QuEChERs方法结合SERS技术检测猪肉中氨基糖苷类抗生素残留

目的:实现猪肉中氨基糖苷类抗生素残留的快速、定量和高通量检测。方法:以PP合成纸为衬底制备基于金纳米花(AuNFs)的方阵排列SERS基底。通过QuEChERs方法对猪肉样品进行前处理,并对其进行SRES检测。结果:采用4-巯基苯甲酸为SERS探针分子,基底表现出良好的均一性、SERS增强效应、重现性和稳定性。475,619 cm-1特征峰处的SERS信号强度分别与硫酸庆大霉素和硫酸新霉素浓度的对数具有良好的线性关系(R 2分别为0.9916,0.9907),最低检测限分别低至1×10^(-9),1×10^(-8) mol/L,并成功应用于猪肉中氨基糖苷类抗生素的快速、定量和高通量检测。结论:试验方法为SERS技术应用于真实肉类样品中抗生素残留检测提供了一种经济、高效、省时和高灵敏的途径。

牛、羊源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药基因检测

为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因AadA1、AbdB、Aph(3′)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅰb、Aac(3′)-Ⅱ进行PCR检测和同源性序列分析。结果显示,榆林地区大肠杆菌总检出率为42.49%;牛、羊源大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药率从高到低依次为链霉素(70.7%)、卡那霉素(64.3%)、阿米卡星(47.9%)、庆大霉素(45.1%)、新霉素(39.4%)和妥布霉素(30.3%);多重耐药率(耐3种及3种以上药物)为67.0%;耐药基因AadA1和Aph(3′)-Ⅰ的检出率分别为79.5%和83.0%。综上表明,榆林地区检出的牛、羊大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性比较强,耐药基因以AadA1、Aph(3′)-Ⅰ为主。

蒸发光散射检测器高效液相色谱法同时测定猪肉中4种氨基糖苷类抗生素

建立蒸发光散射检测器高效液相色谱法(HPLC-ELSD)测定猪肉中妥布霉素、安普霉素、卡那霉素、新霉素4种氨基糖苷类抗生素残留。在固液比1∶10下,采取磷酸盐缓冲液(pH值为7.0)提取猪肉样品中残留的氨基糖苷类抗生素,通过SupelMIP^(TM) SPE-Aminoglycosides分子印记固相萃取柱净化,利用HPLC-ELSD法检测提取液中4种目标物的含量。4种氨基糖苷类抗生素的质量浓度为0.1~10μg/mL范围内与对应的色谱峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.992~0.999 4。4种目标物的平均回收率为87.2%~97.3%,测定结果的相对标准偏差为5.25%~8.68%(n=6)。该方法操作简便,灵敏度高,结果准确,满足猪肉中妥布霉素、安普霉素、卡那霉素和新霉素的残留检测要求。

大肠杆菌过表达WcaB对氨基糖苷类抗生素敏感性的影响

为寻找新的靶点以加速解决由于抗生素滥用而引发的细菌耐药问题,通过利用pCA24N表达载体构建大肠杆菌BW25113过表达乙酰基转移酶WcaB菌株,在对数期进行氨基糖苷类抗生素杀伤效果测试,并进一步测定大肠杆菌BW25113过表达WcaB对氨基糖苷类抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和生长曲线。结果表明:WcaB过表达后会抑制细菌生长,氨基糖苷类抗生素对WcaB过表达株的MIC没有明显变化,WcaB过表达使细菌在庆大霉素或卡那霉素处理下的存活率降低,证明WcaB过表达提高了大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性。研究结果显示乙酰基转移酶在增强抗生素对大肠杆菌产敏感性方面具有重要的作用,该酶有望成为大肠杆菌新的药理靶点。

雏鸭腹泻大肠埃希菌耐药性和氨基糖苷类抗生素耐药基因检测与分析

目的 研究雏鸭腹泻大肠埃希菌的耐药性和氨基糖苷类抗生素耐药基因的存在情况。方法 采取山东济宁某养鸭场腹泻雏鸭粪便病料,通过实验室分离培养,对雏鸭腹泻大肠埃希菌进行药敏试验,比较雏鸭腹泻大肠埃希菌分离株对抗菌药物的敏感性,并采用PCR法对氨基糖苷类抗生素耐药菌株进行氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ、ant(3”)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅱ的检测。结果 在24种药物敏感性试验中,雏鸭腹泻大肠埃希菌对头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟和阿米卡星4种药物敏感,对氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟和大观霉素4种药物中度敏感;对青霉素、链霉素、庆大霉素和四环素等16种药物耐药。在20株菌株中,检测的氨基糖苷类抗生素耐药基因中5株细菌检测出aac(3)-Ⅰ,10株细菌检测出aac(3)-Ⅱ,5株细菌检测出aac(6’)-Ⅰb,6株细菌检测出aac(6’)-Ⅱ,8株细菌检测出ant(3”)-Ⅰ,17株细菌检测出aph(3’)-Ⅱ。结论此次试验分离培养出的雏鸭腹泻大肠埃希菌呈现普遍耐药性,普遍检测出氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ、ant(3”)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅱ,其中aph(3’)-Ⅱ检出率高达85%。

D-海藻糖联合氨基糖苷类抗生素杀菌效果分析

目前,开发抗生素佐剂以提高传统抗生素杀菌效果是解决细菌耐药的有效途径之一。为了寻找新的抗生素佐剂,通过外源添加D-海藻糖与三大类杀菌抗生素对大肠杆菌BW25113和金黄色葡萄球菌ATCC25923进行杀灭测试,并通过在D-海藻糖与氨基糖苷类抗生素联合使用组中外源添加羰基氰化氯苯腙(CCCP),探究D-海藻糖联合氨基糖苷类抗生素潜在的杀菌机制。结果显示D-海藻糖联合氨基糖苷类抗生素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭效果最佳,联合杀菌组中外源添加CCCP后,细菌可恢复耐受表型。表明D-海藻糖有望作为新的抗生素佐剂,提示其联合氨基糖苷类抗生素杀菌的机制与质子动力势有关。

大肠杆菌ydiB基因敲除和过表达对氨基糖苷类抗生素的耐受性分析

为了寻找新靶点解决抗生素滥用所造成的细菌耐药问题,通过比较氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、妥布霉素、链霉素、阿米卡星、新霉素)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)和β-内酰胺类抗生素(氨苄西林、羧苄西林)对大肠杆菌野生型BW25113(WT)和ydiB基因敲除菌株(△ydiB)杀菌表型的差异,并且通过进一步测试以庆大霉素为代表的氨基糖苷类抗生素对过表达菌株BW25113-pCA24N和BW25113-pCA24N(ydiB)的杀菌表型,以此来确认ydiB基因对细菌耐药的重要性。结果表明:与大肠杆菌野生型BW25113(WT)相比,ydiB基因敲除菌株(△ydiB)仅对氨基糖苷类抗生素耐受,并且发现过表达菌株BW25113-PCA24N(ydiB)能恢复对庆大霉素的敏感性。因此,证明ydiB基因是氨基糖苷类抗生素作用的关键基因,有望成为氨基糖苷类抗生素作用的新靶点。

氨基糖苷类抗生素分析方法进展

氨基糖苷类抗生素(AGs)是对多种致病菌有效的、杀菌完全的抗菌药物,在革兰阴性病原体及感染性疾病治疗中具有显著效果。此类药物主要通过抑制细菌蛋白质的合成促使细菌被快速有效杀灭。综述 AGs 不同分析方法的最新进展。随着高效液相色谱法(HPLC)的发展,以微生物检定、薄层色谱法(TLC)、衍生化 -UV、HPLC- 蒸发光散射检测器(ELSD)、HPLC- 脉冲安培检测器(PAD)及新型气溶胶检测器电喷雾检测器(CAD)等;开发新型 AGs 质量控制方法对其他检测技术的缺陷问题进行解决。

高效液相色谱-串联质谱法检测乳制品中10种氨基糖苷类抗生素残留

建立了乳制品中链霉素、双氢链霉素、新霉素、卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素、安普霉素、潮霉素B、巴龙霉素、阿米卡星等10种氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides,AGs)残留的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。乳制品提取液经亲水-亲脂平衡(hydrophilic-lipophilic balance,HLB)柱净化后,采用反相离子对高效液相色谱分离,电喷雾串联四极杆质谱检测。对样品前处理条件、液相色谱流动相以及质谱条件进行了优化。结果表明:10种AGs在20～1 000μg/L范围内定量离子的峰面积和样品的质量浓度之间有很好的线性关系;在乳制品中的加标回收率为71.2%～101.7%,相对标准偏差为3.4%～13.8%。该方法简便、灵敏、准确,可用于乳制品中多种AGs残留的同时检测。

氨基糖苷类抗生素治疗药物浓度监测的研究进展

氨基糖苷类抗生素是土壤放线菌产生的一种抗菌药物，为最早使用的抗生素之一，其抗菌谱广、对大多数革兰阴性菌的杀菌作用强、抗生素后效应（post-antibiotic effect，PAE）明显。由于氨基糖苷类肾、耳毒性明显，毒性低的β内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗菌药物等的研发及广泛使用，氨基糖苷类抗生素在临床的应用受到了较大的限制。

氨基糖苷类抗生素耳毒性的保护和修饰

目的氨基糖苷类抗生素的分离和鉴定距今已70多年,对治疗严重革兰阴性菌感染,如肠球菌和结核杆菌感染有着强大的功效。然而,随着氨基糖苷类抗生素用药疗程的延长或(和)剂量的增加往往导致肾毒性和耳毒性,阻碍了其在临床上的广泛应用。由于非耳毒性抗生素也具有较广的抗菌谱,用于许多系统感染性疾病的治疗,使得曾经作为优先选择使用的氨基糖苷类抗生素逐渐被取代。然而现在,氨基糖苷类抗生素处于一个潜伏的复兴时期,正逐渐用于治疗对大多数一线抗生素耐受生物所引起的严重性感染,如多重耐药结核、复杂性院内获得性急性尿路感染等。氨基糖苷类抗生素使用的增加,再次向科学家和医生提出了挑战,即肾毒性和耳毒性的问题,尤其该类抗生素导致的耳聋对于具有遗传易感性的患者往往是极重度且不可逆转的。基于这个原因,在过去二十年里,科学家提出了很多种分子治疗策略与氨基糖苷类抗生素导致的耳毒性副作用相抗衡。本文主要概述了:①氨基糖苷类药物杀菌的分子机制,②氨基糖苷类抗生素如何导致具有遗传易感倾向的患者发生耳毒性,③到目前为止,在临床实验和/或临床上已被证明的能阻止和调节氨基糖苷类耳毒性的药物和化合物,④减少氨基糖苷类抗生素剂量来减少耳毒性的发生率。

8种氨基糖苷类抗生素的电喷雾离子阱质谱

目的 探讨8种结构相似的氨基糖苷类抗生素的质谱裂解规律。方法 在正离子检测方式下,用电喷雾离子阱质谱法对庆大霉素、小诺霉素、西索霉素、依替米星、奈替米星、威替米星、卡那霉素A和妥布霉素进行多级质谱分析。结果 各化合物在二级质谱分析时,均可发生B环与C环之间的糖苷键断裂,生成脱去C环(氨基葡萄糖)的碎片离子m/z 322(庆大霉素、小诺霉素和西索霉素)、m/z 350(依替米星、奈替米星和威替米星)和m/z 324(卡那霉素和妥布霉素);在三级质谱分析时,则进一步发生A环(氨基葡萄糖)与B环(脱氧链霉胺)之间的糖苷键断裂,生成A环或B环的碎片离子m/z 163和m/z 191或m/z 160和m/z 162。结论 通过多级质谱分析可获得氨基糖苷类抗生素分子丰富的结构信息,并可用于该类化合物的快速结构解析和定量分析。

曲利本红与氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

在弱酸性条件下 ,酸性双偶氮染料曲利本红 (TR)或硫酸卡那霉素 (KANA)、硫酸新霉素 (NEO)、硫酸庆大霉素 (GEN)和硫酸妥布霉素 (TOB)等氨基糖苷类抗生素的各自共振瑞利散射 (RRS)十分微弱 ,但两者相互作用形成离子缔合物时能使RRS急剧提高并产生新的RRS光谱 ,在 40 0～ 5 3 5nm之间有一个强的散射带 ,最大散射峰位于 40 0nm处 ,在 0 0 13～ 6 0 μg·mL-1范围内RRS强度与抗生素浓度成正比 ,可用于氨基糖苷类抗生素的测定 .对不同抗生素的检出限 (3σ)在 12 9～ 17 6ng·mL-1之间 ,其灵敏度的顺序是KANA >NEO >TOB >GEN .方法有较好的选择性 ,可用于市售抗生素注射液或滴耳液中药物含量和临床血药浓度的快速测定 .文中还用量子化学方法对反应机理进行探讨 。

辽宁地区猪源大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测与分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采用K-B纸片法对65株猪源大肠埃希菌菌株进行6种氨基糖苷类抗生素的药敏试验,同时采用PCR方法对耐药菌株rpsl基因和4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4进行检测及序列分析,并将阳性样品与Gen Bank中登录的序列进行同源性比较。结果显示,辽宁地区猪源大肠埃希菌对链霉素、妥布霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素的耐药率分别为26.2%、15.4%、18.5%、29.2%、4.6%、21.5%;23株耐药菌株rpsl基因检出率为100%;4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4检出率分别为13.0%、8.7%、69.6%、4.3%。以上结果表明,在氨基糖苷类抗生素中耐药性最低的是丁胺卡那霉素,rpsl基因及氨基糖苷类钝化酶基因普遍存在于辽宁地区猪源大肠埃希菌中。

氨基糖苷类抗生素在蒸发光散射检测器中响应因子的一致性考察

目的 考察不同的氨基糖苷类抗生素在蒸发光散射检测器中的响应因子是否一致 ,进而考察ELSD在该类药的有关物质检查、多组分同类物质的相对比例测定及氨基糖苷类新药基准品的建立等方面应用的可能性。方法 用HPLC ELSD法测定了一组氨基糖苷类抗生素 (阿米卡星、西索米星、奈替米星、依替米星和一类新药威替米星 )的线性方程。色谱条件 :DiamonsilC1 8柱 15 0mm× 4 6mm ,5 μm ;流动相 0 2 mol·L- 1 三氟醋酸 甲醇 (94∶6 ) ;流速0 6mL·min- 1 。检测器条件 :漂移管温度 110℃ ,气体流速 2 80L·min- 1 。结果 上述 5种物质的线性方程间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 5种不同氨基糖苷类抗生素在蒸发光散射检测器中的响应因子一致 ,可以尝试用HPLC ELSD法测定该类药中的有关物质、控制多组分药物的相对比例并建立一类新药基准品。

离子交换-脉冲积分安培法分离检测氨基糖苷类抗生素

用离子交换柱分离氨基糖苷类抗生素妥布霉素、新霉素B和西梭霉素，用脉冲积分安培电化学检测器进行检测。其流动相不同于一般抗生素的离子对色谱法，它配制简单，仅需使用NaOH-水体系；对两种检测电位波形进行了对比，并选取了表现优良的检测电位。方法对妥布霉素、新霉素B和西梭霉素的检出限分别为8、5、47ng／mL，在0．1～100／μg／mL范围内表现良好线性关系（r=0．9990～0．9996）。该方法应用于市售鲜奶的检测，3种氨基糖苷类抗生素古白回收率为850％～985％．

达旦黄与氨基糖苷类抗生素相互作用的分光光度研究及其分析应用

在弱酸性溶液中氨基糖苷类抗生素(AGs)与达旦黄(TY)反应时能导致染料褪色, 其最大褪色波长位于409 nm处, 此反应可用于褪色光度法测定某些氨基糖苷类抗生素, 如硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素和硫酸妥布霉素等. 其摩尔吸光系数(ε/×104 L·mol-1·cm-1)分别为2 0,1 5和2 5. 考察了褪色反应的光谱特征、适宜的反应条件和共存物质的影响. 结果表明: 用褪色光度法测定氨基糖苷类抗生素, 不仅具有较高的灵敏度和较好的选择性, 而且简便、快速. 用于市售氨基糖苷类抗生素注射液含量的测定和血清样品的分析, 结果令人满意.

氨基糖苷类抗生素肾毒性及生物标志物的研究进展

由于抗菌谱广和价格便宜等原因，氨基糖苷类抗生素（AGS）广泛地用于治疗革兰阴性细菌所引起的感染。然而该类抗生素在治疗过程中有10％－20％的概率引起肾毒性，使其在临床应用中受到了一定限制。本文就氨基糖苷类抗生素所引起的肾毒性以及肾毒性的预测方法做综合性介绍，并着重介绍诊断肾毒性的生物标志物（Biomarker）。

达旦黄与氨基糖苷类抗生素相互作用的共振瑞利散射光谱研究及其应用

在弱酸性介质中，达旦黄（TY）和氨基糖苷类抗生素（AGs）本身的共振瑞利散射（RRS）均很微弱。但两者相互作用形成离子缔合物时，溶液的RRS显著增强，并产生了新的RRS光谱。不同AGs的反应产物具有相似的光谱特征，其RRS峰位于278和469nm；与此同时，它的倍频散射（FDS）也明显增强，并且最大FDS峰位于392nm处，但二级散射（SOS）变化不明显。RRS较FDS具有较高的灵敏度，而且在一定范围内，AGs的浓度与散射强度（△IRRs）成正比。对于不同抗生素的检出限在17．2～23．3μg·L^-1之间，用于氨基糖苷类注射液和血清样品中AGs的测定．别得结果的RSD（n=5）值均小于3．5％。回收率在96．3％～97．2％之间．

14种氨基糖苷类抗生素质谱分析

目的:探讨氨基糖苷类抗生素质谱裂解规律。方法:在正离子检测方式下,对14种氨基糖苷类抗生素分别进行 ESI-MS^n 和 APCI-MS^n 质谱分析。结果:多级质谱分析时,2-脱氧链霉胺双取代衍生物(小诺霉素、庆大霉素、西索米星、依替米星、奈替米星、阿米卡星、卡那霉素 A、卡那霉素 B、妥布霉素、新霉素、巴龙霉素和核糖霉素)均先脱去 C 环或 D 环(氨基葡萄糖);再进一步发生 A 环(氨基葡萄糖)与 B 环(脱氧链霉胺)之间的糖苷键断裂;大观霉素可能首先在 B 环的异侧 C-O 键间断裂生成 m/z189的碎片离子,再脱去羟基和甲基生成 m/z 158的离子,或在 B 环2个 C-O 键同侧断裂并脱去羟基和甲氨基生成 m/z158的二级碎片离子;链霉素可产生二级碎片 m/z 407(脱去 C 环)、m/z 320(脱去 A_1环)的离子,三级质谱中 m/z407生成 m/z 390、m/z 263(A_I 环碎片)、m/z 246(A 环链霉胍)和 m/z 221(再脱去一胍基部分)的离子。结论:质谱分析可获得氨基糖苷类抗生素丰富的结构信息,归纳其质谱裂解规律可用于对该类化合物的结构解析和有关物质结构分析。