活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用

目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。

重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响

目的研究重组人生长激素(rhGH)对THP1单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响。方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达。结果与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P<0.01);rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P<0.01)。同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达。结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性。

长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2/微小RNA-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1轴在食管癌细胞紫杉醇耐药中的作用机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)/微小RNA(miR)-30c-5p/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)轴在食管癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用机制。方法:构建EC109/PTX细胞,检测食管癌组织和癌旁正常组织,以及食管癌细胞EC109和KYSE150细胞、食管上皮细胞SHEE和EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达。取生长良好的EC109/PTX细胞,分为沉默(siRNA)DLEU2组、阴性对照(siRNA NC)组、siRNA DLEU2+miR-30c-5p抑制剂(inhibitor)组、siRNA DLEU2+inhibitor NC组、siRNA DLEU2+过表达(pcDNA)MAPK1组、siRNA DLEU2+pcDNA NC组和空白组。验证miR-30c-5p与DLEU2、MAPK1的靶向关系。检测各组EC109/PTX细胞DLEU2、miR-30c-5p、MAPK1 mRNA表达水平。检测EC109/PTX细胞活性、凋亡情况及对PTX的耐药性。检测谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、MAPK1、P-蛋白(P-gp)蛋白表达水平。结果:食管癌组织和EC109/PTX细胞miR-30c-5p表达降低,DLEU2、MAPK1 mRNA表达增加(均P<0.05)。DLEU2靶向调控miR-30c-5p,miR-30c-5p靶向调控MAPK1。siRNA DLEU2组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA NC组、空白组增加,DLEU2和MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、药物半数抑制浓度(IC 50)以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达降低(均P<0.05)。siRNA DLEU2+miR-30c-5p inhibitor组miR-30c-5p表达和细胞凋亡率较siRNA DLEU2+inhibitor NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。siRNA DLEU2+pcDNA MAPK1组细胞凋亡率较siRNA DLEU2+pcDNA NC组降低,MAPK1 mRNA表达、细胞增殖率、IC 50以及GST-π、MAPK1、P-gp蛋白表达增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA DLEU2可减弱EC109/PTX细胞对PTX的耐药性,可能与调控miR-30c-5p/MAPK1轴有关。

醋酸去氨加压素对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在大鼠耳蜗的表达及功能研究

目的检测醋酸去氨加压素(deamino arginine vasopressin,DDAVP)作用后丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase,MKP-1)在大鼠耳蜗组织的表达情况,探讨MKP-1是否参与梅尼埃病的发生。方法选取SPF级雄性SD大鼠20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组腹腔注射DDAVP,对照组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。造模结束后行听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力,苏木精-伊红染色观察耳蜗形态变化,免疫组织化学及蛋白质免疫印迹检测MKP-1在耳蜗的表达位置及定量分析。结果实验组ABR阈值较造模前上升约10 dB,差异有统计学意义(P<0.01);实验组耳蜗切片苏木精-伊红染色出现膜迷路积水表现,实验组积水率达80%;免疫组织化学显示,MKP-1广泛表达于血管纹、螺旋韧带、螺旋缘、柯蒂器、以及螺旋神经节。两组血管纹、螺旋韧带及螺旋神经节表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);两组SLM和OC表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质免疫印迹显示,实验组MKP-1表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论DDAVP可能通过下调MKP-1促进膜迷路积水形成,进而参与梅尼埃病的发病过程。

转录活化蛋白1反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响

目的探讨转录活化蛋白1(signaltransducerandactivatoroftranscription1,STAT1)反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响。方法取Wistar大鼠10只,随机分为博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各5只,分别向气管内灌注BLM和NS后7d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),并将BLM组的AM分为STAT1反义寡核苷酸(ASON)组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(DEX)组和空白对照组,分别加入ASON、SON、DEX(空白对照组只加培养基)后培养36h,收集培养的条件上清液和细胞;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测AM的STAT1、细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)mRNA和蛋白表达水平;将条件上清液加入肺成纤维细胞中继续培养30h,用3氢标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)检测肺成纤维细胞的增殖情况,用对二甲氨基苯甲醛法检测肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸情况。结果(1)经ASON处理后,AM的STAT1mRNA表达明显降低(31·8±3·5),与空白对照组(65·5±4·6)、SON组(64·2±4·3)、DEX组(44·1±4·6)比较差异有统计学意义(P<0·05);与SON组和空白对照组比较,DEX处理后的AM的STAT1mRNA表达也明显降低,差异有统计学意义(P<0·05);而空白对照组和SON组AM的STAT1mRNA表达比较差异却无统计学意义(P>0·05);NS组AM的STAT1mRNA表达(14·9±3·1)又明显低于空白对照组、ASON组、SON组、DEX组,差异有统计学意义(P<0·05)。(2)AM的ICAM-1mRNA表达与STAT1mRNA表达的变化一致。(3)ASON组(4·4±0·6)、NS组(3·7±0·4)AM的STAT1蛋白表达均明显低于空白对照组(7·6±0·6)、SON组(7·7±0·7)、DEX组(5·9±0·4),P均<0·05;DEX组的STAT1蛋白表达明显低于空白对照组和SON组(P<0·05);而空白对照组和SON组的STAT1蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0·05)。(4)AM的ICAM-1蛋白表达、肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸的能力和增殖情况与AM的STAT1蛋白表达的变化一致。结论STAT1反义寡核苷酸能抑制AM内STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达;STAT1反义寡核苷酸处理AM后的培养条件上清液能引起肺成纤维细胞的增殖能力及分泌羟脯氨酸的能力明显下降。

风湿性心脏病乳头肌TGF-β1和活化蛋白-1表达的意义

目的 探讨转化生长因子 - β1( TGF- β1)和活化蛋白 -1( AP- 1)在风心病心肌纤维化中的作用 .方法 取风心病二尖瓣乳头肌 ,以成人及胎儿正常乳头肌为对照 ,以 HE和Masson染色对心肌进行病理形态学观察 ,免疫组化染色观察TGF-β1和 AP- 1在心肌中的表达 ,用图像分析仪定量分析 .结果 风心病心肌间质胶原明显增生 ,呈网格状包绕心肌细胞 ,心肌内小血管内膜增生 ,管腔狭窄甚至闭塞 .TGF- β1和 AP- 1在风心病及胎儿心肌中表达阳性 ,在正常心肌中表达弱阳性或阴性 ;二者在病变心肌中的表达强度均与心肌纤维化面积呈显著正相关 ( r分别为 0 .8174和 0 .6 82 1,P<0 .0 1) .结论 TGF- β1和 AP-

刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡

目的检测刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白17(rhoptry protein 17,ROP17)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的调控作用。方法将重组质粒p3×Flag-CMV-14/Tg ROP17和p3×Flag-CMV-14空质粒(对照组)转染J774A.1细胞后,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,通过流式细胞术和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP17对细胞凋亡的调控作用,检测c-Jun磷酸化水平及活化形式的半胱天冬酶3(Caspase 3)、Bcl-2、Bcl-x L和Bcl-3等凋亡相关蛋白的表达情况。J774A.1细胞共转染p3×FlagCMV-14/Tg ROP17和c-Jun sh RNA,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,Western blotting检测ROP17对凋亡的调控作用及凋亡相关蛋白Bcl-3的表达。结果流式细胞术显示,过表达ROP17组细胞凋亡率为(3.73±0.51)%,明显低于对照组的(7.78±1.10)%(P<0.05)。Western blotting结果显示,过表达ROP17组磷酸化c-Jun蛋白相对表达量为0.196±0.028,对照组为0.075±0.010(P<0.05);Bcl-3相对表达量为0.461±0.063,对照组为0.108±0.013(P<0.05)。活化形式的Caspase 3相对表达量为0.015±0.004,对照组为0.174±0.026(P<0.05)。Bcl-2在过表达ROP17组和对照组中的相对表达量分别为0.119±0.013和0.117±0.018,Bcl-x L则分别为0.124±0.015和0.121±0.023,差异均无统计学意义(P>0.05)。在c-Jun sh RNA有效抑制c-Jun及其磷酸化表达的条件下,活化形式的Caspase 3在RNA干扰组和对照组的相对表达量分别为0.147±0.024和0.087±0.010(P<0.05),Bcl-3则分别为0.085±0.010和0.162±0.011(P<0.05)。结论ROP17抑制IFN-γ诱导的J774A.1细胞凋亡依赖于c-Jun的磷酸化及Bcl-3的表达。

CD154在B细胞活化蛋白1信号系统活化中的作用

B淋巴细胞表面的CD40分子和其配体（CD154）相互作用是B细胞活化的辅助刺激信号，可诱导活化蛋白1（AP-1）信号通路中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），即JNK、ERK和P38活化，进一步促使下游AP-1转录因子向细胞核内转移，启动与炎症反应和细胞凋亡等相关基因的转录。MAPK活化是自身免疫病的发病机制之一，因此，研究CD40-CD154如何活化AP-1信号系统，

沉默含IQ结构域的三磷酸鸟苷激酶活化蛋白1可提高食管鳞状细胞癌细胞对顺铂的敏感性

研究发现具有IQ结构域的GTP激酶活化蛋白1（IQGAP1）过表达与食管鳞状细胞癌的侵袭转移密切相关。

三七皂苷对肾小管上皮细胞内活化蛋白-1和肝细胞生长因子表达的影响

目的探讨三七皂苷干预肾小管间质损害的效果及机制。方法体外培养人类近端肾小管上皮细胞,用三七皂苷等干预后,采用ELISA法检测活化蛋白-1和肝细胞生长因子。结果三七皂苷尤其是三七皂苷联合缬沙坦能抑制活化蛋白-1的分泌和促进肝细胞生长因子的分泌。结论三七皂苷尤其是联合血管紧张受体拮抗剂可通过抑制活化蛋白-1的分泌和促进肝细胞生长因子的表达,从而减少纤维连接蛋白、转化生长因子-β1的分泌,以减缓肾小管间质纤维化进程。

非小细胞肺癌组织中活化蛋白-1、多瘤促活化因子表达对患者预后的影响

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中活化蛋白-1(AP-1)、多瘤促活化因子(PEA3)表达情况对患者预后的影响。方法收集75例NSCLC患者肺癌组织及距癌组织> 5 cm处癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法(SP)检测肺癌组织及癌旁组织中AP-1、PEA3蛋白表达水平,分析其表达与NSCLC患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法分析AP-1、PEA3表达与NSCLC患者预后的关系,并对NSCLC患者不良预后的危险因素进行Cox回归分析。结果肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达与患者吸烟史、分化程度、TNM分期、淋巴结转移及胸膜转移有关(P <0.05)。肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达患者5年总生存率均低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P <0.05)。TNM分期高、胸膜转移、肺癌组织AP-1蛋白阳性表达、PEA3蛋白阳性表达是NSCLC患者不良预后的独立危险因素(P <0.05)。结论肺癌组织中AP-1、PEA3蛋白阳性表达会影响NSCLC患者的预后,对NSCLC预后评估可能具有临床指导意义。

蛋白酶活化受体-1在鼻咽癌中的表达及意义

目的检测PAR1在鼻咽癌中的表达,探讨PAR1在鼻咽癌中表达的意义。方法免疫组织化学(SP法)检测28例良性鼻咽组织、61例鼻咽癌组织中PAR1中的表达;采用RT-PCR、Western Blot检测鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2中PAR1表达并比较其表达差异。结果PAR1在鼻咽癌组织及两种鼻咽癌细胞株中均表达。PAR1在28例良性鼻咽组织表达为10例,61例鼻咽癌组织中表达48例。PAR1在鼻咽癌组织中的表达率明显高于在良性鼻咽组织中的表达率(P<0.01),高度恶性细胞株中PAR1的表达明显高于其低度恶性细胞株。结论PAR1的表达与鼻咽癌的发生、生长方式、分期、恶性程度等有关。PAR1在鼻咽癌中的表达可能介导鼻咽癌侵袭转移等恶性生物学行为。

急性冠脉综合征患者血小板蛋白酶活化受体-1的表达及普伐他汀体外干预的影响

目的:观察急性冠脉综合征(ACS)患者血小板蛋白酶活化受体-1(PAR-1)的表达,探讨普伐他汀对血小板PAR-1表达的影响。方法:临床研究共纳入110例研究对象,分为急性冠脉综合征(ACS)组、稳定型心绞痛组和正常对照组,通过ELISA方法检测富血小板血浆PAR-1的表达。体外研究给予不同浓度普伐他汀干预及ADP刺激AMI患者和正常对照者血小板,采用流式细胞仪检测血小板PAR-1和LOX-1表达的变化。结果:ACS组PAR-1浓度显著高于稳定型心绞痛组和正常对照组;稳定性心绞痛组PAR-1浓度显著高于正常对照组。体外研究证实普伐他汀呈浓度依赖的方式抑制ADP诱导的血小板PAR-1和LOX-1表达。结论:ACS患者血小板表达PAR-1明显增加,普伐他汀体外干预能明显降低ADP诱导的进一步血小板PAR-1的表达。

阿托伐他汀对活化蛋白-1和转化生长因子-β_1在糖尿病大鼠肾组织表达的影响

目的:研究活化蛋白-1(AP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在糖尿病大鼠肾脏中的分子机制以及阿托伐他汀对它们的影响。方法:大鼠随机分成3组:正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病阿托伐他汀治疗组(DA组)。免疫组织化学法检测各组肾组织AP-1(c-jun)、TGF-β1及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)的表达,生化法测定各组血糖、总胆固醇、三酰甘油、肌酐及24h尿蛋白。结果:DM组AP-1的活性和TGF-β1的表达明显高于C组(P<0.01),阿托伐他汀抑制AP-1活性(P<0.05)、降低TGF-β1和FN的表达(P<0.01)、减少24h尿蛋白排泄(P<0.05)、改善肾功能指标及肾组织病理学损害。结论:AP-1在糖尿病肾病发生发展中具有重要作用,阿托伐他汀对AP-1和TGF-β1活性的抑制可能是其非降脂性肾脏保护作用的诸多机制之一。

转录因子活化蛋白-1在颞叶癫痫模型小鼠海马的表达变化

目的:观察转录因子活化蛋白-1(transcription factor activator protein-1,AP-1)在海人酸(Kainic acid,KA)致癫痫模型小鼠海马的表达变化。方法:雄性C57小鼠32只随机分为对照组(8只)和模型组(24只),模型组再依据造模后小鼠处死时间分成3、8、24小时共3组。采用KA侧脑室注射建立癫痫动物模型,模型建立成功后观察癫痫发作情况,采用RT-PCR检测小鼠造模后各时间点海马AP-1 mRNA转录情况,Western blot法测定小鼠造模后各时间点AP-1的含量,并与对照组比较。采用免疫组化检测小鼠造模后各时间点AP-1在海马的表达分布情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠海马AP-1蛋白含量在癫痫发作后3小时即上升(P<0.05),8小时达高峰(P<0.01),24小时已有所降低(P<0.05)。RT-PCR、免疫组化、行为学结果均呈正相关(P<0.05)。结论:致痫小鼠脑内存在AP-1上升,可能进一步引发中枢炎症反应,成为癫痫发病重要机制之一。

活化蛋白-1和cAMP反应元件结合蛋白在脂多糖注射大鼠肺组织中的变化及地塞米松的影响

目的探讨活化蛋白-1(AP-1)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在急性肺损伤(ALI)发生发展中的可能作用,以及地塞米松的抗炎作用机制。方法采用脂多糖(LPS)5mg/kg颈静脉注射复制ALI大鼠模型,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)观察ALI大鼠肺组织AP-1和CREB的改变和地塞米松的影响。结果ALI大鼠肺组织AP-1的DNA结合活性在2h达到峰值,12h后接近正常水平。CREB的活性在1h即到达峰值,但直到12h并未完全达到正常水平。地塞米松对AP-1和CREB的DNA结合活性均有显著抑制作用。结论AP-1和CREB可能在大鼠的急性肺损伤的发生中发挥重要作用,在转录水平的调节可能是糖皮质激素发挥抗炎作用的重要机制之一。

弓形虫丝裂原活化蛋白激酶1基因编码蛋白结构与功能的生物信息学分析

为了分析并预测弓形虫丝裂原活化蛋白激酶1（TgMAPK1）基因编码蛋白的结构与功能,探讨其作为疫苗候选抗原及潜在药物靶点的可能性,试验从Gen Bank数据库获取Tg MAPK1基因序列,采用在线蛋白分析专家系统（http：//ca.expasy.org/）,结合DNAMAN、DNAStar等生物信息学软件对该序列的编码区进行分析,预测该基因编码蛋白质的理化性质、翻译后修饰位点、功能域、亚细胞定位、二级结构、亲/疏水性、抗原表位等。结果表明：该基因全长为1772 bp,编码区为133-1731 bp,编码532个氨基酸。编码蛋白性质稳定,理论分子质量为58.376 ku。TgMAPK1蛋白有5个跨膜区,有3个N端糖基化位点、7个蛋白激酶C磷酸化位点、8个酪氨酸激酶磷酸化位点、2个环腺苷酸蛋白激酶磷酸化位点、10个N端肉豆蔻酰化位点及1个酰胺化位点;无信号肽,二级结构以无规卷曲为主;Tg MAPK1基因主要存在于弓形虫虫体外膜上,有20个潜在的抗原表位。说明弓形虫TgMAPK1基因编码蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有免疫原性,可作为弓形虫病疫苗候选抗原。

IQ模体的Ras GTP酶活化蛋白1在舌鳞状细胞癌中的表达与临床意义

目的探讨IQ模体的RasGTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)中的表达与临床意义及其对影响舌鳞癌患者预后的影响。方法采用免疫组织化学方法对比检测IQGAP1在舌鳞癌组织和癌旁组织中的差异表达,并分析IQGAP1表达模式与临床病理参数的相关性。同时,回顾性分析中山大学附属口腔医院2006年1月至2010年12月收治的舌鳞癌患者的临床资料,进行多因素Cox回归模型分析。结果 IQGAP1在舌鳞癌中呈高表达状态,而在癌旁组织中呈低表达或阴性表达,而且高表达水平的IQGAP1与颈淋巴结转移(P=0.019)、复发(P=0.017)以及临床分期(P=0.031)等有关。此外,高表达的IQGAP1与舌鳞癌患者的预后具有密切联系(P=0.017)。结论 IQGAP1在舌鳞癌中的异常表达说明其在舌鳞癌的发生、发展中起重要作用,高表达的IQGAP1有可能成为预测舌鳞癌患者预后的一种有效标记物。

降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区活化蛋白-1 DNA结合活性的影响

探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对活化蛋白 - 1(AP - 1)在缺血性脑损伤中的影响及其神经保护作用的机制。方法 采用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型 ,用EMSA法和组织化学法观察海马CA1区AP - 1的DNA结合活性以及神经元形态改变。结果 ①缺血再灌 3h ,CGRP能不同程度的增加AP - 1的结合活性 ,其中C4.0组较NS组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,C2 .0组也有增强 ,活性由假手术组的 2 .7倍增加为 3 .1倍 ,但较NS组无显著性差异。同时CGRP能不同程度的减轻再灌 72h和 7d的神经元损伤 ,CA1区存活细胞数目较NS组明显增加 (P <0 .0 5 )。结论 CGRP能明显提高缺血后海马CA1区AP - 1的DNA结合活力 ,CGRP的神经保护作用可能与其调节AP -

COPD大鼠对糖皮质激素不敏感与丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1的关系

目的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)对激素不敏感与丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)密切相关。文中探讨COPD大鼠激素不敏感与肺组织中MKP-1的表达及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的关系。方法将50只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、COPD空白组、P38MAPK抑制剂组、地塞米松组、P38MAPK抑制剂+地塞米松组,每组10只。采用LPS+烟熏4个月建立COPD模型。建模成功后P38MAPK抑制剂组、地塞米松组每天分别腹腔注射SB203580(100 mg/kg)、地塞米松(2 mg/kg),P38MAPK抑制剂+地塞米松组注射同等剂量的p38抑制剂和地塞米松,连续14 d。支气管肺泡灌洗液测定TNF-α和IL-8的浓度以及细胞计数;测定肺组织平均内衬间隔(MLI)和肺泡破坏指数(DI);取肺组织,用蛋白印迹分析法测MKP-1和P38MAPK的表达。结果 LPS+烟熏4个月大鼠肺顺应性、每分钟通气量均显著低于对照组(P<0.01);而气道阻力、MLI和DI则高于对照组。肺组织病理显示LPS+烟熏4个月大鼠肺气肿形成,模型建立。Western blot检测结果表明,COPD空白组MKP-1、P38MAPK的表达较对照组明显升高(P〈0.01),而较P38MAPK抑制剂+地塞米松组MKP-1降低[(100±11)%vs(131±22)%,P<0.05)];与COPD空白组比较,P38MAPK抑制剂+地塞米松组MKP-1升高[(100±11)%vs(131±22)%,P<0.05)];与COPD空白组P38MAPK表达[(201±76)%]比较,P38MAPK抑制剂组、P38MAPK抑制剂+地塞米松组[(32±3)%、(68±7)%]明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与P38MAPK抑制剂组比较,地塞米松组P38MAPK表达明显升高[(32±3)%vs(185±12)%,P<0.05];与地塞米松组比较,P38MAPK抑制剂+地塞米松组P38MAPK表达降低[(185±12)%vs(68±7)%,P<0.05]。肺泡灌洗液细胞数和TNF-α、IL-8浓度检测结果表明,COPD空白组与P38MAPK抑制剂组、P38MAPK抑制剂+地塞米松组比较,上述指标均升高(P<0.05);与P38MAPK抑制剂组比较,地塞米松组上述指标均升高,而P38MAPK抑制剂+地塞米松组表达均降低(P<0.05);与地塞米松组比较,P38MAPK抑制剂+地塞米松组上述指标均降低(P<0.05)。结论 COPD大鼠对糖皮质激素不敏感的机制可能与肺组织中糖皮质激素诱导MKP-1的功能受损,从而导致P38MAPK表达升高、活性增强有关。