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化橘红成花过程挥发油成分的动态变化及活性分析
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作者 刘影 彭维 +3 位作者 胡双飞 吴灏 董利 苏薇薇 《中山大学学报(自然科学版)(中英文)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期88-95,共8页
本文旨在探索化橘红花挥发油成分的动态变化,为化橘红花的综合利用和其挥发油产品的开发提供理论参考。以现蕾期、花苞期、盛开期和谢花期的化橘红花新鲜样品为材料,水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用气质联用法(GC-MS)测定挥发油成分,通过... 本文旨在探索化橘红花挥发油成分的动态变化,为化橘红花的综合利用和其挥发油产品的开发提供理论参考。以现蕾期、花苞期、盛开期和谢花期的化橘红花新鲜样品为材料,水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用气质联用法(GC-MS)测定挥发油成分,通过构建“化橘红花-活性成分-靶点”网络图对挥发油活性进行分析。结果表明化橘红花挥发油成分以烯类(56.84%~70.19%)和醇类(21.33%~38.34%)物质为主,包括γ-松油烯、D-柠檬烯、芳樟醇、法尼醇、橙花叔醇和β-蒎烯。烯类物质在成花过程中呈现出逐渐降低的趋势,醇类物质表现出先增多再减少的趋势,盛开期达到峰值。现蕾期、花苞期和盛开期的挥发性物质总量保持在较高水平,谢花期显著降低。法尼醇、芳樟醇、α-水芹烯、橙花叔醇和香茅醇等挥发性成分的抑菌和抗氧化活性较高。各个花期的化橘红花均含有丰富的挥发油,具有开发应用价值。 展开更多
关键词 化橘红花 挥发油 变化趋势 GC-MS 活性分析
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弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析
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作者 李响 张小涵 +5 位作者 李美琪 陈冉 冯颖 李林 桑晓宇 杨娜 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期210-218,共9页
为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养... 为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示,Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变;间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达;纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力,同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体(>1∶25600)。以上结果表明,通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。 展开更多
关键词 弓形虫 MIC1蛋白 杆状病毒系统 活性分析
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畜禽内脏源生物活性肽的制备、活性分析及构效关系的研究进展
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作者 张昱婷 牛占占 +3 位作者 黄玉清 宁亚维 苑博华 王志新 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第7期343-352,共10页
禽畜内脏富含蛋白质、脂肪、维生素和矿物质,具有优良的抗氧化、抗炎以及抗衰老等作用,受到国内外研究人员的关注,但我国畜禽内脏资源利用率很低,造成了资源的极大浪费。利用禽畜副产物生产高附加值产品,可减少废弃物处理不当造成的环... 禽畜内脏富含蛋白质、脂肪、维生素和矿物质,具有优良的抗氧化、抗炎以及抗衰老等作用,受到国内外研究人员的关注,但我国畜禽内脏资源利用率很低,造成了资源的极大浪费。利用禽畜副产物生产高附加值产品,可减少废弃物处理不当造成的环境污染,提高副产物综合利用价值,有助于畜禽资源的可持续利用。生物活性肽主要来源于植物、动物和微生物,具有降血压、抗氧化、抗菌、抗炎等多种功效,在食品、医药以及保健品等领域有着广阔的应用前景。目前国内外有关生物活性肽的报道主要源于乳制品、植物蛋白等,以畜禽类内脏为原料的研究报道较少,部分研究者对构效关系进行了较为深入的研究。该文归纳总结了畜禽类内脏制备生物活性肽的方法,讨论了禽畜内脏来源的降血压肽、抗氧化肽、抗炎肽、抗菌肽的活性及其构效关系,为未来更深层次的研究提供新的思路与方法,并对现存的技术问题以及今后的研究方向做出了展望。 展开更多
关键词 畜禽内脏 生物活性 制备纯化 结构鉴定 活性分析 构效关系
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链霉菌FJS31-2外分泌物的挖掘及活性分析
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作者 李钰宇 郭雨悦 +6 位作者 王雪梅 王卓灵 苏夏雨 刘冰欣 韩继明 杨梦 岳昌武 《化学与生物工程》 CAS 北大核心 2024年第2期33-37,共5页
通过培养基优化、核糖体工程对链霉菌(Streptomyces sp.)FJS31-2外分泌物产生条件进行了优化,利用高分辨质谱(HRMS)技术对其主要活性产物的成分进行了初步分析,采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定了外分泌物对肝癌细胞MHCC97H的抑制活性。... 通过培养基优化、核糖体工程对链霉菌(Streptomyces sp.)FJS31-2外分泌物产生条件进行了优化,利用高分辨质谱(HRMS)技术对其主要活性产物的成分进行了初步分析,采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定了外分泌物对肝癌细胞MHCC97H的抑制活性。结果表明,经链霉素多代胁迫结合培养基优化诱导链霉菌FJS31-2产生了分子式为C 28 H 40 O 2的四环萜类化合物,该化合物可抑制肝癌细胞MHCC97H的生长,并呈浓度依赖性。为从链霉菌FJS31-2获取新型抗生素奠定了技术和物质基础。 展开更多
关键词 链霉菌 核糖体工程 活性产物 活性分析
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甜橙转录因子CsGRF04转录激活活性分析
5
作者 杨晓悦 王敏 戴文珊 《赣南师范大学学报》 2024年第6期79-83,共5页
生长调节因子(Growth-regulating factor,GRF)是一类植物特有的转录因子,在植物生长发育、激素信号转导、逆境胁迫响应等多个生物学进程中均发挥重要作用.前期研究在对甜橙GRF家族进行全基因组挖掘与逆境胁迫下表达模式分析的基础上,筛... 生长调节因子(Growth-regulating factor,GRF)是一类植物特有的转录因子,在植物生长发育、激素信号转导、逆境胁迫响应等多个生物学进程中均发挥重要作用.前期研究在对甜橙GRF家族进行全基因组挖掘与逆境胁迫下表达模式分析的基础上,筛选出一个在多重激素和非生物胁迫处理下均显著诱导上调的关键基因CsGRF04.为了进一步验证CsGRF04的转录激活活性,利用酵母系统与双荧光素酶活性分析(LUC)实验分别进行分析.结果表明,CsGRF04在酵母系统中无法激活报告基因表达从而使酵母细胞在缺陷培养基中正常生长,但在LUC系统中能够显著抑制双荧光素酶活性,说明CsGRF04是一个典型的转录抑制因子.为后续深入研究CsGRF04基因在甜橙抗逆响应中的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 甜橙 GRF转录因子 转录激活活性 双荧光素酶活性分析
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油茶不同组织内生真菌的分离鉴定及活性分析
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作者 汤阳灿 李宁 杨文海 《湖南林业科技》 2024年第3期1-9,共9页
为揭示油茶(Camellia oleifera)植株内生真菌组织分布特点,筛选具有抗菌和促生活性的内生真菌资源,对油茶3~4年生植株的根、茎、叶等组织器官中的内生真菌进行了分离鉴定,并进行了体外拮抗活性和分泌IAA能力、解磷能力、产嗜铁素能力等... 为揭示油茶(Camellia oleifera)植株内生真菌组织分布特点,筛选具有抗菌和促生活性的内生真菌资源,对油茶3~4年生植株的根、茎、叶等组织器官中的内生真菌进行了分离鉴定,并进行了体外拮抗活性和分泌IAA能力、解磷能力、产嗜铁素能力等生化活性测定。共分离获得内生真菌26株,其中从根中分离的内生真菌占总数的50%,从根和叶中分离的内生真菌优势菌属分别为土赤壳属(Ilyonectria)和叶点霉属(Phyllosticta)。菌株Ro18对灰霉菌(Botrytis cinerea)和果生炭疽病菌(Colletotrichum fructicola)的生长有明显抑制作用。菌株Ro03同时具有分泌IAA、解磷、产嗜铁素等生物活性。菌株iL04和Ro10可以促进拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼苗的侧根生长,其侧根数量分别为28和16,多于空白对照组的;菌株iL04、iL05、Ro03可以增加拟南芥幼苗生物量的累积,拟南芥幼苗平均鲜重分别为28.43、23.87、28.95mg,高于对照组的。菌株iL04、Ro03、Ro18作为生物防治与促生功能菌株的应用潜力巨大,发展前景广阔。 展开更多
关键词 油茶 内生真菌 分离鉴定 活性分析
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区域电力系统可调度资源灵活性分析与提升技术
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作者 范莉平 《中文科技期刊数据库(文摘版)工程技术》 2024年第3期0036-0038,共3页
确保电力系统稳定运行,适应动态需求,关键因素是区域电力系统可调度资源的灵活性。本文对可调度资源的复杂性和提升技术进行了深入分析,从多个方面进行了探讨。一是区域电力系统供需平衡的复杂性至关重要,二是储能技术的应用和智能电网... 确保电力系统稳定运行,适应动态需求,关键因素是区域电力系统可调度资源的灵活性。本文对可调度资源的复杂性和提升技术进行了深入分析,从多个方面进行了探讨。一是区域电力系统供需平衡的复杂性至关重要,二是储能技术的应用和智能电网、先进控制系统的采用都为系统灵活性的提升提供了强有力的支撑。引入市场机制激发各方创新活力,促进调度资源更好利用。接着,我们讨论了先进的预测和优化算法,高效的储能技术,智能电网和物联网技术的应用,以及如何进一步增强可调度资源灵活性的引入。这些技术的综合运用,使电力系统的智能化程度更高,响应速度更快,从而使可调度资源的总体利用率得到提高。 展开更多
关键词 区域 电力系统 可调度资源 活性分析 提升
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低压缸零出力条件下电锅炉和高低旁路抽汽供热的经济性与灵活性分析 被引量:2
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作者 田亮 汪可 《华北电力大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期85-92,共8页
供热机组灵活性改造是打破“热电耦合”、实现煤电机组为可再生能源发电提供容量支撑的有效措施,最常见的技术方案是汽轮机低压缸零出力运行加高低旁路抽汽供热或电锅炉供热。针对一350 MW超临界供热机组,采用变工况迭代计算方法,对两... 供热机组灵活性改造是打破“热电耦合”、实现煤电机组为可再生能源发电提供容量支撑的有效措施,最常见的技术方案是汽轮机低压缸零出力运行加高低旁路抽汽供热或电锅炉供热。针对一350 MW超临界供热机组,采用变工况迭代计算方法,对两种方案的最小电出力、最大供热和保热调电典型工况点的热经济性,以及深调峰负荷段的电出力的可调范围进行对比分析。结果表明,由于冷端损失很小,在相同热电负荷工况下电锅炉方案耗煤量仅略大于高低旁路抽汽方案;而因电锅炉具有优良的逆向电负荷调节能力,深调峰负荷段下的电负荷可调区间要显著大于高低旁路抽汽方案。 展开更多
关键词 低压缸零出力 高低旁路抽汽 电锅炉 经济性分析 活性分析
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茶树CsbHLH 71基因克隆及转录活性分析 被引量:5
9
作者 吴应奇 宋小凤 +3 位作者 邓见田烨 白思蕾 李娟 王坤波 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期37-44,共8页
bHLH转录因子在植物类黄酮代谢过程中具有重要调控作用。该研究采用PCR方法,从‘碧香早’茶树中获得了与儿茶素含量高度负相关的CsbHLH71基因,并对其进行生物信息学分析、亚细胞定位及转录活性分析,为探究CsbHLH71基因在调控茶树儿茶素... bHLH转录因子在植物类黄酮代谢过程中具有重要调控作用。该研究采用PCR方法,从‘碧香早’茶树中获得了与儿茶素含量高度负相关的CsbHLH71基因,并对其进行生物信息学分析、亚细胞定位及转录活性分析,为探究CsbHLH71基因在调控茶树儿茶素生物合成的分子机制奠定基础。结果表明:(1)通过RNA-seq测序筛选成功获得一个茶树CsbHLH71基因,该基因CDS序列全长912 bp,编码303个氨基酸;氨基酸序列第101-160位含有一个碱性螺旋-环-螺旋保守结构域,属于bHLH家族转录因子;序列对比和系统进化树结果显示,其与杜鹃花、河滨葡萄等物种的bHLH氨基酸序列有较高的相似性。(2)qRT-PCR结果显示,不同浓度微生物肥处理下茶树CsbHLH71基因的表达水平显著上调,且在1000倍处理下效果最显著,说明高浓度的微生物肥能促进茶树CsbHLH71基因的表达。(3)亚细胞定位分析表明CsbHLH71蛋白定位在细胞核。(4)转录活性分析发现,茶树CsbHLH71蛋白在酵母和烟草中均具有转录抑制活性,为转录抑制子,证实了CsbHLH71蛋白具有转录抑制剂的功能。研究推测,CsbHLH71蛋白可能负调控茶树中儿茶素积累。 展开更多
关键词 茶树 BHLH 亚细胞定位 转录活性分析
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鸡源IL-21基因的密码子优化、表达及生物活性分析初探
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作者 朱爱臣 朱凯晴 +3 位作者 孙鹏 张建楼 李妍 霍书英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期89-95,共7页
本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/... 本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/MH,根据人偏爱密码子对鸡IL-21基因进行密码子优化,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-opt/MH。测序正确后转染HEK293T细胞进行表达,经His标签纯化后,通过脾脏淋巴细胞增殖实验鉴定纯化后的IL-21蛋白生物活性。结果显示,扩增的鸡IL-21序列与Genbank中的IL-21序列相对比有2个碱基发生突变(141C→141T,312C→312T),但不影响氨基酸序列;生物信息学分析表明,鸡IL-21基因含有信号肽序列可介导其分泌表达,同时含有1个潜在的N-糖基化位点;Western blot在培养基和细胞内均检测到鸡IL-21蛋白的表达;密码子优化后IL-21表达水平与野生型相比显著升高(P<0.0001);MTT法检测发现,纯化后的IL-21具有增强淋巴细胞增殖的功能。综上所述,本试验成功构建了鸡IL-21的真核表达载体,通过密码子优化提高了IL-21在真核细胞中的表达且表达的蛋白具有良好的生物活性,为进一步探索IL-21蛋白功能奠定一定的基础。 展开更多
关键词 IL-21基因 真核表达 密码子优化 生物活性分析
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镰形扇头蜱巨噬细胞移动抑制因子的克隆、表达及酶活性分析
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作者 王玉俭 郑倩 +1 位作者 宋冠华 钟平生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期67-71,共5页
为了探究镰形扇头蜱巨噬细胞移动抑制因子(Rhipicephalus haemaphysaloides macrophage migration inhibitory factor,RhMIF)基因的功能,试验采用RT-PCR方法对RhMIF基因开放阅读框进行扩增,运用大肠杆菌表达体系对RhMIF蛋白进行体外重... 为了探究镰形扇头蜱巨噬细胞移动抑制因子(Rhipicephalus haemaphysaloides macrophage migration inhibitory factor,RhMIF)基因的功能,试验采用RT-PCR方法对RhMIF基因开放阅读框进行扩增,运用大肠杆菌表达体系对RhMIF蛋白进行体外重组表达,随后对纯化后的RhMIF重组蛋白进行互变异构酶活性分析。结果表明:RhMIF基因开放阅读框大小为351 bp,编码116个氨基酸;RhMIF重组蛋白在大肠杆菌上清液中成功表达,大小为17.4 ku;RhMIF重组蛋白具有互变异构酶活性。说明本试验通过大肠杆菌表达体系成功表达了具有酶活性的RhMIF重组蛋白。 展开更多
关键词 镰形扇头蜱 巨噬细胞移动抑制因子 原核表达 互变异构酶 活性分析
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绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析 被引量:15
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作者 王春生 安铁洙 +2 位作者 白秀娟 任洪林 柳增善 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期137-139,145,共4页
以绵羊基因组DNA为模板克隆获得绵羊角蛋白结合蛋白基因KAP6.1启动子。将KAP6.1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养绵羊皮肤成纤维细胞并检测其表达活性。结果显示:(1)K... 以绵羊基因组DNA为模板克隆获得绵羊角蛋白结合蛋白基因KAP6.1启动子。将KAP6.1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养绵羊皮肤成纤维细胞并检测其表达活性。结果显示:(1)KAP6.1启动子序列大小为830 bp,与GenBank上绵羊角蛋白结合蛋白的参照序列(M95719)有99.64%的同源性;与M95719相比,KAP6.1在349位点、726位点和246位点上分别存在1个C缺失、1个转换(G代替A)和1个颠换(A代替T);在438位点上具有1个依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box,但未发现具有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box;(2)转染24 h后,在蓝光激发下检测到细胞核附近有绿色荧光蛋白的高表达,并在48 h后逐渐减弱,而细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加。这一结果表明,KAP6.1启动子在绵羊皮肤成纤维细胞的表达上可能具有特异性。 展开更多
关键词 角蛋白结合蛋白 启动子 分子克隆 活性分析
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夹竹桃、枫杨、羊蹄皂甙类成分灭螺活性分析 被引量:12
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作者 王宏 王万贤 +2 位作者 潘磊 胡兴宜 左进成 《环境科学与技术》 CAS CSCD 2002年第1期34-35,42,共3页
正丁醇提取夹竹桃、枫杨和羊蹄的皂甙类成分 ,通过浸杀灭螺实验 ,观察提取物对钉螺上爬的抑制作用 ,直线回归法确定灭螺量效和时效关系 ,通过方程预测提取物达LD50 和LD90 的剂量和使用时间 ,为实际应用提供参考。
关键词 夹竹桃 枫杨 羊蹄 钉螺 皂甙 成分 灭螺活性分析 灭螺剂 杀虫剂 钉螺
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重组人角质细胞生长因子-2基因克隆、表达、纯化与活性分析 被引量:13
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作者 马雁冰 李擎 +4 位作者 谢天宏 李鸿钧 冮宏映 戴长柏 孙茂盛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期761-765,共5页
从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实... 从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA ,经RT PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子 2 (keratinocytegrowthfactor 2 ,KGF 2 )的cDNA .克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA ,序列分析表明与文献报道一致 .经IPTG诱导 ,在大肠杆菌BL2 1中实现高效表达 ,表达量可达菌体总蛋白 10 %~15 % .菌体超声破碎 ,上清经CM SepharoseFF阳离子交换 ,Heparin Sepharose亲和层析 ,Superdex 75凝胶过滤层析纯化得到重组人KGF 2 ,纯度高于 95 % .生物活性分析表明 ,它能够促进成纤维细胞NIH 3T3的增殖 ,诱导鸡胚背根神经结神经轴突的生长 ,促进鸡胚尿囊膜血管生成 .研究结果表明 ,获得了 95 %纯度的具有生物学活性的重组人KGF 2 。 展开更多
关键词 人角质细胞生长因子-2 基因克隆 表达 纯化 活性分析
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苏云金杆菌vip3 A基因的克隆、表达及杀虫活性分析 被引量:8
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作者 陈建武 唐丽霞 +2 位作者 汤慕瑾 师永霞 庞义 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期687-692,共6页
用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 ... 用全长PCR方法从野生型苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)菌株S184中克隆了 2 3kb大小的vip3A基因并进行了序列分析。将vip3A S184基因插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP ,转化大肠杆菌M15 ,转化子经 1mmol LIPTG诱导后可表达 89kD大小的Vip3A S184蛋白 ,并得到Westernblot证实。蛋白可溶性试验表明 ,目的蛋白中约有 19%是可溶的 ,用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此 ,可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体 ,用于苏云金杆菌Vip3A蛋白表达的检测。利用IPTG进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾 (Spodopteraexigua)、斜纹夜蛾 (S .litura)和棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)等 3种害虫的初孵幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,Vip3A 展开更多
关键词 苏云金杆菌 vip34基因 基因克隆 表达 杀虫活性分析 抗体
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棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析 被引量:7
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作者 刘小民 李杰 +2 位作者 郭巍 张霞 李新娜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期730-737,共8页
【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方法】制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera(Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利... 【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方法】制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera(Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利用生物信息学软件和网站进行序列分析,构建原核表达载体进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因hc3(GenBank登录号:GU119888)全长2 896 bp,编码795个氨基酸。羧酸酯酶HC3的等电点pI为3.94,活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser204,Glu331,His444;第545—773位包含大量高度重复的Gly,Asp、Glu(GDE区域)构成亲水区。该基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白,检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100μL酶液。【结论】成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3,并发现GDE亲水结构域。为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能。 展开更多
关键词 棉铃虫 CDNA表达文库 羧酸酯酶 活性分析
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猪IL-2基因在毕赤酵母中的高效表达及生物活性分析 被引量:6
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作者 陈国华 贾怀杰 +4 位作者 曾爽 房永祥 李小庆 景志忠 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期551-556,共6页
本研究根据密码子偏爱原则设计猪IL-2引物,克隆其基因后构建pPIC9k-IL-2重组表达载体,线性化后电转化毕赤酵母GS115,获得优化密码子的重组酵母转化子;再用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,不同条件下进行甲醇诱导表达。结果表明:... 本研究根据密码子偏爱原则设计猪IL-2引物,克隆其基因后构建pPIC9k-IL-2重组表达载体,线性化后电转化毕赤酵母GS115,获得优化密码子的重组酵母转化子;再用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,不同条件下进行甲醇诱导表达。结果表明:经PCR鉴定IL-2基因已整合到酵母基因组中。表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量为16、20ku两条目的蛋白表达带,脱糖基化分析表明目的蛋白得到了适度的糖基化修饰,Western blotting分析显示表达的蛋白具有良好的免疫反应性,分子筛纯化可以获得纯度为95%的蛋白质,淋巴细胞增殖活性分析表明所得的蛋白质具有促淋巴细胞增殖的活性。毕赤酵母表达系统可以高效地表达具有生物活性的重组猪IL-2蛋白分子。 展开更多
关键词 猪IL-2基因 毕赤酵母 活性分析
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猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析 被引量:7
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作者 孙东波 冯力 +4 位作者 刘杰 时洪艳 佟有恩 刘胜旺 童光志 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期147-149,共3页
A pair of primers containing BamHI and XhoI sites was designed to amplify n gene of 1149bp from the positive pMD18-TN plasmid of transmissible gastroenteritis virus n gene by PCR.PCR product was subcloned into multipl... A pair of primers containing BamHI and XhoI sites was designed to amplify n gene of 1149bp from the positive pMD18-TN plasmid of transmissible gastroenteritis virus n gene by PCR.PCR product was subcloned into multiple cloning sites of pET-30a containing 6 His·Tag.Recombinant plasmid pET-30a of n gene named pET30a-N was transfected into E.coli BL21 and the bacteria was induced with IPTG at 37℃.It was demonstrated by SDS-PAGE that recombinant N protein expressed in E.coli BL21 was soluble protein and its molecular weight was about 52kD.The result of Western blot test showed that immunoactivity of the recombinant N protein was the same to that of the natural N protein. 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N基因 原核表达 免疫活性分析
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大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析 被引量:5
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作者 杨帅 王玲 +1 位作者 赵奎军 韩岚岚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期3755-3763,共9页
【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b... 【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE(GenBank登录号:JF970181)全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点(pI)为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族(EC:3.1.1.-)。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036mmol/100μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。 展开更多
关键词 大豆蚜 羧酸酯酶 基因克隆 活性分析
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人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析 被引量:5
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作者 王阶平 庄国洪 +4 位作者 杨桂旺 王臻 李文珠 谢莲英 颜江华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期193-195,199,共4页
目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE... 目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。表达产物通过Ni亲和层析柱纯化。采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析。结果:通过重叠PCR获得序列正确的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,目的蛋白的纯度达95%以上。hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性,并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合。结论:获得的人源化单域抗体hu3D3VH,保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性,为进一步临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人源化 抗人肺癌单域抗体 表达 活性分析
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