流式细胞技术在抗生素抑菌实验中的应用

针对抗生素类药物抑菌实验检测中存在的缺少量化指标、无法准确评估细菌自身生长状态以及实验周期较长等问题,探究不同质量浓度(0.02~20 mg/mL)和不同处理时间(1和2 h)下申嗪霉素对黄单胞菌的抑菌检测中流式细胞技术的应用。结果表明,相同处理时间下,申嗪霉素质量浓度越高,凋亡晚期的坏死细胞越多;相同质量浓度下,随着申嗪霉素处理时间的增加,死亡细胞的比例明显增加。流式细胞技术能够在抗生素等药物抑菌实验中快速、准确地检测细菌的生长状态和活力,为抗生素等药物抑菌机理研究中的检测技术提供数据支持,也有助于拓展流式细胞技术在细菌凋亡研究领域的应用。

成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较

目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。

多参数流式细胞技术分析髓系白血病细胞相关免疫表型

目的 探讨常见的急性髓系白血病细胞相关免疫表型,并阐述其在临床中的应用价值。方法 应用多参数流式细胞技术分析47例急性髓系白血病(AML)患者骨髓标本中白血病细胞相关免疫表型,并对其免疫分型结果与治疗、预后的相关性进行统计分析,进而探讨AML免疫分型在临床中的应用。结果 47例AML患者阳性高表达的髓系抗原有CD33(93.62%)、CD13(89.36%)、MPO(89.36%)、CD117(82.98%)、CD64(38.30%);造血干/祖细胞CD分子阳性表达以CD38(93.62%)、CD34(65.96%)、HLA-DR(51.06%)为主;其他抗原以CD56(48.94%)、CD7(23.40%)、CD19(19.15%)为主。经相同时间治疗后,23例(48.94%)AML患者病情得到完全缓解,患者阳性表达T细胞系抗原CD7的完全缓解率显著低于阴性患者(P<0.05)。6例(26.09%)患者在1 a内复发,没有任何一种抗原表达情况与之有关(P>0.05)。随访结束后,有26例(55.32%)患者死亡,阳性表达NK细胞系抗原CD56和T细胞系抗原CD7患者的死亡率显著性高于阴性表达的患者,阳性表达B细胞系抗原CD19的患者死亡率显著性低于阴性表达的患者(P<0.05),幼稚标志与成熟标志不同步的患者死亡率高于幼稚标志与成熟标志同步的患者(P<0.05)。结论 髓系抗原CD33、CD13、MPO、CD117、CD64是AML诊断中可靠的抗原标志物,AML患者的免疫分型结果可为临床医生确定治疗方案和判断预后提供参考。

荧光显微镜与流式细胞仪融入医学实验技术专业实验教学探究

针对构建多层次实验教学平台、改进实验教学方法以及丰富实验教学内容等教学改革问题,将大型仪器的使用与医学实验技术专业本科生实验教学相融合,优化实验教学模式的同时,提升大型仪器在实验技术人才培养上的作用。以探究“H2O2诱导RAW264.7细胞系细胞凋亡”为出发点,学生利用研究级倒置荧光显微镜观察细胞核Hoechst 33258染色情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并自行查阅文献分析实验结果,完成开放性实验教学。通过这种模式,提高医学实验技术专业学生对细胞凋亡知识和大型仪器实践操作的掌握水平,为学生未来胜任实验技术工作打下良好基础。

流式细胞技术在乳品商业无菌检测中的应用

[目的]为明确流式细胞技术在乳品商业无菌检测中的高效性、准确性,了解微生物快速检测技术的必要性和价值。[方法]介绍流式细胞技术的定义、原理、方法,并与国标中的商业无菌检验方法进行对比。[结果]流式细胞技术与国标中的商业无菌检验方法对未添加微生物样品的检测结果为商业无菌,对添加目标微生物的检测结果为非商业无菌,检测结果一致。[结论]流式细胞技术检测商业无菌和国标中的商业无菌检验方法在检测上可以达到相同的筛选目的,而且在便利性、准确性、稳定性、可操作性、时效性等方面更具有优势,能快速放行产品,对质量判定有重要意义。

流式细胞技术在消化系统疾病中的应用效果

分析流式细胞技术在指导消化系统恶性肿瘤疾病个性化诊疗和预后判断方面的临床应用价值。方法 选择结肠癌患者40例作为观察组,同步选择健康体检人群40例作为对照组,分别选择三个不同的时间节点采集两组的外周血,借助流式细胞技术检测两组的T细胞亚群、NK细胞水平以及IL-6、TNF-α含量的动态变化。结果 观察组的总淋巴细胞、CD4+数量以及CD4+/CD8+均低于对照组(P<0.05),CD8+数量高于对照组,CD3+数量与对照组之间不存在显著差异(P>0.05);观察组的NK细胞数量多于对照组(P<0.05);观察组的IL-6水平低于对照组,但TNF-α与对照组之间不存在显著差异(P>0.05)。结论 借助流式细胞技术可以有效监测免疫细胞的水平变化,帮助跟踪评估消化系统疾病患者的免疫能力改变,从而为制定和调整诊疗方案,评估诊疗结果提供参考依据。

利用流式细胞术鉴定3种李属植物基因组大小及染色体倍性检测

【目的】研究适合不同李属资源的FCM检测体系,估测其基因组大小及倍性,为李属资源的鉴定、分类及基因组和转录组等深入研究提供依据。【方法】利用FCM对3种常用的细胞核裂解液进行筛选与优化,选取最适宜的裂解液鉴定3种李属植物进行基因组大小和检测染色体倍性。【结果】LB01、Marie’s和WPB 3种裂解液对樱桃李检测效果均较好,而WPB裂解液检测效果最佳;Marie’s和LB01裂解液与欧洲李不匹配,改良的WPB裂解液最适合欧洲李;杏李与LB01裂解液不匹配,WPB裂解液对杏李的裂解效果好于Marie’s裂解液,而改良的WPB裂解液对杏李的裂解效果均最好。樱桃李和杏李基因组大小范围分别为491.22~566.40 Mb和514.46~573.83 Mb,欧洲李资源平均基因组大小为1678.37 Mb。【结论】樱桃李和杏李资源均为二倍体,欧洲李资源全部为六倍体,李属植物每个种内不同品种之间的基因组大小存在一定差异。

基于流式细胞仪技术的快速检测试剂盒在生乳菌落总数检测中的应用

本研究将市售流式细胞仪技术快速检测试剂盒应用于生乳中菌落总数的检测。通过对不同浓度、不同死/活细菌比的金黄色葡萄球菌菌悬液的流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测,并将检测结果与标准分离分离培养法进行对比,证实了试剂盒染色液对常见微生物的荧光标记能力良好,样品染色液A和染色液B联用可以有效实现对死/活细菌的区分与计数。通过向生乳样品中添加不同浓度金黄色葡萄球菌、不同死/活细菌比例细菌或不同种细菌制备人工污染生乳样品并进行FCM检测,证实了该FCM试剂盒方法能够适用于实际生乳制品菌落总数定量检测与死/活细菌区分计数,且方法稳定性良好,可以应用于实际生乳菌落计数。该试剂盒方法在生乳检测流程上的应用证实了利用FCM法替代传统分离检测法的实际应用可行性,可以为第三方检测机构和乳品企业提供一种更为高效、便捷和准确的流程参考。

流式细胞技术在肺癌干细胞研究中的应用进展

肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤,在全世界癌症发病率中排名第二、死亡率排名第一^([1,2]),在中国是发病率和死亡率最高的癌症^([3])。肺癌因为早期临床症状不明显而容易被忽视,等发现时往往已经错过最佳治疗时机,所以早期诊断并及时治疗具有非常重要的临床意义。肺癌干细胞(Lung cancer stem cell,LCSC)是指肺组织中部分具有自我更新以及多向分化潜能的未分化细胞,并且具有耐药特性的特定细胞群,其参与肺癌增殖、转移和耐药等多种肿瘤发生发展过程。

应用流式细胞技术(FCM)检测儿童APL微小残留病

目的:研究应用流式细胞技术(FCM)检测APL病人的白血病微小残留病(MRD),评价其临床意义.方法:应用FCM检测和分析36例APL病儿在初发期和完全缓解期的CD13、CD33、CD34和TdT表达,全部APL病人每日输入AS2O3治疗,直到完全缓解(CR).结果:36例APL病人在初发期CD13、CD33表达均明显高于对照组(P<0.05),其阳性表达率分别为63.88%(23/36)和80.55%(29/36),CD34和TdT均为低表达,经AS2O3治疗的CR期有34例APL病人CD13和CD34阳性细胞为10‰左右,其余2例仍为高表达(CD13和CD33抗原阳性细胞>10%～20%),并于3个月内复发.结论:研究结果推断,应用FCM检测APL病人CD13和CD33表达可预测复发,FCM分析结果可提高检测MRD的敏感性并可估计APL病人的预后,CD13和CD33双表达可能预后不良.

利用流式细胞仪技术研究杂色鲍血细胞的吞噬率

利用流式细胞仪(FCM)技术检测了杂色鲍血细胞在体内和体外对不同含量荧光微球悬液的吞噬率.其结果表明体内注射法测定吞噬率的方法不可行.在体外吞噬中,当荧光微球含量为血细胞含量的68.2倍时吞噬率达98.43%±1.27%,随着荧光微球含量的降低血细胞吞噬率也随着降低.当荧光微球含量为血细胞含量的6.82倍时吞噬率为63.45%±6.05%,以这一含量进行血细胞吞噬率的测定比较恰当.利用这一含量测定了正常鲍与经过低盐(S=18)海水胁迫24 h后鲍的血细胞吞噬率的变化,正常鲍的吞噬率为68.71%±10.05%,经低盐海水胁迫后鲍的吞噬率为49.49%±10.18%,吞噬率出现了显著的下降(p<0.05).实验结果表明利用流式细胞仪技术相比传统的显微镜镜检记数法检测杂色鲍血细胞吞噬率更为方便可靠.

流式细胞术(FCM)在生物学研究中的应用

流式细胞仪(Flow Cytometer)是一种对细胞进行定量分析与分选的精密仪器,它具有分析速度快、特异性好和灵敏度高的优点,是生物学研究的有力工具。流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术,它是众多不同学术背景、不同科技领域相结合的结晶。概述了FCM在国内外生物学领域应用的最新动态。

应用流式细胞技术研究铜对藻细胞膜完整性及脂酶活性的影响

应用流式细胞技术(FCM)及PI/FDA染色方法,在不同Cu2浓度处理后,从细胞膜完整性、脂酶活性两方面同时研究了Cu2+处理对微囊藻细胞的急性毒性作用.检测结果表明,在不同浓度Cu2+处理M.aeruginousa1h时,PI荧光检测显示藻细胞膜的完整性几乎没有受到影响,而FDA荧光检测则表明藻细胞的脂酶活性在一定浓度受到刺激.在Cu2+处理24h时,随着Cu2+浓度的增高,PI和FDA荧光强度变化的概率均呈明显的浓度抑制型变化,说明在此时Cu2+作用下FDA荧光的下降,不仅与细胞内脂酶活性受到抑制有关,而且也是高浓度Cu2+作用下细胞膜受损而导致细胞内含物外流的结果.

流式细胞仪研制的技术进展

流式细胞仪(flowcytometer,FCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器.概括来说,流式细胞术就是对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术.

医学院校流式细胞仪实验平台技术开发和研究生实验教学应用实践的探讨

流式细胞术广泛应用于生物医学基础和临床领域的研究和诊断中,也是医学院校医学免疫学等课程理论和实验课的教学内容之一。随着各种流式细胞前沿新技术的不断涌现,其在免疫学、病原生物学、细胞生物学、肿瘤学、血液学、药学和医学检验等研究领域中的作用越来越突出。基于科研需求推动下的流式细胞前沿技术开发应用为模式,以研究生教学和科研实践中针对性地增加流式细胞前沿技术的理论和实验内容为起点,将流式前沿技术的科研手段、思维方式和创新意识灵活贯穿于"科研-流式平台建设-研究生培养"这一途径的多个环节中。通过以科研促技术、以技术建平台和以平台促研究生教学等一系列形式,提高流式细胞技术平台的水平、培养研究生对流式细胞技术的动手操作能力,为流式细胞技术平台建设和研究生未来科研和职业发展奠定基础。

流式细胞技术在诊断B-NHL患者骨髓受累中的应用

本研究探讨流式细胞术(FCM)在诊断B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者骨髓受累中的应用意义。利用多参数FCM检测54例初治B-NHL患者的骨髓标本,并结合骨髓形态学和分子生物学检测结果进行分析。FCM诊断B-NHL患者骨髓受累的标准为出现单克隆B细胞。分子生物学方法诊断骨髓受累的标准为出现肿瘤性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排。结果表明,在诊断B-NHL患者骨髓受累方面,FCM的检出率最高(27.5%,14/54例),其次为分子生物学方法(22.2%,12/54例),而形态学检出率最低(5.6%,3/54例)。3种方法联合运用,可将B-NHL患者淋巴瘤骨髓受累的检出率提高至38.9%(21/54例)。FCM方法诊断淋巴瘤骨髓受累的14例患者中,骨髓B淋巴细胞kappa/lam bda轻链比值远超过诊断界值。FCM在早期患者(3/26例)中亦能检测到骨髓受累。在3例形态学诊断骨髓受累的患者中,FCM均检测到单克隆B细胞。FCM与分子生物学方法检测结果符合率为70.4%(38/54例,p=0.14)。结论:对于B-NHL患者,运用FCM检测骨髓中单克隆B细胞,在诊断淋巴瘤患者骨髓受累方面敏感性高、准确性好。B-NHL早期患者也存在骨髓受累的可能,应及时在治疗前评价骨髓是否受累。采用FCM、分子生物学检测技术能提高淋巴瘤患者骨髓受累的诊断效率。

应用流式细胞分析技术研究微纳尺度SiO_2对雄性大鼠睾丸生精细胞的毒性作用

为了进一步研究纳米与微米尺度SiO2对雄性大鼠的生殖毒性作用,选择不同剂量的纳米SiO2(20～40nm)与微米SiO2(1～10μm),采用气管滴注方式对雄性Wistar大鼠分组染毒.于染毒5周后处死大鼠,应用流式细胞技术对睾丸生精细胞进行分析.结果表明:1)高、低剂量纳米SiO2组及高剂量微米SiO2组细胞凋亡率均显著高于对照组;2)与对照组相比,高、低剂量纳米SiO2组及高剂量微米SiO2组1C细胞显著减少,4C细胞显著增加;3)与对照组相比,高剂量纳米SiO2组和高剂量微米SiO2组G0/G1期细胞比例显著降低,高剂量纳米SiO2组G2/M期细胞比例显著增加.结果提示纳米SiO2能够阻滞细胞周期进程,诱导生精细胞凋亡;与微米SiO2相比,纳米SiO2对大鼠睾丸生精细胞的损伤有更严重的趋势.

应用流式细胞分析技术研究溴氯海因对近头状伪蹄形藻的毒性作用

实验采用流式细胞术的检测分析方法,探究溴氯海因(BCDMH)对常见淡水藻类近头状伪蹄形藻的作用。研究结果显示BCDMH对近头状伪蹄形藻的生长抑制作用呈明显的浓度依赖型变化。根据不同浓度细胞生长抑制的百分率计算,24、48和72hBCDMH对近头状伪蹄形藻生长抑制作用的EC50分别为3.64、3.21和2.56mg·mL-1。生长抑制作用的无可观察效应浓度(NOEC)为0.31mg·mL-1。伴随着生长抑制作用,近头状伪蹄形藻细胞的活性氧(ROS)含量、酯酶活性及细胞膜完整性均发生了不同程度的改变,NOEC分别为0.16、0.31和1.3mg·mL-1。其中ROS含量的升高对BCDMH浓度的变化最为敏感,其次是酯酶活性的变化,细胞膜破损仅在5.0mg·mL-1和2.5mg·mL-1浓度组出现。结合本次研究结果,在日常使用BCDMH时,需要综合考虑使用环境和用途等因素,在不影响使用效果的前提下,应尽可能地降低其使用浓度。

流式细胞技术在哺乳动物性别控制中的研究进展

在动物性别控制的各种技术中，应用流式细胞仪分离的X、Y精子授精可较准确地控制动物后代的性别。文章简单阐述了流式细胞仪分离x、Y精子的原理及其在动物性别控制中的应用，并结合最新研究进展详细地探讨了这项技术在实际生产与应用中的注意事项，旨在为这项技术的研究与应用提供必要的参考与建议。