溶酶体相关4次跨膜蛋白质基因多态性与肝癌易感性的关系

目的：探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（lysosome-associated protein transmembrane 4 beta，LAPTM4B）基因多态性与肝癌易感性的关系．方法：应用病例对照研究方法，收集190例肝癌患者、190例慢性乙型肝炎患者、175例健康献血者全血，分离白细胞，提取基因组DNA，采用特异性引物PCR方法，扩增LAPTM4B第一外显子5′UTR内的部分序列，对三组人群进行分析研究．x^2检验分析肝癌组与对照组LAPTM4B的基因多态性和其他相关因素的相关性．结果：LAPTM4B等位基因在三组观察对象中的分布，^＊1和^＊2在健康对照组的频率分别是75．71％和24．29％，慢肝组73．16％和26、84％，肝癌组中66．84％和33.45％，三组比较等位基因分布频率有统计学意义，健康对照组与肝癌组比较有统计学意义（x^2=6．979，P=0．008）．LAPTM4B的基因型LAPTM4B1^＊1型、LAPTM4B^＊1／2混合型和LAPTM482^＊2型在肝癌组中的频率分别是37.9％、57.9％和4．2％、慢肝组50．5％、45．3％和4．2％、健康对照组56．6％、38.3％和5．1％，三组间三种基因型分布频率比较有统计学意义（x^2=14．854，P〈0．005）.结论：基因型^＊1／2和等位基因^＊2可能与肝癌的发生有关．

法舒地尔对蛛网膜下腔出血后大鼠脑皮质Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨法舒地尔对蛛网膜下腔出血(SAH)后大鼠脑皮质B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bax蛋白表达的影响。方法 30只大鼠随机均分为假手术组、SAH组及SAH+法舒地尔组。采用枕大池二次注血法制备大鼠SAH模型,假手术组将自体血替换为生理盐水,SAH+法舒地尔组为第2次注血后30 min腹腔注射法舒地尔注射液,剂量为3 mg/kg。24 h后比较各组大鼠术后的一般情况和神经行为学评分,TUNEL染色法观察脑皮质细胞凋亡情况,免疫组化染色和Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果与假手术组相比,SAH组和SAH+法舒地尔组大鼠出现明显的神经运动功能障碍体征;SAH组神经行为学评分(2.68±0.31)低于假手术组(5.00±0.00),SAH+法舒地尔组(3.27±0.35)高于SAH组(P<0.05)。SAH组和SAH+法舒地尔组均可见明显的神经细胞凋亡,且SAH+法舒地尔组凋亡程度轻于SAH组。SAH组的Bcl-2表达水平低于假手术组,而Bax表达水平高于假手术组(P<0.05);SAH+法舒地尔组Bcl-2表达水平较SAH组升高,而Bax表达量较SAH组降低(P<0.05)。结论法舒地尔可明显改善SAH引起的神经功能损伤,其作用机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达有关。

IGFBP-5和Lamp-2在年龄相关性白内障和透明晶状体上皮细胞的蛋白表达

目的:研究胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-likegro-wthfactorbindingprotein5,IGFBP-5)和溶酶体膜糖蛋白2(lysosomeassociatedmembraneprotein2,Lamp-2)在年龄相关性白内障和透明晶状体上皮细胞(LECs)的表达,为了解白内障发生机制提供实验依据。方法:术中获取白内障和透明晶状体前囊,免疫组化检测LECsIGFBP-5和Lamp-2蛋白的表达。结果:成熟期年龄相关性白内障与核性年龄相关性白内障LECs表达IGFBP-5蛋白阳性率分别低于透明晶状体对照组(40.0%,42.1%vs79.0%,P<0.05),Lamp-2的蛋白表达各组间没有明显差异,其中核性年龄相关性白内障组与透明晶状体对照组比较P值接近0.05。结论:年龄相关性白内障LECs的IGFBP-5和Lamp-2表达异常与该白内障的形成有关。

溶酶体相关4次跨膜蛋白质β基因在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（LAPTM4B）基因在良恶性前列腺组织中的表达差异及异常表达的LAPTM4B与前列腺癌的关系。方法采用已知微阵列（Microarray）数据分析LAPTM4B在良恶性前列腺组织中的表达差异。利用免疫组织化学技术对100例前列腺癌和80例良性前列腺标本中LAPTM4B的蛋白表达水平进行分析。结果LAPTM4B的DNA水平在良恶性前列腺组织中差异有统计学意义（P〈0．01）；转移性前列腺中LAPTM4B的DNA水平明显高于原发前列腺癌（P〈0．01）。LAPTM4B的mRNA水平在高Gleason评分患者中明显增高（P〈0．05）。LAPTM4B的蛋白表达在良恶性前列腺组织中差异有统计学意义（P〈0．01）。在不同水平前列腺特异抗原（PSA）前列腺癌患者中LAPTM4B蛋白表达差异有统计学意义（P〈0．01）；在不同Gleason评分的前列腺癌患者间LAPTM4B蛋白表达差异有统计学意义（P〈0．01）；LAPTM4B蛋白表达在PSA生化复发的前列腺癌患者中明显增高（P〈0．05）。结论在前列腺癌组织中LAPTM4B基因的表达异常，上调的LAPTM4B与前列腺癌具有相关性，可能为潜在的前列腺癌标志物。

溶酶体相关膜蛋白2基因新突变导致Danon病的临床病理特点

目的 报道1例Danon病患者的临床表现、病理改变特点和基因突变位点.方法 16岁男性患者表现为缓慢进展的骨骼肌无力和萎缩,以近端为主,伴随轻度脊柱强直.心电图示Ⅰ度房室传导阻滞,心脏超声示二尖瓣局限性增厚伴舒张功能损害,肌电图提示神经源性合并肌源性损害.患者左腓肠肌活体组织检查后,进行组织学、酶组织化学、电镜观察及抗肌营养不良素蛋白、层黏连蛋白α2、C5b9等免疫组织化学染色.患者及其父母进行溶酶体相关膜蛋白2（LAMP2）B基因的直接测序.结果 骨骼肌纤维内出现大小不一的自嗜空泡和镶边空泡,空泡内缺乏糖原,免疫组织化学显示多数肌纤维内的空泡边缘出现肌营养不良素蛋白、层黏连蛋白α2和C5b9的表达.电镜显示肌纤维内大量膜性空泡和溶酶体聚集.患者的LAMP2B基因9号外显子存在K402X突变,患者母亲无此突变,50名健康对照无此突变.结论 LAMP2B的9号外显子羧基末端的截断突变可以导致相对良性的Danon病,其心脏损害相对轻微.

高密度脂蛋白对血小板ɑ 颗粒膜糖蛋白及CD63表达的影响

目的研究高密度脂蛋白(HDL)对凝血酶刺激的人血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62P或P-选择素)、溶酶体膜糖蛋白(CD63)表达的影响。方法 3组等体积手工制备的洗涤血小板分别加入0.5、1和10U/mL的凝血酶(低、中、高凝血酶组),另外3组同样含量的凝血酶加入37℃孵育15min的HDL,分别为低、中、高复合组。同时37℃环境下孵育10min,以流式细胞仪检测各组CD62P、CD63的表达。结果低、中、高复合组CD62P表达率分别为11.55%±1.34%,17.19%±0.17%,19.79%±0.32%,均低于相应凝血酶组的18.14%±1.50%,26.24%±0.77%,80.38%±5.66%(均P<0.01),低、中、高复合组CD63表达也低于相应的凝血酶组即(2.92%±0.22%、4.20%±0.98%,5.12%±0.09%vs8.09%±0.48%、14.15%±1.39%、24.48%±1.71%,均P<0.01)。低、中复合组血小板CD62P、CD63抑制率均低于高复合组(均P<0.05)。结论在体外,HDL抑制了凝血酶刺激的血小板α颗粒膜糖蛋白和溶酶体膜糖蛋白的表达。

溶酶体相关膜蛋白2抗体在ANCA相关性肾炎患者血清中的表达水平及意义

目的 检测溶酶体相关膜蛋白2（LAMP-2）抗体在未治疗的抗中性粒细胞胞质抗体（ANCA）相关性肾炎患者血清中的水平,分析其与疾病活动度及肾损害严重程度的相关性.方法 选择33例未治疗ANCA相关性肾炎患者和30例健康对照,间接免疫荧光法和夹心ELISA法检测ANCA,ELISA法检测血清中LAMP-2抗体的水平,分析其与疾病活动度及肾损害的相关性,并观察其中25例ANCA相关性肾炎患者活动期及好转后LAMP-2抗体的动态变化.通过受试者工作特征曲线（ROC曲线）,判断未治疗ANCA相关性肾炎患者血清LAMP-2抗体的截取值（cut-off）,以此观察其在未治疗ANCA相关性肾炎组的阳性率.结果 未治疗ANCA相关性肾炎组患者血清中LAMP-2抗体的均值高于缓解期ANCA相关性肾炎组患者和健康对照,差异有统计学意义（均P＜ 0.01）.疾病缓解期患者与健康对照血清中LAMP-2抗体的水平差异无统计学意义（P＞0.05）.未治疗ANCA相关性肾炎组患者间接免疫荧光镜下表现为不典型ANCA荧光模式患者与镜下表现为核周型（P-ANCA）荧光模式患者血清中LAMP-2抗体的平均值差异有统计学意义（P＜ 0.05）.相关性分析显示,未治疗ANCA相关性肾炎患者血清中LAMP-2抗体水平分别与ESR、Scr、BUN、24 h尿蛋白量、新月体比例、伯明翰血管炎活动性评分（Birmingham vasculitis activity score,BVAS）呈正相关,与Alb、Hb、Ccr呈负相关.结论 LAMP-2抗体水平与ANCA相关性肾炎疾病活动及肾损害严重程度有一定相关性,其可能是判断ANCA相关性肾炎病情活动和缓解的一个有效指标.

溶酶体相关膜蛋白2及其抗体与慢性肾脏病患者肾功能变化的关系

目的探讨溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)及LAMP-2抗体与慢性肾脏病(CKD)患者肾功能变化的关系。方法选择2016年8月至2017年8月湖北医药学院附属东风医院收治的CKD 3~5期患者80例(CKD组)和健康体检者50例(对照组)。两组均抽取空腹肘静脉血检测血红蛋白、肌酐、尿素、白蛋白、LAMP-2和LAMP-2抗体水平,计算估算肾小球滤过率(eGFR)。CKD患者随访1年,末次随访时若eGFR下降幅度超过平均eGFR下降幅度定义为肾功能恶化;若随访期间患者开始透析或死亡,则随访结束,并将此类患者判定为肾功能恶化。以入选时血清LAMP-2及LAMP-2抗体水平中位数为依据将患者分为高水平组和低水平组。结果CKD组eGFR、血红蛋白、白蛋白明显低于对照组[(24.60 ± 5.79)ml/min比(119.20 ± 9.52)ml/min、(111.36 ± 24.41)g/L比(144.60 ± 17.85)g/L、(36.83 ± 3.84)g/L比(45.92 ± 6.37)g/L],肌酐、尿素、LAMP-2、LAMP-2抗体明显高于对照组[(306.17 ± 49.24)μmol/L比(83.24 ± 5.55)μmol/L、(15.17 ± 3.39)mmol/L比(5.57 ± 1.33)mmol/L、(24.76 ± 5.47)μg/L比(12.93 ± 4.43)μg/L、(20.33 ± 4.89)μg/L比(9.98 ± 2.20)μg/L],差异有统计学意义(P < 0.01)。80例CKD患者均完成随访,随访时间3~12(8.14 ± 1.95)个月。末次随访时患者eGFR较入选时明显降低[(19.38 ± 7.30)ml/min比(24.60 ± 5.79)ml/min],肌酐、LAMP-2抗体较入选时明显升高[(397.56 ± 52.32)μmol/L比(306.17 ± 49.24)μmol/L和(22.35 ± 4.74)μg/L比(20.33 ± 4.89)μg/L],差异有统计学意义(P<0.01);末次随访时血红蛋白、白蛋白、尿素和LAMP-2与入选时比较差异无统计学意义(P>0.05)。80例CKD患者中,肾功能恶化患者42例,肾功能稳定患者38例。在肾功能恶化患者中,末次随访时eGFR、尿素明显降低[(18.28 ± 6.92)ml/min比(24.46 ± 5.76)ml/min和(13.51 ± 1.92)mmol/L比(14.81 ± 3.32)mmol/L],肌酐、LAMP-2和LAMP-2抗体明显升高[(412.47 ± 53.21)μmol/L比(303.16 ± 47.87)μmol/L、(29.07 ± 5.42)μg/L比(25.89 ± 5.39)μg/L、(25.03 ± 3.30)μg/L比(20.95 ± 4.86)μg/L],差异有统计学意义(P < 0.01或<0.05);末次随访时血红蛋白和白蛋白与入选时比较差异无统计学意义(P>0.05)。在肾功能稳定患者中,末次随访时eGFR较入选时明显降低[(20.38 ± 7.58)ml/min比(24.73 ± 5.89)ml/min],肌酐较入选时明显升高[(381.07 ± 46.64)μmol/L比(309.49 ± 51.15)μmol/L],差异有统计学意义(P < 0.01);末次随访时血红蛋白、白蛋白、尿素、LAMP-2和LAMP-2抗体与入选时比较差异无统计学意义(P>0.05)。CKD患者中,LAMP-2高水平组(≥ 24.75 μg/L)38例,LAMP-2低水平组(<24.75 μg/L)42例;LAMP-2抗体高水平组(≥ 20.33 μg/L)38例,LAMP-2抗体低水平组(<20.33 μg/L)42例。Kaplan-Meier曲线分析结果显示,LAMP-2高水平组肾功能恶化风险明显高于LAMP-2低水平组,LAMP-2抗体高水平组肾功能恶化风险明显高于LAMP-2抗体低水平组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CKD患者血清LAMP-2、LAMP-2抗体明显升高,高血清LAMP-2、LAMP-2抗体水平患者发生肾功能恶化的风险增加。

CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。

突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。

自噬在急性胰腺炎发生发展中的作用

急性胰腺炎(AP)是一种胰腺外分泌部炎症性疾病,其发病的病理生理机制尚不清楚。自噬是细胞内代谢降解的一个重要途径,自噬损伤与许多疾病的发生发展密切相关。近来研究发现,AP中自噬过程发生明显异常,自噬体与溶酶体融合障碍,自噬溶酶体降解功能显著下降。胰腺内胰酶异常激活与炎症反应是启动AP的关键事件,而自噬功能异常与二者皆密切相关。对AP自噬功能障碍的上下游机制进行探究,有助于发现治疗胰腺炎新的分子目标和策略。

山莨菪碱对横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠保护作用的研究

目的观察山莨菪碱对横纹肌溶解引发急性肾小管上皮细胞溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)和组织蛋白酶B(Cathepsin B)表达的影响并探讨其机制。方法63只雄性SD大鼠随机均分为对照组、模型组和给药组。模型组和给药组采用甘油肌注法建立横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠模型,给药组建模前腹腔注射山莨菪碱(1 mg/kg)。甘油肌注后不同时点,HE染色观察肾组织病理学变化;检测肾功能指标[尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、肌酸激酶(CK)]、血清肌红蛋白(Mb)水平及肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。甘油肌注诱导急性肾损伤24 h时,采用免疫组化法和Western blot法检测肾组织中LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白的表达。结果HE染色示模型组大鼠发生明显肾脏损伤,山莨菪碱给药后肾脏损伤情况明显改善。模型组在甘油肌注24 h和48 h的Scr、12 h和24 h的BUN、6 h的CK、24 h的Mb均高于对照组,而给药组上述各时点的指标水平均低于模型组(P<0.05)。给药组甘油肌注6 h和12 h的MDA含量低于模型组,而SOD活性高于模型组(P<0.05)。甘油肌注24 h时,免疫组化和Western blot结果显示,模型组LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白表达水平高于对照组,而给药组LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05)。结论山莨菪碱可能通过减少Mb的生成,下调肾组织内LAMP2和Cathepsin B的表达以及抑制氧化应激反应发挥其肾脏保护作用。

禹州漏芦总黄酮对类风湿关节炎大鼠治疗机制研究

目的：研究禹州漏芦总黄酮（FELT）对类风湿关节炎大鼠模型的治疗作用及病理机制的影响。方法：50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、空白对照组和FELT 50 mg／kg组、100 mg／kg组、150 mg／kg组，每组10只。空白对照组采用完全弗氏佐剂于每只大鼠右后足趾皮内注射0．1 mL致炎的方法制备，正常对照组大鼠右后足趾皮内注射0．1 mL磷酸盐缓冲液。采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价FELT对类风湿关节炎大鼠的治疗作用，采用实时定量PCR分别检测FELT灌胃治疗对类风湿关节炎大鼠滑膜组织中纤维连接蛋白和基质金属蛋白酶3 mRNA表达的影响，对类风湿关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞（ FLS ）中促凋亡基因Bcl－2相关X蛋白（ Bax ）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（ caspase 3）、抗凋亡基因Bcl－2表达的影响。结果：类风湿关节炎大鼠经FELT 50、100、150 mg／kg 3个剂量灌胃治疗后，其关节炎评分和足爪肿胀评分较空白对照组均显著减少（均P＜0．05）。空白对照组和FELT 50、100、150 mg／kg 3个剂量组关节滑膜组织中纤维连接蛋白平均相对表达量分别为2．53和1．80、1．76、1．67（均P＜0．05）；基质金属蛋白酶3平均相对表达量分别为2．67和1．69、1．46、1．45（均P＜0．05）；FLS中Bax平均相对表达量分别为0．30和0．56、0．58、0．60（均P＜0．05） ，caspase 3平均相对表达量分别为0．29和0．54、0．56、0．59（均P＜0．05） ，Bcl－2平均相对表达量分别为4．04和2．20、2．08、2．08（均P＜0．05）。结论：FELT可以改善类风湿关节炎大鼠关节炎的严重程度，其机制可能与促进FLS凋亡、抑制滑膜组织异常增殖有关。

Danon病三例

目的 总结Danon病患者的临床表现、实验室检查结果和骨骼肌的组织病理学特点。方法对3例Danon病患者的临床资料进行总结分析。结果 3例患者均为男性,2例患者主要症状为心脏受累表现,1例患者感四肢力弱,其他症状包括消瘦、视力下降、学习成绩差等。3例患者肌肉病理显示肌纤维内自噬空泡及嗜碱性物质沉积。基因检测发现3例患者溶酶体膜相关蛋白-2 (1ysosome-associated membrane protein-2,LAMP2)基因存在半合子突变。结论 Danon病主要表现为青少年起病的心肌病,预后差。对有心肌病和肌酸激酶升高的患者建议肌肉活检,肌肉病理对诊断和鉴别诊断有意义。

LAPTM4B基因多态性与人类肿瘤的关系

LAVTM4B基因是新近发现的癌症相关基因，具有癌基因的特性。其mRNA和编码的LAPTM4B-35蛋自在许多肿瘤中显著上：调，并与肿瘤细胞的分化、增殖、侵袭、多药耐药等密切相关。近年来研究较多的是LAPTM4B基因多态性与肿瘤患者预后的关系。现就其结构、生物学功能、基因多态性与肿瘤的易感性以及对肿瘤患者预后影响等方面作一综述。

子宫内膜癌组织KIF23、LAPTM4B、Snail表达与患者临床病理参数及预后的关系

目的:探讨子宫内膜癌组织驱动蛋白家族成员23(KIF23)、溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(LAPTM4B)、Snail表达与患者临床病理参数及预后的关系。方法:选择2012年10月至2015年2月期间在我院治疗的130例子宫内膜癌患者进行临床研究,采用免疫组织化学染色法检测KIF23、LAPTM4B、Snail的表达,分析KIF23、LAPTM4B、Snail的表达与各项临床病理参数及预后的关系。Cox比例风险回归分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果:子宫内膜癌组织中KIF23、LAPTM4B、Snail阳性率明显高于癌旁正常组织(x^2=61.356、67.031、82.028,均P=0.000)。子宫内膜癌组织中KIF23、LAPTM4B、Snail表达与淋巴结转移、肌层浸润和FIGO分期相关(P<0.05)。KIF23、LAPTM4B、Snail阳性患者5年总生存率明显低于KIF23、LAPTM4B、Snail阴性患者(P<0.05)。FIGO分期、KIF23、LAPTM4B和Snail是子宫内膜癌患者预后的影响因素(HR=1.409、1.478、1.523、2.178,P<0.05)。结论:KIF23、LAPTM4B和Snail在子宫内膜癌中阳性表达率升高,并且均与子宫内膜癌淋巴结转移、肌层浸润、FIGO分期和预后相关,在子宫内膜癌的诊断和预后评估中具有一定临床意义。

TMEM106B基因多态性与阿尔茨海默病发病的关系及其机制

目的探讨TMEM106B参与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病的可能机制。方法从阿尔茨海默病神经影像学计划(ADNI)研究队列纳入接受TMEM106B rs1990622基因分型和AD脑脊液(CSF)核心蛋白、神经影像学评估的受试者308名,根据CSFβ淀粉样蛋白42(Aβ_(1-42))水平将其分为AD病理组和非AD病理组。收集患者的年龄、性别、受教育年限、基因型、AD CSF核心蛋白[包括Aβ_(1-42)、总tau蛋白(T-tau)和磷酸化tau蛋白(P-tau)]水平及神经影像学指标[包括海马、内嗅皮质及颞叶内侧MRI结果及氟脱氧葡萄糖正电子发射计算机断层扫描(FDG-PET)标准摄入值(SUV)]。采用卡方检验或t检验比较两组受试者上述指标,并采用多因素线性模型分析TMEM106B rs1990622位点多态性与AD关键表型的关联性。结果两两比较结果显示,AD病理组及非AD病理组受试者的Aβ_(1-42)、T-tau、P-tau水平及载脂蛋白E?4携带状态、FDG-PET SUV、各脑区(海马、内侧颞叶和内嗅皮质)体积比较差异有显著性(t=-6.137~50.792,P<0.05)。多因素线性模型分析结果显示,AD病理组女性受试者的TMEM106B rs1990622位点多态性与CSF Aβ_(1-42)水平存在显著关联(β=58.637,t=2.664,P<0.001)。结论TMEM106B rs1990622位点多态性与CSF Aβ_(1-42)水平存在关联,TMEM106B可能是通过影响CSF Aβ_(1-42)代谢参与AD的疾病过程。

Danon病心内膜心肌活检病理诊断

目的探讨Danon病的临床病理学特征及鉴别诊断要点。方法收集2019年1—12月首都医科大学附属北京安贞医院确诊的2例Danon病患者资料,行HE染色、免疫组织化学标记、电镜检查及基因检测。结果患者均为男性,年龄分别为21岁和19岁,2例患者临床均表现为肥厚型心肌病。心内膜心肌活检镜下组织学特征为心肌细胞肥大,细胞空泡样变性,心肌细胞中央可见窗格状透明区域,细胞核增大、深染、畸形,部分心肌细胞内可见脂褐素。超微结构特征性表现为糖原聚集。基因检测结果分别为:LAPM2基因移码突变(c.973delC)和半合子插入突变(c.719721dupAGC)。结论Danon病是一种罕见的LAMP2基因突变导致的疾病,以肥厚型心肌病为典型临床表现。心肌细胞空泡变性是典型组织学特征,心肌细胞内糖原颗粒异常聚积为超微结构特征,结合LAMP2基因突变即可确诊Danon病;熟悉该病的临床病理学特征可避免漏诊。

1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导嗜铬细胞瘤细胞自噬应激并导致α-突触核蛋白的自噬性清除障碍

目的探讨1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP^＋）所诱导的自噬应激在嗜铬细胞瘤（PCI2）细胞损伤中的作用以及MPP^＋导致α-突触核蛋白自噬性清除障碍及其异常聚集的可能机制。方法在MPP^＋处理细胞24h后，采用四甲基偶氮盐法检测细胞活力，Westernblot检测α-突触核蛋白及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）在蛋白水平表达的变化，并用MDC染色和免疫荧光标记观察自噬水平的变化及仪-突触核蛋白、LC3-Ⅱ和溶酶体相关膜蛋白-1（LAMP-1）在细胞内的共定位情况。结果MPP^＋处理后细胞的活力明显下降；与未处理组相比（PCI2组：0．20±0．08；A30P组：0．76±0．09），PCI2＋MPP^＋组（0．66±0．07，t=5．7271，P=0．0023）和A30P＋MPP^＋组（1．71±0．40，t=8．6100，P=0．0005）α-突触核蛋白表达增加；LC3-β蛋白的表达水平及自噬泡的平均数目均增高。另外，MPP^＋处理后，α-突触核蛋白和LC3-Ⅱ的荧光信号及其共定位增加，尽管LAMP-1标记的溶酶体荧光信号增加，但与LC3-H标记的自噬体共定位程度却减小。结论MPP^＋导致自噬体与溶酶体的融合出现障碍，引起α-突触核蛋白的自噬性清除障碍与自噬应激的出现，最终导致细胞的损伤甚至死亡。

自噬相关基因在小鼠急性胰腺炎中的表达及其意义

目的检测小鼠急性胰腺炎（AP）胰腺组织中自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p62和溶酶体相关膜蛋白2（LAMP-2）的表达，并探讨其意义。 方法20只小鼠随机分为AP组和对照组。采用腹腔内注射20%L-精氨酸溶液（4 g/kg体重）2次、间隔1 h的方法制备AP模型；对照组腹腔注射等容积生理盐水。24 h后观察两组小鼠胰腺组织的病理改变，采用蛋白质印迹法检测小鼠胰腺组织LC3、p62和LAMP-2蛋白的表达。 结果对照组小鼠胰腺组织未见明显病理改变；AP组小鼠胰腺腺泡水肿，腺泡结构破坏、消失，叶间隔、小叶间隔及腺泡间隔显著增宽，腺泡细胞呈不同程度变性坏死。AP组胰腺组织水肿、出血、坏死和炎症评分分别为（3.13±0.50）、（2.83±0.32）、（3.25±0.46）、（3.16±0.47）分，对照组的4项评分均为0分，差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。AP组胰腺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及p62、LAMP-2蛋白表达量分别为1.16±0.08、0.94±0.04、0.35±0.04；对照组分别为0.24±0.02、0.34±0.03、0.95±0.03。AP组胰腺组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、p62蛋白表达显著高于对照组，LAMP-2蛋白表达显著低于对照组，差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。