基于PI3K/Akt信号通路探讨温下方乙酸乙酯部位对A549细胞移植瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的探讨温下方乙酸乙酯部位经调控PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞移植瘤生长的作用及机制。方法建立人肺腺癌A549细胞移植瘤裸鼠模型,随机分为模型组、阳性对照组(顺铂注射液,2.0 mg/kg)和温下方高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),每组5只,药物干预5周后,取裸鼠肿瘤,称定质量并计算抑瘤率,HE染色观察裸鼠肿瘤病理形态学变化,TUNEL染色检测裸鼠肿瘤凋亡情况,Western blot法检测裸鼠肿瘤组织Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K、MMP-3、caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结果与模型组比较,顺铂组和温下方各剂量组肿瘤质量和瘤组织p-Akt、p-PI3K、MMP-3、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡阳性细胞面积比例和瘤组织caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),肿瘤细胞出现不同程度的坏死。结论温下方乙酸乙酯部位可抑制裸鼠A549细胞移植瘤的生长,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路有关。

温下方逆转A549/DDP细胞的多药耐药及对膜表面蛋白表达的影响

目的运用血清药理学方法,体外研究温下方对A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用及机制。方法正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549/DDP细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测温下方含药血清对A549/DDP细胞的逆转作用;运用免疫荧光技术,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果温下方含药血清能明显逆转A549/DDP细胞的多药耐药,增敏倍数为2～2.5倍。并可明显降低P-gp、LRP、MRP蛋白表达。结论温下方通过降低P-gp、LRP、MRP的表达以增强A549/DDP对化疗药的敏感性,逆转肺腺癌细胞的多药耐药。

温下方含药血清对A549／DDP细胞内erbB-2、Topo-Ⅱ表达及铂含量的影响

目的:观察温下方不同剂量含药血清对A549/DDP细胞内表皮生长因子受体(erbB-2),DNA拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)表达及铂含量的影响。方法:将对照血清及不同刺量温下方含药血清作用于A549/DDP细胞.用免疫荧光技术、激光共聚焦显微镜检测erbB-2、Topo-Ⅱ表达.用激光流式细胞仪技术检测细胞内顺铂浓度。结果:温下方含药血清能明显降低erbB-2表达(P<0.05),明显提高Tppp-Ⅱ表达及细胞内铂含量(P<0.05)。结论:温下方可能通过降低耐药细胞损伤后自我修复能力而逆转其耐药。

温下方抑瘤作用及对免疫功能的影响

目的 :研究温下方对肿瘤的抑制和对免疫功能的影响及与化疗药合并的增效减毒作用。方法 :以小鼠移植性肿瘤为模型 ,测定其抑瘤率、血象变化和免疫功能指标。结果 :本方对小鼠S180和Heps具有明显的抑瘤作用 ,其抑瘤率可至 37%和 39% ,能减轻CTX引起的WBC、RBC的下降 ,提高免疫器官的质量及血清中IL - 6和TNF -a的含量。结论 :温下方可明显抑制肿瘤生长 ,提高机体免疫功能 ,与化疗药合用具增效减毒之功。

温下方逆转MCF-7/ADM细胞耐药及诱导凋亡作用

目的 :研究自拟温下方逆转MCF 7 ADM细胞耐药、诱导凋亡作用。方法 :MTT法研究温下方含药血清对MCF 7 ADM耐药逆转作用 ,流式细胞术测定细胞内药物浓度及耐药相关蛋白P gp、凋亡调控蛋白p5 3、bcl 2的表达 ,激光共聚焦显微镜技术检测细胞内钙浓度及线粒体膜电位。结果 :温下方含药血清可提高MCF 7 ADM对化疗药的敏感性 ,增加胞内化疗药物浓度 ,使P gp表达下降 ,p5 3表达增高 ,胞内钙浓度及线粒体膜电位均降低。结论 :温下方可部分逆转MCF 7 ADM耐药 ,其逆转机制可能与诱导耐药细胞凋亡密切相关。

温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinD1表达的影响

目的:研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响。方法:正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达。结果:温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79。结论:温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达。

温下方含药血清对肺腺癌耐药细胞内GSH、GST-π的影响

目的:研究温下方含药血清对肺癌耐药细胞内谷胱苷肽(GSH)、谷胱苷肽转移酶-π(GST-π)及顺铂(DDP)含量的影响。方法:实验动物分为3组,灌服给药,制备温下方大剂量含药血清,温下方小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为4组,DDP干预组,大剂量含药血清+DDP干预组,小剂量含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组,分别孵育人肺腺癌耐药细胞株(A549/DDP)24h后,检测细胞内GSH含量及GST-π的表达,细胞内顺铂浓度。结果:A549/DDP细胞经温下方大、小剂量含药血清作用后,与对照组比较,细胞内GSH含量降低至3.55±0.65,3.54±0.74nmol/106(P<0.01);GST-π表达分别降低至1.64±0.08,1.63±0.09(P<0.05);细胞内铂含量分别增高至89.34±11.65,78.78±10.19(P<0.05)。结论:温下方含药血清能降低肺腺癌耐药细胞内GSH含量及GST-π的表达,提高耐药细胞内铂含量,从而增强耐药细胞对DDP的敏感性而逆转耐药。

基于网络药理学和分子生物学探讨温下方治疗肺癌的作用机制

【目的】应用网络药理学方法预测温下方(由人参、大黄、附子、当归组成)治疗肺癌疾病的作用靶点和信号通路,并通过细胞实验验证其预测的准确性。【方法】搜索TCMSP数据库获得温下方组成药物的有效活性成分,使用Cytoscape软件建立活性成分-作用靶点网络,使用String数据库和Cytoscape软件绘制蛋白相互作用网络,并通过DAVID数据库对靶点进行基因本体论(GO)注释及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。制备不同浓度温下方含药血清作用A549细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞增殖情况,采用定量聚合酶链反应(qPCR)技术测定苏氨酸激酶(AKT)的mRNA表达水平,验证预测结果的可靠性。【结果】温下方作用于肺癌的有效活性成分有32个,相关靶点112个,在靶点间的蛋白-蛋白相互作用网络中,分析出温下方中有39个重要靶点与治疗肺癌有关。验证实验可知,温下方含药血清能浓度依赖性抑制A549细胞的增殖,下调AKT mRNA水平。【结论】温下方治疗肺癌具有多成分-多靶点-多途径的作用特点,可为深入研究其机制指明方向。

“增液温下方”联合常规疗法治疗老年慢性功能性便秘100例临床研究

目的:观察增液温下方对老年慢性功能性便秘患者的临床疗效及其对患者结肠传输功能和生活质量的影响。方法:200例老年慢性功能性便秘患者随机分为治疗组和对照组,每组100例。对照组予枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合乳果糖口服溶液治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予中药增液温下方,2组疗程均为4周。比较2组患者临床疗效以及治疗前后便秘症状量化评分(排便间隔时间、粪便性状、排便困难、腹胀、排便不尽感)、结肠传输试验及慢性便秘生活质量自评量表(PAC-QOL,包括躯体不适、心理社会不适、担心和焦虑、满意度)评分改善情况。结果:治疗组总有效率为91.0%,明显高于对照组的79.0%(P<0.05)。2组治疗后便秘症状量化评分、PAC-QOL评分均较治疗前明显降低(P<0.05),治疗组治疗后上述评分均明显低于对照组(P<0.05)。2组患者治疗后服用钡剂24h、48h、72h的钡剂排出率均较治疗前明显升高(P<0.05),治疗组各时段排出率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:增液温下方能够改善老年慢性功能性便秘患者结肠传输功能,有助于缓解患者临床症状,提高生活质量。

温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨温下方含药血清对肠癌细胞的诱导凋亡作用。方法:运用血清药理学方法及MTT、FCM、LSCM技术,检测含药血清对细胞生长的抑制作用,从形态学、凋亡率等方面观察温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的情况。结果:温下方含药血清作用24 h,可明显抑制肠癌细胞生长,形态学观察可见明显的凋亡细胞,FCM检测肠癌细胞凋亡率显著增高。结论:温下方含药血清对肠癌细胞有明确的诱导凋亡作用。

温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡及对Bcl-2、p53表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:流式细胞技术检测肠癌细胞凋亡率及Bcl-2、p53的表达。结果:与正常血清组相比,含药血清组能明显诱导肠癌细胞凋亡,提高p53、降低Bcl-2表达(P<0.05)。结论:温下方含药血清诱导细胞凋亡的作用机制可能与提高p53、降低Bcl-2的表达有关。

温下方乙酸乙酯部位通过Hh-Gli1通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探究温下方乙酸乙酯部位对人肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:采用MTT法检测温下方乙酸乙酯部位对A549细胞增殖活力的影响,筛选合适的药物浓度,实验分为空白对照组、温下方乙酸乙酯部位组、环巴胺(Hh-Gli1通路抑制剂)组、联合组(温下方乙酸乙酯部位+环巴胺),划痕实验检测A549细胞体外迁移能力,Transwell实验分析A549细胞侵袭能力,采用PT-PCR及Western Blot法检测各组细胞MMP-2、MMP-9及Hh-Gli1信号通路相关mRNA及蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,各给药组肺腺癌A549细胞活力、迁移能力、侵袭数量显著及Ptch1、Smo、Gli1、MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:温下方乙酸乙酯部位能抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制Hh-Gli1信号通路的激活有关。

非小细胞肺癌化疗后温下方加减干预临床疗效研究

目的观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗后运用温下方加减的治疗效果。方法纳入NSCLC化疗后患者32例,核心病机均为阳气不足、寒凝瘀滞,运用温下方加减治疗并进行疗效评价。评价主要指标为:瘤灶近期疗效,临床症状评分,肺癌治疗功能评价量表(FACT-L)评分,卡氏(KPS)评分。结果治疗前后患者瘤灶近期疗效未见显著差异(P>0.05);温下方加减干预后患者临床症状总评分较前明显降低(P<0.01);肺癌治疗功能评价量表中,生理状况、功能状况、肺癌特异模块评分及总分较治疗前显著增加(P<0.05);KPS评分显示治疗后评分较治疗前显著升高(P<0.01)。结论温下方加减治疗NSCLC化疗后患者,可有效改善患者临床症状,提高患者生活质量。

温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响。方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱。A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组。孵育24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、大黄素及乌头碱。含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P<0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P<0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P<0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P<0.05)。结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药。

温下方乙酸乙酯提取部位调控CAFs介导的Hh-Gli1通路抑制A549移植瘤生长的作用机制

目的:观察温下方乙酸乙酯提取部位(WFEA)对肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)介导的Hh-Gli1通路的影响,探讨其抑制A549移植瘤生长的作用机制。方法:建立肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为A549组、模型组、顺铂组,WFEA高、中、低剂量组和环巴胺组,药物干预5周。采用超高压液相色谱-飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)分析WFEA的主要化学成分;采用小动物活体成像、HE染色、免疫组化等方法检测WFEA在A549移植瘤裸鼠体内的抗肿瘤活性;采用Western blot法和实时PCR法检测CAFs介导的Hh-Gli1信号通路水平。结果:采用UPLC-Q-TOF-MS方法共定性出WFEA的15种化学成分;与模型组比较,WFEA各给药组裸鼠肿瘤的光子强度均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01)。模型组HE染色可见细胞排列紧密,瘤细胞形态不规则,未见明显的坏死,WFEA各给药组肿瘤细胞均有不同程度坏死,胞浆破裂,细胞膜不完整;与模型组比较,WFEA各给药组FN蛋白表达以及PTCH1、SMO和Gli1的蛋白和mRNA表达水平均有不同程度的降低(P<0.01,P<0.05)。结论:WFEA对A549移植瘤有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制CAFs介导的Hh-Gli1信号通路有关。

温下方调控肿瘤相关巨噬细胞M2型极化抑制肺癌侵袭转移的机制

目的:探讨温下方对巨噬细胞极化调控机制及M2型巨噬细胞(M2-TAMs)对A549细胞侵袭转移的影响。方法:动物实验:BALB/c裸鼠随机分为模型组和温下方组,灌胃干预。活体成像分析光子强度;观察肺部病理变化;识别CD68/CD163双标M2-TAMs。细胞实验:佛波酯(PMA)及白介素-4(IL-4)诱导M2-TAMs;流式细胞术检测M2-TAMs标志蛋白CD163表达;PCR检测温下方对M2-TAMs相关基因mRNA表达的影响;划痕和Transwell检测温下方对M2-TAMs促A549细胞侵袭转移的影响;Western blot和PCR检测非受体型酪氨酸蛋白激酶3(J AK3)、信号转导及转录激活因子6(ST AT6)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PP A Rγ)蛋白及mRNA表达。结果:动物实验显示,与模型组比较,温下方在第28天~35天有效降低转移灶光子强度(P<0.05,P<0.01);温下方有效减轻肺部病理损伤;温下方降低转移瘤中M2-TAMs特异性表型CD68和CD163双阳表达。细胞实验显示,成功诱导的M2-TAMs高表达CD163;与M2组比较,温下方显著抑制M2-TAMs标志物Arg-1、Fizz-1、C D206 m R NA表达(P<0.01);与M2组比较,M2+WC F组显著降低M2-T A M s促A549细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);与M2组相比较,温下方有效降低p-JAK3、p-STAT6和PPARγ蛋白及JAK3、STAT6、PPARγmRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:温下方可能通过调控JAK3/STAT6/PPARγ信号通路,抑制巨噬细胞M2极化,降低A549细胞侵袭转移。

温肾暖脾通下方对严重脓毒症患者炎症反应的影响

目的观察温肾暖脾通下方治疗严重脓毒症的临床疗效及对患者炎症反应的影响。方法将60例严重脓毒症患者随机分为2组,每组30例,对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上辅以温肾暖脾通下方治疗。观察2组治疗第5天、第10天APACHEⅡ评分、炎症因子相关指标、降钙素原(PCT)的变化;对比2组ICU住院时间以及28 d总病死率。结果治疗组28 d病死率为16.67%,低于对照组的36.67%,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗组ICU住院时间明显短于对照组(P<0.05);治疗组第5天、第10天白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及PCT等指标的改善情况均优于对照组(P均<0.05)。结论温肾暖脾通下方能抑制严重脓毒症患者炎症反应,缩短患者ICU的住院时间,改善预后。

温肾暖脾通下方对严重脓毒症患者免疫麻痹的影响

目的:观察温肾暖脾通下方治疗严重脓毒症患者的临床疗效及其对免疫麻痹的调节作用。方法:60例严重脓毒症患者随机分为2组,每组30例,对照组采用西医常规治疗,观察组在对照组治疗基础上辅以温肾暖脾通下方治疗。观察2组治疗前及治疗第5 d、第10 d APACHEII评分、免疫学相关指标、降钙素原(PCT)的变化;比较2组ICU住院时间以及28 d死亡率。结果:观察组28 d死亡率为16.7%低于对照组之36.7%,但无统计学差异(χ~2=3.068,P=0.080);观察组ICU住院时间为(12.25±8.32)d,明显短于对照组(19.75±12.56)d(t=2.727,P=0.0084);观察组第5 d、第10 dCD_(14)^+单核细胞人白细胞DR抗原(HLA-DR)、T淋巴细胞亚群(CD_4^+、CD_8^+、CD_4^+/CD_8^+)、自然杀伤细胞(NK细胞)、免疫球蛋白IgG、IgM以及PCT等指标的的改善均优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:温肾暖脾通下方能增强严重脓毒症患者免疫功能,缩短患者ICU的住院时间,改善预后。

临床药师对外科723份运行病历的干预研究

目的通过临床药师对外科运行病历的干预,提高了外科医生合理、安全、有效使用药物的水平。方法2006年3月至2009年6月每周对外科运行病历随机抽查10～15份,根据2005年版《中国药典》、《新编药物学》16版、《抗菌药物临床应用指导原则》、《卫生部办公厅关于抗菌药物临床应用管理有关问题的通知》、麻醉药品及第一类精神药品管理办法等参考资料,对每份运行病历进行认真查阅和分析,发现问题及时与医生探讨和协商并提出书面整改建议。结果经过几年的运行干预723份病历,提出建议的174例占24.1%,此方法对外科合理、安全、有效的用药起到了保障作用。结论临床药师以干预运行病历方式工作,方法切实可行,值得推广。