梯度洗脱LC-ICP/MS法测定5种硒形态

建立一种梯度洗脱液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(Liquid Chromatography-Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry,LC-ICP/MS)分析硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、亚硒酸根、硒代蛋氨酸、硒酸根5种硒形态。样品通过Hamilton PRP-X100阴离子色谱柱,分别以流动相A 40 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵+5 mmol·L^(-1)柠檬酸(pH=4.6)和流动相B 60 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵+5 mmol·L^(-1)柠檬酸(pH=4.6)梯度洗脱5种硒形态,流速为1.0 mL·min^(-1),切换时间分别为3.0 min和6.4 min,ICP/MS检测,外标法定量。5种硒形态在8.5 min内检测完毕;0.5~200.0μg·L^(-1)相关系数r>0.999,最低检测质量浓度为0.10~0.39μg·L^(-1)。相较于《生活饮用水标准检验方法第6部分:金属和类金属指标》(GB/T 5750.6-2023)硒形态分析法,该方法将分析时间缩短了46.8%,5种形态峰分离度更好、灵敏度更高。

HPLC梯度洗脱法测定雷公藤多苷片中甲素的含量

目的建立以梯度洗脱测定市售雷公藤多苷片中甲素含量的方法。方法采用HPLC以甲醇-水为流动相梯度洗脱;流速为0.9ml/min;柱温为25℃;检测波长为218 nm。结果线性范围为0.65~41.68μg/ml,r=0.9998,平均回收率103.43%,RSD=0.96%(n=9)。结论梯度洗脱法比现行质量标准的检测方法重复性更好、精密度更高。可作为雷公藤制剂中甲素的定量检测方法。

RP-HPLC梯度洗脱法测定盐酸金霉素有关物质方法研究

目的 建立准确可靠的RP-HPLC梯度洗脱法用于测定盐酸金霉素原料药有关物质。方法 采用Ultimate XB-C8色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以高氯酸-水-二甲基亚砜(16∶934∶525)(pH<2.0)、乙腈、甲醇分别作为流动相A、B、C,进行梯度洗脱;柱温为45℃;检测波长为280 nm;流速为0.8 mL/min。结果 与《中国药典》2020年版相比,检出杂质多2个,盐酸金霉素与11个已知杂质分离度良好。13批样品均检出6个已知杂质,除盐酸四环素、4-差向金霉素外,还检出杂质B、E、J、L,其中杂质B、E为主要其他杂质。结论 该方法适用性好、专属性强,可真实反映盐酸金霉素有关物质状况,为其质量控制提供方法支撑。

基于HPLC梯度洗脱-切换波长法测定防芷鼻炎片的6种成分

目的:建立防芷鼻炎片6种成分的含量测定方法。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,甲醇-0.5%醋酸溶液为流动相,以1.0 mL/min的流速进行梯度洗脱;分时段切换波长。结果:绿原酸、咖啡酸、芍药苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、蒙花苷分别在2.57~30.88μg/mL、0.77~75.80μg/mL、25.2~403.2μg/mL、3.054~48.864μg/mL、1.008~16.128μg/mL、5.19~83.06μg/mL的范围内,与峰面积呈良好线性关系;6种成分的加样回收率均在96.7%~103.1%之间;分别对3个厂家6个批号的样品测定结果进行分析,发现同一厂家生产的样品差异不大,而不同厂家的样品测定结果差异显著。结论:该方法系统适用性好、精密度高,可作为防芷鼻炎片6种成分的含量测定方法。

反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。

大孔吸附树脂精制栀子黄色素的梯度洗脱和拐点控制

筛选了应用较广的4种大孔吸附树脂YW、NKA、D3520、HPD-100A进行栀子黄色素的吸附分离精制,研究了精制过程中水和低度乙醇洗脱除杂的拐点控制,结合采用反梯度洗脱工艺,得到栀子黄色素产品分别在440nm、325nm和262nm有吸收峰,计算其吸光度比值A325nm/A440nm=0.187,A238nm/A440nm=0.000,A262nm/A440nm=0.220,产品精制回收率皆可超过90%。

HPLC梯度洗脱法同时测定活血镇痛膏中防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱

目的:建立同时测定活血镇痛膏中的防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量的HPLC梯度洗脱法。方法:采用Dikma-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈(3∶1)(A)与0.06%二乙胺水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,检测波长分别为280 nm(防己诺林碱和粉防己碱)、235 nm(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱),流速1.0 ml·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μl。结果:防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱5个成分的质量浓度分别在7.490~149.800、14.610~292.200、4.150~83.000、5.250~105.000、5.140~102.800μg·ml^(-1)范围内呈良好线性关系,r分别为0.999 9,0.999 8,0.999 2,0.999 6,0.999 9;平均加样回收率(RSD)分别为99.87%(0.49%),97.79%(1.11%),96.97%(1.75%),98.60%(1.50%),97.94%(0.98%)(n=6)。结论:本文建立的HPLC梯度洗脱法能同时测定活血镇痛膏中的5个成分,该方法简便、稳定、可靠,可作为活血镇痛膏全面可靠的质量控制方法。

HPLC梯度洗脱法测定防风中4种主要成分含量

目的:在原有防风HPLC含量测定方法基础上改进测定条件。方法:应用HPLC法,以防风中4种主要成分为指标;采用Alltima C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1。结果:运用梯度洗脱,建立防风中防风色原酮Ⅰ葡萄糖苷,防风色原酮Ⅱ葡萄糖苷,防风色原酮Ⅰ,防风色原酮Ⅲ葡萄糖苷的HPLC含量测定方法,与前方法相比测定结果无显著性差异。结论:HPLC梯度洗脱法测定防风中4种主要成分含量比原方法(两种流动相系统)简便、易于操作。

反相高效液相色谱中流动相线性梯度洗脱条件下溶质保留时间预测的新方法

在计算溶质的梯度保留时间时 ,根据流动相在色谱柱内的分布规律 ,对溶质在色谱柱内的迁移距离和流动相梯度同时进行校正 ,从而建立了一种预测溶质线性梯度洗脱条件下保留时间的新方法。该方法在不同的仪器系统中 ,对于弱保留和强保留溶质在不同线性梯度洗脱条件下保留时间的预测 ,都具有良好的准确度。以 15种氨基酸和 8种苯的同系物为例 ,该方法对于弱保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 3 70 %和 4 90 % ,远小于文献方法得到的结果 (2 3 6 1%和 31 16 % ) ;对于强保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 0 2 1%和6 0 1% ,略小于文献方法得到的结果 (0 81%和 6 6 9% )。

高效液相色谱梯度洗脱法测定不同中国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定国产西红花中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量。方法采用反相高效液相色谱法,以Agilent ZORBAX StableBond SB-Aq(4.6 mm×250 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相为0.01%甲酸(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱,0～8 min(75%～70%A),8～10 min(70%～60%A),10～25 min(60%～30%A);流速:1.0 mL.min-1;进样量:5μL;测定波长:440 nm;柱温:30℃。结果西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的保留时间大约分别为5.71 min和8.83 min。以峰面积对进样浓度线性回归,西红花苷Ⅰ回归方程:Y=24.93X-0.254 3,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1,西红花苷Ⅱ回归方程:Y=36.11X+8.370,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的回收率分别为101.1%和100.2%,RSD分别为1.7%和1.4%。结论本方法可用于测定不同国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量,本方法操作简便,结果准确。

煤液化油的梯度洗脱及芳烃组成分析

采用梯度洗脱技术对煤液化油进行了分离,并对芳烃部分进行了气相色谱-质谱（GC-MS）和核磁共振氢谱（^1H-NMR）分析。结果表明,通过梯度洗脱技术能够将煤液化油分成轻、中和重芳烃。单环芳烃低场部分质子的特征吸收区域在化学位移（δ）为6.9-7.2处,双环和多环芳烃低场部分质子特征吸收区域在δ为7.2-9.0处。

梯度洗脱测定植物源调节剂中内源激素方法探讨

建立了梯度洗脱高效液相色谱法同时测定内源激素赤霉素（GA3）、吲哚乙酸（3-IAA）、脱落酸（ABA）、细胞分裂素（6-BA）和α-萘乙酸（α-NAA）等5种植物内源激素的方法，采用Hypersil ODS C18柱和紫外检测器，以甲醇、乙腈和0．6％的乙酸为流动相梯度洗脱，分别在各组分的保留时间段设置其最佳检测波长，在12min内可将上述5种内源激素的各组分分离完全，峰形良好，该方法的回收率可达到90％～96％，线性相关系数（r）大于0．998，检出限在0．02～0．3μg／g之间。还探讨了各组分的最佳检测条件和梯度洗脱存在的问题及解决方法。

高效液相色谱梯度洗脱同时测定化妆品中防腐剂、抗氧化剂和杀菌剂

建立了一种灵敏、快速的高效液相色谱梯度洗脱同时测定化妆品中防腐剂、抗氧化剂和杀菌剂的方法。采用C8柱,以甲醇和水为流动相梯度洗脱,在检测波长273 nm用二极管阵列检测器,17 min内可将4种防腐剂、2种抗氧化剂和2种杀菌剂分离测定。方法快速准确,用于实际样品的测定。

高效液相梯度洗脱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质

目的用高效液相色谱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱;检测波长232nm;采用A相(含20%磷酸盐缓冲液的乙腈溶液)B相磷酸盐缓冲液[水1mol·L-1磷酸二氢钾溶液1mol·L-1醋酸溶液(909∶10∶1)]为流动相进行梯度洗脱(A相的起始比例为10%,30min内上升至90%);流速为1mL·min-1;柱温为30℃;进样量为10μL。结果本法实现了在较短时间内将原料中引入的有关物质和强力破坏条件下产生的降解产物与主成分之间的基线分离。结论本色谱条件适合氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质的测定。

二元梯度洗脱法快速测定人血浆中7种镇静催眠药浓度

本文采用二元梯度洗脱法快速测定了人血浆中7种镇静催眠药的浓度．以二氯甲烷为提取溶剂，色谱测定条件为：HyperSilC18柱，100×4．6mmI．D，检测波长240nm；流动相为甲醇（B）和水（A），流速1．0ml／min。洗脱条件：T＝0B＝50％；T＝7minB＝65％。采用保留时间和最大吸收波长同时定性，在线扫描范围200～400nm，扫描速度5nm／s。全部样品洗脱时间不超过15min，药物之间达完全分离。7种药物中平均回收率最低的为司可巴比妥，回收率88．24％．样品在0～50μg／ml范围内呈良好的线性关系。最大日内差和日间差分别为5．83％和9．64％。本法提取简单，分离度好，定性方便，非常适用于医院中镇静催眠药中毒患者快速鉴定。

高效液相色谱梯度洗脱法测定大鼠胆汁中9-硝基喜树碱含量

目的建立大鼠胆汁中 9 硝基喜树碱的高效液相色谱梯度洗脱方法。方法胆汁样品经乙腈 水 ( 1∶1 )稀释后 ,直接进样。检测波长为 370nm ,采用HypersilBDSC18柱 ( 5 μm,1 5 0mm× 4 6mmI D )分离 ,使用以乙腈 2 %甲酸水溶液为流动相的二元梯度洗脱方法。结果线性范围为 0 5～2 5 μg/mL,定量限为 0 5 μg/mL。结论本法操作简便 ,成功应用于胆汁中 9 硝基喜树碱的含量的测定及胆汁中 9 硝基喜树碱代谢物的初步研究。

HPLC梯度洗脱法测定血浆中柳氮磺吡啶及其代谢物

目的：建立人血浆中柳氮磺吡啶（SASP）及其代谢物磺胺吡啶（SP）、乙酰磺胺吡啶（AcSP）浓度的高效液相色谱（HPLC）测定方法。方法：液相分离采用Hedera ODS-2分析柱,柱温：30℃,以甲醇0.05 mol/L乙酸铵溶液（含0.1%三乙胺）溶剂系统梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,进样量20μl;检测波长243 nm。以苯巴比妥（PB）为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白质后取上清液进样分析。结果：血浆中其他组分均不干扰样品的测定;在0.5-100mg/L范围内SP、AcSP和SASP均呈良好的线性关系,相关系数r均〉0.999 2;提取回收率（n=5）分别为97.1%-101.3%、97.7%-103.3%、94.9%-102.3%;日内相对标准偏差（RSD）分别为1.44%-3.04%、1.76%-3.85%、2.12%-3.22%,日间RSD分别为2.01%-3.69%、2.11%-3.99%、2.56%-3.56%。结论：本方法操作简便、选择性好、准确、灵敏,可用于柳氮磺吡啶的药代动力学研究。

梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠有关物质

目的:建立梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠中的有关物质。方法:采用梯度洗脱方法,用 C_(18)BDS(Thermo Hypersil-Keystone,250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH 值至3.5)-乙腈(95:5)为流动相 A,乙腈为流动相 B;以1.0 mL·min^(-1)的流速进行梯度洗脱,梯度洗脱条件:0～6 min,A 为94%;6～20 min,A 从94%→30%;20～27 min,A 为70%;27～28 min,A 从70%→94%;28～35 min,A 为94%;检测波长为272 nm。通过加热破坏的方法,制备系统适用性溶液,对已知杂质进行定位。结果:在选定的色谱条件下,3-TSA、7-ACA 2个相邻杂质分离度达到4.1,在等度洗脱时保留时间超过80 min 的甲酰头孢尼西缩短为21 min。通过加热破坏的方法,可以将不易得到对照品的3-TSA 进行准确定位。结论:该方法测定灵敏,选择性、重现性好,即可以将不易分离的相邻杂质进行有效分离,又可大大缩短分析时间,符合常规检验的要求。

大豆异黄酮的AB-8树脂吸附梯度洗脱纯化精制工艺研究

以纯化精制大豆异黄酮为目的,研究了以AB-8大孔树脂为吸附剂,不同浓度梯度有机溶剂A 洗脱流程的纯化精制效果。结果表明,以4．5mg大豆异黄酮／mL树脂的上样量,B溶剂→30％A溶剂→ 70％A溶剂一次上柱洗脱,40％A溶剂→70％A溶剂二次上柱洗脱的工艺流程,可以实现较高纯度大豆异黄酮的获得。