过表达果糖脱氢酶促进氧化葡萄糖酸杆菌高效合成5-酮果糖

5-酮果糖(5-KetoFructose,5-KF)具有与D-果糖相似的甜度和自然甜味,且不能被人体代谢而具有低热量的优点,是一种具有发展前景的非营养型天然甜味剂。为了获得5-酮果糖高产菌株,作者将来源于Gluconobacter japonicus的膜结合的果糖脱氢酶基因在Gluconobacter oxydans中过表达,通过对不同的宿主、表达载体和启动子的筛选,获得一株能够高效合成5-KF的工程菌QT-10。在3 L发酵罐中进行补料发酵优化,最终采用恒速连续流加果糖的方式,该工程菌可在82 h内消耗质量浓度为650 g/L的D-果糖,5-KF的产量高达608 g/L,产率为94.6%,时空产率为7.41 g/(L·h)。

氢化脱氢工艺在锆-2合金粉末制取中的应用

分析了氢化脱氢工艺在锆-2合金粉末制备中的应用情况,详细介绍了粉末制取前准备工作、氢化反应、脱氢处理、粉碎筛分、分离处理等操作过程。采用氢化脱氢工艺可以得到纯净的锆-2合金粉末,提升制取效率,降低制作成本。

重组枯草芽孢杆菌表达4-木糖醇脱氢酶的发酵和反应条件优化

L-木酮糖(L-苏式-戊酮糖)是一种昂贵的稀有戊糖,而4-木糖醇脱氢酶(xylitol-4-dehydrogenase,XDH)是生物合成L-木酮糖(L-xylulose)的关键酶。为了促进L-木酮糖的生产,对枯草芽孢杆菌外源表达4-木糖醇脱氢酶的发酵条件进行优化,并对以木糖醇为底物静息细胞催化反应合成L-木酮糖的反应条件进行研究。通过单因素实验确定了最佳培养基的成分(g/L)为:蔗糖25,尿素6,MgSO_40. 05,MnSO_40. 01,FeSO_40. 01,初始pH值8. 0。最佳发酵条件为:装液量40 mL(250 mL锥形瓶),接种量1. 67%,发酵培养温度28℃。在优化条件下4-木糖醇脱氢酶酶活为5. 183 U/L,与初始酶活相比提高了231. 2%。最优反应条件:底物质量浓度20 g/L,50mmol/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液(pH 10. 0),反应温度45℃,优化反应条件下转化率达到17. 74%。通过对菌株发酵和反应工艺条件的优化,为后续L-木酮糖工业化生产奠定了基础。

采用氢化-脱氢(HDH)钛粉和氢化钛粉制备MIMTi-6Al-4V合金

以HDH钛粉制备MIMTi-6Al-4V合金的过程为参照,对使用氢化钛粉为原料制备P/M模压钛合金以及MIM钛合金的工艺过程进行了探索。使用HDH钛粉制备的MIMTi-6Al-4V合金抗拉强度为819MPa,拉伸样延伸率为7%;使用氢化钛粉制备的P/M模压Ti-6Al-4V合金拉伸样抗拉性能高于850MPa;使用氢化钛粉为原料制备MIMTi-6Al-4V合金,顺利实现了脱氢-脱脂过程。

草鱼脆化前后肌肉营养成分及其红细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量的比较

对草鱼脆化前后的肌肉营养成分及其红细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)含量进行了测定,结果表明:草鱼脆化养殖后,其肌肉中其他一些营养成分的含量与脆化养殖前基本一致,但粗脂肪和红细胞中G6PD的含量较脆化养殖前明显减少,G6PD差异也达极显著(P<0.01)水平,这说明不同的养殖方式对草鱼的组织化学组成有影响.

氢化-脱氢法制备锆粉及其性能表征

以海绵锆为原料,采用氢化-脱氢法制备一种高纯、粒度可控、分布集中的锆粉。研究脱氢温度、球磨时间、球料比对粉末粒度、纯度的影响。采用扫描电子显微镜(SEM)、激光粒度测试仪、元素含量测试等手段对锆粉表面形貌、粒度及氧、氮、氢含量进行表征。结果表明:采用氢化-脱氢法制备的锆粉为不规则形状,呈现机械破碎的特性;海绵锆在700℃渗氢1 h,氢的质量分数达1.98%,渗氢完全;最佳脱氢温度580℃,脱氢时间1 h,氢含量降至0.002 2%,脱氢完全且无大面积结块;最佳球料比8:1,球磨时间60 min,制备的锆粉中位径D50=18.36μm;脱氢前后O元素的质量分数分别为0.17%、0.45%,制备过程中粉末氧含量均得到了有效控制,符合低氧制备锆粉的要求。

11β-类固醇脱氢酶-2启动子区甲基化与原发性高血压关系初探

目的通过11β-类固醇脱氢酶-2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase-2,11β-HSD-2)基因启动子区甲基化发生率的测定,探讨原发性高血压可能的发病机制。方法选取未经治疗的原发性高血压患者64例以及正常对照组30例,Sequenom MassArray质谱法检测11β-HSD-2基因启动子区"-101到461"的563个碱基序列的甲基化发生率。结果原发性高血压组甲基化发生率高且差异有统计学意义,CpG位点如下:CpG_7、8、CpG_9、CpG_62、63、64、CpG_65、CpG_72。t值分别为-5.42,-3.17,-2.84,-2.32和-2.32,P<0.05。CpG_7、8、CpG_9位于核心启动子区。结论原发性高血压患者11β-HSD-2基因启动子区存在高甲基化发生率位点。

醒脑静对化脓性脑膜炎患者肿瘤坏死因子-α、神经元特异性烯醇化酶、C反应蛋白及乳酸脱氢酶的影响

目的探讨醒脑静注射液对成人化脓性脑膜炎炎症细胞介质的影响。方法将80例化脓性脑膜炎患者随机分为对照组和治疗组。对照组给予西医疗法,治疗组在对照组基础上加用醒脑静注射液。治疗2周后,比较2组脑脊液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、C反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)等指标的变化。结果治疗后,治疗组TNF-α、NSE、CRP、LDH水平均显著低于对照组,格拉斯哥昏迷评分(GCS)低于对照组,临床总有效率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论醒脑静注射液能有效抑制成人化脓性脑膜炎患者炎症细胞介质的分泌,促进患者意识障碍的恢复,疗效确切。

1,3-丙二醇脱氢酶一步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究

转录表达来源于Klebsiella.p1,3-丙二醇脱氢酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)条件下培养20h;发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrap HP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH,纯化倍数为2.94倍,活性回收率为50%,经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带,表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa。用改进的溶胶-凝胶法(杂化凝胶)包埋纯化酶,考察正硅酸乙酯(TEOS)浓度、海藻酸盐(ALG)浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响,结果表明,较优包埋条件为:ρ(TEOS)=20g/L,ρ(ALG)=30g/L,ρ(CaCl2)=40g/L,V(ALG)∶V(TEOS)=3∶1;由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%,进行批次反应时,反应3批后酶活保持70.3%,反应第6批时酶活剩余29.8%。

脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素在卵巢储备功能低下患者体外受精-胚胎移植中的应用研究

目的:探讨脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素注射液在卵巢储备功能低下患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的应用价值。方法:选取2015年1月~2017年10月我院收治的卵巢储备功能低下行IVF-ET患者84例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各42例。对照组给予重组人促卵泡激素注射液治疗,观察组在行对照组治疗前服用脱氢表雄酮3个月。比较两组治疗前后卵巢储备功能及临床结局。结果:治疗前,两组血清FSH、AMH水平及AFC比较无显著性差异(P>0.05);治疗后,观察组血清AMH水平及AFC高于对照组,FSH水平低于对照组(P<0.05);观察组获卵数、受精率、可利用胚胎数及临床妊娠率均高于对照组(P<0.05);两组流产率比较无显著性差异(P>0.05)。结论:脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素注射液,可显著提高卵巢储备功能低下患者卵巢储备功能,有利于改善IVF-ET临床结局。

M6型A群链球菌表面烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶特性的研究

表面烯醇化酶(surface enolase,SEN)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(surface glyceraldehydes-3-phosphate dehydro-genase,sGAPDH)都是A群链球菌(group A Streptococcus,GAS)没有跨膜结构的膜表面蛋白,它们可能在GAS感染中起到重要的作用。在本研究中,对SEN和sGAPDH在M6型GAS不同生长阶段(即在对数期和稳定期)的表达情况进行检测分析。取对数期(OD600=0.5-0.6)和稳定期(OD600=1.5-1.6)的GAS,分别测定SEN和sGAPDH活性。同时用变溶菌素(mutanolysin)提取这2个生长阶段细胞壁结合蛋白,用Western blot检测该提取物中的SEN和sGAPDH。结果表明在相同菌细胞浊度的条件下,SEN在M6型GAS对数期时的表达量及活性比其稳定期时的高45%左右。虽然sGAPDH的表达量较高但活性很低(<0.07mM NADH/min),并且在这2个生长阶段没有明显的差异。

超声波协同反应-结晶耦合单离脱氢枞酸

以歧化松香和2-乙醇胺为原料、乙醇为溶剂、超声波协同反应-结晶制备脱氢枞酸乙醇胺盐,经萃取、结晶、重结晶、酸化制得脱氢枞酸。通过正交优化实验,考察了溶剂浓度、反应温度、反应时间、超声波功率、搅拌转速对脱氢枞酸收率的影响,确定最佳单离条件为:反应时间50min,反应温度35℃,超声波功率500W,溶剂浓度50%,搅拌转速400r·min-1,在该操作条件下脱氢枞酸的收率达55·37%,纯度达99·53%。并探讨了脱氢枞酸胺化反应-结晶过程相态变化对反应平衡和选择性的影响,当反应温度分别为35℃和70℃时,胺化反应是在非均相和均相下进行,所得脱氢枞酸产品的纯度为99·53%和95·66%。采用GC、GC-MS、元素分析、UV、FT-IR、熔点仪和旋光仪对脱氢枞酸产品进行了分析鉴定,实验值与文献值吻合。

全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究

以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。

脱氢松香基Friedel-Crafts反应产物的合成研究

以脱氢松香酸和脱氢松香酸甲酯为原料,经傅-克酰基化反应合成6种脱氢松香基芳酮衍生物,产物用红外光谱和核磁共振谱进行表征。重点研究以脱氢松香酸甲酯为反应物合成12-乙酰基脱氢松香酸甲酯的傅-克酰基化反应,确定了最佳反应条件:以CCl4为溶剂,无水氯化铝、乙酰氯和脱氢松香酸甲酯物质的量之比为2.3¨1.5¨1,反应6 h,其产率最高可达92%。

11β-氢化醛固酮脱氢酶2型与高血压

本文就近年来有关11β-氢化醛固酮脱氢酶2型的生物学功能及与高血压病之间的关系作一综述。

高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

建立同时测定 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的高效液相色谱-质谱法。方法:选择雌酮硫酸酯(ES)作为内标。雄性 SD 大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后,经固相萃取、水解及衍生化后,以高效液相色谱质谱检测器测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度。色谱柱为 Zorbax SB C_(18)柱温40℃,流动相为乙腈水,使用梯度洗脱;采用大气压化学离子源(HPLC/APCI-MS),负离子检测方式,用于选择离子检测(SM)定量分析的离子为 m/z 490.0(DHEAS)和 m/z 518.0(PREGS)及 m/z 472.1(ES)[M-H]^-。结果:血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为:0.05～2.0ng·mL^(-1),0.03～2.0 ng·mL^(-1),r 分别为0.9990和0.9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66.8%～82.3%之间,相对回收率为:98.4%～111.6%,日内、日间变异均小于15%。正常雄性 SD 大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0.070±0.020 ng·mL^(-1)、0.13±0.031 ng·mL^(-1)。结论:本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点,适合测定雄性 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和和孕烯醇酮硫酸酯的含量。

RP-HPLC法同时测定人血清中内源性氢化可的松与可的松的含量

目的:建立测定人血清中内源性氢化可的松与可的松含量的方法。方法:采用迪马Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-甲醇(51:136:77);流速:1.2 ml·min^(-1);紫外检测波长:245 nm;柱温:30℃;进样量:30μl。结果:氢化可的松在50.0～300.0μg·L^(-1),可的松在10.0～100.0μg·L^(-1)的浓度范围内线性关系良好。氢化可的松与可的松的方法回收率分别为(101.83±1.19)%和(100.52±5.91)%。92名健康者血清中氢化可的松、可的松的浓度分别为(111.60±27.30)和(18.66±4.44)μg·L^(-1),其比值为(6.08±1.10)。结论:本法操作简便,灵敏度高,快速可靠,适用于氢化可的松与可的松含量的测定,为研究人体肝脏11β-羟基类固脱氢酶(11β-HSD)的活性及调整激素治疗方案提供有效的分析手段。

卵巢颗粒细胞11β-羟基类固醇脱氢酶的表达与多囊卵巢综合征卵巢局部皮质醇代谢的相关性研究

目的·探讨卵巢颗粒细胞11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenases,11β-HSDs)的表达亚型与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢局部皮质醇(氢化可的松)代谢的相关性。方法·按照2003年鹿特丹诊断标准纳入PCOS组患者24例,同时纳入对照组患者21例。取卵日收集行体外受精/卵胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)的PCOS组患者和对照组患者的卵泡液和黄素化颗粒细胞,采用酶联免疫吸附测定法检测2组卵泡液中皮质醇、可的松水平,免疫荧光方法验证11β-HSD1、11β-HSD2在黄素化颗粒细胞上的表达以及实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测黄素化颗粒细胞中11β-HSD1、11β-HSD2的表达差异,并进一步分析卵巢局部皮质醇水平与黄素化颗粒细胞中11β-HSD1、11β-HSD2表达的相关性。结果·与对照组相比,PCOS组患者卵泡液中皮质醇水平显著增高[(477.3±35.3)nmol/L vs(292.0±36.4)nmol/L,P=0.014],而可的松无显著变化。11β-HSD1和11β-HSD2皆在黄素化颗粒细胞上有表达。与对照组相比,PCOS组患者黄素化颗粒细胞11β-HSD1 mRNA表达(P=0.033)及还原酶活性(P=0.006)均显著增加,而11β-HSD2 mRNA表达和氧化酶活性无显著改变。Pearson相关性分析显示,卵巢局部皮质醇的浓度与黄素化颗粒细胞11β-HSD1表达成正相关(r^2=0.3476,P=0.001),而与黄素化颗粒细胞11β-HSD2表达无相关性。结论·PCOS患者卵巢局部皮质醇增加可能与卵巢颗粒细胞11β-HSD1表达及还原酶活性增加有关。

深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因敲除及鉴定

以产油丝状真菌深黄被孢霉M6—22（Mortierella isabellina 6-22）为出发菌株，利用亚硝基胍诱变技术筛选到一株对潮霉素药物敏感的菌株Mortierella isabellina 6-22—4，同时构建了含有潮霉素抗性基因表达单元和深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因5’与3’端部分同源序列的重组质粒PD4M16，用于对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的敲除.通过PEG／CaCl2介导的原生质体转化法，将质粒PD4M16转化入深黄被孢霉M6—22—4菌株．转化子经潮霉素抗性选择平板筛选、分子检测获得了一个△^6-脂肪酸脱氢酶基因缺失的突变株Mut6．气相色谱分析结果显示，该突变株γ-亚麻酸特征峰消失，相应地亚油酸产量显著增加．培养结果表明该突变株的菌落形态、颜色及生长状况与出发菌株M6—22或M6—22—4相比均有显著改变。

α-羟丁酸脱氢酶、神经元特异性烯醇化酶和糖类抗原125检测对非霍奇金淋巴瘤诊断及预后判断的意义

目的观察α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和糖类抗原125(CA125)检测对非霍奇金淋巴瘤(NHL)诊断及预后判断的意义。方法选取我院收治的94例NHL患者作为NHL组,同期47例健康体检者为健康对照组,检测血清α-HBDH、NSE、CA125水平。比较2组血清α-HBDH、NSE、CA125水平及NHL组治疗前后血清α-HBDH、NSE、CA125水平,评估血清α-HBDH、NSE、CA125水平检测对NHL的诊断效能。结果NHL组血清α-HBDH、NSE、CA125水平高于健康对照组(P均<0.05);血清α-HBDH、NSE、CA125水平联合检测NHL的敏感性94.68%、准确性91.49%,高于α-HBDH(74.47%、80.14%)、NSE(78.72%、81.56%)、CA125(79.79%、82.27%)单独检测(P均<0.05);治疗后NHL组患者血清α-HBDH、NSE、CA125水平均降低,有效者血清α-HBDH、NSE、CA125水平低于无效者(P均<0.05)。结论NHL患者血清α-HBDH、NSE、CA125水平升高,血清α-HBDH、NSE、CA125水平联合检测可提高NHL诊断敏感性、准确性,增强诊断和预后评估效能,是诊断NHL的重要方法。