HPLC法测定五种产地地龙中次黄嘌呤和肌苷的含量

目的:建立地龙中次黄嘌呤与肌苷含量的测定方法,测定五种产地地龙成分,为地龙成分的提取工艺研究、质量分析探索新型高效的研究方法。方法:建立HPLC高效液相色谱法测定分析方法。色谱柱Agilent extend C18色谱柱,4.6 mm×250 mm,粒径:5μm。流动相为甲醇-0.2%磷酸,波长选择254 nm,进样量选择20μL,柱温为30℃,使用梯度洗脱法,建立次黄嘌呤和肌苷的标准曲线,进行精密度试验,稳定性试验,重复性试验,加样回收试验等方法学考察。结果:次黄嘌呤标准曲线:y=78.819x+245.92,R2=0.9999,在10.08~161.28μg·mL^(-1)范围内呈良好线性关系;肌苷标准曲线:y=56.566x+68.333,R2=0.9995,在20.08~321.28μg·mL^(-1)范围内呈良好线性关系。实验精密度、稳定性、重复性良好,计算得到次黄嘌呤的平均回收率为95.43%,RSD值为1.52%(n=6);肌苷的平均回收率为99.86%,RSD值为2.36%(n=6),广东、河南、海南、上海、广西五种产地地龙的次黄嘌呤含量分别为:0.5335、0.3468、0.6874、0.5694、0.7945 mg·g^(-1);肌苷含量为:1.5625、0.5674、1.1267、0.8436、1.2849 mg·g^(-1)。结论:建立的HPLC高效液相色谱法,梯度洗脱效果较好,实验准确度良好,精密度良好,稳定性良好,重复性高,是一种高效的分析测定方法。

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶及其促进酿酒酵母核酸合成的研究进展

核糖核酸(Ribonucleic acid,RNA)的降解产物及其衍生物具有多种生物学功能,属于药食同源,近年来已在新型食品增味剂、保健品、抗病毒制剂及农用增产剂等方面广泛使用,具有较高的市场价值,目前主要通过发酵法培养微生物获得,然后被酶促转化成多种降解物及衍生物,以满足市场需求。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是公认的食品安全性微生物,且核酸含量较高,是理想的RNA生产微生物。微生物系统工程团队(本团队)在前期的研究中发现,强化次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)有利于提高酿酒酵母核糖体RNA(Ribosome RNA,rRNA)的合成。而从医药角度,IMPDH一直被作为研发抗癌、抗病毒和抗寄生虫药物的靶点。本文综述了IMPDH的研究现状,重点介绍了酿酒酵母IMPDH的生物学功能、结构、同工酶及表达调控机制,并结合IMPDH与rRNA合成的关联,展望了其在提高酿酒酵母核酸产生中的作用,以期为突破核酸产业的技术瓶颈提供理论依据。

基于标准加入法和多水平的药代动力学综合分析疏血通注射液中不稳定的次黄嘌呤(潜在的质量标志物)

[目的]作为一种中药注射制剂,舒血通注射液用于治疗缺血性脑卒中。次黄嘌呤是其潜在的质量标志物之一。本研究的目的是通过对次黄嘌呤的定量和药代动力学行为分析为疏血通注射液的质量控制奠定基础。[方法]应用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)首次建立了基于标准加入法的疏血通注射液中次黄嘌呤的定量方法。另一方面,也成功建立了基于LC-MS/MS的大鼠给药后血浆样品中次黄嘌呤的测定方法。[结果]对于相同批次的疏血通注射液,采用常规的液质联用技术测出的次黄嘌呤的浓度大于LC-MS/MS联合标准加入法测出的次黄嘌呤的浓度。单次静脉注射疏血通注射液的低、中、高剂量比为1:2:4,AUC0-t分别为(848.34±324.53)μg·h/L、(1483.94±497.74)μg·h/L,(3074.84±910.29)μg·h/L,剂量呈良好的线性依赖关系。[结论]标准加入法的引入可校正目标化合物的浓度,进而消除内源性物质的影响。别嘌呤出可抑制次黄嘌呤的转化以保证药代动力学研究中检测的准确性。通过空白血浆前处理获得的“空白生物基质”成功区分了内源性和药源性的次黄嘌呤。静脉注射次黄嘌呤血药浓度与给药剂量呈良好的线性关系。同样,多次给药中剂量组也没有药物蓄积,这与单次给药中剂量组的药代动力学特征是相似的。

微小隐孢子虫次黄嘌呤核苷酸脱氢酶抑制剂的虚拟筛选

为开发新型抗隐孢子虫病药物,本研究采用Autodock和GOLD两种软件,通过计算机虚拟筛选方法,将21种已报道的具有抗隐孢子虫作用的化合物与微小隐孢子虫次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(CpIMPDH)和人源IMPDH(IMPDH2)进行对接。综合分析并推测山莴苣素17有望成为CpIMPDH选择性抑制剂,后续工作将以此为基础对山莴苣素17开展进一步的验证性试验。通过计算机虚拟筛选可以减少试验的盲目性,节省人力、物力,加快新兽药的开发进程。

基于封装酶的金属有机框架纳米酶级联催化实现鱼肉中次黄嘌呤的可视化检测

目的基于金属有机框架(metal-organic framework,MOF)封装黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)构建纳米酶级联催化体系,实现次黄嘌呤(hypoxanthine,Hx)的可视化检测。方法室温下采用一步法仿生矿化工艺将天然酶XOD封装于1,4-苯二甲酸铜(copper 1,4-benzenedicarboxylate,CuBDC)MOF纳米酶中,制备封装酶的金属有机框架材料(XOD@CuBDC),探究其过氧化物酶活性及级联催化性能。通过最适反应条件的优化,建立颜色强度与Hx浓度的标准曲线,考察该方法对鱼肉中Hx的检测。结果与使用游离XOD和CuBDC组成的级联反应系统比较,XOD@CuBDC催化速度更快,显色强度更强,酶储存更稳定。该体系的颜色强度与Hx浓度在0.015~0.470 mmol/L范围内具有线性关系(r^(2)>0.99),方法检出限(S/N=3)为10.47μmol/L。应用于不同新鲜程度的牙鲆鱼肉中Hx含量测定,结果与高效液相色谱法呈线性关系,相关性为0.98865。结论构建的XOD@CuBDC纳米酶级联催化体系具有良好的稳定性和催化性能,能够用于鱼肉中Hx的快速检测。

胎儿超声血流参数联合母体血浆次黄嘌呤对胎儿宫内窘迫程度的诊断研究

目的 探讨胎儿超声血流参数联合母体血浆次黄嘌呤对胎儿宫内窘迫程度的诊断价值。方法 选取2020年3月至2022年9月在郑州市金水区总医院即将分娩的488例产妇作为研究对象,孕妇分娩前均行超声检查,并采集血样检测血浆次黄嘌呤水平。根据产妇是否存在胎儿宫内窘迫将其分为胎儿窘迫组(107例)和正常组(381例),依据胎心率、胎心监护及羊水污染程度将胎儿窘迫产妇分为轻度组(43例)、中度组(44例)、重度组(20例)。比较胎儿窘迫组和正常组及不同窘迫程度组超声血流参数[包括血流搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩与舒张末期最大血流速度比值(S/D)]及血浆次黄嘌呤水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析超声血流参数、母体血浆次黄嘌呤水平单独及联合对胎儿宫内窘迫程度的诊断价值。结果 与正常组比较,胎儿窘迫组PI值、RI值、S/D值及血浆次黄嘌呤水平均升高(P<0.05);轻度组、中度组及重度组PI值、RI值、S/D值及血浆次黄嘌呤水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),中度组、重度组均高于轻度组(P<0.05),重度组高于中度组(P<0.05);PI、RI、S/D联合诊断中重度宫内窘迫的曲线下面积(AUC)为0.861 (95%CI:0.781~0.920),高于PI、RI、S/D单独诊断的AUC [0.721 (95%CI:0.626~0.803)、0.736 (95%CI:0.642~0.817)、0.726 (95%CI:0.632~0.808)],其敏感性、特异性为85.94%、81.40%;超声血流参数联合母体血浆次黄嘌呤诊断中重度宫内窘迫的AUC为0.950 (95%CI:0.890~0.983),高于超声血流参数、母体血浆次黄嘌呤单独诊断的AUC [0.861(95%CI:0.781~0.920)、0.848 (95%CI:0.766~0.910)],其敏感性、特异性为96.88%、79.07%。结论 胎儿脐动脉超声血流参数、母体血浆次黄嘌呤水平均对中重度宫内窘迫具有一定的诊断价值,但两者联合诊断价值更高。

免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷mRNA

采用免疫亲和层析法分离纯化含次黄嘌呤核苷的mRNA(I-mRNA)。将Poly-I与BSA交联,并用Poly-I-BSA交联体免疫家兔,获取抗次黄嘌呤核苷抗血清,斑点印迹法检测到该抗体滴度高、选择性强。将抗次黄嘌呤核苷抗体与蛋白ASapharose交联,并制备抗体亲和层析柱。将小鼠肺mRNA上样于层析柱,淋洗层析柱后,用洗脱液洗脱I-mRNA,并以斑点印迹法在洗脱液中检测到很强的I-mRNA阳性信号;淋洗液中I-mRNA阳性信号的强度则随淋洗液体积的增加而减弱。以上结果表明,应用本方法可以有效分离得到含次黄嘌呤核苷的mRNA。

HPLC测定不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量

目的:测定不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱:Inertsil ODS- EP柱,流动相:水-甲醇-四氢呋喃(93:7:0．05),流速:1．0 mL／min,检测波长254 nm。结果:次黄嘌呤的平均回收率为98．6％,方法精密度(RSD)为0．50％(n=6)。结论:该法可用于不同产地广地龙中次黄嘌呤的含量测定。

HPLC法测定各沪产地龙和广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量

目的测定各种沪产地龙与广地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量,建立地龙药材质量评价的方法。方法用0.9%生理盐水超声提取地龙,SORBAX SB-Aq色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm,Aglient Co.,Ltd）,流动相：5mmol/L磷酸二氢钾（pH 2.9）,流速1mL/min,检测波长254nm,柱温30℃,进样量10μL,采用HPLC法,同时测定次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷4种核苷类成分的含量。结果次黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率99.37%,RSD=1.36%（n=6）;黄嘌呤的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.993 1）,平均回收率91.57%,RSD=1.40%（n=6）;尿嘧啶的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率95.31%,RSD=1.64%（n=6）;尿苷的线性范围为0.500 0-100.00μg（r=0.999 9）,平均回收率100.21%,RSD=1.98%（n=6）。结论该方法重复性、回收率好,可用于测定地龙与广地龙中次黄嘌呤等4种核苷类成分的含量。

HPLC法测定海马中次黄嘌呤、黄嘌呤的含量

目的:建立海马中次黄嘌呤、黄嘌呤含量测定的方法。方法:采用Kromasil C_(18)柱(250mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(2:98,V/V)为流动相,测定波长λ=254nm。结果:次黄嘌呤在29.0～464.0 ng范围内呈良好的线性关系(r=0.99996);黄嘌呤在24.5～392.0 ng范围内呈良好的线性关系(r=0.9995)。平均加样回收率:次黄嘌呤为100.37％,BSD为1.31％;黄嘌呤为100.54％,RSD为1.14％。结论:本法操作简便,结果可靠,为海马药材的质量控制提供了有效的方法。

日本血吸虫中国株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的克隆、表达及其免疫保护性研究(英文)

根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)EST(BU803192)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接,获得SjHGPRT全长cDNA(1270bp),经序列分析,推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框,其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SmHGPRT)全长编码基因碱基一致性为82%,其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%.将其编码基因克隆到表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子质量约为28ku.用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测,在预测位置上出现明显的识别条带.重组蛋白动物免疫保护性结果显示:在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面,疫苗组与对照组比较差异均具有显著性(P<0.05,P<0.01).结果表明,日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达,表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子.

HPLC测定海龙中次黄嘌呤及黄嘌呤含量

目的 研究海龙中次黄嘌呤、黄嘌呤含量测定的方法。方法 采用Lichrosper C18柱，以甲醇-0．1％HAc（1：99）为流动相，测定波长λ=254nm。结果 次黄嘌呤在5．91～94．56μg·mL^-1范围内，浓度与峰面积线性关系良好（r=0．9999），平均加样回收率为99．22％，RSD为1．25％；黄嘌呤在2．04～32．64μg·mL^-1范围内，浓度与峰面积线性关系良好（r-0．9998），平均加样回收率为98．05％，RSD为1．21％。结论 该法操作简便，结果可靠，为海龙药材的质量研究提供了有效的方法。

炮制对广地龙次黄嘌呤和肌苷含量的影响

目的:研究广地龙不同炮制方法对次黄嘌呤和肌苷含量变化的影响。方法:分别以黄酒、白酒、醋、蛤粉为辅料炮制广地龙,各条件下制得的样品采用HPLC法测定次黄嘌呤和肌苷的含量。色谱条件:DIKMA C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);甲醇-水(95∶5)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长256 nm,柱温30℃。结果:广地龙不同炮制品中次黄嘌呤和肌苷含量与生品比较有较大差异,次黄嘌呤含量高低顺序为蛤粉制广地龙>黄酒制广地龙>白酒制广地龙>醋制广地龙>净制品,肌苷含量高低顺序为净制品>醋制广地龙>白酒制广地龙>黄酒制广地龙>蛤粉制广地龙。结论:不同炮制方法使广地龙炮制前后次黄嘌呤和肌苷的含量发生改变,为进一步研究广地龙提供了依据。

不同产地鹿茸中次黄嘌呤的HPLC含量测定

应用反相高效液相色谱法测定鹿茸药材中活性成分次黄嘌呤的含量。色谱柱DiscoveryC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇磷酸盐缓冲液(1000ml水+1.36g磷酸二氢钾+0.092ml磷酸)(8∶92);检测波长249nm。结果次黄嘌呤在0.1～1.8μg范围内线性关系良好(r=0.9999),加样回收率为97.73%(RSD=1.13%)。本方法简便,准确,可靠,适用于次黄嘌呤的定量分析。

HPLC测定地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、尿苷的含量

用反相高效液相色谱法对两种地龙中次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶及尿苷进行了含量测定。为检测地龙质量提供了快速可行的新方法和客观指标。

5种水蛭中尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤的含量比较

采用反相HPLC法测定了宽体金线蛭、光润金线蛭、尖细金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭及不同产地的宽体金线蛭中尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤的含量。色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C_(18)柱,流动相:0.05mol/l的磷酸氢二铵溶液(pH=8.4),流速:0.8ml/min,检测波长:254nm,回收率:>98.0％。本法准确、快速、重现性好。

次黄嘌呤核苷酸和胶原蛋白与猪肉品质的关系研究

综合多个试验的资料 ,分析了不同猪的品种和杂交组合及不同营养水平下猪肉IMP和胶原蛋白含量及其与常规肉质性状的相关性。结果表明 ,约克猪的肌肉IMP含量极显著低于长荣猪、荣昌猪和长白猪 ,而胶原蛋白含量极显著高于长荣猪、荣昌猪和长白猪 ;荣昌猪和及其杂交猪的IMP含量明显高于长白猪 ;提高营养水平有提高猪肉IMP含量的趋势。提高瘦肉产量会极显著降低IMP含量 ,提高肌肉胶原蛋白含量 ;肌肉IMP含量与肉色呈显著正相关 ,与失水率呈极显著负相关 ;胶原蛋白与失水率呈极显著正相关 ,与IMP呈极显著的负相关。由此结论 ,提高肌肉IMP含量、降低胶原蛋白含量可改善猪肉品质 ;

猪眼玻璃体液钾离子、次黄嘌呤浓度变化与PMI推断

目的研究猪眼玻璃体液成分变化及其与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法放血处死家猪后取带眼睑的眼球96只,随机分为24组,在避光、温度(15±2)℃、湿度(50±5)%条件下分别放置2～96h,采集玻璃体液,运用全自动生化检测仪、超高效液相色谱检测K+、Na+、Cl-及次黄嘌呤(hypoxan-thine,Hx)浓度;用SPSS统计软件检测数据进行统计分析。结果玻璃体液中K+、Hx的浓度与PMI呈线性相关,R2分别为0.767和0.793;K+和Hx两者浓度与PMI经二元线性回归分析,R2为0.866;玻璃体液中Na+、Cl-浓度与PMI无明显相关性。结论玻璃体液K+、Hx浓度变化可作为较为客观的推断PMI的参考指标,两者与PMI的二元回归方程推断死亡时间有更高的准确性。

HPLC 同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷的含量

目的:研究以 HPLC 同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷含量的方法。方法:采用 Kromasil C_(18)柱(4.6mm×150mm,10μm),以甲醇-水(1∶99)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),λ_1=248nm(检次黄嘌呤核苷),λ_2=254nm(检鸟嘌呤核苷),柱温30℃。结果:次黄嘌呤核苷在20-421ng 范围内线性关系良好,r=0.9999,鸟嘌呤核苷在40-339ng 范围内线性关系良好,r=0.9996。平均加样回收率(n=9):次黄嘌呤核苷为99.2%;鸟嘌呤核苷为99.7%。结论:本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为半夏药材质量控制的方法。

HPLC法测定不同产地地龙中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量

目的:测定不同产地、品种的地龙药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量,建立地龙质量控制的客观指标。方法:用0.9%生理盐水超声提取地龙药材,采用反相高效液相色谱法,Waters Symmetry C_(18)色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以0.01mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液和50%甲醇为流动相,流速为0.8ml·min^(-1),梯度洗脱,检测波长254nm,柱温27℃,同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷等4种成分的含量。结果:尿嘧啶的线性范围为0.75～24.00μg·ml^(-1)(r=0.9993),平均回收率99.82%,RSD=2.34%(n=6);次黄嘌呤的线性范围2.50～80.00μg·ml^(-1)(r=0.9992),平均回收率101.93%,RSD=1.45%(n=6);尿苷的线性范围1.25～40.00μg·ml^(-1)(r=0.9992),平均回收率97.53%,RSD=1.73%(n=6);肌苷的线性范围5.00～160.00μg·ml^(-1)(r=0.9991),平均回收率102.06%,RSD=2.44%(n=6)。结论:该方法重复性,回收率好,可用于地龙药材中尿嘧啶等4种成分的含量测定。