绵羊清道夫受体A基因启动子克隆及序列分析

为了分析绵羊清道夫受体A(scavenger receptor A,SRA)基因的启动子序列特征,试验根据UCSC数据库和NCBI数据库预测的绵羊SRA基因启动子序列设计特异性引物,以绵羊肺组织基因组DNA为模板进行SRA基因启动子序列PCR扩增、测序,然后对序列进行生物信息学分析,包括预测启动子活性区域、转录因子结合位点、TATA box及CpG岛。结果表明:利用根据UCSC数据库预测的SRA基因启动子序列设计的引物未扩增出目的片段,利用NCBI数据库预测的SRA基因启动子序列设计的引物扩增得到了绵羊SRA基因启动子序列,大小约为1200 bp,与NCBI预测序列的相似性为99%,其中第577位碱基发生了突变(G→A);含有1个潜在活性区域(aaaaatgagctcacattcattttttttttcttaactggc);存在干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)1、IRF2、c-Jun、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein,C/EBP)、活化蛋白1(activator protein 1,AP-1)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)转录因子结合位点,其中IRF1和c-Jun的结合位点出现频率较高;不存在TATA box和CpG岛,只存在3个CpG位点。说明SRA基因的表达可能受IRF1和c-Jun等相关转录因子的调控,不受甲基化的影响。

巨噬细胞清道夫受体与Toll样受体对Ox-LDL摄取和炎症的影响

巨噬细胞吞噬氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)后形成的泡沫细胞是动脉粥样硬化过程的标志。在巨噬细胞摄取ox-LDL过程中,清道夫受体人类白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)、清道夫受体A1(scavenger receptor class A1,SR-A1)、氧化低密度脂蛋白受体1(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor,LOX-1)发挥着重要功能。有研究表明,与炎症相关的巨噬细胞Toll样受体(Toll-like receptors,TLR),如TLR4,通过激发炎症反应影响ox-LDL的摄取,然而两者的调控机制尚不清楚。巨噬细胞清道夫受体和TLR如何相互影响可能是治疗动脉粥样硬化的关键。通过对经典清道夫受体和TLR4在ox-LDL摄取与炎症反应中的作用研究进展进行综述,以期为寻找治疗动脉粥样硬化新的靶点提供思路。

清道夫受体⁃A在类风湿关节炎中的作用及其应用研究进展

清道夫受体(scavenger receptors,SR)是表达于髓样细胞上功能多样的蛋白质,不仅具有清除修饰脂蛋白、识别并结合配体的能力,而且作为先天模式识别受体之一,在生物学过程中发挥着重要作用。因此,SR不仅对于维持宿主体内平衡起着关键作用,而且还参与了许多疾病的发病机制。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的特征是炎性细胞浸润和关节滑膜炎的发生,滑膜炎中最显著的细胞是巨噬细胞,活化的巨噬细胞能够产生多种细胞因子,最终导致软骨和骨的严重破坏。近期研究发现,SR⁃A作为SR的分类之一,在RA的发病过程中起着关键性作用,本文就SR⁃A在RA中的作用及其应用研究进展作一综述,以期能够为临床诊断及治疗RA提供新思路、新方法。

B类1型清道夫受体介导的高密度脂蛋白在年龄相关性黄斑变性中的研究进展

随着年龄的增长,机体胆固醇代谢失调和叶黄素水平异常易导致视网膜异常脂质沉积和玻璃膜疣,进而增加年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)的患病风险。视网膜细胞上的B类1型清道夫受体(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)在脂质代谢和视网膜保护中至关重要。组织细胞表面的SR-B1通过识别并结合细胞外的高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL),将游离胆固醇逆向转运至肝脏,对维持全身包括视网膜的脂质代谢平衡与避免脂质沉积至关重要。此外,HDL同样作为转运体参与叶黄素的视网膜转运过程。叶黄素,以其独特的蓝光过滤和抗氧化功能,减少蓝光对视网膜的潜在损伤并清除有害的氧自由基,发挥保护视网膜的作用。本综述将详细探讨SR-B1在视网膜中的作用,尤其是在协助胆固醇清除和叶黄素抗氧化防御方面的重要性,并评述SR-B1以及携带的有益成分如HDL和叶黄素对缓解AMD发病的机制与最新研究进展。

肺癌化疗后肺部感染病原菌的分布及血清细胞角蛋白19片段抗原、高迁移率族蛋白B1及可溶性血红蛋白清道夫受体的诊断价值

目的探讨肺癌化疗后肺部感染病原菌分布及血清细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性血红蛋白清道夫受体(sCD163)水平变化和诊断价值。方法将2022年7月—2023年11月收治的83例肺癌化疗患者根据肺部感染情况分为未感染组(n=43)和感染组(n=40)。收集肺癌化疗患者痰液标本,记录标本来源并进行菌种鉴定。比较2组血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平变化;采用多因素Logistic回归模型分析肺癌化疗后肺部感染的影响因素;分析血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平对肺癌化疗后肺部感染的诊断价值。结果80例肺癌化疗患者中,发生肺部感染者40例;病原菌检测出55株,其中革兰阴性菌、革兰阳性菌分别为34、18株,占比61.82%、32.73%,真菌仅3株,占比5.45%。感染组血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平均高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄、肺部疾病史、CYFRA21-1、HMGB1、sCD163为肺癌化疗患者发生肺部感染的影响因素(P<0.05)。血清CYFRA21-1、sCD163、HMGB1水平诊断肺癌化疗后肺部感染的曲线下面积依次为0.677、0.763、0.819(P<0.05)。结论肺癌化疗后,肺部感染患者病原菌以革兰阴性菌为主,血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平显著升高,其可作为早期诊断和评估感染的生物学指标。

基于渔业养殖的清道夫型仿生机械鱼设计

仿生鱼具有鱼类的特点,具备真实鱼类的机械结构和运动特征,而鱼类拥有卓越的水中运动能力,能够在水中自由地游动、转向和操纵,灵活性和适应性强。基于此,文章设计了一款清道夫型仿生机械鱼,在设计仿生机械鱼结构的基础上,同时对仿生机械鱼进行运动及动力设计、视觉识别系统设计和控制系统设计等,并进行水下测试。测试结果表明,仿生机械鱼具有作业时间长、能耗低、运动范围广、能在机动性能要求比较高的水下环境工作等优点,可实现水下环境的检测和生物生存状况的观测,如水下渔情分析、定位、查询等,而且该产品在市场化后销售价格低,深受渔民朋友的好评。

B类清道夫受体与胆囊结石关系的研究进展

B类清道夫受体作为机体内广泛分布的一类高密度胆固醇受体,主要参与调节脂质代谢、介导胆固醇和其他脂质体在高密度脂蛋白和细胞之间转换、促进胆固醇从外周组织流出,并促进肝脏对胆固醇的选择性摄取,通过肝内胆管将胆固醇分泌入胆汁。因此,作为参与调节脂质代谢的B类清道夫受体能够影响胆汁胆固醇的水平,而胆汁胆固醇过饱和作为胆囊胆固醇结石发生的必要条件,其所介导的胆固醇代谢在胆囊结石过程中扮演的角色已经逐步显现。

蛋白激酶C抑制剂对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体功能的影响

目的观察细胞内蛋白磷酸化水平对清道夫受体功能的影响。方法用蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素处理小鼠腹腔巨噬细胞,利用蛋白质印迹试验和放射自显影方法观察药物对细胞表面受体表达的影响,并分别测定对照组和处理组细胞对碘标记的氧化型低密度脂蛋白的结合、降解以及细胞内脂质蓄积的程度。结果0.4μmol/L蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素可以促进细胞结合碘标记的氧化型低密度脂蛋白,增加细胞表面受体的表达,但抑制细胞降解碘标记的氧化型低密度脂蛋白,同时抑制细胞内胆固醇酯的蓄积。结论以上表明清道夫受体功能与细胞内蛋白质磷酸化水平密切相关。

凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响

目的:探讨凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体(SR)的表达的影响以及肝脏(LPS)引起损伤的影响,从细胞信号转导途径阐明中药解毒机制。方法:建立内毒素血症小鼠动物模型,同时灌服凉膈散,在内毒素给药后不同时间点(2,4,8 h)杀动物取肝组织,免疫组化法观察肝脏库普弗细胞CD14及SR表达的变化,并进行图像分析和肝组织的病理检测。结果:注射LPS 2,4,8 h后,与正常对照组相比,LPS损伤组肝脏库普弗细胞CD14的表达均呈显著升高,SR表达均呈显著降低(P<0.01)。不同剂量凉膈散组及地塞米松组均介于正常对照组与LPS损伤组之间。与LPS损伤组比较,不同剂量凉膈散组及地塞米松组在两者的表达上均有显著性差异(P<0.01),以高剂量凉膈散最为明显,呈剂量相关性。肝脏损伤主要表现为空泡变性,肝脏库普弗细胞SR,CD14的表达变化与小鼠肝损伤程度呈平行关系。结论:凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞表面CD14表达上调以及SR表达下调有明显的抑制作用,并能减轻内毒素所致的肝损伤。

内毒素血症时小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体的表达

目的 探讨内毒素肺损伤时 ,肺泡巨噬细胞逐步由免疫防御型转变为效应型的分子机制。方法 建立内毒素肺损伤动物模型 ,免疫组化法观察肺泡巨噬细胞CD14及清道夫受体 (SR)表达的变化 ,并辅以计算机图像分析 ;同时检测肺体指数 ,肺组织的病理变化及动物存活率。结果 内毒素对CD14的表达呈时间依赖性升高 ,但加大剂量并未使其进一步增加 ;SR呈时间及剂量依赖性降低。肺泡巨噬细胞SR、CD14的表达变化与小鼠肺损伤程度及存活率呈平行关系。结论 内毒素致小鼠肺损伤过程中 ,肺泡巨噬细胞表面SR表达下调以及CD14表达上调可能是肺泡巨噬细胞由免疫防御细胞转化为致炎效应细胞的机制之一。

血竭提取物对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块稳定性及清道夫受体CD36表达的影响

目的观察血竭提取物对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块成分、血脂及清道夫受体CD36 mRNA表达的影响,探讨血竭提取物稳定斑块的作用及可能机制。方法33只6～8周龄ApoE-/-小鼠予高脂饮食喂养13周后,随机分为3组:模型组、血竭提取物(450.5 mg/kg)组、辛伐他汀(9.01 mg/kg)组(阳性对照组),每组11只。继续高脂喂养并给予相应药物治疗13周后,检测血脂,取主动脉根部4个切面,分别行HE染色和Movat染色,采用易损指数[(细胞外脂质成分+泡沫细胞)/(平滑肌细胞+胶原成分)]综合评价药物对小鼠主动脉斑块稳定性的影响。实时荧光定量PCR法检测主动脉内CD36 mRNA的表达。结果给药13周后,血竭提取物组和辛伐他汀组的斑块易损指数较模型组均有不同程度的降低(P<0.01),两组间比较无显著差异(P>0.05)。血竭提取物组血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平与模型组比较显著降低(P<0.05、0.01),而主动脉内CD36 mRNA的表达与模型组比较亦显著降低(P<0.01)。结论血竭提取物可通过改善斑块内部成分来稳定易损斑块,其机制与调节血脂、抑制清道夫受体CD36 mRNA的表达有关。

川芎嗪对爪蟾卵母细胞外源清道夫受体基因表达的影响

目的研究川芎嗪对SRAI基因表达的影响,从基因调控水平探讨其抗动脉粥样硬化作用的机制。方法将人SRAI基因构建在γ干扰素活性位点(GAS)调控元件的下游,并导入爪蟾卵母细胞,建立人类清道夫受体SRAI基因表达调控系统。分别用经oxLDL刺激培养牛主动脉平滑肌细胞后制备的平滑肌细胞条件培养液(SCM)以及含有川芎嗪的SCM培养卵母细胞。3d后,对卵母细胞膜上的SRA1表达量检测。结果结果显示川芎嗪可抑制SCM诱导的SRAI表达,且有量效关系。结论说明川芎嗪和γ干扰素有类似的作用,可以通过干预GAS调控途经,阻止oxLDL诱导引起的SRA1过量表达。

冠心病患者外周血单核细胞源性巨噬细胞清道夫受体活性变化及银杏叶提取物的干预作用

目的观察冠心病患者外周血单核细胞 (peripheralbloodmonocyte ,PBMs)转化为巨噬细胞清道夫受体活性及血清炎性因子的变化及银杏叶提取物 (Gingkobilobaextract,GBE)对清道夫受体活性的影响 ,探讨炎性因子水平与清道夫受体活性关系及GBE稳定粥样硬化斑块的可能机制。方法 97例血脂正常的冠心病患者分为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组、急性心肌梗死组 ,2 9名健康人作为对照组。测定所有观察对象血清C反应蛋白 (CRP)、可溶性细胞间黏附分子 1(solubleintercellularadhesionmolecule 1sICAM 1)、可溶性血管细胞黏附分子 1(solublevascularcelladhesionmolecule 1,sVCAM 1)水平 ;并在体外分离培养PBMs转化为巨噬细胞 ,观察GBE对其表达清道夫受体的影响。结果巨噬细胞清道夫受体活性及血清CRP、sICAM 1、sVCAM 1水平 ,急性心肌梗死组 >不稳定性心绞痛组 >稳定性心绞痛组 >对照组。GBE能下调冠心病患者PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性。结论冠心病患者PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性与CRP、sICAM 1、sVCAM 1呈正相关 ,PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性可作为易损斑块活动程度的监测指标 ;GBE可抑制冠心病患者血PBMs源性巨噬细胞清道夫受体活性。

丹参酮对爪蟾卵母细胞外源清道夫受体-AⅠ基因表达的影响

目的从基因调控水平探讨丹参酮对清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)基因表达的影响以及抗动脉粥样硬化的作用机制。方法将人SR-AⅠ基因构建在其调控元件SRad-SRap的下游,并经显微核注射导入爪蟾卵母细胞,建立SRad-SRap元件调控的SR- AⅠ表达系统；氧化低密度脂蛋白(OXLDL)刺激培养牛主动脉平滑肌细胞,制备平滑肌细胞条件培养液(SCM)；分别用SCM和含有丹参酮的SCM培养注射后的卵母细胞,用荧光标记配体法和ABC-Elisa法定性、定量检测卵母细胞膜上SR-AⅠ的表达。结果丹参酮可以抑制卵母细胞膜SR-AⅠ表达,且有量效关系。结论OXLDL可通过诱导平滑肌细胞产生相关因子,经SRad-SRap调控途径的作用上调SR-AⅠ的表达；丹参酮可以阻止SR-AⅠ的过量表达,可能是治疗As的作用机制之一。

MicroRNA155通过下调清道夫受体表达抑制巨噬细胞泡沫化形成

【目的】探讨microRNA-155(miR-155)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制。【方法】实时定量PCR检测miR-155的表达,Western Blot方法检测巨噬细胞A类清道夫受体SR-A和B型清道夫受体CD36的表达,激光共聚焦显微镜观察miR-155对THP-1结合、摄取DiI标记氧化型低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)能力的影响。【结果】80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)时间依赖性地诱导巨噬细胞miR-155表达上调。过表达miR-155抑制SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显降低。而反义-miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显增强。【结论】MiR-155通过降低巨噬细胞SR-A和CD36的表达抑制巨噬泡沫细胞的形成。

清道夫受体AI转基因小鼠对动脉粥样硬化具有易感性

通过本室已建立的人清道夫受体AI转基因小鼠对动脉粥样硬化的易感性的研究 ,以阐明人清道夫受体在动脉粥样硬化中的作用。为此 ,用人清道夫受体转基因小鼠 (F3)的纯合子 (TghSR AI+ +)、杂合子 (TghSR AI+ )、聚合酶链反应阴性 (TghSR AI )和C57BL 6小鼠各 1 2只 ,喂高脂高胆固醇饲料 1 4周后 ,取动物心脏和主动脉 ,作连续石蜡切片或冰冻切片 ,HE染色或油红O染色 ,用图象分析系统测量和计算主动脉动脉粥样硬化病变面积。结果发现 ,喂高脂高胆固醇饲料 1 4周后 ,小鼠动脉粥样硬化病变主要位于主动脉窦至主动脉弓的区域内 ,但纯合子鼠的动脉粥样硬化病变除在整个主动脉根部外 ,病变已扩展到胸主动脉、冠状动脉和肾动脉。C57BL 6鼠和阴性小鼠的主动脉窦区瓣膜附着处仅有轻微损伤。计算机图象分析发现 ,纯合子鼠主动脉粥样硬化病变的平均面积为 1 4 4 864± 1 71 0 3μm2 ,与杂合子组 (1 1 1 32 2± 1 0 71 3μm2 )相比 ,差异有显著性统计学意义 (P <0 .0 5) ;与聚合酶链反应阴性 ( )小鼠或C57BL 6小鼠相比 ,差异有非常显著性统计学意义 (P <0 .0 1 )。提示纯合子鼠动脉粥样硬化病变最严重 ,其次是杂合子鼠 ,而非转基因小鼠主动脉动脉粥样硬化病变较轻。转基因小鼠肝、肾也可见明显的病变。

可溶性髓系细胞触发受体-1和可溶性血红蛋白清道夫受体对脓毒症的诊断价值

目的探讨可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、可溶性血红蛋白清道夫受体(sCD163)等指标对诊断脓毒症及评估脓毒症严重程度的价值,为临床脓毒症的诊断及治疗提供可靠依据。方法 70例入住ICU时疑似脓毒症的患者,按2001年脓毒症诊断标准分为脓毒症组(A组,n=51)和非脓毒症组(B组,n=19)。脓毒症组(A组)再按病情严重程度分为一般脓毒症组(A1组,n=19)、严重脓毒症组(A2组,n=19)和脓毒症休克组(A3组,n=13)3个亚组。另收集20例健康体检者作为对照组(C组)。A组患者分别于入住ICU第1、3、7天(B组仅在第1天,C组在体检时)采集外周血,ELISA方法检测sTREM-1和sCD163表达水平,并送检验科检测降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)和白细胞计数(WBC)。结果 A组患者第1天sTREM-1、sCD163、PCT表达水平均显著高于B组(P<0.01),但两组间CRP水平差异无统计学意义(P=0.116)。亚组相同时间点比较,A2组第1、3天sTREM-1和第1、3、7天sCD163水平均显著高于A1组(P<0.05);A3组第1、3、7天sTREM-1、sCD163、PCT水平均显著高于A1组(P<0.05);A2组第1、3、7天PCT水平与A1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。sTREM-1与sCD163呈显著正相关(r=0.632)。sTREM-1、sCD163s、sTREM-1+sCD163(串联)诊断脓毒症的AUC分别为0.911、0.913、0.934,均显著高于PCT、CRP和WBC。结论 sTREM-1、sCD163、PCT等指标均能敏感反映机体脓毒症状态,sTREM-1和sCD163显著优于PCT、CRP、WBC等指标,且两者呈显著正相关关系,表明sTREM-1+sCD163(串联)可作为诊断脓毒症的可靠指标。

清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠脂质代谢的影响

目的 :鉴定清道夫受体AⅠ /Ⅱ (SR -AⅠ /Ⅱ )基因敲除小鼠 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法 :应用SR -AⅠ /ⅡcDNA基因部分序列作探针 ,用Southernblot方法检测SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲除结果 ,用生化分析仪检测血脂、载脂蛋白和血肌酐 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除和未敲除小鼠分别在普通饮食和高脂饮食情况下脂质代谢的改变情况。结果 :SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后小鼠的低密度脂蛋白 (LDL)、体重较正常对照小鼠明显增高 (P <0 0 5 ) ,出现了脂质代谢严重失衡 ,在高脂饮食情况下这种失衡更为明显 ,体重、LDL的升高幅度均大于对照组 (P <0 0 1)。结论 :SR -AⅠ /Ⅱ参与对组织和循环中的LDL的摄取和清除 ,有利于保持机体脂质代谢的正常调节。小鼠SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后脂质代谢发生了明显紊乱 ,机体对脂质代谢的调节功能减弱。

丹参多酚酸盐对单核细胞分化为泡沫细胞过程中清道夫受体A表达的干预作用

使用佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,将其分为对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+丹参多酚酸盐组(低、中、高浓度组),应用流式细胞仪测定巨噬细胞SR-A表达水平。结果镜下观察到单核细胞株THP-1在PMA诱导下转变为泡沫细胞;ox-LDL处理组SR-A蛋白表达水平较对照组明显增加(P<0.01);丹参多酚酸盐组较其他两组均明显减弱(P均<0.01),且随浓度增加SR-A表达明显减弱(P均<0.01)。认为ox-LDL能够明显刺激巨噬细胞表达SR-A,丹参多酚酸盐能够下调ox-LDL刺激的巨噬细胞表达SR-A,可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的机制之一。

马氏珠母贝B型清道夫受体PmSR-B基因克隆与表达性分析

采用c DNA末端快速扩增技术克隆获得马氏珠母贝清道夫受体基因c DNA全长序列(Pm SR-B);利用荧光定量技术检测Pm SR-B基因在各个组织中的表达量。结果表明,Pm SR-B基因c DNA序列全长1 857 bp,开放阅读框(ORF)长1 443 bp,编码480个氨基酸,5′非翻译区(5′UTR)长89 bp,3′UTR长325 bp。预测其分子质量为54.77 ku,等电点为7.94,脂溶性系数92.94,总平均亲水性-0.120,属于疏水性蛋白;不稳定指数26.37,属于稳定蛋白。氨基酸序列同源比对结果,Pm SR-B氨基酸序列与其他物种具有一定的保守性,与华贵类栉孔扇贝(Mimachlamys nobilis)SR-B的序列的相似度高达47%。荧光定量PCR检测结果,Pm SR-B在肝胰腺中表达量最高,其后依次是鳃、闭壳肌、中央膜,各组织的表达量差异具统计学意义(P<0.05)。