葛根汤和桂枝汤调节椎间盘组织Fas、bcl-2蛋白表达的实验研究

目的 :比较检测风寒湿痹证型颈椎病动物模型中颈椎间盘Fas、bcl 2蛋白的表达 ;检测葛根汤、桂枝汤对风寒湿型颈椎病家兔颈椎间盘组织中Fas、bcl 2蛋白的调节作用。方法 :8月龄雄性新西兰白兔 2 4只 ,随机分为正常对照组、风寒湿刺激组、葛根汤治疗组、桂枝汤治疗组。风寒湿刺激组温度 6℃ ,湿度 95 % ,风力 6级 ,每日连续刺激 4h ,间断重复刺激 12 8h ;葛根汤、桂枝汤治疗组在风寒湿刺激组造模基础上服用。采用免疫组织化学ABC法检测椎间盘石蜡切片中Fas、bcl 2蛋白的表达情况。结果 :风寒湿刺激组同正常对照组比较 ,Fas表达均上调 (P <0 0 1) ,葛根汤降低Fas表达 ,与风寒湿刺激组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。风寒湿刺激组同正常对照组比较 ,bcl 2表达均下降 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,葛根汤上调bcl 2表达 ,但与风寒湿刺激组比较没有显著性差异 (P >0 0 5 ) ,桂枝汤对bcl 2的调节作用不明显。结论 :风寒湿刺激组同正常组对照比较 ,Fas表达均上调 ,bcl 2表达均下降 ,葛根汤降低Fas表达 ,上调bcl 2表达 ,发挥延缓椎间盘退变的作用 ,桂枝汤调节上述细胞因子的作用低于葛根汤。

人退变椎间盘组织的基因表达谱

目的 :研究人类退变椎间盘的基因表达谱 ,分析人退变椎间盘基因表达水平的变化。方法 :按条件优化的一步法抽提人退变及正常椎间盘组织的总RNA各 3例 ,分别用cy3 ,cy5荧光标记 ,获得 2组椎间盘cDNA的探针 ,与含有 40 96条人类全长基因的cDNA表达谱芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,对所获得的基因进行生物信息学分析。结果 :在 40 96条基因中 ,有差异表达的基因 70 6条 ,3 5 8条基因表达量明显下降 ,2 98条基因表达量明显上升。在有差异表达的基因中 ,细胞凋亡相关类蛋白 8条 ,其中上皮细胞膜蛋白 (EMP 1 )基因的表达上调明显。结论 :退变椎间盘的基因表达发生变化 ,细胞凋亡增加可能是椎间盘退变发生和发展的因素之一。

风寒湿对家兔颈椎间盘组织iNOS mRNA表达的影响

目的 :观察风寒湿这一颈椎病常见致病因素刺激颈部对机体颈椎间盘组织中诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)mRNA的影响 ,探讨颈椎病病因病机的内在联系。方法 :30只新西兰白兔 ,随机分为正常对照组、风寒湿组、低头位组、复合模型组和中药治疗组等 5组 ,每组 6只 ,采用组织学及逆转录 -多聚酶链反应技术 ,观察颈部肌肉、椎间盘组织形态及iNOSmRNA表达的变化。结果 :风寒湿与低头位等颈椎病常见的致病因素可使颈部肌肉产生无菌性炎症 ,椎间盘组织形态变化虽不明显 ,但颈椎间盘组织iNOSmRNA表达出现异常 (与正常对照组比P <0 0 5 )。结论 :颈部肌肉无菌性炎症。

腰椎间盘组织的炎症诱导效应的实验研究

目的 :探讨腰椎间盘组织是否具有产生或诱导白细胞产生炎症介质磷脂酶A2 (PLA2 )的能力并寻找有效实用的抑制药物。方法 :取腰椎间盘突出症患者的椎间盘标本 1 0份 ,抽取这 1 0名患者的周围血标本 ,从血中分离出单个核细胞。将同一患者的椎间盘和单个核细胞按下列 5组进行培养 :组 1为单个核细胞 ,组 2为椎间盘 ,组 3为灭活椎间盘 +单个核细胞 ,组 4为灭活椎间盘 +单个核细胞 +地塞米松 ,组 5为灭活椎间盘 +单个核细胞 +青蒿酯。测定磷脂酶A2 的活性。结果 :组 1 ,2 ,4,5与组 3比较均差异有显著性 (P <0 .0 1 )。组 5与组 4比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :①椎间盘组织的某些成分可诱导单个核细胞产生高活性PLA2 ;PLA2 很可能是腰椎间盘突出症患者产生腰腿痛的炎症介质并进一步诱导产生其他炎症介质 ;②在体外 ,青蒿素具有抑制PLA2 产生的作用。此作用与地塞米松相近。

水通道蛋白在正常大鼠椎间盘组织中的表达与分布

目的:阐明水通道蛋白在椎间盘中的表达类型及分布情况。方法:收集正常大鼠椎间盘组织,部分用于提取RNA,采用RT-PCR的方法检测水通道蛋白表达的类型;部分标本固定后行组织切片,进行AQPs(aquapor-in)的免疫组织化学染色,观察其表达与分布。结果:在正常大鼠的椎间盘组织中软骨细胞、纤维环细胞和髓核细胞皆有AQP1、3的表达,软骨终板中心地带的表达强于周边区域,内层纤维环表达强于外层纤维环;其余几种水通道蛋白未见表达。结论:AQP1、3在正常大鼠椎间盘中的表达及其空间分布提示其可能与椎间盘内水、甘油的代谢有关,对维持椎间盘组织的正常功能可能有重要的作用。

腰椎间盘突出伴椎间盘组织骨化11例报告

腰椎间盘突出伴椎间盘组织骨化１１例报告杨裕红，吴揭地近年来由于影像学的不断发展，大大提高了椎管内病变的诊断率，尤其是对椎间盘突出的形态、节段、部位以及椎间盘对神经压迫的程度等。此外，ＣＴ扫描可以反映突出椎间盘组织有否钙化、骨化等病理改变。本组１１例腰...

烟碱对腰椎间盘组织及其诱导的炎症效应的影响(英文)

目的 探讨烟碱对突出退变的腰椎间盘组织及其诱导周围血白细胞产生炎症介质NO和IL - 6能力的影响。方法 取 10个手术摘除的腰椎间盘突出症患者的椎间盘标本 ,抽取 10个健康自愿者的周围血标本 ,从各血标本中分离出单个核细胞。用烟碱作为干扰刺激因素。将椎间盘和单个细胞按下列组合进行培养 :组 1为椎间盘 +培养液 ,组 2为椎间盘十烟碱 +培养液 ,组 3为灭活椎间盘 +单个核细胞 +培养液 ,组 4为灭活椎间盘 +单个核细胞 +烟碱 +培养液 ,组 5为单个核细胞 ,组 6为单个核细胞 +烟碱 +培养液。CO2培养箱内培养 72h ,取上清液离心 ,吸取上清液分别测定NO和IL - 6的含量 (ILISA法 )。结果 椎间盘 +烟碱组比单独椎间盘组产生的NO和IL - 6量增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,灭活椎间盘 +单个核细胞 +烟碱组比灭活椎间盘 +单个核细胞组产生的NO和IL - 6量增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1,P <0 .0 1)。单个核细胞 +烟碱组比单独单个核细胞组产生的NO和IL - 6量增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ,灭活椎间盘 +单个核细胞培养组比单独椎间盘组和单独单个核细胞组产生生的NO和IL - 6量增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。结论 突出退变的椎间盘组织自身具有分泌炎症介质NO和IL -

原子力显微术对人体腰椎间盘组织超微结构的研究

报道了采用原子力显微镜（ＡＦＭ）对腰椎间盘组织成分的观察结果，并对胶原组织从结构上进行了分类．

参麦液对早期退变腰椎间盘组织中NO、TGF-β_1表达的影响

目的:探讨参麦液在延缓椎间盘退变中的作用。方法:对6例年轻腰椎间盘突出患者的椎间盘组织采取体外细胞培养,随机分为4组:对照组、1%参麦液组、2 . 5 %参麦液组、5 %参麦液组,用分光光度法测定各组培养上清液中NO含量与NOS活性,并采用免疫组化的研究方法测定椎间盘细胞TGF β1表达。结果:对照组退变椎间盘组织产生的NO为(14 4. 1±9 .7) μmol/L ,NOS为(6 . 2±0 .6 )U/ml,高于参麦液组,有统计学差异。参麦液组中的椎间盘细胞呈不同程度的棕黄色,对照组则呈阴性改变。结论:参麦液可降低椎间盘内炎症因子的浓度,促进椎间盘细胞TGF -β1表达,有效减缓椎间盘组织的退变。

一种椎间盘组织总RNA提取的改良方法

目的改进传统常规法在椎间盘组织中总RNA提取,获得高质量的椎间盘组织总RNA。方法健康成年Newsland白兔,完整取出椎间盘组织,随机分RNA传统方法组和酶消化改良组。传统组,按Trizol法提取总RNA;酶消化改良组,加入0.2%Ⅱ型胶原酶,置于细胞培养箱消化数小时,加入含小牛血清的PBS液终止,离心收集细胞。余步骤同传统组。结果传统组,电泳结果未见28S和18S条带,5S条带部分可见;A260/280比值在1.5左右,蛋白多糖污染重。而酶消化组,电泳结果可见清晰的28S、18S和5S条带,且28S条带的亮度约是18S的两倍;A260/280比值在1.8～2.0之间,无蛋白污染,此法提取的RNA,逆转录后可用于扩增β-actin基因。结论酶消化改良法可望成为椎间盘组织总RNA提取的好方法。RNA片断完整,纯度高,无蛋白污染,不影响后续基因表达（RT-PCR）的分析,并且重复性好,可以推广。

腰椎间盘组织中血管内皮生长因子mRNA表达与其病变程度和病程的相关性

目的:探讨血管内皮生长因子mRNA在突出腰椎间盘组织中的表达情况及其与病程和病变程度的关系。方法:选择2002-06/11在郑州市骨科医院脊柱骨科住院的腰椎间盘突出症患者25例作为病变组,均知情同意。病程1个月～10年,平均23.67个月。硬膜外麻醉下行髓核摘除术,记录椎间盘突出类型,病情从轻至重为:凸起型4例,突出型15例,游离型6例。同时选择3例急性腰椎爆裂性骨折行椎管内减压内固定术患者及2例行脊柱侧弯行前路松解术患者作为对照组,既往健康。手术中选取纤维环、髓核、软骨终板组织标本,每组标本分为两份,一份液氮速冻后转入-70℃超低温冰箱中冻存备用。另一份作光镜下病理组织学观察,根据NorbetBoos等的组织学分级将所有标本的病理病变程度分为轻、重两度。不同类型椎间盘髓核、纤维环、软骨终板组织标本血管内皮生长因子mRNA表达情况以反转录-聚合酶链反应技术测定,并探讨其与病程的关系。结果:腰椎间盘突出症患者25例及对照组5例全部进入结果分析。①血管内皮生长因子mRNA的表达水平:在髓核中的表达水平显著高于在纤维环、软骨终板中的表达犤13.05±0.82,6.91±0.33,2.47±0.37(t=12.03,10.16,P<0.05)犦。游离型显著高于突出型犤8.36±0.41,4.13±0.14,(t=7.81,P<0.05)犦;突出型显著高于凸起型(1.19±0.48)(t=3.35,P<0.05)。病变组明显高于正常对照组(0.61±0.34),(t=8.64,P<0.05)。重度病变患者显著高于轻度病变患者犤10.43±0.27,6.01±0.34(t=8.26,P<0.05)犦。②病程与血管内皮生长因子mRNA表达的关系:病程大于12个月患者椎间盘组织中血管内皮生长因子mRNA表达的阳性率显著高于病程3～6个月及7～12个月的患者犤88.9%,39%,30.7%,(χ2=19.24,P<0.05)犦。结论:血管内皮生长因子参与腰椎间盘突出的病理过程,随病情的加重而分泌增多。病程在12个月以上椎间盘突出症患者的血管内皮生长因子mRNA阳性率较高。

HCMV感染介导的椎间盘组织退变模型的病理学观察

目的探讨HCMV感染Balb/c小鼠对椎间盘退变及病理学改变的模型研究,活体Balb/c小鼠模型导入组织学、基因表达、免疫学的研究,确定人巨细胞病毒注射到腹腔对椎间盘退变的影响及不同剂量的对照性研究。方法(1)随机选取6-8周SPF级Balb/c小鼠84只,建立五个不同感染量HCMVAD169株感染Balb/c小鼠模型雌雄各6只为感染组(A组),同时设立病毒灭活组(B组)和细胞对照组(C组)雌雄各6只;(2)间接ELISA法检测小鼠血清中的IgG、IgM抗体水平,取各组小鼠椎间盘组织进行病毒分离,采用PCR和RT-PCR分别检测HCMVUL83基因和UL54基因转录产物;(3)取各组小鼠椎间盘组织行病理学观察。结果A组和B组小鼠IgG抗体均为阳性,C组为阴性,小鼠IgM抗体仅A组中2×106PFU/ml和2×105PFU/ml感染组雌性小鼠为阳性;上述两感染组小鼠病毒分离、PCR及RT-PCR均为阳性,病理学可见椎间盘组织髓核细胞数目减少,排列不均匀,纤维环结构紊乱;雄性小鼠、其余A组、B组和C组均无明显变化。结论HCMV注射后似乎能逐渐诱导椎间盘退变,出现病理学改变;该模型对椎间盘退变的分子水平研究有显著的优势;进一步研究将会阐述HCMV介导椎间盘退变相关的分子学等机制和过程。

椎间盘组织突出后再吸收研究进展

传统观点认为椎间盘突出症治疗的最好选择是外科手术,可从根本上去除脊髓或神经根致压因素,但外科手术创伤较大,存在一定的风险。目前的研究证实椎间盘组织突出后存在再吸收现象,随着研究的深入,一些影响再吸收过程的因素如炎症反应、机械刺激等也已逐步明朗。继之有学者研究药物对这些影响因素的作用,试图对此进行调节,促进再吸收过程,避免手术。许多临床试验结果证实类固醇激素、英夫利昔单抗、重组人基质金属蛋白酶等药物可调节突出椎间盘组织的再吸收过程,为椎间盘突出症患者的临床治疗提供了一种新方法。

突出腰椎间盘组织中巨噬细胞的表达及意义

目的 通过对突出腰椎间盘组织中巨噬细胞浸润的检测 ,进一步探讨腰椎间盘突出症的致痛机制。方法 38例标本取自不同类型的腰椎间盘突出症患者 ,患者术前术后记录疼痛等级。采用免疫组化SABC法对标本进行CD6 8(为单核 /巨噬细胞的表面标记 )染色。将组织学观察结果与患者术前及术后的疼痛量化结果进行比较。结果 ① 38例标本中CD6 8的阳性表达为2 2例 (5 7% ) ,其中 18例脱出及游离型椎间盘标本中阳性为 14例 (78% ) ,2 0例膨出及突出型中为 8例 (40 % )。②椎间盘组织中的巨噬细胞浸润与患者疼痛有相关性。结论 突出的椎间盘组织中存在着巨噬细胞 。

人退变腰椎间盘组织中p53与IL-1β、IL-6表达

目的实验研究人退变腰椎间盘组织中p53与IL-1β、IL-6表达。方法选择30例本院所收治的腰椎间盘突出症患者2018年5月-2019年10月作为本研究的时间范围,另选取30名于我院体检的健康志愿者,全部患者均采集其血清,对血清实施western blot技术检测,对比2组p53、IL-1β、IL-6表达及阳性检出情况。结果实验组p53、IL-1β、IL-6表达高于参照组,实验组p53(80.00%)、IL-1β(86.67%)、IL-6(70.00%)阳性检出率高于参照组(10.00%、20.00%、16.67%),组间具有明显差异,P<0.05。结论腰椎间盘退变患者与健康志愿者相比,p53与IL-1β、IL-6表达水平明显升高,说明三者在人腰椎间盘组织退变过程中发挥作用。

二甲双胍抑制腰椎间盘退变模型兔椎间盘组织的细胞凋亡

目的探究二甲双胍对兔椎间盘组织自噬及炎性反应的影响,以初步探究其抗椎间盘退变的分子机制。方法将兔分为:假手术组、模型组、二甲双胍组、自噬抑制剂组、二甲双胍+自噬抑制剂组,每组10只。免疫组化染色法检测自噬相关蛋白7(Atg7)阳性表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、凋亡相关蛋白caspase-8表达。结果与模型组相比,二甲双胍组兔椎间盘退变减轻,自噬小体及自噬溶酶体形成增多,自噬蛋白质表达增多,炎性因子及凋亡蛋白质表达降低(P<0.05)。自噬抑制剂可抑制自噬,加重椎间盘退变,增强炎性因子及凋亡蛋白质表达,并减弱二甲双胍发挥的增强自噬、减弱炎性反应及凋亡作用(P<0.05)。结论二甲双胍可能通过促进自噬激活,减弱炎性反应,来抑制椎间盘组织细胞凋亡,改善椎间盘退变。