红曲霉固态发酵产洛伐他汀工艺条件的研究

该文通过对洛伐他汀生产菌红曲霉S-01固态发酵工艺条件的研究,确定了固态发酵的最佳工艺条件:发酵培养基配方为大米2500 g、甘油75 g、蛋白胨175 g、初始含水量40%,按装载量350 g/1.5 L进行装瓶,接种量25%,于30℃发酵7 d(前发酵),23℃发酵33 d(后发酵),经过优化后的红曲固态发酵产洛伐他汀的含量达到14.38 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀含量为9.35 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀占比为65.02%。该研究对功能红曲的工业化生产有一定的指导意义。

高产色素和洛伐他汀红曲菌株的筛选、鉴定及发酵条件研究

红曲色素(Monascus pigments,MPs)和洛伐他汀(Lovastatin)是两种具有极高营养、保健和药用价值的红曲菌代谢产物,寻找挖掘高产MPs和洛伐他汀的红曲菌,具有重要实践意义。从土样中分离得到红曲菌A1和A2,在对其进行分类鉴定的基础上,采用分光光度法对MPs的色价和洛伐他汀含量进行测定,并通过单因素和正交试验对发酵培养基进行了优化。结果表明:菌株A1和A2隶属于紫色红曲菌(Monascus purpureus)。在基础培养基中,菌株A1和A2的MPs色价分别为3287.11、2561.30 U/g,洛伐他汀含量为31.35、33.74μg/mL。通过L_(16)(4^(5))正交试验优化培养基,获得产MPs最优配方为乳糖20 g/L、KNO_(3)5 g/L、KH_(2)PO_(4)4 g/L、KCl 2 g/L、Na_(3)C_(6)H_(5)O_(7)2 g/L,产洛伐他汀最优配方为乳糖20 g/L、KNO_(3)15 g/L、KH_(2)PO_(4)2 g/L、KCl 6 g/L、Na_(3)C_(6)H_(5)O_(7)4 g/L。在最优培养基中A1菌株总色价可达15851.98 U/g,提高了3.82倍,洛伐他汀含量为122.96μg/mL,提高了2.92倍;A2菌株总色价为8933.58 U/g,提高了2.49倍,洛伐他汀含量达198.26μg/mL,提高了4.88倍。该文为红曲菌资源库提供了优秀潜力菌株,为工业上大规模生产MPs和洛伐他汀奠定了理论基础并提供了实际方案。

超高效液相色谱-四极杆/飞行时间高分辨质谱测定保健食品及其原料中洛伐他汀及类似物的含量

目的利用超高效液相色谱-四极杆/飞行时间高分辨质谱(ultra performance liquid chromatography tandem quadrupole/time-of-flight high resolution mass spectrometry,UPLC-Q/TOF HRMS),建立同时鉴别和定量测定保健食品及其原料中的洛伐他汀及其类似物的分析方法。方法样品用Agilent Eclipse Plus C_(18)(50mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式离子化,全扫描模式检测。结果当称样量为1 g时,酸式洛伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、辛伐他汀、去羟基洛伐他汀和洛伐他汀羟酸钠盐的检出限分别为40、25、25、25、25和50 ng/g;洛伐他汀、美伐他汀、辛伐他汀、去羟基洛伐他汀在25~200μg/L范围、洛伐他汀羟酸钠盐在100~800μg/L范围内线性关系良好(R≥0.99);5种成分在保健食品及原料中均有较好的回收率和稳定性。结论该方法简便、快速、灵敏、准确,适合于保健食品及原料中的洛伐他汀及其类似物的鉴别和定量测定。

HPLC法测定血脂康胶囊中洛伐他汀和洛伐他汀酸的含量

目的:建立血脂康胶囊中的洛伐他汀和洛伐他汀酸HPLC定量分析方法。方法:利用HPLC法,采用YMC-C 18柱(150 mm×4.6 mm,4μm),流动相为甲醇:10 mmol·L^(-1)甲酸铵-0.2%甲酸水溶液(73:27),流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长为237 nm。结果:洛伐他汀的线性范围为1.649～9.891μg(r=1.000 0),平均回收率为98.5%(RSD=2.31%,n=6);洛伐他汀酸的线性范围为0.221～1.327μg(r=1.000 0),平均回收率为96.3%(RSD=2.03%,n=6)。结论:本方法专属性强、结果准确、简便可行,可用于血脂康胶囊及其它相关天然他汀类药物的质量控制。

脱氢洛伐他汀的调血脂作用

目的观察洛伐他汀的脱氢衍生物脱氢洛伐他汀对高脂血症大鼠的调血脂作用。方法以高脂饲料喂养建立高脂血症大鼠模型,以洛伐他汀为阳性对照药,灌胃给予不同剂量的脱氢洛伐他汀,于第8周末和第12周末全自动生化分析仪测定血脂水平,获取肝脏组织进行病理切片以观察肝脏脂肪变性情况。结果洛伐他汀和脱氢洛伐他汀高剂量组对大鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平有呈时间依赖性降低作用,并能降低脂肪肝水平。结论脱氢洛伐他汀有类似洛伐他汀的降低血清TC和LDL-C水平,阻止脂肪肝形成的作用。

七叶皂苷对洛伐他汀在高脂血症大鼠模型体内药代动力学的影响

目的在高脂血症大鼠模型中研究七叶皂苷对洛伐他汀药代动力学的影响。方法采用高脂饲料喂饲大鼠,构建高脂血症大鼠模型,通过血清生化分析确定造模成功。选择12只造模成功的大鼠,随机分成2组,即单独给药组和联合给药组,每组6只大鼠。单独给药组和联合给药组大鼠分别经尾静脉注射给予0.9%生理盐水和注射用七叶皂苷钠(0.5 mg/kg,qd),连续14 d。第14天,给药后,两组大鼠灌胃给予洛伐他汀(20 mg/kg,0.5%CMC-Na溶液),并于洛伐他汀给药前和给药后不同时间点采集血样,采用HPLC-MS/MS方法测定洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的血药浓度,计算药动学参数。结果长期给予七叶皂苷钠导致洛伐他汀酸的血浆暴露水平显著升高,Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别是单独给药组的2.43(90%CI:1.55,3.31)、2.66(90%CI:1.67,3.66)和2.99倍(90%CI:1.44,4.55),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与单独给药组相比,联合给药组洛伐他汀的血浆暴露也略有增加,但两组Cmax和AUC比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论七叶皂苷可抑制高脂血症模型大鼠的洛伐他汀代谢,增加其体内暴露水平。

血脂康胶囊中洛伐他汀不同处理方法对其生物利用度的影响

目的:探讨血脂康胶囊中洛伐他汀不同处理方法对其生物利用度的影响。方法:将血脂康胶囊中的洛伐他汀分别与无机盐、薄荷脑、甘油酯、卵磷脂复配,采用离体肠道穿透实验,研究各处理方法对洛伐他汀生物利用度的影响。结果:洛伐他汀与薄荷脑复配后的平均生物利用度最高;不同处理方法基本不产生基质效应,提取回收率均>90%,其中薄荷脑复配的回收率最高。相同处理方法下,不同温度洛伐他汀浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血脂康胶囊中的洛伐他汀分别与无机盐、薄荷脑、甘油酯、卵磷脂复配效果较好,可以提高药物成分的生物利用度,其中将洛伐他汀与薄荷脑复配的生物利用度最高。

甘草对高脂血症大鼠模型洛伐他汀药代动力学的影响

目的研究高脂血症大鼠模型中甘草对洛伐他汀药代动力学过程的影响。方法将18只SD大鼠随机分为对照组(n=6)和实验组(n=12)。实验组采用高脂饲料喂养大鼠,构建高脂血症大鼠模型,随机分为洛伐他汀单独给药组(n=6)和洛伐他汀与甘草联合给药组(n=6)。联合给药组给予甘草颗粒,单独给药组给予相应体积的生理盐水,连续7 d后,2组大鼠单剂量灌胃给予洛伐他汀胶囊(20 mg/kg,0.5%CMC-Na溶液)。分别于给药前和给药后不同时间点采集血浆样品,采用液相色谱-质谱联用方法测定血药浓度,计算药代动力学参数,并进行组间比较。结果长期给予甘草导致洛伐他汀代谢产物洛伐他汀酸在高脂血症大鼠中血浆暴露水平显著升高,联合给药组平均C_(max)较单独给药组升高约80%(P<0.05),而AUC0-t和AUC0-∞分别升高115%和109%(P=0.005和P=0.027)。联合给药组与单独给药组比较,洛伐他汀的C_(max)和AUC增加,但无统计学差异(P>0.05)。结论甘草可抑制洛伐他汀在高脂血症大鼠体内的代谢,增加其体内暴露水平。

一测多评法同时测定红曲茯苓片中洛伐他汀和洛伐他汀酸含量

目的:建立适于红曲茯苓片质量控制的洛伐他汀和洛伐他汀酸的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以洛伐他汀为对照,建立与其开环产物洛伐他汀酸的校正因子关系,同时对产品中洛伐他汀和洛伐他汀酸两种成分同时进行定量检测的一测多评方法。结果:阴性样品无干扰,样品检测方法的专属性良好,洛伐他汀和洛伐他汀酸在相应的线性范围内线性关系良好,R^(2)>0.9999,精密度和重复性RSD值均小于3%,加标回收率为在98.43%~103.18%之间。洛伐他汀对洛伐他汀酸的相对校正因子为0.9000;一测多评法测定三批红曲茯苓片中洛伐他汀酸的平均含量为0.3563 mg/g,外标法测定洛伐他汀酸的平均含量为0.3668 mg/g;洛伐他汀的平均含量为1.1113 mg/g,表明所构建的一测多评法可用于红曲茯苓片的多成分质量评价研究。结论:本研究建立的产品中洛伐他汀定量方法稳定准确,专属性强,为以红曲为原料的红曲茯苓片的质量控制和深度开发提供了科学依据。

RP-HPLC法测定洛伐他汀胶囊及片剂的含量

目的:建立洛伐他汀胶囊及片剂的HPLC含量测定方法,并同时考察了全国数批洛伐他汀胶囊及片剂的含量。方法:采用高效液相色谱法分析,色谱柱Agela C18柱(Venusil 4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:乙腈-0.01%磷酸(60∶40),流速:1.0mL.min-1,检测波长为238 nm。结果:洛伐他汀的回归方程为A=59 799.07+29 055.4C,r=0.999 9,线性范围4.88～305mg.L-1,胶囊平均回收率为100.20%,RSD为0.24%(n=9),片剂平均回收率为100.1%,RSD为0.3%(n=9)。结论:本方法准确、重现性好、操作简单,可有效地控制药品质量。

不同厂家洛伐他汀口服制剂溶出度比较

目的考察洛伐他汀胶囊（片）的溶出度及其体释药性质。方法照溶出度测定法[中国药典2005版二部附录XC溶出度试验法第一法（转篮法）]。以磷酸盐缓冲液．正丙醇（2：1）900mL为溶出介质。采用高效液相法测定．检测波长为238nm。结果洛伐他汀线性范围1．988μg·mL^-1-29．820μg·mL^-1，r=0．9998（n=7），回收率99．5％100．0％，RsD=0．4％-0．8％（n=9）。结论该方法简便、准确、灵敏，该制剂具有良好的溶出度。符合规定。

反相高效液相色谱法测定洛伐他汀胶囊的含量和有关物质

目的建立测定洛伐他汀胶囊含量及有关物质的反相高效液相色谱法。方法采用HypersilC18柱（250mm×4．6mm，10μm），以乙腈一磷酸盐缓冲液（pH=4．0）-甲醇（5：3：1）为流动相，检测波长为238nm。结果洛伐他汀质量浓度在80．63～322．53μg／mL范围与峰面积呈良好线性关系（r=0．9997，n=7），规格为10mg和20mg洛伐他汀的平均回收率分别为99．56％和99．67％，RSD分别为0．42％和0．83％（n=9）。洛伐他汀及其有关物质得到基线分离，方法的最低检测量为0．2ng，控制总杂质量不得超过2．0％。结论该法测定洛伐他汀胶裳的含量及有关物质，方法简便、快速、结果准确，专属性好，适用于洛伐他汀胶囊及其制剂的质量控制。

LC-MS/MS法测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的浓度。方法样品用乙酸乙酯∶二氯甲烷(体积比为1∶1)提取浓集后进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C18(50×3mm,3μm),流动相为乙腈-水(85∶15)。质谱采用ESI离子源MRM模式检测,以辛伐他汀为内标,按内标法定量。洛伐他汀、洛伐他汀酸和内标的检测离子对分别为质荷比(m/z)427.4→325.4、445.4→343.4和436.4→325.4。结果洛伐他汀在0.031～64μg/L范围内线性关系良好(r=0.9987),最低定量限为0.031μg/L,方法回收率在96%～102%之间,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.3%及9.3%。结论本文建立的方法准确、灵敏,可用于洛伐他汀血药浓度测定及药代动力学研究。

红曲中洛伐他汀总量的测定方法

考察降脂红曲产品的安全性和功效性 ,测定洛伐他汀的总量比仅仅测定其内酯含量更为可取。本文建立了测定红曲中洛伐他汀总量的方法 ,并对方法的可行性进行了验证。采用HPLC方法 ,色谱柱 :C18柱(2 5 0mm× 4 60mm) ;流动相 :甲醇 :水 (72 :2 8) ,检测波长 :2 3 8nm ;流速 :1 0ml min;柱温 :室温 ,方法回收率98 3 % ,RSD =0 3 3 %。

HPLC法对不同来源红曲中洛伐他汀的定量分析

采用硅胶柱预处理－ＨＰＬＣ对自制组曲Ｈ－１８及市售组曲中的洛伐他汀进行了定量分析， 线性范围 ０．６５～５７．２μｇ／ｍＬ，ｒ＝０．９９９９，加样回收率为９６．４％，ＲＳＤ＝３． ６８％。结果表明，各地产 红由商品药材中有 ７种洛伐他汀未测出或只有痕量，５种含量甚微（０．０８８～０．５５１μｇ／ｇ生药），而 自制组曲Ｈ－１８的洛伐他汀含量最高，达５μｇ／ｇ生药。

洛伐他汀对MCF-7细胞增殖分化功能及间隙连接细胞通讯的影响

背景与目的:洛伐他汀(lovastatin)是细胞内源性胆固醇合成的抑制剂,临床已普遍用于治疗高脂血症。现有研究报道,洛伐他汀具有抗肿瘤作用,但分子机制尚不清楚。本文探讨洛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7增殖功能以及间隙连接细胞通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)的影响。方法:分别以4、8、16μmol/L洛伐他汀处理MCF-7细胞24～72h后,流式细胞仪检测细胞周期的时相分布及细胞凋亡率,硝基蓝四氮唑(NBT)还原实验鉴定细胞分化,并采用划痕标记染料示踪技术观察洛伐他汀对MCF-7细胞GJIC功能的影响。结果:不同浓度洛伐他汀处理细胞不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受抑,抑制率最高可达75.8%,且同一处理时相点各组间比较差异均有显著性(P<0.05);细胞周期分析显示,各处理组内G0/G1期细胞明显增多,处理72h后可高达80%左右;同时洛伐他汀能明显促进MCF-7细胞分化、各处理组间比较差异均有显著性(P<0.01),但洛伐他汀诱导该细胞凋亡的作用不明显。另外,洛伐他汀有上调或恢复MCF-7细胞GJIC的作用;16μmol/L洛伐他汀处理细胞72h后,荧光染料传输的范围可达4～5层细胞。以上作用均有浓度-效应和时间依赖关系。结论:洛伐他汀可抑制MCF-7细胞增殖,使细胞生长阻滞于G0/G1期,并能促进细胞分化,该作用可能与洛伐他?

洛伐他汀对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期时相的影响

目的探讨洛伐他汀对人肾小球系膜细胞（HMC）增殖和细胞周期时相的影响及机制。方法用３H-TdR掺入量法测定HMC增殖水平，以流式细胞术测定HMC的细胞周期。结果洛伐他汀剂量依赖性抑制HMC增殖，从细胞周期水平，洛伐他汀可使HMC由G１期向S期的进展受阻，这些抑制作用可被外源甲羟戊酸和法呢醇恢复。结论洛伐他汀是HMC增殖的抑制剂，本研究为重新认识和评价他汀类药物在治疗肾脏疾病中的作用提供了一定的理论及实验依据。

洛伐他汀、普罗布考对小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察不同剂量下洛伐他汀和普罗布考对巨噬细胞源性泡沫细胞中胆固醇含量的影响 ,借此进一步探讨药物在促进胆固醇外流中的作用。方法 离体培养小鼠腹膜巨噬细胞 ,利用氧化的低密度脂蛋白蓄积胆固醇形成泡沫细胞 ,给予不同剂量的洛伐他汀与普罗布考后 ,利用高效液相方法测定细胞内胆固醇的含量。结果 模型组胆固醇酯(CE)的含量和胆固醇酯 /总胆固醇 (CE/TC)比值均较正常组和血清对照组升高 ,且CE/TC >5 0 % ,提示泡沫细胞模型建立成功。洛伐他汀可明显减少泡沫细胞内TC、CE含量 ,降低CE/TC比值 ,且有一定剂量依赖性。普罗布考可明显减少泡沫细胞内TC、CE含量 ,但无剂量依赖性 ,对CE/TC比值亦无明显影响。结论 洛伐他汀可促进泡沫细胞内胆固醇外流、降低细胞内胆固醇含量 ,减轻泡沫细胞化。普罗布考可降低细胞内胆固醇含量但对泡沫细胞化的影响不明显。

洛伐他汀对颈动脉粥样硬化斑块、血脂及血清C-反应蛋白水平的影响

目的观察洛伐他汀对脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块、血脂及血清C-反应蛋白(CRP)水平的影响。方法120例脑梗死合并颈动脉粥样硬化斑块患者随机分为洛伐他汀组和对照组。两组在低脂饮食的基础上,洛伐他汀组口服洛伐他汀20mg每日1次,共6个月;观察两组治疗8周及6个月时颈动脉粥样硬化斑块积分、血清CRP及血脂水平的变化。结果(1)治疗6个月时,洛伐他汀组颈动脉粥样硬化斑块积分(4.20±3.77)明显低于治疗前(4.77±2.31)及对照组(6.86±1.89)(均P<0.05);(2)治疗8周时,洛伐他汀组血清CRP水平[(6.37±2.16)mg/L]明显低于治疗前[(16.35±5.18)mg/L]及对照组[(16.30±4.84)mg/L](均P<0.05);(3)与治疗前及对照组比较,治疗8周及6个月时,洛伐他汀组血总胆固醇、三酰甘油及低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低,高密度脂蛋白胆固醇明显升高(均P<0.05)。结论长期服用洛伐他汀可稳定甚至缩小颈动脉粥样硬化斑块,降低CRP及血脂水平,有助于预防脑卒中复发。

红曲霉固态发酵生产洛伐他汀的研究

通过对红曲霉固态发酵生产洛伐他汀发酵过程的观察，对发酵过程中菌体生长、洛伐他汀的积累、物料含水量及重量等性质的变化有了初步的认识，得出了发酵周期为１２ｄ，影响固态发酵的两个关键参数的最适值：物料厚度为４．５ｃｍ，初始含水量５０％。发现固态发酵较液体发酵有明显优势，在我们的实验条件下固态发酵洛伐他汀的产率为液体发酵的２０倍以上。选择乙醇为浸取洛伐他汀的初始溶剂，并确定了其最适浓度为７０％。