自体颅骨深低温保存方案的探索性研究

目的 探索自体颅骨冷冻保存方案,包括保存温度、保存时间、保存方法以及管理流程。方法 回顾性分析2016年1月—2021年12月于宁夏医科大学总医院神经外科行去骨瓣减压术+自体颅骨回植术的325例患者的临床资料,并结合相关文献进行复习。依据探索性保存方案使用之前和使用之后,将2016—2018年的数据分为旧管理组,2019—2021年的数据分为新管理组,进行两组数据自体颅骨回植效果的评价研究。结果 自体颅骨冷冻保存平均时间122.9 d。行回植术后平均住院时间为12.3 d,经过新保存方案和管理流程应用之后,颅内感染率由3.4%降低到1.7%。结论 -80℃深低温保存自体颅骨效果良好,可有效减少颅内感染发生率。

三维塑形钛网与深低温保存自体颅骨在早期颅骨修补中的应用效果分析

目的:分析在早期颅骨修补中运用三维塑形钛网和深低温保存自体颅骨的临床效果。方法:选择2022年 1月至2023年1月到粤北人民医院行颅骨修补术的患者80例,按照术式不同将其分为对照组、试验组,分别接受常规三维塑形钛网修补、深低温保存的自体颅骨修补,比较其恢复效果和并发症。结果:在手术情况记录方面,对比对照组与试验组,后者的住院时间、手术操作总时长更短(P<0.05);试验组感染、颅内出血、积液、伤口不愈合坏死等并发症发生率更低(7.50% VS 30.0%)(P<0.05);在Karnofsky功能状态评分方面,对比对照组与试验组,二者在颅骨修补术前、术后3个月、6个月以及1年Karnofsky功能评分结果对比,差异无统计学意义(P>0.05);在术后外观修复满意度对比方面,对照组总满意度达到80.00%,试验组总满意度达到97.50%,试验组的术后修复满意度结果更加理想,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在早期颅骨修补中,运用深低温保存自体颅骨修补术,能够使病患早日出院,减少术后并发症,提高病患的术后外观修复满意度。

深低温保存增强血小板促凝血功能的研究

为了探索血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性相关分子变化与冰冻血小板体内即刻止凝血功能增强之间的可能联系,用流式细胞术检测了新鲜血小板冰冻保存前后Ⅴ因子结合能力、血小板膜表面GPIbⅨ--Ⅴ分子(CD42a)密度,用血凝仪测定激活血小板诱导血浆凝固时间(aPACT)变化,用血细胞计数仪测定血小板计数、MPⅤ和PDW。研究结果表明,与新鲜血小板比较,深低温保存后血小板激活血小板诱导血浆凝固时间缩短43.9%;结合Ⅴ因子的荧光强度平均增加117%;结合膜表面GPIbⅨ--Ⅴ分子的荧光强度增加32%。结论:冰冻血小板体内即可止凝血功能增强,可能与血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性分子表达增加或功能增强,促凝血功能明显增强,发挥快速止血功能有关。

深低温保存角膜缘干细胞活性实验研究

目的 评价深低温冷冻保存兔眼角膜缘干细胞活性。方法 12只 (12眼 )新西兰白兔 ,制备 2mm周边角膜和 2mm球结膜的环形浅层角膜缘植片及角膜干细胞缺乏眼表疾病模型。角膜缘植片通过程序降温仪程序降温后 - 196℃深低温保存 ,30天和 6 0天后行角膜缘自体移植。组化及免疫组化证实深低温保存的角膜缘干细胞活性。结果 角膜干细胞缺乏导致角膜上皮愈合延迟 ,上皮结膜化 ,PAS染色阳性 ,AE5染色弱阳性 ;基质水肿 ,角膜血管化。深低温保存角膜缘干细胞自体移植能促进角膜上皮愈合 ,为角膜表型 ,PAS染色阴性 ,AE5染色阳性。基质水肿逐渐吸收 ,新生血管消退、变细。结论 深低温保存法能保存角膜缘干细胞活性 ;能随时按需为临床提供活性角膜缘材料 ;为深低温保存角膜缘干细胞移植治疗临床眼表疾病提供了实验依据。

深低温保存皮肤的一种快速冷却方法

提出一种适用于皮肤低温保存的快速冷却方法 ,并与目前使用的快速冷却方法进行了比较。试验结果表明 ,新方法可以得到更高的降温速率 ,使皮肤能够迅速越过零度附近的温区 ,从而有效地抑制组织内水分结晶及长大对细胞造成的损伤 ,促进玻璃化 。

简易法深低温保存角膜的实验和临床评价

自1986年3月以来,用自制的“QL生物降温仪”对简易法深低温保存角膜进行了系统研究,应用光镜、电镜、酶组织化学、动物实验和临床穿透性角膜移植及非接触式角膜内皮显微镜检测结果证明,深低温保存角膜组织结构完整、功能良好、临床移植效果满意。

组织工程化肌腱种子细胞深低温保存的实验研究

对肌腱种子细胞进行深低温保存,研究保存过程中多个环节的影响因素对细胞存活率的影响及深低温保存对种子细胞生物学特性、胶原分泌功能的影响。实验结果表明二甲基亚砜是肌腱种子细胞深低温保存中比较好的抗冻保护剂;冻存后使用与培养时不同的营养血清处理对细胞有损害,可降低细胞存活率;在冷冻保存过程中,细胞存活率与细胞浓度有一定关系,浓度太低可能降低细胞存活率;细胞在冷冻保存时,降温速度对细胞存活率有影响,慢速的分步降温组细胞存活率明显高于直接入液氮的快速降温组;采用10%二甲基亚砜加15%小牛血清加75%DM EM配方保存肌腱种子细胞,对其分泌胶原功能无明显影响,对其生长曲线、细胞周期及染色体众数无明显改变,适于肌腱种子细胞的保存。

深低温保存兔肢体不同方法复温后许旺细胞的活性

背景:根据神经再生的特点,作为再生支架的许旺细胞完整性十分重要,因此神经的深低温保存最重要的是保存许旺细胞的结构和活性。目的:使用不同方法复温深低温保存的兔肢体,通过对比其神经组织的微观形态学变化,得到一种对深低温保存复合组织中的神经组织损伤较小的复温方法。方法:取40个新西兰大白兔后肢,随机分为空白组、快速复温组、慢速复温组、对照组。空白组不进行任何处理,对照组给予保护剂灌注,快速复温组、慢速复温组给予保护剂灌注后采用梯度化降温处理并保存于液氮中72 h,而后慢速复温组采用梯度化复温断肢,快速复温组将断肢直接放入37℃水浴中快速复温。复温后的各组肢体切取胫神经,采用光镜、电镜、免疫荧光、共聚焦显微镜进行观察对比,结果用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。结果与结论:通过光镜、电镜、免疫荧光、共聚焦显微镜观察对比,空白组与对照组比较差异无显著性意义,快速复温组、慢速复温组两组均有不同程度的神经纤维断裂,轴突破坏以及线粒体肿胀,与空白组、对照组两组比较差异有显著性意义,快速复温组与慢速复温组比较,快速复温组显著优于慢速复温组。结果说明,深低温保存的兔断肢,快速复温方法对复合组织中的神经组织损伤较小。

简化一步深低温保存法保存羊膜的实验研究

目的 观察简化一步深低温保存法保存不同的时间对羊膜活性的影响。方法 取健康剖宫产产妇胎盘 ,剥离其羊膜 ,分成 2 .5cm× 2 .5cm小块 ,用简化一步深低温保存法保存 1、3个月后取羊膜行光镜、电镜、酶组织化学 [乳酸脱氢酶 (LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH) ]及免疫组织化学 [碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF) ]观察 ,并与新鲜羊膜对比。结果 (1 )光镜下 ,简化一步深低温保存法保存 1、3个月时羊膜上皮形态完好 ;(2 )电镜下 ,简化一步深低温保存法保存 1、3个月部分线粒体肿胀 ,细胞核变化不明显 ;(3 )简化一步深低温保存法保存 1、3个月时 2种酶活性与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5) ;(4)b FGF分布于羊膜上皮和基质层。简化一步深低温保存法保存 1、3个月 b FGF表达与在新鲜羊膜中的表达差异无显著性 (P>0 .0 5)。

新型玻璃化冷冻法在人卵巢组织深低温保存的应用

目的:分析新型玻璃化冷冻方法(NIV)与其他冷冻方法在人卵巢组织冷冻中的保存效果。方法:对10例患者的卵巢组织皮质片进行NIV法(NIV组)与程序化慢速冷冻法(慢速冷冻组)、滴入法玻璃化冷冻法(滴入法组)深低温保存,并与未行冷冻的新鲜卵巢组织(新鲜组)进行凋亡检测、组织体外培养和形态学分析、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度测定,并进行比较。结果:①新鲜组中正常始基卵泡百分率高于各冷冻组(P<0.01)。正常形态始基卵泡数目在各冷冻组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②各组卵巢皮质中始基卵泡凋亡发生率:各冷冻组均较新鲜组明显增加(P<0.01);各冷冻组间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢间质细胞凋亡发生率:各冷冻组较新鲜组明显增加(P<0.01);在各冷冻组间比较,NIV组间质细胞凋亡率较慢速冷冻组和滴入法组明显降低(P<0.05)。③各冷冻组LDH浓度均高于新鲜组(P<0.01)。在各冷冻组间比较,NIV组LDH浓度低于慢速冷冻组和滴入法组(P<0.01)。结论:NIV法较程序化慢速冷冻和滴入法玻璃化冷冻法能更好地保存卵泡周围的间质细胞。

长时段深低温保存血管和骨组织超微结构观察及力学研究

目的:报道长时段深低温冷冻保存血管和骨组织的超微结构及力学变化。方法:采用-196℃液氮保存18个月人的带血管骨段标本,复温后取其血管、骨组织,行光镜、透射电镜观察和力学测试,测试结果与新鲜标本对照组进行比较。结果:电镜下3种不同口径血管组织的3层结构都有不同程度损伤,以内皮细胞损伤最为严重,主要表现为内皮细胞层严重脱落,基膜裸露,内皮细胞多已坏死,核内染色质均质化,胞膜不完整,胞浆内细胞器减少或胞浆崩解;中膜平滑肌细胞的线粒体有不同程度水肿,嵴减少或消失;外膜滋养血管内皮细胞脱落。骨胶原原纤维排列整齐,分布均匀、致密,周期性横纹清晰可见,但骨细胞多已退变或坏死。18个月组与对照组胫骨的压缩强度极限为(71.23±6.60)MPa和(88.80±9.10)MPa。结论:长时段液氮保存带血管骨段,血管组织损伤严重,骨的压缩极限强度有明显差异(P<0.01)。

血液深低温保存的程序控制

血液深低温保存的程序控制广州血液中心（５１００９５）赵阳陈洪涛肖露露聂咏梅低温生物学原理应用于血液（红细胞）保存，可延长细胞的体外存活时间。自１９７７年美国Ｍｅｒｙｍａｎ教授首次将甘油保存的红细胞用于人体输血获得成功［１，２］以来，冷冻血液逐渐在临床...

深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响

目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32)。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测。结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m^12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(P>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明显高B组(P<0.05)。B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m^12m期间,C组PG含量均高于B组(P<0.05)。B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低,但两组间未见明显差异(P>0.05)。结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求。

深低温保存血小板匀速和非匀速降温模式比较研究

目的评估3种降温模式对冷冻保存血小板质量的影响,优化深低温保存血小板降温技术。方法随机选取8人份血小板,每人份等分3份并随机配对分为A、B、C组,分别采用传统匀速(-1℃/min)降温模式、-80℃低温冰箱降温模式和非匀速降温模式进行冷冻降温处理。各组降温至终点后取出,均采用37℃循环式水浴箱复温,然后检测血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(LA)、pH、CD62p阳性率、磷脂酰丝氨酸(PS)阳性率、CD62p再表达率、玻片法血小板聚集实验(SPAT)、激活血小板血浆凝固时间(APCT)。结果1)3组Plt、PDW、pH、LA、aPCT均差异无显著性统计学意义(P>0.05)。2)B组和C组各项指标差异无显著性统计学意义(P>0.05)。3)B组和C组MPV、CD62p再表达率、SPAT明显优于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。A组、B组和C组MPV分别为(5.81±0.90)fl,(5.61±0.91)fl,(5.68±0.81)fl;A组、B组和C组CD62p再表达率分别为(52.4±7.8)%,(55.0±8.6)%,(57.0±8.3)%;A组、B组和C组SPAT分别为(123±14)s,(111±13)s,(110±16)s。4)B、C组血浆LDH水平明显低于A组,差异有显著性统计学意义(P<0.05)。A组、B组和C组血浆LDH分别为(127±22)U/L,(120±20)U/L,(122±22)U/L。结论1)匀速降温不是血小板最理想的冷冻降温方式;2)能保证-10℃—-40℃温度段降温平均速率在(-1—-3)℃/min间的非匀速降温模式不仅具有可操作性强的明显优势,而且更加符合血小板低温生物学特性,有利于提高血小板保存质量。

深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植

目的 :探讨深低温冷冻保存角膜缘干细胞羊膜片的活性及异体移植疗效。方法 :将兔角膜缘干细胞移植到羊膜上 ,经简化程序降温后置 - 196℃深低温保存 ,并将兔对侧眼制成碱烧伤模型。第 30天～第 4 5天后抽样取出冷冻保存的植片分别行电镜检查及兔角膜缘干细胞异体移植 ,并收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -18;修回日期 :2 0 0 2 -0 7-15基金项目 :浙江省教委课题基金 (sjy0 0 0 0 6)。作者简介 :韩真真 ( 195 0 -) ,女 ,浙江温州人 ,主任医师。研究方向 :眼表疾病和角膜病。通信作者 :韩真真 (E -mail:zuixianmei@sina .com)。于术后第 1个月时进行印迹细胞学检查。结果 :电镜检查显示冷冻保存的角膜缘干细胞超微结构形态正常 ,线粒体轻微水肿。移植术后第 1个月时 ,角膜上皮稳固愈合 ,混浊角膜渐转透明 ,新生血管减少 ,角膜印迹细胞学检查显示角膜上皮细胞正常 ,未见杯状细胞。结论 :深低温保存的角膜缘干细胞羊膜片能有效用于眼表的重建 。

深低温保存羊膜在眼睑成形术中的应用

目的 观察和评价羊膜在眼睑缺损成形术中的应用价值。方法 采用保存人羊膜移植用于各种原因引起的眼睑缺损部位代替自体球结膜移植 ,成形再造眼睑共 2 6例 2 6只眼。结果 2 6只眼无 1例感染 ,1 0天后移植的羊膜变透明 ,缝合处结膜向羊膜上爬行 ,1个月后新生的结膜上皮完全覆盖移植区。结论 保存的人羊膜无抗原性 ,移植后能作为结膜上皮移行生长的载体 ,替代球结膜用于眼睑成形术的效果满意。

深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的差异表达

目的了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关microRNA(miRNA)的表达改变。方法应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因。结果与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5 d时无明显变化、保存7 d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296。选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7 d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在<7 d保存过程中表达上调(P<0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P>0.05)。结论短期(<7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板。