骨髓分化因子88通过核因子-κB/活化蛋白-1信号通路调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨骨髓分化因子88(MyD88)在结直肠癌发生发展中的功能和潜在机制。方法在SW480细胞中稳定敲低MyD88。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell和划痕实验检测结直肠癌细胞的迁移能力;采用Transwell实验分析结直肠癌的侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析MyD88的潜在调控机制。结果实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot结果显示,本研究在结直肠癌细胞中成功敲低了MyD88的表达。结直肠癌细胞中MyD88的降低可以显著抑制细胞的生长和侵袭。进一步研究发现,在结直肠癌细胞中敲低MyD88可以显著抑制MyD88-NF-κB/AP-1信号通路的表达。结论MyD88基因在结直肠癌的发生发展中起着重要的作用,有望成为结直肠癌的潜在的诊断和预后生物标志物。

三七皂苷对肾小管上皮细胞内活化蛋白-1和肝细胞生长因子表达的影响

目的探讨三七皂苷干预肾小管间质损害的效果及机制。方法体外培养人类近端肾小管上皮细胞,用三七皂苷等干预后,采用ELISA法检测活化蛋白-1和肝细胞生长因子。结果三七皂苷尤其是三七皂苷联合缬沙坦能抑制活化蛋白-1的分泌和促进肝细胞生长因子的分泌。结论三七皂苷尤其是联合血管紧张受体拮抗剂可通过抑制活化蛋白-1的分泌和促进肝细胞生长因子的表达,从而减少纤维连接蛋白、转化生长因子-β1的分泌,以减缓肾小管间质纤维化进程。

非小细胞肺癌组织中活化蛋白-1、多瘤促活化因子表达对患者预后的影响

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中活化蛋白-1(AP-1)、多瘤促活化因子(PEA3)表达情况对患者预后的影响。方法收集75例NSCLC患者肺癌组织及距癌组织> 5 cm处癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法(SP)检测肺癌组织及癌旁组织中AP-1、PEA3蛋白表达水平,分析其表达与NSCLC患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法分析AP-1、PEA3表达与NSCLC患者预后的关系,并对NSCLC患者不良预后的危险因素进行Cox回归分析。结果肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达与患者吸烟史、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及胸膜转移有关(P <0.05)。肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达患者5年总生存率均低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P <0.05)。TNM分期高、胸膜转移、肺癌组织AP-1蛋白阳性表达、PEA3蛋白阳性表达是NSCLC患者不良预后的独立危险因素(P <0.05)。结论肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达会影响NSCLC患者的预后,对NSCLC预后评估可能具有临床指导意义。

活化蛋白-1和cAMP反应元件结合蛋白在脂多糖注射大鼠肺组织中的变化及地塞米松的影响

目的探讨活化蛋白-1(AP-1)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在急性肺损伤(ALI)发生发展中的可能作用,以及地塞米松的抗炎作用机制。方法采用脂多糖(LPS)5mg/kg颈静脉注射复制ALI大鼠模型,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)观察ALI大鼠肺组织AP-1和CREB的改变和地塞米松的影响。结果ALI大鼠肺组织AP-1的DNA结合活性在2h达到峰值,12h后接近正常水平。CREB的活性在1h即到达峰值,但直到12h并未完全达到正常水平。地塞米松对AP-1和CREB的DNA结合活性均有显著抑制作用。结论AP-1和CREB可能在大鼠的急性肺损伤的发生中发挥重要作用,在转录水平的调节可能是糖皮质激素发挥抗炎作用的重要机制之一。

阿托伐他汀对活化蛋白-1和转化生长因子-β_1在糖尿病大鼠肾组织表达的影响

目的:研究活化蛋白-1(AP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在糖尿病大鼠肾脏中的分子机制以及阿托伐他汀对它们的影响。方法:大鼠随机分成3组:正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病阿托伐他汀治疗组(DA组)。免疫组织化学法检测各组肾组织AP-1(c-jun)、TGF-β1及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)的表达,生化法测定各组血糖、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及24h尿蛋白。结果:DM组AP-1的活性和TGF-β1的表达明显高于C组(P<0.01),阿托伐他汀抑制AP-1活性(P<0.05)、降低TGF-β1和FN的表达(P<0.01)、减少24h尿蛋白排泄(P<0.05)、改善肾功能指标及肾组织病理学损害。结论:AP-1在糖尿病肾病发生发展中具有重要作用,阿托伐他汀对AP-1和TGF-β1活性的抑制可能是其非降脂性肾脏保护作用的诸多机制之一。

降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区活化蛋白-1 DNA结合活性的影响

探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对活化蛋白 - 1(AP - 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法 采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP - 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果 ①缺血再灌 3h ,CGRP能不同程度的增加AP - 1的结合活性 ,其中C4.0组较NS组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,C2 .0组也有增强 ,活性由假手术组的 2 .7倍增加为 3 .1倍 ,但较NS组无显著性差异。同时CGRP能不同程度的减轻再灌 72h和 7d的神经元损伤 ,CA1区存活细胞数目较NS组明显增加 (P <0 .0 5 )。结论 CGRP能明显提高缺血后海马CA1区AP - 1的DNA结合活力 ,CGRP的神经保护作用可能与其调节AP -

苯并(a)芘通过活化蛋白-1非依赖性通路诱导细胞中p53蛋白过表达及高磷酸化

目的探讨苯并(a)芘[B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白、p53磷酸化水平及亚细胞分布和活化蛋白-1(AP-1)活性的改变,以及p53与AP-1的上下游关系。方法转染p53小干扰RNAp53 siRNA质粒(p53-H)、载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)和转染AP-1荧光报告质粒的HELF细胞(AP-H)无血清培养48h后,加入2μmol/L B(a)P作用24h,用Western blot及免疫荧光法检测细胞中p53蛋白及p53磷酸化的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位,用荧光检测法检测AP-1的相对活性。用AP-1的化学抑制剂curcumin抑制其活性,用p53的化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察了二者的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P作用24h后细胞内p53蛋白及p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平增加,并且主要分布在细胞核内;AP-1的活性增加。抑制AP-1活性后,对B(a)P诱导的p53蛋白含量增加没有明显的影响;抑制p53表达后,对B(a)P诱导的AP-1活性的增加没有明显影响。结论B(a)P通过AP-1非依赖的信号通路引起人胚肺成纤维细胞p53蛋白含量的增加。

转录因子活化蛋白-1在颞叶癫痫模型小鼠海马的表达变化

目的:观察转录因子活化蛋白-1(transcription factor activator protein-1,AP-1)在海人酸(Kainic acid,KA)致癫痫模型小鼠海马的表达变化。方法:雄性C57小鼠32只随机分为对照组(8只)和模型组(24只),模型组再依据造模后小鼠处死时间分成3、8、24小时共3组。采用KA侧脑室注射建立癫痫动物模型,模型建立成功后观察癫痫发作情况,采用RT-PCR检测小鼠造模后各时间点海马AP-1 mRNA转录情况,Western blot法测定小鼠造模后各时间点AP-1的含量,并与对照组比较。采用免疫组化检测小鼠造模后各时间点AP-1在海马的表达分布情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠海马AP-1蛋白含量在癫痫发作后3小时即上升(P<0.05),8小时达高峰(P<0.01),24小时已有所降低(P<0.05)。RT-PCR、免疫组化、行为学结果均呈正相关(P<0.05)。结论:致痫小鼠脑内存在AP-1上升,可能进一步引发中枢炎症反应,成为癫痫发病重要机制之一。

类固醇受体辅活化子-3基因敲除对炎症反应中活化蛋白-1的影响

目的 观察类固醇受体辅活化子（SRC）-3基因敲除对脂多糖（LPS）诱导的炎症反应中活化蛋白-1（AP-1）表达水平及活性的影响.方法 健康清洁野生型（SRC-3＋/＋）小鼠、SRC-3基因敲除（SRC-3-/-）小鼠各20只,雌性,体质量约20 g,分为SRC-3＋/＋组和SRC-3-/-组,每组设正常（N）、1 h、4 h、12 h四个时相点,每个时相点各5只小鼠.采用腹腔注射5 mg/kg体质量LPS构建炎症反应动物模型,Western blot测定肝、脾组织c-Jun、c-Fos的蛋白表达.结果 SRC-3＋/＋组、SRC-3-/-组小鼠肝、脾组织在LPS刺激后c-Jun、c-Fos蛋白表达水平均显著增加,在相应时相点SRC-3-/-组小鼠显著低于SRC-3＋/＋组.LPS刺激后1、4 h两组小鼠肝组织c-Jun核转位程度显著增加,且SRC-3-/-组仅在1 h显著低于SRC-3＋/＋组 两组脾组织c-Jun、肝脾组织c-Fos核转位在所有时相点均显著增加,但在相应时相点SRC-3-/-组小鼠均显著低于SRC-3＋/＋组.结论 LPS刺激后引起AP-1的表达和活性显著增加,SRC-3蛋白缺失可部分抑制AP-1的表达及活性,这可能与致炎细胞因子合成释放减少有关.

活化蛋白-1在膳食牛磺酸防护视网膜光损伤中的表达变化

目的探讨膳食牛磺酸防护视网膜光化学损伤的分子机制。方法30只Sprague-Dawley大鼠饲以AIN-93标准饲料或补充4%牛磺酸膳食干预15d,给予(3000±200)lux的持续光照24h,形态测量法观察视网膜外核层厚度,电生理法检测视网膜功能,Western blot或免疫组织化学法检测活化蛋白-1(actor protein-1,AP-1)亚单位c-fos/c-jun蛋白表达,荧光定量PCR法检测其mRNA表达。结果光照能降低视网膜外核层厚度,降低视网膜电图a波和b波的幅度,升高AP-1蛋白和mRNA的表达,4%膳食牛磺酸在转录和翻译水平下调AP-1的表达,有效防护视网膜光化学损伤。结论转录因子AP-1在膳食牛磺酸防护视网膜光损伤中发挥着重要作用。

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏活化蛋白-1表达的影响

目的:研究活化蛋白-1(AP-1)在糖尿病大鼠肾脏中的分子机制,探讨辛伐他汀对AP-1的影响及机制。方法:大鼠随机分成正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)和辛伐他汀治疗组(DS组),用原位杂交方法检测各组肾组织AP-1(c-jun mRNA)的表达,免疫组织化学法检测各组肾组织巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)及纤维连接蛋白(FN)的表达,生化法测定各组血糖、总胆固醇、甘油三酯、肌酐及24 h尿蛋白。结果:DM组AP-1的活性和MIP-1α的表达明显高于C组(P<0.01),DS组AP-1活性降低、MIP-1α和FN低表达(P<0.01)、24 h尿蛋白排泄减少(P<0.01)、改善肾功能指标及肾组织病理学损害。结论:AP-1在糖尿病肾病发生发展中具有重要作用,辛伐他汀抑制AP-1活性可能是其非降脂性肾脏保护的机制之一。

活化蛋白-1在急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠海马的表达变化

目的:观察急性一氧化碳中毒后不同时间点大鼠海马AP-1的表达变化。方法:腹腔注射一氧化碳的方法制备一氧化碳中毒迟发性脑病模型,HE染色观察大鼠海马区病理变化,免疫组化及Western blot法检测AP-1的表达水平,TUNEL染色计数海马CA1区凋亡神经元。结果:HE染色,空气组(AC组)、空白组(BC组)各时间点海马区细胞形态正常;一氧化碳组(CO组)海马区细胞肿胀、细胞数目减少,排列紊乱,细胞间隙扩大,细胞核碎裂、深染、固缩。免疫组化:CO组各时间点AP-1表达量均高于AC组及BC组,3 d达峰值,组内第3天与其余各时间点比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot:AP-1表达在时间分布趋势上与免疫组化结果一致。TUNEL染色:CO组各时间点凋亡指数均较AC组、BC组多,于毒染后7 d达高峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大鼠海马区AP-1表达增高,可能进一步导致细胞凋亡和炎症免疫反应,成为DEACMP发病的重要机制之一。

活化蛋白-1在神经系统疾病中的研究进展

活化蛋白-1(AP-1)是一类二聚体的反式调节因子,其作用十分广泛,对细胞的增殖、存活和凋亡等重要生理过程具有调控作用。许多体内外实验均证实,AP-1与脑血管疾病、神经退行性疾病、癫痫和脑胶质瘤等神经系统常见疾病有密切联系。本文就AP-1的组成、调节及其与以上疾病的关系作简要综述。

非甾体类抗炎药经转录活化蛋白-1及核因子-κB信号传导通路抑制结肠癌细胞生长

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2抑制剂(COX-2)对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及其作用的信号传导通路。方法采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;免疫印迹技术检测非甾体类抗炎药对结肠癌细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)/磷酸化(p)ERK、核因子(NF)-κBp65的表达影响;用凝胶迁移电泳技术分析阿司匹林及塞来昔布对结肠癌细胞转录活化蛋白(AP)-1及NF-κB结合活性的影响。结果阿司匹林及塞来昔布均能有效抑制体外培养的结肠癌细胞生长,并具良好的量-效关系。阿司匹林及塞来昔布不同程度下调结肠癌细胞COX-2、pERK及NF-κBp65的表达水平,但不影响总ERK-1表达。凝胶迁移电泳分析表明,20%血清或肿瘤坏死因子-α能刺激结肠癌细胞AP-1及NF-κB结合活力,阿司匹林及塞来昔布能有效抑制HT-29细胞AP-1及NF-κB活化。塞来昔布能有效抑制SW480细胞AP-1及NF-κB活化,阿司匹林仅对SW480细胞AP-1活性有抑制作用,而对NF-κB活性的影响不明显。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,其作用机制与抑制结肠癌AP-1及NF-κB信号传导通路有关。

ERK和JNK/活化蛋白-1通路在苯并(a)芘诱导人胚肺成纤维细胞周期改变中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/转录因子活化蛋白-1(AP-1)信号通路在调控苯并(a)芘[B(a)P]致人胚肺成纤维细胞(HELF)周期改变中的作用。方法用AP-1荧光素酶报告基因技术检测AP-1荧光素酶活力,流式细胞术测定细胞周期时相分布,免疫印迹法检测MAPK[包括细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38激酶]总量及磷酸化水平,用MAPK显性失活突变体(DN)(DN-ERK2、DN-JNK1和DN-p38)证明通路的上下游关系。结果2μmol/L B(a)P分别处理细胞0、6、122、4 h,AP-1活力在12 h达峰值,是对照组的2.22倍,差异有统计学意义(P<0.05);ERK1/2、JNK1/2和p38蛋白激酶的磷酸化水平明显提高,分别是对照组的2.5、14.0和2.1倍;B(a)P处理组S期细胞比例(50.2%±4.6%)与对照组(16.7%±8.1%)相比明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);ERK2和JNK1显性失活突变体的过表达均可明显降低B(a)P诱导的AP-1活力增强,并且明显降低B(a)P处理组S期细胞比例(分别为33.3%±1.7%,30.8%±3.9%),差异均有统计学意义(P<0.05);p38显性失活突变体的过表达对B(a)P引起的AP-1活力增强及S期细胞比例增加无影响。AP-1化学抑制剂姜黄素(20μmol/L)可明显降低B(a)P引起的S期细胞比例增加(13.6%±2.9%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERK和JNK通过活化AP-1介导B(a)P诱导的细胞周期改变;而B(a)P诱导的AP-1活力增强及细胞周期改变与p38无关。

急性冠状动脉综合征患者外周血单个核细胞核因子-κB和糖皮质激素受体及活化蛋白-1的表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)、糖皮质激素受体(GR)和活化蛋白-1(AP-1)的核内蛋白水平的变化与急性冠状动脉综合征(ACS)的关系。方法初步诊断为冠心病并行选择性冠状动脉造影患者共52例。其中急性心肌梗死(AMI)14例,不稳定型心绞痛(UAP)14例;稳定型心绞痛(SAP)患者13例,冠状动脉造影正常者11例。采用Western-blot法检测外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB、GR和AP-1蛋白表达水平的变化。结果 ACS组NF-κBp65、c-Jun/AP-1蛋白表达水平较SAP组和对照组明显增高(P<0.05);ACS组GR-α蛋白表达水平较SAP组和对照组明显降低(P<0.05)。结论 ACS患者与SAP患者比较,存在NF-κB、AP-1的激活和GR的抑制。

活化蛋白-1和巨噬细胞炎性蛋白-1α在实验性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸的影响

目的研究活化蛋白(AP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α在佐剂性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸(SA)对它们的影响。方法随机将大鼠分成4组:正常对照组(NC组)、模型组(M组)、SA1组(腹腔注射SA0.5mg·kg-·1d-1)、SA2组(腹腔注射SA1.0mg·kg-1·d-1)。免疫组织化学检测各组C-fos、MIP-1α的表达;生化法测C反应蛋白。结果NC组未见C-fos和MIP-1α表达,M组C-fos及MIP-1α大量表达(P<0.05),C反应蛋白水平升高(P<0.01);与M组比较,SA1组及SA2组C-fos、MIP-1α表达降低(P<0.05),C反应蛋白水平下降(P<0.01),且SA2组更明显。结论AP-1和MIP-1α在大鼠佐剂性关节炎发生发展具有重要作用;亚砷酸能下调AP-1和MIP-1α的表达,降低CRP的水平,提示亚砷酸对RA有一定的治疗作用。

凋亡蛋白酶活化因子-1和星形细胞上调基因-1在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和星形细胞上调基因-1(AEG-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法选取2015年9月至2017年12月于新余市人民医院行胃癌切除术及病理证实的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法测定胃癌及癌旁组织中Apaf-1、AEG-1表达水平,分析Apaf-1、AEG-1表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及Apaf-1与AEG-1表达水平的相关性。结果癌旁组织中Apaf-1阳性表达率(78.00%)高于胃癌组织(20.00%),胃癌组织中AEG-1阳性表达率(82.00%)明显高于癌旁组织(26.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Apaf-1、AEG-1表达水平均与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关;经Spearman相关性分析结果显示,胃癌组织中Apaf-1表达水平与AEG-1表达水平呈显著负相关(r<0,P<0.05)。结论胃癌组织中AEG-1呈高表达,Apaf-1呈低表达,二者与胃癌的疾病进展密切相关,Apaf-1和AEG-1的肿瘤基因检测可能成为治疗胃癌的新靶点,具有较高的研究价值。

MiR-30a-5p靶向成纤维蛋白-1抑制胰腺导管腺癌增殖和迁移作用

目的 探讨microRNA-30a-5p (miR-30a-5p)对胰腺导管腺癌(PDAC)细胞增殖和迁移的影响及对成纤维细胞活化蛋白-1 (FAP-1)的调控作用。方法 反转录聚合酶链反应、免疫印迹法分别检测PDAC细胞及胰腺正常细胞中miR-30a-5p和FAP-1的表达。生物信息学网站预测miR-30a-5p、FAP-1基因存在结合位点,FAP-1在正常细胞与癌细胞表达存在差异;miR-30a-5p模拟物、抑制物,阴性对照物转染PDAC细胞系,反转录聚合酶链反应检测转染效率,蛋白质印迹法检测FAP-1的蛋白表达水平;CCK-8法检测PDAC细胞的增殖;划痕实验、细胞迁移实验检测PDAC细胞的迁移作用。结果 MiR-30a-5p在胰腺正常细胞系中的表达高于PDAC细胞系(P<0.05);FAP-1在胰腺正常细胞系中的表达低于PDAC细胞系(P <0.05)。MiR-30a-5p、FAP-1基因有连接位点,转染miR-30a-5p模拟物后miR-30a-5p表达量增高,FAP-1的表达量显著降低(P <0.05),PDAC细胞的增殖和迁移能力下降(P <0.05);转染miR-30a-5p抑制物后miR-30a-5p表达量降低,FAP-1的表达量显著增加(P <0.05),PDAC细胞增殖和迁移能力增强(P <0.05)。FAP-1、miR-30a-5p与胰腺癌患者临床病理特征之间的关系表明:FAP-1与肿瘤TNM分期相关,FAP-1与饮酒习惯相关;miR-30a-5p与肿瘤TNM分期相关(P <0.05)。结论 MiR-30a-5p可能靶向抑制FAP-1蛋白,抑制PDAC增殖、迁移。

雷公藤甲素抑制核因子-κB、活化蛋白-1 DNA结合活性的作用

目的探讨雷公藤甲素(TP)对T细胞转录因子核因子-κB(NF-κB)和活化蛋白-1(AP-1)的DNA结合活性的作用。方法通过凝胶电泳迁移试验(EMSA)检测TP对伴刀豆球蛋白A(ConA)或佛波脂(PMA)刺激活化的人T细胞NF-κB、AP-1的DNA结合活性的影响。结果正常T细胞NF-κB、AP-1的DNA结合活性较弱,经ConA或PMA刺激后结合活性增强,TP可降低NF-κB、AP-1的DNA结合活性。结论 TP抑制NF-κB、AP-1的DNA结合活性,可能是其免疫抑制作用的重要机制。