极光激酶A通过促进巨噬细胞源性泡沫细胞形成参与动脉粥样硬化发生发展

目的:明确极光激酶A(Aurora kinase A,AurkA)是否通过调控巨噬细胞源性泡沫细胞形成参与动脉粥样硬化发生发展。方法:从GEO数据库提取动脉粥样硬化小鼠主动脉基因表达谱数据(GSE 19286),选择特异性探针分析AurkA表达。选用8周龄普通饲料喂养的C57BL/6J健康雄性小鼠作为CC组(喂养普通饲料),将8周龄C57BL/6J背景的ApoE^(-/-)(Apolipoprotein E KO)健康雄性小鼠随机分为AN组(喂养普通饲料)和AH组(喂养21%脂肪,0.5%胆固醇的高脂饲料),喂养16周。收集外周血及主动脉、肝脏、脾脏等组织样本,检测血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平和主动脉大体油红染色确认动脉粥样硬化小鼠模型建模成功后,利用qPCR方法检测各组织AurkA mRNA表达。选用8周龄C57BL/6J背景的ApoE^(-/-)健康雄性小鼠,随机分为MC组(溶剂处理的高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠)和M组(AurkA抑制剂MLN8237处理的高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠),以同样方法高脂喂食16周构建动脉粥样硬化小鼠模型。在建模第12周开始M组给予小鼠20 mg·kg^(-1)MLN8237灌胃,每周2次,持续4周,MC组给予小鼠同等体积溶剂(10%2-羟丙基-β-环糊精和1%碳酸氢钠)处理。在建模16周后取外周血,检测血脂水平的同时,经流式细胞术检测外周血中髓性细胞占比;取主动脉经大体油红染色检测斑块总面积;取心脏制备主动脉根部切片经HE和油红染色后分析斑块面积以及斑块内脂质累积情况。基于Bloodspot数据库分析AurkA mRNA在各类血液细胞中的表达模式并构建细胞模型,使用8周龄C57BL/6J小鼠获取骨髓细胞悬液,加入10 ng·mL^(-1)M-CSF诱导成为骨髓源性巨噬细胞,重新铺板分为对照组(Con)、建模组(ox-LDL)以及AurkA抑制剂处理组(ox-LDL+TCS)。在建模组(ox-LDL)和AurkA抑制剂处理组(ox-LDL+TCS)细胞中加入100μg·mL^(-1)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)构建泡沫细胞模型,同时给予ox-LDL+TCS组10 nM AurkA抑制剂TCS7010处理,给予ox-LDL组等量溶剂处理,48 h后利用油红染色检测泡沫细胞的脂质累积情况。结果:动脉粥样硬化小鼠主动脉基因表达谱数据显示,AurkA mRNA在病灶区的表达呈上升趋势。与CC组和AN组相比,AH组血清中的TC、TG以及LCL-C水平均升高(P<0.05),同时主动脉中存在大量粥样斑块沉积,提示造模成功。相较AN组,AH组小鼠肝脏、脾脏以及主动脉中的AurkA mRNA水平均有上调(P<0.05)。在给予MLN8237处理后,与MC组相比,M组的体重、血脂水平以及主动脉斑块总面积均无显著改变(P>0.05),但其主动脉根部的斑块面积以及斑块内的脂质累积均减少(P<0.05)。流式细胞术分析结果显示,M组小鼠外周血中的髓性细胞占比与MC组相当(P>0.05),但单核细胞占比降低(P<0.05)。AurkA在血液细胞中的表达谱分析显示,其在髓性细胞尤其是巨噬细胞中特异性高表达。在细胞实验中,与ox-LDL组相比,ox-LDL+TCS组的油红阳性面积占比下降(P<0.05),提示AurkA抑制剂能够下调巨噬细胞的脂质累积从而抑制泡沫细胞生成。结论:AurkA通过调控外周血中的单核细胞数量以及斑块中巨噬细胞源性泡沫细胞生成促进动脉粥样硬化发生发展,抑制AurkA活性可有效改善动脉粥样硬化进程。

肺炎衣原体通过下调ABCA1和ABCG1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的:观察ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ABCG1在肺炎衣原体(C.pn)诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用,以初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的分子机制。方法:C.pn在Hep-2细胞内增殖,将不同浓度的C.pn(1×105～1×106IFU)分别感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞0～72小时,运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别运用RT-PCR和Westernblot检测ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达。结果:高浓度的C.pn(5×105和1×106IFU)感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞48小时后,细胞浆内的脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(>50%)。C.pn感染呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1、ABCG1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:ABCA1和ABCG1表达下调是C.pn诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为C.pn感染致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据。

PPARγ基因转录与单核巨噬细胞来源的泡沫细胞形成

目的 :探讨PPARγ基因转录在动脉粥样病变局部的作用。方法 :观察动脉粥样硬化局部PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)分布的关系 ;分析PPARγ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞SRA、PPARγmRNA表达、肿瘤坏死因子α(TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放的影响。结果 :PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)的分布相似 ;PPARγ配体在增加巨噬细胞PPARγmRNA表达的同时 ,显著抑制了ox LDL介导的巨噬细胞SRAmRNA表达和TNF α、MMP 9的释放。结论

miR-155靶向CARHSP1参与动脉粥样硬化泡沫细胞形成的分子机制

本刊编委，武汉市中心医院检验科卢忠心教授（通讯作者）指导硕士研究生李晓怡（第一作者）等在《Scientific Reports》（2016Feb22；6：21789，IF：5．578）发表了题为＂miR-155 acts as an anti-inflammatory factor in atherosclerosis- associated foam cell formation by repressing calcium-regulated heat stable protein 1＂的研究论文，主要内容如下：

肺炎衣原体通过上调清道夫受体A1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用。方法给予不同浓度的肺炎衣原体(1×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72h。运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达。结果高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%)。在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1 mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达。结论清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。

睾酮抑制小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞形成

生理浓度的睾酮具有抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）作用[1],但其分子机制尚不清楚。巨噬细胞迁入内膜下吞噬脂质转变为泡沫细胞是AS早期的标志性事件。本文旨在观察睾酮对泡沫细胞形成的作用,以及对相关蛋白表达的影响,探讨睾酮抗AS的可能机制。1材料与方法1.1材料：小鼠巨噬细胞系RAW264.7（中科院上海细胞生物所）;氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）（尚善生物）;

N~ε-羧甲基赖氨酸通过RAGE促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成

目的研究Nε-羧甲基赖氨酸（CML）对平滑肌细胞泡沫化中脂质外流的影响,探讨其在促进平滑肌细胞泡沫化中的作用和机制。方法使用组织贴块法从C57BL/6J小鼠主动脉中提取原代血管平滑肌细胞并进行鉴定;将第3~9代的原代平滑肌细胞分为对照组,氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）（50 mg/L）模型组,1、10、100μmol/L的CML与ox-LDL共刺激组,通过NBD-胆固醇流出实验检测CML对泡沫细胞胆固醇流出率的影响,通过胆固醇含量测定试剂盒测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）水平;将原代血管平滑肌细胞分为四组：对照组、ox-LDL模型组、ox-LDL＋CML组、RAGE siRNA沉默组（ox-LDL＋CML＋siRAGE组）并进行刺激,通过Western blot检测糖基化终末产物受体（RAGE）和胆固醇流出调节子ABCA1的表达;通过油红O染色和油红萃取实验检测各组平滑肌细胞泡沫化程度。结果与对照组相比,不同浓度CML明显升高平滑肌细胞内TC、CE和FC的含量;胆固醇流出实验表明胆固醇流出率随CML浓度升高而降低;Western blot实验表明与对照组相比,加入CML后RAGE明显升高,ABCA1明显降低,ox-LDL＋CML＋siRAGE组RAGE的表达降低,并且ABCA1降低水平减少;油红O染色显示ox-LDL能够促使平滑肌细胞内脂质蓄积,CML能够增强其作用,抑制RAGE表达后CML作用减弱。结论 CML通过RAGE抑制脂质外流,促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成。

“氧化型低密度脂蛋白—凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1—活性氧”信号通路参与泡沫细胞的形成(英文)

动脉粥样硬化是多因素引起的,以动脉壁内脂质的沉积甚至粥样斑块的形成为特征的慢性血管炎症性疾病。巨噬细胞内胆固醇的堆积和泡沫细胞的形成是早期动脉粥样硬化形成的标志。然而,泡沫细胞形成的确切机制尚未完全阐明。于此,我们推测氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL),凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)和活性氧(reactive oxygen spe-cies,ROS)组成了一个促进泡沫细胞形成的"信号通路",在泡沫细胞的形成乃至诱导动脉粥样硬化发生中起始动作用。在这一通路中,氧化型低密度脂蛋白,这种经过氧化修饰的低密度脂蛋白,是"激活子";凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1,作为内皮细胞上的氧化型低密度脂蛋白的主要受体是信号"转导子";活性氧,这氧化型低密度脂蛋白与凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1结合后的直接产物是"催化子"和"诱导剂"。

苦瓜蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

为研究苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的作用及其机制 ,用离心、超滤和色谱技术从苦瓜 (MomordicacharantiaL)果肉中提取苦瓜蛋白 (Momordicin) ,THP 1细胞经 16 0nmol/LPMA孵育 2 4h ,诱导其分化成巨噬细胞 ,然后用 2 5mg/L乙酰化低密度脂蛋白孵育 4 8h ,使其泡沫化 ,以观察苦瓜蛋白对泡沫细胞形成的影响。用高效液相色谱法分析细胞内胆固醇和胆固醇酯的变化 ,用逆转录—聚合酶链反应技术检测苦瓜蛋白对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响。结果发现 ,经苦瓜蛋白作用后 ,细胞内总胆固醇及胆固醇酯均显著减少 (对照组总胆固醇为 6 34± 2 1,苦瓜蛋白处理组为 2 5 7± 2 6 ,P <0 .0 1;对照组胆固醇酯为 339± 2 1,苦瓜蛋白处理组为 93± 9,P <0 .0 1)。胆固醇酯与总胆固醇比值从对照组的 6 2 .9%下降到 36 .2 %。同时 ,细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达显著上调 (P <0 .0 5 )。提示苦瓜蛋白抑制THP 1单核巨噬细胞源性泡沫细胞的形成可能与上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1有关。

泡沫细胞的形成机制及中医药干预研究进展

通过对泡沫细胞的形成机制及相关因子的研究,总结现代医学和中医中药对巨噬细胞的干预和影响的有关文献,归纳中西药对巨噬细胞的形成时自由基、血脂、细胞因子、钙离子浓度、受体蛋白及相关基因表达的干预作用机制。

内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的:观察内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响,及其在动脉粥样硬化中的作用机制。方法:给予不同浓度的内肥素处理24h和同一浓度的内肥素处理THP-1源性巨噬细胞0～36h,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测LOX-1的mRNA和蛋白的表达水平。结果:高浓度的内肥素处理负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24h后,细胞浆内的脂滴明显增多。在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞上,内肥素上调LOX-1mRNA和蛋白表达。结论:内肥素上调THP-1源性泡沫细胞中LOX-1的表达。

CD36与肾间质泡沫细胞形成及血清胆固醇水平间的关系

我们既往的研究结果显示肾间质泡沫细胞的形成与蛋白尿的严重程度和血清胆固醇水平有关。Alport综合征患者血脂水平明显低于其他病理类型的肾小球疾病患者，但其泡沫细胞浸润的发生率却显著高于其他患者；另外膜增生性肾小球肾炎（MPGN）患者与局灶节段硬化性肾小球病（FSGS）患者相比两组间血清胆固醇水平差异无统计学意义，但两者泡沫细胞发生率却有显著差异。

内脂素对THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的:观察内脂素(visfatin)诱导人类单核细胞白血病细胞株THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达作用。方法:给予不同浓度的visfatin处理THP-1源性巨噬细胞,并加入低密度脂蛋白(LDL)孵育24 h后,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果:高浓度的visfatin刺激负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞质内的脂滴明显增多。visfatin呈浓度依赖性的下调负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞中PPARγmRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:visfatin对THP-1源性泡沫细胞形成中PPARγ表达水平的下调,这可能在动脉粥样硬化的发生发展起重要作用。

Angptl4基因缺失可改善脂质代谢与抑制泡沫细胞形成避免动脉粥样硬化

血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein family 4，Angptl 4）是血管内皮生长因子家族成员，主要在脂肪和肝脏表达，在心、肾等组织也有表达，可以通过抑制脂蛋白脂肪酶活性而调节脂质代谢。日本熊本大学的Adachi及其同事通过ApoE（-／-）Angptl4（-／-）小鼠来研究Angptl4基因缺失对脂质代谢和动脉粥样硬化的影响。其结果发表于美国的《生物化学及生物物理研究通讯杂志》（Biochem Biophys Res Commun，2008，15）上。

瘦素对THP-1细胞泡沫化过程中ACAT-1表达的影响

目的 :研究单核或巨噬细胞转分化和泡沫细胞形成过程中瘦素对人酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶(ACAT_1)表达的影响。方法 :在体外模拟动脉粥样硬化 (AS)形成过程中 ,运用放射性同位素标记底物法、逆转录聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹法检测ACAT_1mRNA和蛋白表达水平。结果 :单核或巨噬细胞转分化过程中ACAT_1酶活性、蛋白及mRNA水平均升高。巨噬细胞转变为泡沫细胞过程中ACAT_1表达水平无明显变化。高瘦素血症可明显增强单核或巨噬细胞转分化和泡沫细胞形成过程中ACAT_1表达。结论 :高瘦素血症可能通过增强ACAT_1表达导致动脉粥样硬化提前发生。

ACSL4介导铁死亡及在动脉粥样硬化性心血管病中的潜在作用

背景:铁死亡是一种铁依赖性调节细胞死亡形式,其特征是铁依赖性脂质过氧化,长链酰基辅酶A合酶4参与脂质过氧化底物的形成进而导致铁死亡。近几年研究表明,长链酰基辅酶A合酶4介导铁死亡在动脉粥样硬化性心血管疾病中发挥关键作用。目的:总结长链酰基辅酶A合酶4的结构功能和调控机制及其介导铁死亡的潜在分子机制,阐述长链酰基辅酶A合酶4驱动铁死亡在动脉粥样硬化、缺血性脑卒中和心肌梗死中的应用,以期为治疗动脉粥样硬化心血管疾病提供新的治疗策略。方法:在PubMed数据库检索自建库起至2023年8月收录的相关文献,以“atherosclerosis,ferroptosis,long-chain acyl-coenzyme A synthase 4,ACSL4,glutathione peroxidase 4,ischemic stroke,myocardial infarction,endothelial cell,smooth muscle cells,foam cell”为检索词,最终纳入76篇文献进行综述分析。结果与结论:①长链酰基辅酶A合酶4参与形成多不饱和脂肪酸的辅酶衍生物并将其插入磷脂,为铁死亡发生的核心机制脂质过氧化提供底物;②在长链酰基辅酶A合酶4表达的调节因子中,整合素α6β4、细胞内囊泡转运因子p115、锌脂蛋白A20负调控其表达,同时多种miR通过结合3′-UTR下调其表达,相反长链酰基辅酶A合酶4的表达上调大部分通过转录因子转录调控;③长链酰基辅酶A合酶4依赖性生成含有多不饱和脂肪酸的磷脂是脂质过氧化并执行铁死亡必不可少的必要条件,且长链酰基辅酶A合酶4与谷胱甘肽过氧化酶4作为铁死亡的正负调控因子相互制约,其具体机制仍待进一步研究;④长链酰基辅酶A合酶4介导铁死亡参与动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血性脑卒中的病理机制,动脉粥样硬化中内皮细胞损伤与长链酰基辅酶A合酶4介导的铁死亡密切相关,但长链酰基辅酶A合酶4参与泡沫细胞形成、平滑肌细胞表型转化、钙化的研究尚未见报道;⑤长链酰基辅酶A合酶4作为铁死亡的生物标志物和潜在靶点成为研究热点,靶向长链酰基辅酶A合酶4抑制铁死亡可能成为治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的新方向,而抑制长链酰基辅酶A合酶4的药物研究较少,未来还需进一步研究。

巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化能力的影响

越来越多的实验结果证实巨噬细胞集落刺激因子在动脉粥样硬化发生过程中的重要作用，为了探讨巨噬细胞集落刺激因子和活性氧与动脉粥样硬化之间的相互关系，观察了巨噬细胞集落刺激因子对培养的小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化酶活性的影响。结果发现巨噬细胞集落刺激因子能使小鼠腹腔巨噬细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性提高３２％，超氧化物歧化酶的活性提高１２０％，并减轻叔丁基氢过氧化物促巨噬细胞源性泡沫细胞形成，以及提高巨噬细胞的生存数。此结果提示巨噬细胞集落刺激因子提高杭氧化酶活性的作用可能是其虽增加对氧化修饰低密度脂蛋白和胆固醇的摄入却能阻止泡沫细胞形成及动脉粥样硬化发生发展的原因之一。