背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供...背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。展开更多
目的关节软骨缺乏直接的血液供应,内部的软骨细胞依靠扩散和对流过程与关节腔内的滑液交换液体、营养物质、氧气、信号分子和废物。在这种情况下,了解细胞外基质中的溶质运输对关节软骨中软骨细胞的活动至关重要。方法利用共聚焦显微镜...目的关节软骨缺乏直接的血液供应,内部的软骨细胞依靠扩散和对流过程与关节腔内的滑液交换液体、营养物质、氧气、信号分子和废物。在这种情况下,了解细胞外基质中的溶质运输对关节软骨中软骨细胞的活动至关重要。方法利用共聚焦显微镜定量评估了不同分子量(479 Da、40 k Da、150 k Da)的荧光标记分子沿3种转运路径(表面路径、侧面路径和复合路径)的转运行为,并得出了荧光强度与溶质浓度之间的相应关系。结果与表面路径和侧面路径相比,复合路径的分子运输效果最好,479 Da、40 k D和150 k Da分子的最大扩散系数分别为27.1、16.8、14.8μm^(2)/s。随着溶质分子量的增加,其运转质量和运转速率均出现下降,这应该是受软骨致密结构的影响。随着传质时间的增加,软骨层中分子运转质量增加,但增加速率降低,有趋于稳定的趋势。在动态压缩条件下,应力幅值的增加促进了分子迁移效应,然而,频率对3种示踪剂分子的分子迁移影响并不明显。结论一定幅值的动态压缩载荷可以有效促进软骨内溶质分子的运转。展开更多
为了探究孔隙含水层的非均质性对注水井附近溶质运移的控制机理以及溶质羽的空间分布特征,基于美国MADE场地含水层地质统计学数据,利用T-PROGS(transition probability geostatistical software)构建了三维径向非均质随机模型;并结合MOD...为了探究孔隙含水层的非均质性对注水井附近溶质运移的控制机理以及溶质羽的空间分布特征,基于美国MADE场地含水层地质统计学数据,利用T-PROGS(transition probability geostatistical software)构建了三维径向非均质随机模型;并结合MODFLOW和MT3DMS模块模拟了注水井附近的溶质运移过程,研究了沉积相不同空间结构对溶质运移过程的影响。结果表明:在非均质含水层注水井附近普遍存在双峰反常运移现象;径向溶质运移受高渗透性沉积相的沉积长度和厚度影响较大,沉积长度越大溶质质量空间分布曲线双峰现象越明显,尤其当沉积长度扩大到1.75倍时,双峰现象最明显;通过模拟结果可以得出高渗透性沉积相所在位置与高流速优先流所处位置呈一定的正相关性。总体而言,高渗透性的含水介质在冲洪积孔隙含水层中具有很强的连通性,易形成优先水流通道,导致溶质沿快速和慢速两种通道运移,从而使得穿透曲线出现双峰现象。展开更多
文摘目的关节软骨缺乏直接的血液供应,内部的软骨细胞依靠扩散和对流过程与关节腔内的滑液交换液体、营养物质、氧气、信号分子和废物。在这种情况下,了解细胞外基质中的溶质运输对关节软骨中软骨细胞的活动至关重要。方法利用共聚焦显微镜定量评估了不同分子量(479 Da、40 k Da、150 k Da)的荧光标记分子沿3种转运路径(表面路径、侧面路径和复合路径)的转运行为,并得出了荧光强度与溶质浓度之间的相应关系。结果与表面路径和侧面路径相比,复合路径的分子运输效果最好,479 Da、40 k D和150 k Da分子的最大扩散系数分别为27.1、16.8、14.8μm^(2)/s。随着溶质分子量的增加,其运转质量和运转速率均出现下降,这应该是受软骨致密结构的影响。随着传质时间的增加,软骨层中分子运转质量增加,但增加速率降低,有趋于稳定的趋势。在动态压缩条件下,应力幅值的增加促进了分子迁移效应,然而,频率对3种示踪剂分子的分子迁移影响并不明显。结论一定幅值的动态压缩载荷可以有效促进软骨内溶质分子的运转。
基金support from the National Science Foundation of China (No.51971249)the Natural Science Foundation of Shandong Province,China (No.ZR2020KE012)the Science and Technology Planning Project of Longkou City,China (No.2021KJJH025).
文摘为了探究孔隙含水层的非均质性对注水井附近溶质运移的控制机理以及溶质羽的空间分布特征,基于美国MADE场地含水层地质统计学数据,利用T-PROGS(transition probability geostatistical software)构建了三维径向非均质随机模型;并结合MODFLOW和MT3DMS模块模拟了注水井附近的溶质运移过程,研究了沉积相不同空间结构对溶质运移过程的影响。结果表明:在非均质含水层注水井附近普遍存在双峰反常运移现象;径向溶质运移受高渗透性沉积相的沉积长度和厚度影响较大,沉积长度越大溶质质量空间分布曲线双峰现象越明显,尤其当沉积长度扩大到1.75倍时,双峰现象最明显;通过模拟结果可以得出高渗透性沉积相所在位置与高流速优先流所处位置呈一定的正相关性。总体而言,高渗透性的含水介质在冲洪积孔隙含水层中具有很强的连通性,易形成优先水流通道,导致溶质沿快速和慢速两种通道运移,从而使得穿透曲线出现双峰现象。