用。方法取60只SD大鼠适应性饲养1周后,随机分为对照组、模型组、低剂量梓醇保护组、中剂量梓醇保护组和高剂量梓醇保护组,每组12只。采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立大鼠DN模型,使用梓醇灌胃6周后,常规取材制备标本。应用HE、PAS染色法对肾脏进行组织学检查。应用免疫组化、Western Blot方法观察PERK、CHOP在肾组织中的分布和蛋白表达。结果HE和PAS染色结果显示,对照组大鼠肾组织形态结构正常;模型组大鼠肾小球变形、基底膜增厚、系膜增生,肾小管变性、上皮细胞空泡化、间质水肿;PAS阳性明显。梓醇干预后,肾组织病理改变有所改善,PAS阳性减弱,特别是中、高剂量梓醇保护组的系膜增生减少、基底膜增厚和肾小管病变明显减轻。免疫组化结果显示,PERK和CHOP均定位表达于近端小管和远端小管上皮细胞胞浆。模型组大鼠肾组织PERK和CHOP表达与对照组比较明显增加(P<0.001);梓醇保护组大鼠肾组织PERK和CHOP表达与模型组比较减少,尤其是中、高剂量梓醇保护组PERK和CHOP表达减少明显(P<0.01,P<0.001)。Western Blot结果显示,模型组大鼠肾组织PERK和CHOP蛋白表达与对照组比较明显增加(P<0.001)。梓醇保护组PERK蛋白表达与模型组比较减少,且呈现剂量依赖性(P<0.05,P<0.001);低剂量梓醇保护组CHOP表达无明显变化;中、高剂量梓醇保护组CHOP表达减少(P<0.01,P<0.001)。结论梓醇可能通过下调肾组织PERK和CHOP表达,维持内质网稳态平衡,缓解糖尿病肾病肾损伤。

梓醇通过NLRP3/Caspase-1通路对糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及机制

目的 探讨梓醇通过NLRP3/Caspase-1通路对糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及其机制。方法 从80只健康SD大鼠中随机选取70只,给予高脂高糖饲料,同时通过腹腔注射的方式,注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)建立糖尿病大鼠模型,余下10只作为对照组正常饲料喂养。将造模成功的60只大鼠(10只大鼠未达模型标准被淘汰)随机分成模型组、梓醇低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各15只,按照100、300、900 mg/kg的量每日灌胃1次,连续干预8 w,期间保持高脂高糖喂养;对照组和模型组灌胃生理盐水。最后一次灌胃结束后,超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达量,大鼠血清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量经酶联免疫吸附法(ELISA)检测。结果 与对照组相比,模型组大鼠左心室缩短率(fractional shortening, FS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)均显著降低(P<0.05),HE染色结果可见心肌纤维肿胀、排列紊乱、纤维束间隔增宽,大鼠心肌组织NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白表达量和血清中IL-1β、IL-18水平均显著增高(P<0.05)。梓醇低、中、高剂量组LVEF、FS与模型组比较均明显改善(P<0.05),大鼠心肌组织病理学损伤明显改善,同时心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达及血清IL-1β、IL-18含量均明显降低(P<0.05),仅梓醇低剂量组Caspase-1蛋白表达无差异。结论 梓醇保护DCM大鼠心肌组织可能是通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路,抑制DCM大鼠心肌细胞焦亡。

梓醇-川芎嗪方调控STAT3改善阿尔茨海默病神经可塑性的机制研究

目的:探讨梓醇-川芎嗪(CT)方对阿尔茨海默病(AD)的作用及转录激活蛋白3(STAT3)的影响。方法:将野生型C57BL/6J小鼠作为对照组(Control),同时将粉样前体蛋白/早老素1双转染小鼠按照随机数字表法随机分为模型组(Model)、低剂量梓醇-川芎嗪方组(CT-L)、高剂量梓醇-川芎嗪方组(CT-H),每组6只。CT-L组和CT-H组分别给予梓醇-川芎嗪方药50、100 mg/kg灌胃处理。Control组和Model组均给予等体积的生理盐水灌胃。每日1次,连续灌胃8周。水迷宫实验探索梓醇-川芎嗪对AD小鼠学习记忆能力的影响,免疫组化检测海马组织中生长相关蛋白43(GAP-43)的表达。海马神经元HT-22细胞分为空白对照组(Control组)、模型组(Model组)、低剂量梓醇-川芎嗪方组(CT-L组)、高剂量梓醇-川芎嗪方组(CT-H组)、STAT3敲除+梓醇-川芎嗪方组(CT+siSTAT3组)。通过Aβ_(1-42)构建体外AD模型,通过转染siSTAT3构建STAT3沉默的神经元模型,并加入高、低剂量的梓醇-川芎嗪方培养24 h,细胞活性检测(CCK-8)检测细胞活力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Cyclin D1、Ki-67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、NF200、GAP-43、STAT3和磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,Brdu检测细胞增殖,流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测细胞凋亡。结果:梓醇-川芎嗪方可以明显缩短APP/PS1双转染小鼠的逃避潜伏期,提高目标象限停留时间和目标象限停留次数,上调海马组织GAP-43的表达,其中高剂量的梓醇-川芎嗪方作用更显著(P<0.05或P<0.01)。梓醇-川芎嗪方可以恢复AD模型细胞的活力和增殖能力,上调Cyclin D1、Ki-67、NF200、GAP-43和STAT3蛋白的表达,下调凋亡相关蛋白Bax的表达并恢复了抗凋亡Bcl-2蛋白的水平,其中高剂量梓醇-川芎嗪方的作用更显著(P<0.05或P<0.01)。而沉默STAT3逆转了梓醇-川芎嗪方对AD神经元增殖和对NF200、GAP-43蛋白表达的促进作用,阻断了梓醇-川芎嗪方对AD神经元的抗凋亡作用(P<0.05或P<0.01)。结论:梓醇-川芎嗪方可以显著改善AD模型小鼠的认知和记忆能力,且其效应具有剂量依赖性。其作用机制可能与促进神经元细胞的增殖,降低凋亡,调控STAT3的表达从而促进神经元的可塑性有关。

响应面法优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺

目的 优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺。方法 采用单因素实验,考察超声时间、超声温度、超声功率、料液比对千金黄连丸中小檗碱和梓醇含量的影响。在单因素实验的基础上,以通过熵权法计算的小檗碱含量、梓醇含量的综合评分为评价指标,采用响应面法优化千金黄连丸中小檗碱和梓醇的超声提取工艺。结果 最佳工艺参数为料液比1:30(g:mL),超声时间50min,超声温度27℃,超声功率67%(167.5W,最大功率250W),此条件下,小檗碱含量为4.15,梓醇含量为0.593,综合评分为2.34。结论 响应面法操作方便、省时、重复性好,结果可靠,为千金黄连丸的进一步开发利用提供了证据。

梓醇对MPTP诱导帕金森病模型小鼠的神经保护作用及其机制

目的探究梓醇对甲基苯骈三氮唑(MPTP)诱导帕金森病模型小鼠的神经保护作用,并探索其作用机制。方法利用MPTP构建帕金森病模型小鼠模型,根据实验目的将实验小鼠分成空白对照组,MPTP模型组和MPTP+梓醇组。利用开放场实验(OFT)、爬杆实验和Rota-rod实验检测小鼠行为学,处死小鼠后收集其脑组织,检测小鼠脑组织中活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测凋亡相关分子的表达量,免疫组织化学检测小鼠脑黑质和纹状体中酪氨酸羟化酶(HT)的表达。结果3组小鼠的OFT总距离,爬杆试验结果和Rota-rod时间差异均无统计学意义(均P>0.05),但MPTP+梓醇组小鼠的区域中心距离和进入竞技场中心的次数均优于MPTP组(均P<0.05)。MPTP组小鼠脑组织中ROS含量高于空白对照组(P<0.05),而SOD活性低于空白对照组(P<0.05);MPTP+梓醇组小鼠脑组织中ROS含量低于MPTP组(P<0.05),而SOD活性高于MPTP组(P<0.05)。MPTP模型组小鼠Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的相对表达量均高于空白对照组(均P<0.05);MPTP+梓醇组小鼠的Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3的相对表达量均低于MPTP组(均P<0.05)。MPTP+梓醇组小鼠的p-MKK4/MKK4、p-JNK/JNK和p-cjun/jun的相对表达量均低于MPTP组(均P<0.05)。MPTP模型组小鼠黑质和纹状体中HT的含量均低于空白对照组(均P<0.05),而MPTP+梓醇组小鼠黑质和纹状体中HT的含量均高于MPTP模型组(均P<0.05)。结论梓醇不仅可以抑制氧化反应,还可以调高HT的表达,进而发挥抗帕金森的作用,而MKK4/JNK/c-jun信号通路可能是MPTP氧化应激传导的信号通路。

鲜地黄与干地黄中梓醇、糖类成分含量的比较

目的 对地黄的干品和鲜品进行梓醇、糖类成分含量的成分比较研究。方法 用高效液相色谱法和紫外分光光度法进行含量测定。结果 地黄中梓醇含量、还原糖和多糖的含量均为鲜品高于干品。

地黄中梓醇变化条件的探讨

地黄干燥、炮制后，经ＨＰＬＣ测定梓醇的含量明显降低。梓醇含量的变化与酸、碱性条件有关，而在水溶液中加热时间对其含量无明显改变。与单糖。

不同产地的地黄中梓醇含量比较

目的 采用薄层扫描法测定了不同产地的地黄中梓醇的含量。方法 以氯仿 -甲醇 -水 ( 7∶ 4∶ 0 .5 )为展开剂 ,10 %硫酸 -乙醇为显示剂 ,4 13 nm为扫描波长 ,反射法扫描。结果 河南温县产地黄中梓醇含量较高 ,山东嘉祥产地黄中梓醇含量较低。

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。

地黄的炮制对梓醇和5-羟甲基糠醛含量的影响

目的:研究地黄炮制过程对梓醇(catalpol)和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化的影响。方法:鲜地黄制成干地黄后分别以10%和50%的乙醇为液体辅料并分别在90℃和100℃的条件下反复蒸制得熟地黄,各条件下制得的样品经30%甲醇超声波提取2 h,利用反相HPLC分别在204,284 nm,流速1.0 mL.min-1,流动相3%乙腈条件下测定梓醇和5-HMF的含量。结果:随着蒸制次数的增加,梓醇的含量减少,5-HMF的含量增加。液体辅料乙醇的体积分数和蒸制温度都对梓醇和5-HMF的含量有影响,10%乙醇,100℃的条件下炮制的熟地黄最优,在此条件下蒸7次以上的熟地黄中5-HMF的含量符合大韩药典标准。结论:分析了地黄炮制对梓醇和5-HMF含量的影响,为进一步研究地黄提供了依据。

梓醇改善东莨菪碱诱导的学习记忆障碍及机制研究

目的研究梓醇对由东莨菪碱所致小鼠空间学习记忆障碍的影响和机制。方法小鼠随机分为4组:正常组、模型组(东莨菪碱,2 mg.kg-1)、奥拉西坦组(阳性药物,105mg.kg-1)和梓醇治疗组(9 mg.kg-1),采用水迷宫测试小鼠空间学习记忆功能。于实验前30 min腹腔注射东莨菪碱诱导小鼠学习记忆障碍模型,记录小鼠逃避潜伏期时间。水迷宫测试毕,处死小鼠,分离大脑皮质和海马,匀浆取上清液测大脑皮质和海马中乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的含量。结果①各组实验前逃避潜伏期无差异;给药东莨菪碱前后差异有显著性。②组间比较,与正常组比较,东莨菪碱导致记忆障碍;与东莨菪碱组比较,阳性药物奥拉西坦和梓醇治疗组逃避潜伏期明显缩短,ACh和BDNF含量明显增加(P<0.05)。结论小鼠注射东莨菪碱成功诱导学习记忆机能障碍模型。梓醇改善东莨菪碱诱导的学习和记忆障碍,其机制可能与促进BDNF表达,增加脑ACh含量有关。