奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估

为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。

体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。

草莓农药残留快速检测试剂盒的农药敏感性及检测准确度

为草莓中常见农药残留的快速筛查提供技术支撑,比较5种有机磷和氨基甲酸酯类快检试剂盒产品对草莓样品中的敌敌畏、马拉硫磷、克百威、灭多威4种农药的敏感性及其检测结果准确度。结果表明:5种有机磷和氨基甲酸酯类快检产品的一般性指标均满足要求,其中,试剂盒A(贵州国芯生物技术有限公司)为5种试剂盒中最优产品,检出限能满足《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》的要求,在检出限下,可检出克百威、灭多威、敌敌畏3种农药,且5种试剂盒对敌敌畏检出的准确度较高,未出现假阳性现象。但目前试剂盒速检法仅限于检测有机磷类、氨基甲酸酯类两种农药,检测范围较小,还需进一步探索农药残留快速检测技术。

微间隙抗体芯片检测试剂盒及生物仪器研发与应用研究

本研究聚焦于微间隙抗体芯片检测试剂盒及其生物仪器的研发与应用,探讨了微间隙抗体芯片的基本原理、工作机制及其制备工艺。通过对该试剂盒的组成、制备工艺、性能检测及质量控制等方面的分析,对其应用效果进行了评价。详细讨论了该系统的设计原理,硬件结构,软件设计和集成优化。实例分析表明,微隙型抗体芯片及其相关仪器对疾病早期诊断具有较高的敏感性与准确性,极大地提高了临床诊断的效率与可靠性。

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒国家监督抽检质量分析

目的:评价国内不同使用环节的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的质量现状。方法:依据企业产品技术要求,对准确性、特异性、检测限、精密度4个项目进行检验。同时,以国家参考品和细胞质控品为样品,进行探索性研究。结果:本次国家监督抽检共抽检15批次产品,其中13批次的准确性、特异性、检测限和精密度检测结果均符合要求,2批次结果因质量控制不符合要求判定为不合格,抽检合格率为87%。探索性研究结果显示,以国家参考品为样品进行评价,6批次试剂盒未能满足检测限要求;以9种不同型别的高、低浓度细胞质控品为样品进行评价,各试剂检测高浓度样品符合率较高,检测低浓度样品符合率较低。结论:企业需进一步规范和完善产品技术要求,改进和完善企业参考品和产品的设计,建议采用国家参考品优化检测限标准。

伦理关怀视角下的核酸检测试剂盒改良设计

目的在疫情常态化背景下,为避免核酸检测试剂盒在使用与回收周期中,对传染源处理不当造成二次污染,因此进行试剂盒改良设计,以构建良好的伦理关怀关系。方法首先分析了当下核酸检测产品所存在的弊端,获取功能需求,确定了所属设计类型,运用AD理论对功能需求进行分解,然后对初步设计方案进行耦合判断,运用TRIZ进行解耦,最终得到设计方案。结果采用集成AD和TRIZ的设计方法,从伦理关怀的视角下,对核酸检测试剂盒的安全消毒模块进行设计,将核酸检测试剂盒改良为一体化结构,并增添消毒灭菌模块,最终设计方案可有效解决二次污染问题并实现伦理关怀。结论方案通过集成AD和TRIZ的设计方法,从功能结构上对核酸检测试剂盒进行改良设计,解决了现有产品存在的诸多问题。在设计中注重产品使用感受,帮助人们在使用产品时舒缓紧张感并构建信任,同时为产品新功能模块的创新设计提供思路和参考。

利用比色卡黄龙病快速检测试剂盒对柑橘黄龙病的田间检测试验结果初报

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,由韧皮部限制性细菌Candidatus Liberibacter导致。感染黄龙病的柑橘树的叶片有异常高淀粉积累,因此开发出了基于碘-淀粉显色法的黄龙病快速检测试剂盒。将不同浓度的可溶性淀粉溶液进行碘-淀粉显色反应,制作成快速检测试剂盒配套的比色卡,用来快速确认叶片淀粉值区间。根据不同采样时间的健康树和黄龙病树的叶片淀粉值差异进行统计数据分析,确定了7—10月为黄龙病快速检测试剂盒的适宜采样检测时间。根据显色易辨性和检测准确率将淀粉质量浓度3000 ppm确定为适宜的黄龙病阳性叶片淀粉值界限,即检测叶片淀粉值≥3000 ppm判定为黄龙病阳性。通过田间随机取样发现,快速检测试剂盒与实时荧光定量PCR检测方法的一致性约为80%。该黄龙病快速检测试剂盒对田间黄龙病的快速筛查具有重要意义,可作为实时荧光定量PCR检测方法的前序筛查辅助手段。

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。

基于液相色谱串联质谱法的他克莫司检测试剂盒的研制和评价

目的研制液相色谱串联质谱定量检测他克莫司血药浓度试剂盒并对其性能进行评价。方法全血样本经乙腈沉淀蛋白,以子囊霉素内标。色谱柱:C_(18)柱(4.6 mm×10 mm,5 mm);流动相:1 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-甲醇,梯度洗脱;流速:1.1 ml·min^(-1);柱温:50℃,进样量:5μl。质谱采用电喷雾离子化源、正离子模式、多重反应监测。考察该试剂盒的专属性、线性关系与定量限、精密度与准确度、基质一致性等。对120例临床样本进行检测,分析不同试剂盒间测定结果的相关性和一致性。结果加标样本的回收率为93.42%~105.7%,变异系数的范围为3.04%~4.79%,试剂盒特异性强、准确度高、灵敏度好。在临床样品测试中,考核试剂与对比试剂相关系数r=0.9951,95%置信区间的样本百分比为95.83%。结论液相色谱串联质谱法他克莫司试剂盒检测结果准确可靠,操作简便,适用于他克莫司血药浓度监测和临床检测。

新型冠状病毒抗原检测试剂盒自动售卖机的研发与应用

全球范围内暴发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒性肺炎疫情,对世界各国的公共健康和经济发展造成了重大影响。其中,及时检测并隔离新冠病毒感染者是阻断疫情不断传播和蔓延的关键措施。后疫情时代背景下,通过探究新型冠状病毒抗原检测试剂盒自动售卖机的便捷性与经济适用性,进一步满足不同应用场景下人们自行进行便捷高效自测的需求,减缓国家经济和医疗资源压力,同时为日后如何防治以新型冠状病毒性肺炎疫情为例的突发公共卫生事件提供一定思路。

不同厂家PEDV-IgA抗体ELISA检测试剂盒的对比分析

为比较市面上常用PEDV-IgA抗体ELISA试剂盒检测结果之间的相关性,挑选不同厂家生产的3款试剂盒检测了68份母猪初乳及78份免疫前后的后备母猪血清,并对检测结果进行了相关性分析。结果表明:不同试剂盒检测初乳和血清PEDV-IgA抗体结果差异较大,在进行实验室检测时,应注意合理选择试剂盒,并科学地分析和利用实验室检测结果。

湖南省成功研制出20种常见毒蘑菇的快速检测试剂盒

毒蘑菇中毒是湖南省主要的食源性疾病致病和致死因子,每年发生上百起中毒事件,给广大群众的身体健康和生命安全带来严重威胁。湖南省野生食用菌种类多、分布广,据统计,全省较为常见且易被误食引发中毒的毒蘑菇有20余种,不同种类的毒蘑菇含有多种不同毒素,可导致不同中毒症状,其中部分剧毒者可引发肝、肾损害以及横纹肌溶解和溶血等症状,可危及生命,需要对症进行不同的治疗。因此,发生中毒后的早期准确识别、及时诊断和治疗是降低毒蘑菇中毒死亡的关键。

两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究

为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性,对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒和固相竞争ELISA检测试剂盒进行了检测,并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。结果表明,两种试剂盒在应用方面各有优劣,口蹄疫固相竞争ELISA检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点,更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测;口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值,更适用于口蹄疫抗体定量检测。

核酸检测试剂盒塑料激光焊接结构及工艺研究

为解决核酸检测试剂盒激光焊接漏液问题,该研究通过激光焊接轨迹、焊接次序、焊接功率、焊接速度及工件定位方式调整及上层核酸检测试剂盒盖焊接槽结构、下层核酸检测试剂盒焊接筋结构的设计和改进,采取梯形焊接筋配合焊接槽结构组合,使用单圈多轨迹激光路径、调整不同内外圈焊接次序、焊接功率和焊接速度控制焊接温度,增大激光覆盖面积,克服装配系统性误差,在不改变激光器对焦焦距的前提下降低激光器使用功率增加激光器寿命。通过试验得出,当色母添加比例为1%,激光焊接功率为50 W,激光焊接速度为1000 mm/s,焊接圈数为3,激光光斑直径为0.8 mm时,漏液比例达到最低的0,焊缝剪切强度最高,为37 MPa,且焊缝清洁无烟尘,焊缝内部无气孔的存在,此时焊缝剪切强度最高,焊接漏液率小于万分之一。

水产病原肝肠孢虫核酸检测试剂盒效果测评

该研究选取汇科因、市场品牌A、市场品牌B 3种核酸提取试剂盒及其对应的PCR检测试剂盒,检测近几年盛行肆虐的水产病害——肝肠孢虫(EHP),综合评估核酸提取试剂盒提取的核酸浓度、纯度、CV值,RT-PCR检测试剂盒的Ct值、波动范围等结果。结果显示,提取南美白对虾的肝胰腺和肌肉组织,不同核酸提取试剂盒提取的核酸浓度高低:汇科因>B>A;不同提取试剂盒获取的核酸样品经不同qPCR检测得到的EHP病原浓度高低:汇科因≥A>B;汇科因核酸提取试剂盒和qPCR检测试剂盒相对于A、B试剂盒的效果和稳定性均较佳。

不同禽白血病抗原检测试剂盒检测效果比较

禽白血病目前暂无有效的药物和疫苗进行防控,只能通过不断检测、淘汰阳性鸡以净化种鸡群,在较短时间内最大程度筛检出阳性个体非常重要。因此,选择灵敏度高、特异性强、稳定性好的抗原检测试剂盒很关键。受新冠疫情等因素的影响,某些进口的禽白血病病毒抗原检测试剂盒出现供货紧张的局面,寻找检测灵敏度和批次间稳定性好的国产试剂盒十分必要。因此,该研究通过对比评估多个国产抗原检测试剂盒(B、C、D)与某品牌进口禽白血病病毒抗原试剂盒(A)对多个不同亚群禽白血病病毒的检测灵敏度和批次间稳定性,以期筛选出检测灵敏度高、稳定性好的国产试剂盒,以保证净化工作能够持续进行。结果表明:不同试剂盒对分离细胞上清液病毒的检测灵敏度和批次间稳定性存在一定差异,A、B、C、D这四种试剂盒的阳性率由高到低依次是B>D>C=A,其中以B试剂盒的检测灵敏度最高,试剂盒C的批次间稳定性最好、与进口试验盒A的检测结果最接近。本研究为规模化种禽场禽白血病净化过程中试剂盒的选择提供参考。

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果(阳性检出率为1/30)准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。