小鼠脾T淋巴细胞增殖实验条件优化

目的探讨刀豆球蛋白A刺激小鼠脾T淋巴细胞增殖的最佳浓度与最佳作用时间。方法以小鼠脾T淋巴细胞与刀豆球蛋白A共同培养后,采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果不同浓度的刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的刺激效果不同,在作用后48和72 h检测,10~25μg/mL浓度范围内增殖最为明显。结论刀豆球蛋白A对小鼠脾T淋巴细胞的增殖具有双重作用,推荐浓度为10~25μg/mL,检测时间为48~72 h。

牛磺酸影响人外周血T淋巴细胞增殖及分化功能的体外研究

目的:研究牛磺酸(Tau)对人外周血T淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响及其作用机制。方法:无菌分离健康志愿者外周血淋巴细胞,建立植物凝集素(PHA)刺激T细胞体外活化增殖模型。实验设置对照组(control组)、PHA刺激组(PHA5μg/mL组)及Tau处理组(PHA+Tau 80 mmol/L组、PHA+Tau 160 mmol/L组)。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测T淋巴细胞增殖率;瑞—吉染色法观察细胞形态及计算转化率;实时荧光定量PCR检测T细胞增殖标志物Ki67,Th1转录因子T-bet及细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Th2转录因子GATA-3及白介素-4/6(IL-4/6),凋亡相关因子Fas、FasL基因表达水平;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平。结果:与control组相比,PHA 5μg/mL组T淋巴细胞转化率、增殖率、增殖标志物Ki67、Th1相关因子T-bet、IFN-γ、TNF-α、凋亡相关因子Fas基因表达及胞内ROS水平升高(P<0.05),凋亡相关因子FasL基因,Th2相关因子GATA-3、IL-6基因表达水平降低(P<0.05)。与PHA 5μg/mL组相比,PHA+Tau 80 mmol/L组与PHA+Tau 160 mmol/L组T淋巴细胞转化率、增殖率、Ki67基因表达及胞内ROS水平均下降(P<0.05),Th2相关因子IL-4、IL-6基因表达水平均升高(P<0.05),Th1相关因子IFN-γ、FasL基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),PHA+Tau 80 mmol/L组Th1相关因子T-bet、TNF-α、Th2相关因子GATA-3及Fas基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05),PHA+Tau 160 mmol/L组Th1相关因子T-bet、TNF-α、Th2相关因子GATA-3及Fas基因表达水平升高(P<0.05)。结论:Tau可能通过下调Ki67表达和增强Fas-AICD途径抑制T细胞增殖转化,并可能通过降低胞内ROS含量,提高Th1/Th2活化水平,调节Th1/Th2平衡偏向Th1分化,发挥调节T淋巴细胞活化增殖及分化的作用。

急性髓系白血病伴初治B淋巴细胞增殖性疾病1例报告并文献复习

目的通过分析急性髓系白血病伴初治B淋巴细胞增殖性疾病的临床资料并进行文献复习,以期提高临床对该病的认识。方法回顾性分析解放军总医院海南医院2021年2月1日收治的1例急性髓系白血病伴初治B淋巴细胞增殖性疾病患者的临床表现,形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查结果,治疗方案,临床结局,并进行文献复习。结果患者为63岁男性,以发热伴腹痛就诊于解放军总医院海南医院,骨髓形态学、病理学检查等均支持急性单核细胞白血病,骨髓涂片和流式细胞仪检测发现一群单克隆成熟B细胞,免疫分型为CD19^(+)、CD20^(+)、CD5^(-)、CD10^(-),考虑急性髓系白血病合并B淋巴细胞增殖性疾病。患者经常规化疗和联合新药维奈克拉治疗后均未获缓解,化疗后发生Ⅳ度骨髓抑制、脓毒血症等。最终因疾病进展和感染死亡。结论急性髓系白血病合并B淋巴细胞增殖性疾病少见,容易漏诊,该类患者不易缓解,同时抵抗力低,易发生感染,治疗难度高,临床预后极差。

移植后淋巴细胞增殖性疾病的研究现状及进展

随着移植技术的不断成熟、适应证不断拓宽,异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)在全球范围内得到越来越广泛的应用,移植病例逐年增加。随之,alloHSCT术后的严重并发症之一移植后淋巴细胞增殖性疾病(post-transplant lymphoprolirative disorders,PTLD)发病率也逐渐上升,成为临床面临的严峻挑战之一[1]。

以贫血为首发表现的T细胞慢性淋巴细胞增殖性疾病报道

慢性淋巴细胞增殖性疾病(chronic lymphoproliferative disorders,CLPD)是以成熟淋巴细胞克隆性增殖为特征的一组恶性疾病,分为B和T细胞系2大类。本文报道2例T细胞CLPD患者,均以贫血为首发表现,病例2伴有单克隆异常浆细胞。

CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激在慢性B淋巴细胞增殖性疾病细胞遗传学检测中的临床价值

目的 探讨未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)DSP30联合白细胞介素-2(IL-2)刺激在慢性B淋巴细胞增殖性疾病(B-CLPD)细胞遗传学检测中的应用价值。方法 选取2020年1月至2021年6月天津金域医学检验实验室的491例B-CLPD患者骨髓标本作为研究对象,将其中240例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者作为CLL组,251例非CLL的其他B-CLPD患者作为non-CLL组。将每例骨髓标本分为2份,一份为实验组,一份为对照组,同步进行培养。实验组采用CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激细胞并培养72 h,对照组采用常规培养细胞48 h,培养完成后收集细胞并制备染色体,应用G显带技术进行核型分析,比较实验组和对照组染色体核型培养成功率和染色体核型异常检出率的差异,并比较CLL组与non-CLL组的染色体核型异常情况。结果 实验组染色体核型培养成功率和异常检出率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CLL组比较,non-CLL组高水平复杂核型及复杂核型占比更高,更易出现14q32(IGH)重排、6q-、7q-、+3及+18。结论 采用CpG-ODN DSP30联合IL-2刺激能明显提高B-CLPD的细胞遗传学异常检出率,并且在非CLL的B-CLPD中同样具有重要价值。

测定淋巴细胞增殖的MTS和XTT比色法的建立

目的建立用新型四唑氮盐MTS和XTT做比色分析测定淋巴细胞增殖效应的方法。方法分别用MTS、XTT结合PMS,对小鼠脾淋巴细胞密度和增殖进行比色测定,选择最佳实验条件,并将这两种方法与3H-TdR掺入法和MTT法比较。结果用MTS和XTT比色分析法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖,在0.5～4×109/L的范围内,所获光吸收(A)值与细胞密度呈良好的相关性。最佳细胞密度为2×109/L,最佳反应时间为6h,最佳PMS的终浓度为1×10-4mol/L。两种比色法与3H-TdR掺入法的结果相一致,且两种新方法较MTT法灵敏。结论MTS和XTT比色分析法可代替3H-TdR掺入法和MTT法,用于测定淋巴细胞的增殖效应。

三肽囊素对鸡脾脏淋巴细胞增殖转化、IL-2和IL-6分泌及其基因表达的影响

为探讨人工合成的三肽囊素(BS)作为新型免疫增强剂的作用机制,本研究采用MTT比色法、放射免疫测定法(RIA)和相对半定量RTPCR法,分别研究了BS对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞的增殖、对白细胞介素2(IL2)和白细胞介素6(IL6)分泌及其mRNA表达水平的影响。试验结果表明,0.5μg/ml、5μg/ml和50μg/mlBS处理36h,均可显著提高ConA诱导的脾脏淋巴细胞的增殖反应性;5μg/mlBS处理能显著促进脾脏淋巴细胞分泌IL6,显著升高IL6mRNA表达水平,但对IL2的分泌及其mRNA表达水平无显著影响。本研究结果进一步提示,BS可能主要通过激活IL6基因的表达和促进脾脏淋巴细胞的增殖反应。

植物多糖对断奶仔猪淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响

本试验旨在研究牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABP)、白术多糖(Atractylodes macrocephalaon polysaccharides,AM P)、黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,AP)单独或联合使用对断奶仔猪淋巴细胞增殖作用和细胞因子分泌的影响,探讨ABP、AMP、AP免疫调节作用机制。选用256头28日龄的杜长大(杜洛克×长白×大白)断奶仔猪,采用2×2×2因子设计,随机分为8个处理,每个处理4个重复,每个重复8头猪,试验第14天和第28天每个重复随机选取1头仔猪进行前腔静脉采血,测定仔猪外周血淋巴细胞转化率和血清中细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果表明:1)单独或联合添加多糖组的断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率较对照组都显著提高(P<0.05)。3种多糖合用时淋巴细胞转化率显著高于单独添加1种多糖(P<0.05),较两两合用有不同程度提高(P>0.05)。2)分别添加3种多糖组断奶仔猪血清的细胞因子IL-2、IL-1β、TNF、IFN-γ的含量与对照组相比都显著提高了(P<0.05),IL-6含量有一定程度提高,但差异不显著(P>0.05)。3种多糖两两合用或三者合用较对照组显著提高了细胞因子IL-2、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF的含量(P<0.05)。由此可知,ABP、AMP、AP单独或合并使用可促进断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率和血清细胞因子TNF、IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ的分泌。

淫羊藿多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为研究淫羊藿多糖脂质体(EPSL)增强免疫的作用机理,采用MTT法和实时荧光定量PCR法测定了EPSL对鸡外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的影响,以淫羊藿多糖(EPS)作为对照。结果表明,EPSL在体外可以显著促进淋巴细胞的增殖,其中在31.250和3.906μg·mL-1时,无论是单独作用还是协同PHA作用效果都显著优于EPS;EPSL可提高淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γmRNA的表达,其中在62.500和31.250μg·mL-1时,EPSL对3种细胞因子的诱生作用显著强于EPS,EPSL在62.500μg·mL-1时的作用最强,在31.250μg·mL-1时次之,并与剂量呈正相关。EPS经过脂质体包封后其提高淋巴细胞增殖及细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γmRNA表达的作用明显增强。

米糠多糖对环磷酰胺诱导免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞增殖活性及疫苗免疫效果的影响

为探讨米糠多糖(RBS)对鸡免疫抑制状态的调节作用,将100只7日龄健康蛋用公雏鸡随机分为对照组、环磷酰胺(CTX)组和CTX+RBS低、中、高3个剂量组。从7日龄起,肌肉注射CTX,1日1次,连注3 d,从10日龄起,CTX+RBS组灌服RBS,1日1次,连续5 d。14日龄时各组鸡进行新城疫疫苗免疫。在10,21,28,35日龄,测定外周血T淋巴细胞增殖反应活性和ND HI抗体效价。结果显示,CTX组鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性和ND HI抗体效价均显著低于对照组(P<0.01);CTX+RBS中、高剂量组鸡外周血T淋巴细胞的增殖活性均显著高于CTX组(P<0.05或P<0.01),但低于对照组(P<0.05或P<0.01);CTX+RBS中、高剂量组鸡的血清ND抗体效价均显著高于CTX组(P<0.05或P<0.01),且与对照组差异不显著(P>0.05)。证实,肌肉注射CTX可使健康雏鸡外周血T淋巴细胞的增殖反应活性和NDHI抗体效价显著降低,导致受试鸡免疫抑制;雏鸡口服一定剂量的RBS对CTX引起的细胞免疫和体液免疫抑制具有一定的拮抗作用。

中药成分复方对兔外周血淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

【目的】研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。

“艾灸血清”对肿瘤浸润淋巴细胞增殖和表型的影响

目的：观察"艾灸血清"(MS)对肿 瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocytes,TIL)增殖和表型的影响。方 法：用"艾灸血清"培养TIL，通过流式细胞术进行检测。结果： 发现"艾灸血清"能明显促进TIL的增殖，加快其进入指数生长期，"艾灸血清"能协同 细胞因子rIL-2持续升高TIL中CD+3阳性细胞数，维持CD+4阳性细胞，显著提高CD +8阳性细胞， 使CD+4/CD+8出现倒置，这种协同作用存在穴位相对特异性。结论： "艾灸血清"有利于从细胞增殖和表型两方面促进TIL的生长。

牛膝多糖衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IL-2和TNF-α的影响

目的研究牛膝多糖硫酸酯(S-AbP)和磷酸酯(P-AbP)衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生IL-2和TNF-α的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测淋巴细胞增殖,ELISA法测定培养上清液中IL-2和TNF-α的含量。结果S-AbP和P-AbP均能剂量依赖性地促进小鼠脾淋巴细胞增殖,S-AbP和P-AbP的促增殖活性较AbP强。P-AbP显著诱导脾淋巴细胞分泌TNF-α,对IL-2的分泌无明显影响。S-AbP能诱生较高含量的IL-2,而对TNF-α的分泌无明显影响。结论S-AbP和P-AbP较牛膝多糖能更有效地促进淋巴细胞增殖,还可以分别通过IL-2和TNF-α发挥免疫调节作用。

黄芪多糖脂质体对鸡淋巴细胞增殖的影响

为了观察黄芪多糖(APS)被制备成黄芪多糖脂质体后是否能够提高其生物活性,用MTT法测定了其对鸡T、B淋巴细胞增殖的影响,以APS溶液和空白脂质体作为对照。结果显示:APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同植物血凝素(PHA)作用均能显著促进鸡T淋巴细胞的增殖,并且在125～31.25μg.mL-1时,效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05);APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同脂多糖(LPS)作用均能显著促进鸡B淋巴细胞的增殖,并且在31.25μg.mL-1的效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05)。表明:APS脂质体能够提高APS促进鸡淋巴细胞增殖的能力,因此,脂质体作为APS的载体是切实可行的。

黄芩类黄酮对人免疫细胞化学发光及淋巴细胞增殖的影响

目的:探讨黄芩类黄酮对人免疫细胞影响。方法:检测了从黄芩中纯化的3′,5,6,7四羟基2′,8二甲氧基黄酮、2′,5二羟基6,6′,7,8四甲氧基黄酮、5,7,8三羟基黄酮、(2R,3R)2′,3,5,6′,7五羟基黄烷醇、黄芩甙和黄芩酮6种类黄酮成分对人多形核细胞(PMN)、单个核细胞(MNC)化学发光反应和PHA诱导淋巴细胞增殖的影响。结果:除(2R,3R)2′,3,5,6′,7五羟基黄烷醇外,其它5种抑制NFomylMetLeuPhe(fMLP)激活的PMN煌MNC或调理酵母多糖(OZ)激活的PMN产生的化学发光,也显著地抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖,在25×10-4mol/L浓度时抑制化学发光的抑制率可达41%～99%。抑制淋巴细胞增殖的抑制率可达89%～99%。结论:从黄芩中分离的类黄酮对PMN、MNC和淋巴细胞有不同的作用。这些作用可能与黄芩的抗炎症和抗过敏作用有关系。也显示这些成分有可能成为新的抗炎或免疫抑制药物。

沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响

本试验以绵羊外周血淋巴细胞为研究对象,研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率,IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响,为全面揭示沙葱黄酮的免疫调节活性机制和相关产品的开发提供试验依据。试验采用MTT法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率的影响,使用RT-PCR法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响。结果显示,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖的作用,对绵羊外周血淋巴细胞IL-2mRNA表达无明显调节作用,可上调IFN-γmRNA表达,下调IL-4mRNA表达。综上,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖及免疫调节活性的作用。

不同中药多糖体外对鸡外周血和脾脏淋巴细胞增殖能力的比较

为比较玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定各中药多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,根据安全浓度测定结果,选择250.000μg/ml、125.000μg/ml、62.500μg/ml、31.250μg/ml、15.625μg/ml 5个浓度,用MTT法比较5种中药多糖单独和PHA协同刺激对外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,以及比较5种中药多糖单独和LPS协同刺激对脾脏B淋巴细胞增殖率的影响。结果显示,玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度分别为1 250.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、312.5μg/ml。玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同PHA刺激外周血T淋巴细胞,均不同程度地表现出增强T淋巴细胞的活性。桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏B淋巴细胞,均不同程度地显示出良好的增强B淋巴细胞的活性。桑叶多糖和杜仲多糖体外增强免疫效果最佳,在62.500μg/ml和125.000μg/ml时,均显示出较强的增强外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖的能力。

黄芪活性成分的提取及其对淋巴细胞增殖的影响

研究了黄芪多糖(APS)、皂甙(AP)的提取工艺及其对淋巴细胞增殖的影响.通过单因素实验初步确定了APS,AP的提取工艺;淋巴细胞增殖实验表明,在12.5～100μg/mL范围内,APS,AP均能促进ConA诱导的T淋巴细胞增殖,其中APS的增强作用显著.