橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响

[目的]试验旨在研究橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响。[方法]选用240只1日龄爱拔益加肉鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复8只。5组试验鸡分别饲喂基础饲粮(对照组)以及在基础饲粮中添加40 mg·kg^(-1)橙皮苷(橙皮苷组)、40 mg·kg^(-1)百里香酚(百里香酚组)、20 mg·kg^(-1)迷迭香酸(迷迭香酸组)和 40 mg·kg^(-1)橙皮苷+40 mg·kg^(-1)百里香酚+20 mg·kg^(-1)迷迭香酸(联合组),试验期42 d。[结果]与对照组相比,联合组肉仔鸡的法氏囊指数显著增加(P<0.05),血清中脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α、干扰素γ和白细胞介素1β(IL-1β)、免疫球蛋白M的含量显著降低(P<0.05),回肠黏膜中细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)和超氧化物歧化酶(SOD1)等基因mRNA表达水平以及过氧化氢酶活性显著增加(P<0.05),回肠和盲肠中丙二醛含量显著降低(P<0.05),盲肠黏膜中SOCS1、Nrf2、SOD1和GPX4 mRNA表达水平和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著增加(P<0.05);橙皮苷组肉仔鸡血清中LPS、IL-1β的含量显著降低(P<0.05),回肠黏膜Nrf2和SOCS1 mRNA表达水平显著增加(P<0.05),盲肠黏膜的GSH-Px活性显著增强(P<0.05);百里香酚组肉仔鸡血清中LPS、IL-1β含量显著降低(P<0.05),回肠黏膜中Nrf2、NQO1和SOCS1的mRNA表达水平显著增加(P<0.05),盲肠黏膜中GPX4的mRNA表达水平和GSH-Px活性显著增加(P<0.05);迷迭香酸组肉仔鸡血清中LPS、IL-1β含量显著降低(P<0.05),回肠黏膜中Nrf2、NQO1、SOD1和SOCS1 mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。[结论]饲料中联合添加橙皮苷、百里香酚和迷迭香酸能够增加肉仔鸡法氏囊指数,降低血清中细胞因子含量,提高机体和黏膜的免疫能力,增强肠道黏膜的抗氧化能力。

新橙皮苷治疗骨质疏松症的靶点及对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用

背景:前期研究发现新橙皮苷可以延缓去卵巢小鼠的骨丢失,具有治疗骨质疏松症的潜力,但其具体作用机制仍有待探究。目的:基于生物信息学和体外细胞实验探索新橙皮苷治疗骨质疏松症的关键靶点与可能机制。方法:从GEO数据库获得骨质疏松症相关的基因表达数据集,通过R语言筛选和分析差异表达基因,从GeneCards和DisGeNET数据库筛选骨质疏松症的相关靶点,从ChEMBL和PubChem数据库筛选新橙皮苷的相关靶点,三者取交集获得共同靶点,使用String数据库构建交集基因的PPI网络,筛选关键目标靶点,使用DAVID数据库进行GO、KEGG富集分析,运用AutoDock软件对新橙皮苷与目标靶点蛋白进行分子对接验证。检测新橙皮苷对C57小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,以完全培养基为空白对照组、成骨诱导液为对照组,含不同浓度(25,50μmol/L)新橙皮苷的成骨诱导液为实验组,在相应时间检测细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达、矿化程度、成骨相关基因及目标靶点基因的表达。结果与结论:(1)筛选出差异表达基因9253个,骨质疏松症相关靶点2161个,新橙皮苷相关靶点326个,三者共同靶点53个,53个基因在骨质疏松症样本中皆上调。PPI网络筛选出具有研究意义的目标靶点基因PRKACA。GO功能与KEGG通路富集分析表明,新橙皮苷通过PRKACA靶点治疗骨质疏松症主要依靠蛋白质磷酸化和蛋白质自身磷酸化等生物过程,作用于内分泌抵抗、癌症中的蛋白聚糖、雌激素信号通路等发挥治疗作用。分子对接结果表明,新橙皮苷与目标靶点PRKACA对应的蛋白有一定的结合能力。(2)碱性磷酸酶染色显示新橙皮苷可以促进间充质干细胞成骨分化早期碱性磷酸酶的表达,茜素红染色显示新橙皮苷可以促进间充质干细胞成骨分化的矿化。RT-qPCR检测结果显示,新橙皮苷可以促进碱性磷酸酶、PRKACA、骨钙素mRNA的表达。(3)结果表明,新橙皮苷可能通过雌激素信号通路上的PRKACA靶点促进成骨分化,从而防治骨质疏松症。

橙皮苷调控mTOR/HIF-1α通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬的影响

[目的]探讨橙皮苷调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬的影响。[方法]取生长良好的SV40 MES-13细胞,依次分为对照组(不进行处理)、甘露醇组(30 mmol/L甘露醇处理)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、不同剂量橙皮苷组(30 mmol/L、60 mmol/L橙皮苷处理)、60 mmol/L橙皮苷+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组(60 mmol/L橙皮苷、100 ng/mL IGF-1处理),噻唑蓝(MTT)及5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β水平;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、自噬相关基因5(ATG5)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α相关蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,甘露醇组吸光度值、EdU阳性率、TNF-α、IL-1β水平、凋亡率、LC3、p62、ATG5 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α表达差异无统计学意义(P>0.05);高糖诱导细胞后,吸光度值、EdU阳性率、TNF-α、IL-1β水平、p62 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α表达较对照组、甘露醇组显著增加,凋亡率、LC3、ATG5 mRNA表达显著降低(P<0.05);经不同剂量的橙皮苷处理后,吸光度值、EdU阳性率、TNF-α、IL-1β水平、p62 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α表达较高糖组显著降低,凋亡率、LC3、ATG5 mRNA表达显著增加,组间有差异(P<0.05),60 mmol/L橙皮苷联合IGF-1处理细胞,吸光度值、EdU阳性率、TNF-α、IL-1β水平、p62 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、HIF-1α表达较60 mmol/L橙皮苷单独处理显著增加,凋亡率、LC3、ATG5 mRNA表达显著降低(P<0.05)。[结论]橙皮苷调控mTOR/HIF-1α通路促进高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬,抑制其增殖。

橙皮苷通过氧化磷酸化途径缓解高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激

旨在研究橙皮苷(Hesperidin, HDN)对高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激损伤的保护作用及作用机制。将18只雄性C57BL/6(体重20~23 g)小鼠,随机分为对照(control)组、高脂饮食(HFD)组、高脂饮食+橙皮苷(HFD+HDN)组(300 mg·kg^(-1)),每组6只。control组小鼠饲喂常规饲料(脂肪含量10%、碳水化合物含量70%、蛋白质含量20%);HFD组小鼠饲喂高脂饲料(脂肪含量60%、碳水化合物含量20%、蛋白质含量20%);HFD+HDN组在饲喂高脂饲料的同时每天灌胃给药HDN 300 mg·kg^(-1)。16周后腹腔注射3%戊巴比妥钠(60 mg·kg^(-1))麻醉小鼠后进行眼球采血,采血完毕后对小鼠进行脱颈处死并解剖取肝组织;使用试剂盒检测血液中肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;使用试剂盒检测肝组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及总抗氧化能力(T-AOC)的水平;采集肝组织进行转录组学测序,筛选出HFD组和HFD+HDN组的差异表达基因集进行KEGG通路富集分析,以P<0.05作为显著性富集的阈值,据此筛选出HDN干预后影响最显著的一条信号通路;从筛选出的信号通路上挑选显著变化的基因并采取qRT-PCR和蛋白免疫印迹的方法验证转录组学结果;检测mtDNA相对含量和线粒体外膜蛋白(TOMM20)相对表达量;检测肝组织ATP含量。结果显示:与HFD组相比,HDN干预改善了高脂饲喂引起的肝损伤,显著降低了小鼠血液中ALT以及AST活性(P<0.01);显著降低小鼠肝MDA含量(P<0.01);显著升高T-AOC、T-SOD以及GSH-Px水平(P<0.05),KEGG富集分析,筛选出氧化磷酸化(OXPHOS)途径是最显著上调的信号通路(P<0.000 1);与HFD组相比,HDN干预后肝组织Cox8b、Cox6a2、Gm10231、mt-Atp8、mt-Nd4l、Gm11237、Ndufb8、Ndufb10的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),Atp6v0d2、Cox6c2的mRNA的相对表达量显著下调(P<0.05)。Cox6a2、Ndufb8、Ndufb10的蛋白表达量显著升高(P<0.05),Atp6v0d2d蛋白表达量表达量显著降低(P<0.001),与转录组学结果一致;与HFD组相比,HDN干预后TOMM20相对表达量、mtDNA相对含量、ATP含量显著升高(P<0.05)。结果提示,HDN通过调节OXPHOS途径降低高脂饲喂诱导的小鼠肝氧化应激。

黑曲霉转化橙皮苷制备橙皮素的条件优化及其抗氧化活性的比较

该研究采用微生物转化法,以橙皮苷为底物,利用黑曲霉菌株(Aspergillus niger CP-2)进行定向生物转化制备橙皮素,通过对黑曲霉菌种接种量、pH值、底物浓度、反应温度以及恒温摇床转速进行单因素实验,并选择接种量、pH值、底物浓度三个重要影响因素进行正交实验,以探究出最适转化条件。结果表明:通过高效液相色谱法(HPLC)对Aspergillus niger CP-2生物转化的产物鉴定,确定为橙皮素,最终确定的最佳工艺为:黑曲霉接种量为10%、pH值为7.5、橙皮苷底物浓度为1.0 mmol/L、反应温度为37℃、恒温摇床转速为200 r/min。在此反应体系下反应24 h后,得到的橙皮素产率为63.90%;此外,转化产物橙皮素的抗氧化活性以及对H_(2)O_(2)损伤HCK-8细胞的保护能力均高于转化底物橙皮苷,因此,黑曲霉的生物转化技术可为柑橘属副产物活性物质的高值化利用提供理论依据。

AB-8树脂联用C18柱分离牡丹籽粕中新橙皮苷及生物活性研究

该实验借助AB-8树脂联用C18分离纯化牡丹籽粕中新橙皮苷,并进行生物活性探究,为开发相关产品提供依据。借助吸附动力学模型筛选了6种大孔树脂(AB-8、X-5、DM301、CAD-40、D101和NKA),AB-8树脂的吸附/解析能力优于其他5种;优化AB-8的分离条件为上样速度8 BV/h、上样量为60 mL、洗脱剂为60%(体积分数)乙醇溶液、洗脱流速为5 mL/min;抗氧化活性测试表明1 mg/mL新橙皮苷对于DPPH自由基、超氧阴离子自由基和ABTS阳离子自由基的清除能力分别为83.23%、81.05%和72.03%;250 mg/mL新橙皮苷可以通过提高细胞内抗氧化活性来减少细胞内活性氧含量;实验表明,2000 mg/mL新橙皮苷对于K562的抑制率为92.49%,500 mg/mL新橙皮苷可以有效抑制K562分裂的G1期;分子动力学模拟结果表明新橙皮苷可以通过结合B淋巴细胞瘤-2基因、细胞分裂蛋白激酶2生成氢键作用来抑制K562增殖。该实验从牡丹籽粕中分离出了活性物质新橙皮苷,为科学认识牡丹籽粕废弃物提供理论基础。

橙皮苷对慢性应激抑郁模型大鼠海马组织Akt/mTOR信号通路调节机制的研究

目的:通过构建慢性应激抑郁模型大鼠模型,探究橙皮苷是否通过调控蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),参与影响慢性应激抑郁模型大鼠病情。方法:将72只大鼠随机分为6组:健康组、慢性应激抑郁组、橙皮苷高剂量组、橙皮苷低剂量组、氟西汀组、橙皮苷^(+)Akt抑制组,每组12只。构建慢性应激抑郁模型大鼠模型,糖水偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验观察各组大鼠行为学情况;HE染色、Tunel染色观察各组大鼠海马组织病理学变化及细胞凋亡情况;检测各组大鼠海马组织皮质酮(CORT)、5-羟色胺(5-HT)、IL-6含量;Western blot检测海马组织Akt、mTOR、p-Akt、p-mTOR表达水平。结果:健康组大鼠海马组织完整;与健康组相比,慢性应激抑郁组大鼠海马组织损伤明显,强迫游泳不动时间、凋亡指数、CORT、IL-6含量显著升高,糖水偏好度、跨格次数、站立次数、存活神经元数、5-HT含量、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著降低(P<0.05);与慢性应激抑郁组相比,氟西汀组、橙皮苷高剂量组、橙皮苷低剂量组大鼠海马组织逐渐恢复,强迫游泳不动时间、凋亡指数、CORT、IL-6含量显著降低,糖水偏好度、跨格次数、站立次数、存活神经元数、5-HT含量、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著升高(P<0.05);与橙皮苷高剂量组相比,橙皮苷低剂量组、橙皮苷^(+)Akt抑制组大鼠海马组织恢复缓慢,强迫游泳不动时间、凋亡指数、CORT、IL-6含量显著升高,糖水偏好度、跨格次数、站立次数、存活神经元数、5-HT含量、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著降低(P<0.05);橙皮苷高剂量组与氟西汀组相比,各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:橙皮苷通过调控Akt/mTOR通路,激活Akt、mTOR,缓解神经细胞凋亡,改善抑郁大鼠的神经功能和行为学功能,从而治疗慢性应激抑郁。

药学专业“模块化”实践教学改革——以陈皮中橙皮苷的提取工艺研究为例

“模块化”教学是以岗位工作需求为导向,重新整合课程内容,构建学生的实践技能体系。该课题研究从中药材陈皮中提取橙皮苷的最优工艺。采用碱提酸沉法,以料液比例、超声时间、pH、超声功率为考察指标,以橙皮苷的得率为唯一指标,对陈皮中橙皮苷的提取工艺条件进行优化。本课题将创新性,开放性的试验设计与课堂知识和技能进行融合,能够深化学生对知识的融会贯通,强化学生的实践操作技能,培养学生的创新思维和创新能力,从而促进教学研全面协同发展。

HPLC法测定香苏正胃丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量

建立HPLC法测定香苏正胃丸中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷三种化学成分的含量。采用70%甲醇溶液提取制备供试品溶液,采用HPLC法,以Eclipse Plus C18色谱柱,规格250 mm×4.6 mm,5μm,以乙腈-水(22∶78)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长283 nm。该系统能使三种化学成分达到基线分离,在各自范围内线性关系良好(r≥0.9999),三成分的平均回收率为98.3%~99.8%,RSD为0.60%~1.40%。该方法准确、重复性好、操作简单,可用于香苏正胃丸的质量控制。

橙皮苷通过抗炎和抗氧化对骨质疏松大鼠模型的影响

目的研究不同浓度的橙皮苷通过减少炎性分子及氧化应激反应机制对去卵巢诱导骨质疏松症(Ovariectomy,OVX)大鼠模型的抗骨质疏松作用及与剂量之间的关系。方法将SD雌性大鼠随机分为OVX组和Sham组,分别进行OVX手术和假手术;将OVX组大鼠随机分为5组,每组6只,随机选取6只Sham组大鼠作为正常对照,共6组。分别为Sham组(Sham大鼠+1%CMC混悬液)、对照组(OVX大鼠+1%CMC混悬液)、HP1组(OVX大鼠+5 mg·kg^(-1)HP)、HP2组(OVX大鼠+10 mg·kg^(-1)HP)、HP3组(OVX大鼠+20 mg·kg^(-1)HP)和AN组(OVX大鼠+2.5 mg·kg^(-1)AN)。在进行去卵巢手术或假手术4周后,每天早晨经口灌胃给药,持续10周。给药10周后,测定大鼠的体质量变化量。在处死大鼠前,取得大鼠的腹主动脉血清,放在-20℃标本柜中,测得大鼠的Ca^(2+)和P^(5+)的水平;测定了炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;也测得大鼠的骨周转换标志物质ALP、ACP、、β-CTx和OC水平。在处死大鼠后,取得大鼠的左股骨,同样放在-20℃标本柜中,经过处理后,测定大鼠左股骨的氧化应激因子TRARS的水平及抗氧化酶GSH、GST、GR、GPx及CAT的水平;测定了大鼠左股骨中段的骨密度、杨氏模量、最大载荷、能量吸收及最大应力;并且得到了大鼠SIRT1基因的表达水平。结果与对照组相比,经过10周不同浓度HP的处理可显著降低体质量增加量(P<0.001),显著降低了OVX大鼠的Ca^(2+)、P^(5+)水平(P<0.001);显著降低了骨周转换标志物ALP、ACP、β-CTx和OC的水平(P<0.001);显著增加了骨密度、杨氏模量、最大负荷、能量吸收、最大应力及刚度(P<0.001),显著降低了OVX诱导的大鼠的骨氧化应激酶硫代巴比妥酸反应物质水平并增加了抗氧化酶GSH、GST、GR、GPx及CAT的水平(P<0.001),显著降低了炎性分子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平(P<0.001),显著降低了SIRT1基因的表达水平(P<0.001)相比较之下,高浓度HP组的上述参数指标与对照组相比呈现出更显著的差异(P<0.001)。结论表明橙皮苷对去卵巢诱导的骨质疏松症大鼠可通过降低促炎细胞因子及氧化应激反应发挥抗骨质疏松作用,且呈浓度依赖性。

基于pH驱动法利用植物蛋白提升橙皮苷稳定性及生物利用率

采用pH驱动法制备橙皮苷与不同植物蛋白(大米蛋白、豌豆蛋白、豌豆/大米复合蛋白)的复合物,以提高橙皮苷的水溶性、环境稳定性以及生物利用率,并采用扫描电镜、动态散射光、X射线衍射技术等手段表征复合物的形成,同时使用高效液相色谱法测定橙皮苷含量以分析复合物环境稳定性和生物利用率。结果表明,三种植物蛋白均能提高橙皮苷水溶性,其中豌豆/大米复合蛋白提升了19.6倍,使橙皮苷在水中溶解度达到340.78μg/mL。橙皮苷-豌豆/大米复合蛋白复合物环境稳定性基本优于单一植物蛋白,其中热稳定效果最好,在80℃加热2 h橙皮苷保留率在65.09%。体外消化结果表明橙皮苷-豌豆/大米复合蛋白复合物的生物利用率最高,约为游离橙皮苷的5.22倍。本研究为提升橙皮苷稳定性和生物利用度提供了新思路,有助于拓展橙皮苷的应用范围。

新橙皮苷二氢查尔酮化学合成工艺改进及其体外降脂活性研究

新橙皮苷二氢查尔酮(neohesperidin dihydrochalcone,NHDC)是非营养型甜味剂,可用于无糖食品。该研究以化学方法合成NHDC并探究其体外的胰脂肪酶抑制效果。以廉价易得的柚皮苷为原料,经碱性条件开环得到分解产物根皮乙酰苯-4′-新橙皮苷(phloroacetophenone-4′-neohesperidoside,PN),通过Claisen-Schmidt缩合反应合成中间体新橙皮苷,再以廉价的雷尼镍替代昂贵的Pd/C催化氢化反应,合成目标产物NHDC。以高分辨质谱仪、核磁共振波谱仪鉴定产物结构。通过体外胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)抑制实验、荧光猝灭实验探究其降脂活性与动力学作用机制。结果表明,PN的合成中,NaOH与柚皮苷的最佳质量比为1.7,合成新橙皮苷的催化剂吡咯烷与乙酸的最佳摩尔比为2∶1,合成NHDC的最佳NaOH质量分数为7%,雷尼镍催化能力强于Pd/C,最佳添加量为20%。合成工艺改进后,NHDC的总收率为70.6%。NHDC能抑制PL的活性,半数抑制浓度(IC_(50))为0.71 mg/mL,抑制类型为可逆、反竞争性抑制,NHDC与PL结合后,猝灭PL的内源荧光,改变酶结构及微环境,从而降低PL活性,荧光猝灭类型为混合猝灭。因此,NHDC拥有作为胰脂肪酶抑制剂的应用潜力,具有减少脂质吸收的作用。

生﹑蜜炙百部分别与陈皮配伍后橙皮苷含量比较

本实验将小儿百部止咳糖浆进行拆方,将生、蜜炙百部分别与陈皮组成药对,采用HPLC法测定其中橙皮苷的含量。结果发现蜜炙百部-陈皮药对中橙皮苷含量(22.77 mg·g^(-1))高于生百部药对(20.61 mg·g^(-1))。说明蜜炙百部与陈皮配伍能促进其主要化学成分橙皮苷的溶出,但较蜜炙百部入小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量增加(约50%)少,说明复方中生、炙百部互换后,不是单一的促进某一成分溶出,而是多种成分相互作用增加各成分的溶出度,这为中药复方的合理性提供实验支持。

补充橙皮苷对身体特征和运动表现影响的研究进展

橙皮苷是一种主要存在于柑橘类水果中的黄酮类化合物,具有多种生理功能,可预防和改善氧化应激、炎症和脂质积累等健康问题。近些年来,橙皮苷在运动领域的作用逐渐受到研究人员的关注。研究表明,补充橙皮苷具有改善身体特征和运动表现的潜在益处,但国内尚未有对其应用效果以及作用机制的研究。梳理前期研究发现,补充橙皮苷能在一定程度上降低体脂、增加肌肉量和改善身体形态;提高机体有氧、无氧能力和肌肉力量。橙皮苷主要通过激活或抑制部分信号通路,改善血管内皮功能,减少氧化应激和炎症反应以及提高线粒体生物发生,从而对机体产生积极影响。但目前相关研究仍然较少,其作用机制有待进一步深入研究,以及针对不同人群、剂量、周期、训练方法等需继续探索,以期制定个性化、科学化的橙皮苷补充策略。

橙皮苷对庆大霉素致小鼠急性肾损伤及炎症和凋亡的影响

目的观察橙皮苷改善庆大霉素致小鼠急性肾损伤的作用,并探讨该作用与炎症与凋亡的相关性。方法将小鼠随机分为正常组、模型组、维拉帕米组(21.43 mg/kg)及橙皮苷低、高剂量组(100、200 mg/kg),采用腹腔注射庆大霉素法建立AKI模型,随后各组给予相应药物干预14 d。给药结束后检测小鼠24 h尿蛋白、肾脏指数、肾功能指标,采用ELISA法检测血清及肾组织IL-10、IL-6、TNF-α水平,HE染色检测肾组织病理损伤,TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-qPCR法检测肾组织caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表达,Western blot法检测肾组织cleaved caspase-3及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,橙皮苷各剂量组小鼠24 h尿蛋白及肾脏指数降低(P<0.05),肾组织病理损伤有不同程度的改善,血清BUN、Scr及CysC水平降低(P<0.05),血清及肾组织IL-10水平升高(P<0.05),IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05),肾组织细胞凋亡率、caspase-3、Bax mRNA表达及cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达及PI3K、p-Akt蛋白表达升高(P<0.05)。结论橙皮苷对庆大霉素致小鼠急性肾损伤具有一定的改善作用,该作用与其抑制炎症及通过调控PI3K/Akt信号通路而产生的抗凋亡活性有关。

辛弗林与橙皮苷等多酚联用抑制食品体系中丙烯醛的协同效用研究

目的 探究生物碱和黄酮单用以及多元联用对丙烯醛(acrolein, ACR)的抑制效果。方法 利用Chou-Talalay方法,采用高效液相色谱检测辛弗林(synephrine, SYN)、橙皮苷(hesperidin, HES)单用及二元联用[半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)恒定比例,沃柑中实际比例]对ACR的抑制活性,在此基础上与姜黄素(curcumin, CUR)、槲皮素(quercetin, QUE)、山奈酚(kaempferol, KAE)三元联用的抑制活性,采用CompuSyn软件对联用效果进行分析计算,并采用高效液相色谱-串联质谱法测定HES、SYN、CUR联用对ACR的捕获路径,分析其协同机制。最后从模型延展至食品体系,利用富含SYN和HES的柑橘和富含CUR的姜黄应用于烤鸭翅,验证多种物质叠加对ACR的抑制效果。结果 SYN与HES按照IC50恒定比例或沃柑中实际比例二元联用均具有协同抑制ACR的作用,且HES、SYN与CUR/QUE/KAE按照IC50恒定比例三元复配也对ACR的抑制具有协同增效性;相比于单用,联用时SYN、HES、CUR与ACR的加合物均有所提升,阐明协同机制为互相促进捕获更多的ACR形成加合物,从而协同抑制ACR。在烤鸭翅体系中,同时添加54.21 g/kg沃柑果肉和3.334g/kg姜黄对ACR的抑制率为57.22%。结论 SYN与HES、CUR等多酚联用对ACR的捕获具有协同增效性,协同机制为互相促进捕获更多的ACR形成加合物,且富含SYN和HES的沃柑和富含CUR的姜黄对烤鸭翅体系中生成的ACR能够达到较好的抑制效果。

基于网络药理学探讨橙皮苷抗口腔鳞状细胞癌作用机制

目的:探究橙皮苷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的抑制作用并探索其作用机制。方法:用不同浓度橙皮苷体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞。MTT实验检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡。网络药理学预测橙皮苷作用于Tca-8113细胞的潜在靶点;构建蛋白质蛋白质互作网络(PPI);进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。Q-PCR检测不同浓度橙皮苷对Tca-8113细胞相关mRNA表达水平的影响;分子对接预测橙皮苷与核心靶点的结合能,评分函数来判断结合能强弱。结果:橙皮苷对Tca-8113细胞显示浓度依赖性增殖抑制和促凋亡作用(P<0.05);KEGG富集分析橙皮苷调控口腔鳞状细胞癌涉及的关键基因靶点可能与PI3K-Akt、MAPK和Ras等信号通路有关;Q-PCR结果显示MAPK8、HSP90AA1和MAPK1(ERK2)的mRNA表达水平差异具有统计学意义(P<0.05);分子对接结果显示橙皮苷与MAPK1(ERK2)结合力最强。结论:橙皮苷可能通过调控Ras/Raf/MEK/ERK信号通路抑制Tca-8113细胞增殖并促进凋亡。

橙皮苷对脂肪酸致牛乳腺上皮细胞脂质代谢紊乱及其凋亡作用的研究

为了探究橙皮苷(HES)对脂肪酸(NEFA)致牛乳腺上皮细胞(BMEC)脂质代谢紊乱及其凋亡的影响,试验首先选用0,0.6,1.2,1.8,2.4 mmol/L NEFA培养BMEC 24 h,通过观察细胞脂滴积累程度、检测三酰甘油(TG)含量及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)基因相对表达量筛选出NEFA最佳使用浓度。选用不同浓度HES培养细胞24 h,通过检测细胞存活率筛选出HES最佳浓度。将BMEC分为对照组、NEFA组和NEFA+HES组,其中对照组细胞只用完全培养液处理24 h,NEFA组只用最佳浓度的NEFA处理24 h,NEFA+HES组使用最佳浓度NEFA及最佳浓度HES共同处理24 h,采用实时荧光定量PCR和Western-blot技术检测脂质代谢紊乱相关指标腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(p-AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、固醇调节元件蛋白-1c(SREBP-1c)、PPAR-γ、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和细胞凋亡通路相关指标B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase 9)基因和蛋白表达情况,并通过TUNEL检测细胞凋亡情况。结果表明:NEFA和HES最佳使用浓度分别为1.2 mmol/L、20μg/m L。与对照组相比,NEFA组细胞ACC、PPAR-γ、ACOX1、SREBP-1c基因和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量显著下降(P<0.05),Bax、Caspase 3、Caspase 9基因和蛋白相对表达量显著上升(P<0.05),Bcl-2基因和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡数显著升高(P<0.05)。与NEFA组相比,添加20μg/m L HES后显著逆转了NEFA诱导的上述指标的变化(P<0.05)。说明HES可能通过调控脂质代谢和抑制细胞凋亡改善NEFA诱导的BMEC损伤。

UPLC法同时测定清金益气颗粒中橙皮苷、黄芩苷、甘草酸含量

[目的]建立1种能够同时测定清金益气颗粒中橙皮苷、黄芩苷、甘草酸含量的超高效液相色谱(UPLC)。[方法]色谱柱为Waters CORTECS UPLC T3(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~13 min,11%B;13~18 min,11%~15%B;18~35 min,15%B;35~45 min,15%~26%B;45~55 min,26%~40%B;55~60 min,40%B),流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样体积为2μL,检测波长为237 nm、280 nm。[结果]3种成分在所设浓度范围内线性关系良好(r^(2)≥0.9998),精密度、重复性RSD均小于2%,平均加样回收率为90%~99%,RSD均小于5%,常温放置24 h内稳定性良好。[结论]此方法稳定准确、重复性好,可为清金益气颗粒的质量评价提供一定的参考依据。

新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎的网络药理学研究及实验验证

目的 基于网络药理学及动物实验探讨新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法选择TCMSP、TCMIP、Swiss Target Prediction、SymMap、BATMAN-TCM数据库检索新橙皮苷潜在蛋白靶点,在DisGenet及Genecards数据库中检索UC的基因靶点,获取新橙皮苷治疗UC的潜在交集靶点。采用KEGG信号通路和GO功能富集分析筛选新橙皮苷治疗UC的关键信号通路;使用STRING生物信息学数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,筛选获取新橙皮苷治疗UC的核心靶标。采用随机数字表法将30只雄性SPF级C57BL/6小鼠分为对照组、模型组和低、中、高剂量组,每组6只。采用2%的葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC小鼠模型。低、中、高剂量组分别给以0.5、5、50 mL/(kg·d)新橙皮苷溶液灌胃造模的小鼠,对照组和模型组予等量蒸馏水灌胃,持续7 d。采用小鼠疾病活动指数(DAI)及小鼠体质量变化评估小鼠疾病情况;IHC检测网络药理学预测获得的相关核心靶标蛋白表达情况。结果 网络药理学分析获得2 374个UC疾病靶点、101个新橙皮苷作用靶点和51个新橙皮苷与UC共同靶点。GO富集功能分析显示这些共同靶点涉及50个生物过程、20个细胞组分和42个分子功能。KEGG通路分析筛选获得MAPK信号通路、癌症的发病途径、癌症中的蛋白多糖、内分泌耐药、雌激素信号通路、糖尿病并发症的AGE-RAGE通路、IL-17信号通路等66条通路。PPI网络拓扑分析获得MAPK14、ALB、ESR1、FN1、CASP3、PTGS2、CAT、IFNG、HRAS、FGF2及AR等核心靶点。动物实验证实新橙皮苷可降低UC小鼠DAI评分,减少UC小鼠体质量的下降,显著下调UC小鼠结肠组织中p38(MAPK14)蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论 新橙皮苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制可能与降低MAPK通路中p38磷酸化水平有关。