分光光度法与活菌计数法测定副鸡禽杆菌菌液浓度的相关性研究

为建立一种快速测定副鸡禽杆菌菌液浓度的方法,本研究选取副鸡禽杆菌血清A、B和C型代表性菌株(CVCC254株、CVCC257株和CVCC256株),培养制备菌液,分别在450、540、600、650 nm波长测定其吸光度值(OD值),同时测定活菌计数值。回归分析两组数据,获取回归方程及标准曲线,分析回归方程的测定系数(R^(2))和标准曲线的点线离散度,确定最适测定波长。再选取不同培养时间点(10、12、14、16、18、20 h)的菌液,在最适波长下测定其OD值并代入回归方程获取活菌数,同时采用活菌计数法获取活菌计数值,将两组数据使用SPSS 17.0软件进行统计分析,进一步验证分光光度法与活菌计数法测定菌液浓度的相关性。结果显示,3株菌液在600 nm波长测定的OD值与活菌计数值之间均呈最佳的线性关系,确定其菌液浓度最适测定波长均为600 nm,其回归方程分别为y=14.302x-0.1441(R^(2)=0.9962)、y=14.464x-0.2746(R^(2)=0.995)和y=14.681x-0.01326(R^(2)=0.9989),y为活菌计数值(×10^(8)CFU/mL),x为OD600值。3株培养至衰退期前的菌液在600 nm波长测定的OD值代入回归方程计算获得的活菌数值与其活菌计数值无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,衰退期前副鸡禽杆菌菌液的分光光度法与活菌计数法具有良好的相关性。因此,该分光光度法可用于快速测定衰退期前副鸡禽杆菌菌液浓度。

产肠毒素大肠杆菌的生长曲线测定及活菌计数

判断ETEC的对数生长期,并探讨OD600值与ETEC活菌数之间的相关性。方法 采用分光光度计测定ETEC菌液不同生长时间的OD600值,绘制ETEC生长曲线;将OD600值为0.8-1.0的ETEC菌液作为原菌液,将原菌液按不同稀释倍数进行稀释,分别测定其相应的OD600值,并涂血琼脂平板,培养后对菌落进行计数。结果 培养30-150 min为ETEC的对数生长期;OD600值与ETEC活菌数呈线性相关,线性回归方程为y=0.23+0.131x,R2=0.96,OD600值(x),菌落数目(y×109)∕ml。结论 运用OD值法可以准确、简便的判断ETEC的对数生长期及对菌液中的产肠毒素大肠杆菌进行活菌计数。

一种快速的活菌计数新方法研究

四唑盐（MTT）比色法是一种检测动物细胞活细胞数的方法。通过改变比色反应温度、反应时间和比色波长,建立了一种快速、准确的活菌计数新方法并将其应用于细菌PBW1培养过程中活菌浓度的测定。结果表明,新方法与平板稀释法的测定结果一致,且具有快速、方便等优点。

一种简单准确的酵母微量活菌计数方法

10μL点样酵母活菌计数法是取100μL菌液在1.5mL离心管中进行梯度稀释,最后将10μL稀释菌液点在平板上计数。该方法与传统活菌计数法比较工作量小,重复性好,准确性高,是一种简单、准确的酵母微量活菌计数方法。

多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数参考品的研究

为了研制多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数的参考品,以期更科学的评价活菌计数结果的有效性。制备一批猪多杀性巴氏杆菌病活疫苗为参考品候选物,对其性状、纯粹、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考品候选物进行定值,用协作标定的方法统计参考品候选物24个月的保存期,将参考品应用于多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考品的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示,10瓶参考品候选物计数结果的变异系数为5.4%,小于10%,说明其均一性良好。协作标定的赋值范围为(4.2~5.6)×10^8 CFU/头份,保存期试验结果显示,参考品候选物在-70℃以下保存24个月菌数稳定。参考品的初步应用显示本参考品不仅可以为多杀性巴氏杆菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且可以用于控制多杀性巴氏杆菌类疫苗检验用马丁琼脂培养基的质量。

布氏菌病活疫苗活菌计数项目能力验证结果分析

为了解全国布氏菌病活疫苗生产企业活菌计数能力,2015年对该项目进行了能力验证分析,每名参比企业发放布氏菌活疫苗(S2株)样品3份,要求在规定时间内对其进行活菌计数并提交结果报告。结果显示,参比的17家企业中,15家结果"满意",2家企业结果"不满意",表明全国大部分布氏菌病活疫苗生产企业具备可信任的布氏菌病活疫苗活菌计数检测能力。

猪丹毒活疫苗活菌计数参考品的研究

为了更加客观、科学地评价猪丹毒活疫苗活菌计数检验结果,在活菌计数检验中引入了参考品。研制并标定了一批猪丹毒活疫苗活菌计数的参考品,从性状、纯粹性、均一性、加速稳定性、运输稳定性、剩余水分测定、真空度等方面对参考品进行了评价,并对参考品的保存期限进行了探索。结果显示:参考品的性状、纯粹性、活菌计数、剩余水分含量、真空度均符合《中国兽药典》中猪丹毒活疫苗质量标准。通过协作标定,对参考品赋值为每头份含活菌数为8.5×108~12.5×108 CFU。均一性检验变异系数分别为7%和6%。参考品在夏季和冬季由泡沫盒加冰袋的方式进行运输不超过48 h,计数结果稳定。对参考品的保存期进行探索,发现参考品于-70℃保存时可在18个月内保持稳定。表明猪丹毒活疫苗活菌计数参考品符合国家标准物质的要求,可应用于检验。

比较称重法和比浊法对分枝杆菌活菌计数和药敏的差异

目的:比较用称重法和比浊法对分枝杆菌活菌计数、对结核分枝杆菌(M TB)绝对浓度法和比例法药物敏感性(药敏)结果的差异。方法:用称重法和比浊法制作非结核分枝杆菌(NTM)28株、M TB42株菌悬液,10倍梯度稀释,10-4m g/m l、10-5/m g/m l、10-6m g/m l菌悬液0.1m l接种于改良L-J培养基上作活菌计数,10-2m g/m l菌悬液0.1m l接种于含药改良L-J培养基上作绝对浓度法药敏,10-3m g/m l、10-5m g/m l菌悬液0.1m l接种于含药改良L-J培养基上作比例法药敏。结果:两种方法NTM活菌计数比较有显著性差异(P<0.05),活菌计数值在2×107～8×108CFU/m l;两种方法M TB活菌计数值比较无显著性差异(P>0.05),在5×106～5×107CFU/m l。M TB称重法和比浊法菌悬液绝对浓度法药敏一致率异烟肼、利福平分别达95.2%、97.6%,与比例法比较符合率异烟肼、利福平分别达95.2%、92.8%。结论:分枝杆菌不同菌株两种方法活菌计数值有较大差异,药敏结果一致性好。

用活菌计数法检测双歧杆菌对伤寒沙门菌粘附和侵袭的抑制作用

目的 研究双歧杆菌是否对伤寒沙门菌粘附和侵袭肠上皮细胞具有抑制作用。方法 用活菌计数法测定双歧杆菌对伤寒沙门菌粘附和侵袭LOVO细胞的抑制率。结果 发现伤寒沙门菌粘附LOVO细胞后的活菌计数为 79 0CFU ,侵袭后的活菌计数为 2 6 .3CFU ,当将伤寒沙门菌与双歧杆菌混合加入LOVO细胞中 ,伤寒沙门菌粘附和侵袭后的活菌计数分别下降为2 7 0和 15 .7CFU ,差异显著 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。结论 双歧杆菌对伤寒沙门菌的肠上皮细胞的粘附和侵袭均具有明显抑制作用 ,这正是双歧杆菌对肠道感染防治的作用机理之一 ,采用活菌计数法 ,可提高实验的客观性和准确性。

脂肪酸甲酯和活菌计数法检测氯磺隆对土壤微生物群落结构的影响

利用脂肪酸甲酯和活菌计数2种方法检测不同质量分数氯磺隆对土壤微生物群落结构的影响。结果表明:土样经氯磺隆处理1 d,只有放线菌受到抑制,而细菌和真菌没有变化,当处理45 d时,细菌和放线菌随氯磺隆质量分数的增加而表现为抑制,真菌没有显著变化(P<0.05)。活菌计数与脂肪酸分析结果一致。因此,土壤微生物对氯磺隆的敏感程度是放线菌>细菌>真菌,细菌在一定时间内表现出对氯磺隆的耐受性。

一株高度黏连的枯草芽孢杆菌的活菌计数

为了对1株自中草药中分离得到的菌落高度黏连的高产细菌素枯草芽孢杆菌进行有效的活菌计数,试验采用普通平板稀释法进行活菌计数,并对生理盐水、灭菌水、各种PBS、空白培养基等各种不同的稀释液进行比较研究。结果表明:生理盐水、灭菌水、各种PBS均无法将菌团分散,难以形成有效的活菌计数梯度,只有以该菌株的空白培养基作为稀释液时,才能使菌体分散均匀,稀释梯度明显,计数结果准确,重复性好。说明在活菌计数中,空白培养基可能是某些特殊菌株(如菌落高度黏连)的理想稀释液。

稳健统计方法及t检验法在活菌计数能力比对中的应用

为比较检验员活菌计数能力及常量法和微量法在活菌计数应用中是否存在差异,8名检验员于同时、同环境中对同一细菌培养物采用常量法和微量法进行活菌计数,采用稳健统计方法对不同人员相同方法的计数结果进行统计,将检验结果分为"满意"、"可疑"和"不满意";采用t检验法对使用不同方法对同一样品的计数结果进行统计,将结果分为"差异显著"和"差异不显著"。稳健统计方法表明,用常量法进行检测,有6名检验员的检验结果全部满意,而微量法的结果中只有2名检验员获得了全部满意的结果;t检验法表明常量法和微量法之间存在显著差异。稳健统计方法及t检验法统计结果显示,不能用微量法代替常量法进行检验,个别检验员的活菌计数能力有待进一步提高。

MTT法进行活菌计数的方法学探讨

目的 :建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。方法 :以大肠杆菌为研究对象 ,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及反应时间、测量细菌数量的范围、MTT的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果 :细菌数在 3.8× 10 7～ 1.2× 10 9 ml范围内测出的OD值与细菌浓度呈良好的正相关 ,反应时间为 2 0分钟 ,MTT10 μl、2 0 μl均可 ,2 0 μl效果更佳。可不用溶解剂。 结论

沙门氏菌类活疫苗活菌计数参考疫苗的研究

为研制沙门氏菌类活疫苗活菌计数的参考疫苗,以期更科学地评价活菌计数结果的有效性,研究制备了一批仔猪副伤寒活疫苗作为参考疫苗候选物,对其性状、纯粹检验、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考疫苗候选物进行赋值,用协作标定的方法统计参考疫苗候选物在18个月的保存期,将参考疫苗初步应用于仔猪副伤寒活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考疫苗的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示10瓶参考疫苗候选物计数结果的变异系数小于10%,说明其均一性良好。协作标定统计出参考疫苗候选物的赋值范围为(3.0,4.0)×109CFU/头份,保存期试验结果显示参考疫苗候选物在-70℃以下保存18个月菌数稳定。参考疫苗的初步应用显示本参考疫苗不仅可以为沙门氏菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且还可用于控制普通琼脂培养基的质量。

薄膜过滤反注培养基活菌计数培养法实验研究

新设计的薄膜过滤计数培养器,可以对含杀菌成份的样品完成过滤冲洗后,直接向滤膜背面注入培养基进行活菌计数培养。为了检验其对活菌计数的准确性和实用性,在实验室进行了研究,并与贴膜法作比较。结果,对金黄色葡萄球菌用反注法回收率为93.1%,贴膜法回收率为93.7%。对大肠杆菌反注法回收率为94.0%,贴膜法为96.5%。对白色念珠菌反注法回收率为90.0%,贴膜法为94.0%。结果显示,反注法与贴膜法对三种细菌计数的回收率基本一致,两种方法之间无显著差异(P>0.05)。

固态发酵生产芽孢杆菌活菌计数方法的改进

固体发酵生产芽孢杆菌常出现计数困难、波动性大等现象。作者从事微生物检验工作多年,针对检验过程中取样、样品处理等环节长期进行比较跟踪,提出了改进方法,减少活菌计数操作误差,方法便捷简单。

伤寒杆菌活菌计数影响因素探讨

本文以伤寒杆菌为例,从活菌计数操作中的各个有关环节探讨了培养时间,菌苔部位,培养基,稀释液,稀释后放置温度与时间,稀释液pH,温度,菌液冲击,平板温烤时间以及菌株状态等因素对活菌数的影响。并分析讨论了这些因素影响细菌存活与死亡的机理,提出了在实际操作中应该重视的细节和提高活菌数的方法。

适合卡介苗生长和活菌计数用的简化琼脂培养基

适合卡介苗生长和活菌计数用的简化琼脂培养基１０００９１北京解放军第３０９医院匡铁吉，宋萍，王利平，覃振林，王仲元，薛建利中国图书资料分类号Ｒ４４６．５卡介苗（ＢＣＧ）及其细胞组分可用于肿瘤和某些疾病的治疗和预防［１、２］。ＢＣＧ的培养和活菌计数已成为...