沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

2型糖尿病病人血清沉默信息调节因子2相关酶1和叉头样转录因子O4表达与糖尿病视网膜病变的关系

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人血清沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)和叉头样转录因子O4(FOXO4)表达与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法采用随机数字表法将2021年8月至2022年8月在七台河市人民医院收治的142例T2DM病人纳入研究,按照国际临床DR严重程度量表分为无DR组62例、非增殖性(NPDR)组50例和增殖性(PDR)组30例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清SIRT1和FOXO4的表达水平;Pearson法分析血清中SIRT1和FOXO4表达水平的相关性;logistic回归分析影响T2DM病人DR发生的因素。ROC曲线分析血清中SIRT1和FOXO4对T2DM病人DR发生的诊断价值。结果PDR组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)[(1.22±0.15)mmol/L比(1.98±0.17)mmol/L、(1.64±0.18)mmol/L]、SIRT1水平[(3.82±0.50)μg/L比(5.36±0.56)μg/L、(4.65±0.52)μg/L]显著低于无DR组及NPDR组,NPDR组显著低于无DR组;PDR组收缩压(SBP)、三酰甘油(TG)、FOXO4[(14.63±1.48)μg/L比(12.62±1.45)μg/L、(13.74±1.46)μg/L]水平显著高于无DR组及NPDR组,NPDR组显著高于无DR组(P<0.05)。相关性分析显示,血清SIRT1和FOXO4表达水平呈负相关关系(r=−0.47,P<0.001)。logistic回归分析显示,HDL-C、SIRT1和FOXO4表达水平是影响T2DM病人DR发生的因素(P<0.05)。二者联合诊断DR发生的ROC曲线下面积(AUC)高于SIRT1和FOXO4单独诊断的AUC值(Z=32.22,P<0.001;Z=19.03,P<0.001)。结论T2DM病人血清中SIRT1表达水平显著降低,FOXO4表达水平显著升高,二者是影响T2DM病人DR发生的因素。

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

目的探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)与微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达关系及意义。方法选取2016年5月~2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。结果观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05)。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素(P<0.05)。结论FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。

氧化苦参碱调控FOXO1表达对TNF-α诱导HaCaT细胞炎症因子分泌的影响

目的探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间。将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平。结果本研究采用25μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞。与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖。

转录因子FOXO1和干细胞标志物CD133与神经母细胞瘤临床病理因素相关性

目的探究叉头框转录因子O亚族(FOXO)1与干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤(NB)中的表达及其相关性分析。方法使用免疫组织化学方法检测53例NB组织(病例组)和27例癌旁正常组织(对照组)中FOXO1和CD133蛋白表达情况;应用Western印迹检测3例NB组织及3例癌旁组织FOXO1和CD133蛋白表达情况。结果FOXO1在病例组中阳性表达率显著低于对照组;CD133在病例组中阳性表达率显著高于对照组;FOXO1、CD133与临床分期、组织类型和病理分型存在相关性(P<0.05);FOXO1在NB组织显著低于癌旁组织,而CD133在NB组织显著高于癌旁组织;FOXO1和CD133在蛋白表达水平上有明显相关性(P<0.05)。结论FOXO1可能通过负性调节CD133表达来调节NB干细胞特性,是NB发生发展的重要机制。

白藜芦醇通过调控沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1通路保护白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探讨白藜芦醇(RES)对IL-1β诱导的软骨细胞的影响及其作用通路。方法提取Wistar乳鼠软骨细胞,实验分为5组:对照组,IL-1β组,RES+IL-1β组,RES+IL-1β+EX-527[沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂]组,RES+IL-1β+AS[叉头框转录因子O1(FOXO1)抑制剂]组。采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测SIRT1、FOXO1和MMP-3 mRNA表达量。免疫荧光技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ)的蛋白表达,蛋白质免疫印迹技术检测软骨细胞SIRT1,p-FOXO1/FOXO1的蛋白表达。ELISA检测软骨细胞炎性因子IL-6和TNF-α分泌量。计量资料多组间比较行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t法。以P<0.05差异具有统计学意义。结果与正常软骨细胞相比,IL-1β诱导的软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显降低,细胞TNF-α[(24.70±2.84),t=19.24,P<0.001]和IL-6的分泌量[(3.35±0.28),t=12.97,P<0.001]明显升高、MMP-3的mRNA表达[(2.46±0.23),t=12.61,P<0.001]明显升高。RES作用于IL-1β诱导软骨细胞后,Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.001),细胞TNF-α[(12.60±1.05),t=10.14,P<0.001]和IL-6[(2.00±0.15),t=9.89,P<0.001]的分泌量明显降低,MMP-3的mRNA表达[(1.30±0.14),t=10.46,P<0.001]明显降低。加入SIRT1抑制剂EX-527或FOXO1抑制剂AS后,RES对IL-1β诱导软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达的促进作用明显降低(P<0.05),对TNF-α和IL-6的分泌量抑制作用明显下降(P<0.001),对MMP-3的mRNA表达抑制作用明显下降(P<0.05)。结论RES通过SIRT1/FOXO1通路可明显改善IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解和炎症反应。

鹿茸多肽对骨质疏松模型大鼠的改善作用及对SIRT1/FOXO1信号通路的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组、中剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg^(-1))复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关。

白花丹素介导sirt1-FOXO1通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究白花丹素通过沉默信息调节因子2相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响。方法120只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527组(sirt1抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527组,每组20只。检测大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,DN组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05)。与DN组相比,白花丹素低、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白显著升高(P<0.05);EX-527组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用。结论白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤。

Slit引导配体2通过调控AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路影响糖尿病小鼠视网膜血管损伤的机制研究

目的 探讨Slit引导配体2(SLIT2)是否通过调控腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录沉默信息调节因子1(SIRT1)-叉头盒蛋白O1(FoxO1)信号通路通过对糖尿病小鼠视网膜血管损伤的影响。方法 30只db/db小鼠随机分为DR组(db/db小鼠)、DR+阴性对照载体组(DR+sh-NC组)和DR+sh-SLIT2组,每组10只。另选10只db/m小鼠为对照组。DR+sh-NC组和DR+sh-SLIT2组麻醉后分别在双眼玻璃体腔内注射sh-SLIT2的腺相关病毒(AAV)载体。眼底荧光血管造影(FFA)和苏木精伊红染色观察视网膜血管病变;酶联免疫吸附测定检测血清白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,荧光定量PCR检测SLIT2 mRNA表达;Western blot检测视网膜组织SLIT2、AMPK、SIRT1、FoxO1蛋白水平。结果 与对照组相比,DR组、DR+sh-NC组、DR+sh-SLIT2组血糖、每日饮水量、每日排尿量、食物摄入量及体质量均明显升高(P<0.05);与对照组相比,DR组视网膜存在血管病变及病理损伤,SLIT2 mRNA及蛋白表达、IL-6、TNF-α和VEGF水平,FoxO1蛋白水平均明显升高(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平均明显降低(P<0.05);与DR+sh-NC组相比,DR+sh-SLIT2组的视网膜血管病变及病理损伤明显减轻,SLIT2 mRNA及蛋白表达、IL-6、TNF-α和VEGF水平,FoxO1蛋白水平均明显降低(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论 沉默SLIT2表达显著改善糖尿病小鼠视网膜血管损伤及炎症水平,这可能是通过调控AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路发挥作用的。

活动性肺结核患者巨噬细胞相关细胞因子与外周血单个核细胞中沉默信息调节因子1和叉头框蛋白O3水平的相关性

目的探究活动性肺结核(active pulmonary tuberculosis,APTB)患者外周血单个核细胞中沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、叉头框蛋白O3(forkhead box protein O3,FOXO3)水平与巨噬细胞相关细胞因子诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的相关性。方法选取2020年1月—2021年12月期间于重庆医科大学附属第一医院渝北医院接受治疗的64例APTB患者为APTB组,选取59例潜伏结核感染(LTBI)者为LTBI组,同期选取62例健康体检人群作为对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)法进行外周血单个核细胞中SIRT1 mRNA、FOXO3 mRNA水平检测,ELISA法进行血清iNOS、Arg-1水平检测;采用ROC曲线分析SIRT1 mRNA、FOXO3 mRNA水平对LTBI、APTB的鉴别诊断价值;采用Pearson相关分析APTB患者外周血单个核细胞SIRT1 mRNA、FOXO3 mRNA与血清iNOS、Arg-1水平相关性。结果对照组、LTBI组、APTB组外周血单个核细胞SIRT1 mRNA、FOXO3 mRNA及血清iNOS水平依次降低,血清Arg-1水平依次升高(P<0.05)。SIRT1 mRNA、FOXO3mRNA水平鉴别诊断LTBI、APTB的AUC分别为0.876、0.887,灵敏度分别为71.2%、76.3%,特异度分别为96.9%、90.6%。APTB患者外周血单个核细胞SIRT1 mRNA与FOXO3 mRNA水平呈正相关(r=0.500,P<0.05),且二者与血清iNOS呈正相关,与血清Arg-1呈负相关(P<0.05)。APTB患者治疗6个月后外周血单个核细胞SIRT1 mRNA、FOXO3 mRNA及血清iNOS高于治疗前,血清Arg-1低于治疗前(P<0.05)。结论APTB患者外周血单个核细胞中SIRT1 mRNA、FOXO3mRNA水平较低,且二者与巨噬细胞相关细胞因子iNOS呈正相关,与Arg-1呈负相关。

原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13 FOXO1表达水平及其临床意义

目的探究原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13、FOXO1表达水平及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年12月在本院收治的183例原发性肾病综合征儿童作为研究组。另选取同时期在本院体检的185名体检健康的儿童作为对照组,苏木精-伊红(ELISA)法检测血清Apelin-13、FOX-O1水平;采用Pearson法分析Apelin-13、FOXO1水平与血脂指标的关系;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Apelin-13、FOXO1对原发性肾病综合征的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结果与对照组比较,研究组患儿血清Apelin-13水平降低,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apo)B、FOXO1水平升高(P<0.05);与研究组治疗前比较,治疗后血清Apelin-13水平升高,TG、TC、LDL-C、apoB、FOXO1水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析表明,原发性肾病综合征患儿血清Apelin-13与TG、TC、LDL-C、apoB均呈负相关,FOXO1与TG、TC、LDL-C、apoB均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,Apelin-13、FOXO1诊断原发性肾病综合征发生的曲线下面积(AUC)为0.795、0.734,二者联合诊断的AUC为0.920;多因素Logistic回归分析显示,Apelin-13与FOX-O1是影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结论原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13呈低表达、FOXO1呈高表达,二者与血脂水平有关,并且对原发性肾病综合征具有一定的诊断价值。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

足细胞SIRT1/FoxO3自噬通路与糖尿病肾脏疾病关系的研究进展

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病微血管并发症之一,也是目前全球范围内导致终末期肾病的首要原因,足细胞在DKD发病机制中发挥重要作用,而自噬对维持足细胞生存及内环境稳定具有重要意义。因此,自噬及相关通路是DKD的潜在治疗干预靶点。沉默信息调节因子1通过介导叉头框转录因子O3的去乙酰化,激活足细胞自噬相关通路,调节自噬相关基因和氧化应激反应,维持足细胞结构和功能,从而延缓DKD的进展。未来对足细胞自噬相关通路与DKD发病机制的关系进行深入探索,将为DKD的临床诊断和靶向治疗提供新思路。

阿魏酸钠通过SIRT1/FOXO3A改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的机制研究

目的探究阿魏酸钠在血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠中的神经保护作用及其对前额叶皮质沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SRIT1)和叉头框转录因子O3A(forkhead box transcription factor O3A,FOXO3A)表达的影响。方法将32只雄性SD大鼠随机分成4组,每组8只。模型组和阿魏酸钠组大鼠行双侧颈总动脉栓塞;假手术组进行相同的手术操作,但不做结扎处理;正常组不做处理。阿魏酸钠组连续4周灌胃阿魏酸钠溶液(100 mg/kg),其余3组接受相同体积的生理盐水灌胃。通过Morris水迷宫、尼氏染色、Western Blot和免疫组织化学染色法观察比较各组大鼠行为学、细胞形态及SIRT1和FOXO3A蛋白的表达情况。结果正常组和假手术组神经元呈现较完整的形态结构。相较于正常组,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长、穿越平台次数明显减少(P<0.05),细胞核固缩,SIRT1表达水平显著下降(P<0.05),FOXO3A表达显著上升(P<0.05);与模型组相比,阿魏酸钠组细胞形态得以改善,逃避潜伏期和FOXO3A蛋白表达均降低(P<0.05),穿台次数和SIRT1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论阿魏酸钠通过调节SIRT1/FOXO3A改善大鼠学习记忆能力,为VD治疗提供了一定的研究基础。

头颈鳞癌患者血清外泌体miR-96-5p高表达抑制FoxO1的生物学意义

目的:通过证实头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者血清外泌体(Exos)中miR-96-5p对叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)的靶向调节作用,探讨Exo-miR-96-5p对HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移等恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:取2020年9月至2022年1月我院收治的HNSCC患者(25例)及同期体检健康者(40例)血清标本,超速离心法提取Exos,RT-PCR检测Exos中miR-96-5p表达;PKH67染液标记Exos后,与HNSCC细胞系-AGZY-973共培养,观察HNSCC细胞对Exos摄取的影响。AGZY-973细胞分为:Control组(加入DMEM培养基正常培养)、HNSCC患者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL HNSCC患者血清Exos悬液共培养)、健康对照者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL健康对照者血清Exos悬液共培养),CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡率;Transwell检测迁移、侵袭;RT-PCR法检测miR-96-5p表达;Western blot法检测细胞FoxO1及促凋亡蛋白Bax、死亡调解子(Bim)、凋亡蛋白p21表达。双荧光素酶报告试验验证miR-96-5p与FoxO1靶向关系;36只裸鼠分为Control组、Exos组、Exos-miR-96-5p inhibitor组、Exos-inhibitor-NC组、Exos-pcDNA FoxO1组、Exos-pcDNA NC组,每组6只。Control组接种AGZY-973细胞培养液,其余各组分别接种含50μL HNSCC患者血清Exos悬液、Exos-miR-96-5p inhibitor悬液、Exos-inhibitor-NC悬液、Exos-pcDNA-FoxO1悬液、Exos-pcDNA-NC悬液的AGZY-973细胞培养液,28d后,检测瘤体体积及瘤体重量,以验证HNSCC患者血清Exos对miR-96-5p及FoxO1调控的影响。结果:HNSCC患者血清Exos及健康对照者血清Exos均有完整膜,形态呈杯口状,均可被AGZY-973细胞摄取。HNSCC患者血清Exos中miR-96-5p表达高于健康对照者血清Exos(P<0.05)。与Control组相比,HNSCC患者血清Exos组AGZY-973细胞miR-96-5p表达升高,FoxO1及Bax、Bim、p21等凋亡蛋白表达降低,细胞增殖、迁移及侵袭能力升高,凋亡率降低(P<0.05);健康对照者血清Exos对AGZY-973细胞miR-96-5p/FoxO1轴及生物学行为影响不大(P>0.05)。miR-96-5p与FoxO1之间有靶向调控关系。HNSCC患者血清Exos中转染miR-96-5p inhibitor或pcDNA-FoxO1,均可部分逆转Exos发挥的促瘤体生长作用(P<0.05)。结论:HNSCC患者血清Exos可通过传递miR-96-5p,靶向下调FoxO1,发挥促进HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移、生长等恶性生物学行为的发展。

MiR-486-5p/FOXO1轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞增殖和迁移的调节作用

目的探讨miR-486-5p/叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O subfamily 1,FOXO1)轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞的增殖和迁移的调节机制。方法小鼠建立深二度烧伤模型,随机分为NC mimic+Vector组、FOXO1组、miR-486-5p mimic组和miR-486-5p mimic+FOXO1组。采用miR-486-5p mimic和(或)FOXO1处理伤面,观察伤面愈合情况。在烧伤后分别于不同时间点[止血(0 d)、炎症(1 d)和增殖(7 d和14 d)]采用原位杂交技术和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测伤面边缘组织中miR-486-5p表达部位和水平,免疫荧光染色法检测FOXO1表达。通过荧光素酶报告分析FOXO1与miR-486-5p结合关系。构建miR-486-5p过表达或敲低人永生化角质形成细胞(human HaCaTKeratinocytes,HaCaT)模型,通过EdU法和划痕试验考察细胞的增殖和迁移情况,Western blot法分析细胞中FOXO1蛋白表达。结果miR-486-5p在小鼠深二度烧伤伤面愈合过程中显著上调。体内模型显示,miR-486-5p通过抑制FOXO1表达促进伤面愈合。在HaCaT细胞中,miR-486-5p过表达增加了细胞的增殖和迁移,抑制miR-486-5p则具有相反的效果。FOXO1是角质形成细胞中miR-486-5p的直接靶标。FOXO1过表达导致HaCaT细胞的EdU阳性细胞的百分比和伤面愈合降低,并且逆转了miR-486-5p对EdU阳性细胞和伤面愈合的诱导作用。结论miR-486-5p是深二度烧伤创面修复的关键调节剂,通过抑制FOXO1表达促进角质形成细胞的增殖和迁移。

依托咪酯调控Sirt1/FOXO1通路对心肌缺血再灌注大鼠模型的保护作用

目的基于沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)通路探究依托咪酯(Eto)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型的保护作用。方法将60只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MIRI组、依托咪酯低、高剂量组(L-Eto、H-Eto组,0.5、1 mg/kg)、通路抑制剂组(Eto+EX527组,1 mg/kg Eto+2 mg/kg EX527),每组12只。除Sham组外,其余大鼠采用手术结扎冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。给药组大鼠于再灌注后2 h尾静脉注射相应剂量药物;1次/d,持续28 d。于手术前和末次给药2 h后超声心电图检查大鼠心脏功能;生化法检测血清中肌酸激酶同工酶MB(CKMB)、肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)水平和心肌组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织形态变化;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光探针测定心肌中活性氧(ROS)水平;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP)变化;Western blot检测心肌组织Sirt1/FOXO1通路和凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达。结果与Sham组相比,MIRI组大鼠左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、血清CKMB、cTnI、LDH水平、心肌MDA水平、心肌细胞的凋亡率、ROS水平、心肌乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)、Bax、Caspase-3的表达显著升高(均P<0.05),左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌SOD、GSH-Px水平、MMP、心肌Sirt1、Bcl-2的表达显著下降(均P<0.05),心肌纤维紊乱,细胞肿胀、坏死,大量炎性细胞浸润;与MIRI组相比,L-Eto、H-Eto组大鼠的LVESV、LVEDV、血清CKMB、cTnI、LDH水平、心肌MDA水平、心肌细胞的凋亡率、ROS水平、心肌Ac-FOXO1、Bax、Caspase-3的表达明显下降(均P<0.05),LVEF、LVFS、心肌SOD、GSH-Px水平、MMP、Sirt1、Bcl-2的表达明显升高(均P<0.05);心肌损伤明显减轻。EX527可逆转Eto的抗氧化活性和心肌保护作用。结论Eto对MIRI的保护作用可能与激活Sirt1,下调乙酰化FOXO1的表达,进而改善线粒体功能障碍,抑制氧化应激和细胞凋亡有关。

基于Sirt1/FoxO1通路探讨瑞马唑仑减轻脓毒症小鼠脑损伤的机制研究

目的探究瑞马唑仑对脓毒症引起的脑损伤的影响及机制。方法雄性C57BL/6J小鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、瑞马唑仑组(8 mg/kg)、瑞马唑仑+Sirt1抑制剂(EX527)组(8 mg/kg瑞马唑仑+5 mg/kg EX527)、EX527组,每组38只。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠模型。给予相应的干预后,观察并记录术后7 d内小鼠存活率,采用Morris水迷宫检测小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;手术后24 h,通过伊文斯蓝(EB)渗漏量评估血脑屏障(BBB)通透性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脑组织白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β水平,化学比色法检测脑组织丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,HE染色观察海马组织病理学变化,TUNEL法检测神经元凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测海马组织沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD和CAT活性、Sirt1和胞质NF-κB p65蛋白水平显著下降,逃避潜伏期、脑组织EB含量、IL-6、TNF-α、IL-1β和MDA水平、海马神经元凋亡指数、乙酰化FoxO1(Ac-FoxO1)/FoxO1比值和乙酰化核因子-κB p65(Ac-NF-κB p65)、胞核NF-κB p65蛋白水平显著升高(均P<0.05);与模型组相比,瑞马唑仑组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD和CAT活性、Sirt1和胞质NF-κB p65蛋白水平显著升高,逃避潜伏期、脑组织EB含量、IL-6、TNF-α、IL-1β和MDA水平、海马神经元凋亡指数、Ac-FoxO1/FoxO1比值和Ac-NF-κB p65、胞核NF-κB p65蛋白水平显著降低(均P<0.05);EX527可抑制Sirt1表达,显著减弱瑞马唑仑对SAE小鼠的上述保护作用(均P<0.05)。结论瑞马唑仑可提高脓毒症小鼠存活率,通过维持BBB完整性、抑制神经炎症和氧化应激,减少神经元凋亡,减轻脓毒症引起的脑损伤;其作用机制可能与激活Sirt1/FoxO1通路,抑制NF-κB活化有关。

慢病毒介导shRNA干扰FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠ的表达

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体并感染猪成肌细胞,用real-time PCR和Western印迹法检测FoxO1和肌球蛋白重链Ⅰ(myosin heavy chainⅠ,MyHCⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.测序结果证实,Lenti H1 RNAi FoxO1质粒构建正确,获得Lenti H1 RNAi FoxO1病毒颗粒滴度为8×107U/mL.病毒感染猪成肌细胞后,与对照组相比,siFoxO1a组FoxO1在转录水平上降低了58%,蛋白水平降低了77%,而MyHCⅠmRNA表达量提高了2.58倍.结果表明,本研究成功构建了猪FoxO1基因shRNA干扰慢病毒载体,且沉默FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠmRNA的表达.

红景天苷调控FoxO1/β-catenin通路对2型糖尿病骨质疏松大鼠的保护作用研究

目的探讨红景天苷(SDS)对2型糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠的保护作用及叉头框转录因子O亚族1(Fox O1)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。方法高糖高脂饲养8周,8周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ),第10周无菌条件下去除卵巢构建DOP大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、SDS组、Fox O1激动剂组,每组8只;正常组8只大鼠常规饲料正常饲养相同时间。造模成功后第2天予SDS组灌胃36 mg/(kg·d) SDS,Fox O1激动剂组灌胃40 mg/(kg·d)白藜芦醇(Res),连续11周。血糖仪检测空腹血糖水平;苏木精-伊红(HE)检测大鼠股骨组织形态;双能X射线吸收法测定股骨组织骨密度情况;活性氧(ROS)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测血清中ROS、SOD、MDA、GSH-Px水平;蛋白免疫印迹检测股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平。结果建模后给药前,与正常组相比,模型组、SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平升高(P<0.05)。给药后,模型组骨小梁出现明显断裂、破坏严重、数量减少;SDS组、Fox O1激动剂组骨小梁明显断裂,但空隙间隔有所缓解,数量有所增加。与正常组相比,模型组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平升高(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组相比,SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平降低(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05)。结论SDS可激活Fox O1/β-catenin通路,增强抗氧化应激作用,实现对DOP大鼠的保护。