单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。

黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组:对照组(未处理)、高糖组(高糖刺激)及黄芪甲苷50、100μmol/L组(高糖刺激+黄芪甲苷)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体(cleaved-Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-NT)、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,侵袭细胞数显著增加,PI阳性细胞比例显著下降,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的HTR-8/SVneo细胞焦亡,改善细胞侵袭及迁移能力。

干扰PPARγ基因对绵羊滋养层细胞增殖、凋亡、迁移和脂质积累的影响

旨在通过干扰PPARγ基因的表达,探究PPARγ对绵羊滋养层细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移率以及脂质累积的影响,为深入研究PPARγ在绵羊滋养层细胞中的分子机制提供基础依据。本研究设计并合成干扰PPARγ基因的siRNA干扰片段,通过Western Blot和RT-qPCR筛选干扰效率最高的siRNA,并转染至分离培养的绵羊滋养层细胞中。通过BODIPY染色检测干扰PPARγ基因后滋养层细胞中脂滴的聚积,比色法检测细胞中甘油三酯的含量,并利用RT-qPCR检测脂代谢相关基因的转录水平。采用CCK-8法、划痕试验和流式细胞法,分别探究干扰PPARγ基因对滋养层细胞增殖活性、细胞迁移率及细胞凋亡的影响。筛选得到了干扰效率最高的siPPARγ-1片段用于转染滋养层细胞,在干扰滋养层细胞PPARγ基因表达后,细胞中脂滴聚积能力下降,甘油三酯含量降低(P<0.01),脂代谢相关基因CD36、FABP4和PLIN2的转录水平也受到抑制(P<0.01)。同时,滋养层细胞的增殖活力也显著降低(P<0.05),细胞迁移率减少(P<0.01),而细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。本研究表明PPARγ基因在调控滋养层细胞功能方面起重要作用,可对其具体分子机制进行深入研究,以期用于繁殖育种实践中。

褪黑素对猪胎盘滋养层细胞增殖及功能的影响

旨在研究褪黑素对猪胎盘滋养层细胞(porcine placental trophoblast cells,pTr)增殖和功能的影响。不同浓度褪黑素(0、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)处理pTr细胞48 h后,通过测定细胞数、VEGF、EGF、E2、P4分泌水平及相关基因mRNA表达水平,分析褪黑素对pTr细胞增殖及功能的影响。结果显示,处理48 h时,10μmol/L的褪黑素显著促进pTr增殖(P<0.05),并显著提高VEGF、EGF、E2和P4分泌水平(P<0.05)。与空白对照组相比,10μmol/L褪黑素显著上调MT1、CDK4、SLC2A1、VEGF及EGFR的表达(P<0.05),并极显著上调VEGFR2、EGF、ESR1和PGR的表达(P<0.01)。综上所述,10μmol/L的褪黑素能显著促进pTr增殖,其可能通过与MT1结合直接,或通过上调CDK4、SLC2A1基因表达间接促进pTr细胞的增殖;此外,褪黑素还可能通过上调pTr中生长因子及其受体、类固醇激素受体等基因表达,以及促进生长因子、生殖激素合成和分泌改善猪胎盘功能。

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的探讨Src同源物2磷酸酶2(SHP-2)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHP-2在子痫前期(PE)组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点。

生物钟基因BMAL1通过促进ROCK1调控滋养层细胞功能障碍的研究

目的 分析生物钟基因脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白类似蛋白1(BMAL1)对Ras同源物基因组成员A(RhoA)/Rho相关激酶1(ROCK1)信号通路的影响以及对滋养层细胞生物学功能的调控机制。方法 选择滋养层细胞系JEG3细胞,根据转染BMAL1过表达质粒以及添加1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L ROCK1抑制剂Y27632,分为对照组、BMAL1组、BMAL1+1μmol/L Y27632组、BMAL1+2μmol/L Y27632组、BMAL1+5μmol/L Y27632组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BMAL1、RhoA、ROCK1以及上皮-间充质转化(EMT)标记物N-cadherin、Vimentin和转录因子Snail、Slug的mRNA表达水平;Western blot检测蛋白表达水平;CCK8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术分别检测细胞周期、凋亡以及胞内活性氧(ROS)水平。结果 JEG3细胞过表达BMAL1后,与对照组相比,ROCK1 mRNA表达显著增加(P<0.01),RhoA mRNA表达增加但差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,BMAL1组N-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA表达水平显著增加(P<0.01)。在蛋白水平,BMAL1组ROCK1、RhoA及Snail蛋白表达较对照组显著增加(P<0.05),Y27632处理可以显著降低Vimentin及Snail蛋白表达(P<0.05)。此外,与对照组相比,BMAL1组细胞活力显著增加(P<0.001),BMAL1+Y27632各浓度组较BMAL1组细胞活力显著降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与对照组相比,BMAL1组细胞周期由G0/G1期向S+G2/M期转化,细胞总凋亡率有降低趋势但差异无统计学意义(P>0.05),胞内ROS水平显著降低(P<0.01);与BMAL1组相比,BMAL1+1μmol/L Y27632组和BMAL1+2μmol/L Y27632组细胞早期凋亡率及总凋亡率显著增加(P<0.05),BMAL1+1μmol/L Y27632组细胞ROS平均荧光强度增加但差异无统计学意义(P>0.05),BMAL1+2μmol/L Y27632组细胞ROS平均荧光强度较BMAL1组显著增加(P<0.001)。结论 生物钟基因BMAL1通过促进ROCK1表达参与调控滋养层细胞增殖、DNA合成、凋亡及氧化应激水平。

抑制miR-151表达对低氧条件下人绒毛膜滋养层细胞生物学行为的影响

目的:探讨微小RNA-151(miR-151)对低氧条件下人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo生物学行为的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:选择47例子痫前期产妇(子痫前期组)和36例正常产妇(正常组)作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组产妇胎盘组织中miR-151表达水平。将miR-151 inhibitor及其阴性对照inhibitor NC转染至HTR-8/SVneo细胞中,进行低氧(1%O_(2))干预48 h,设立对照组、低氧组、低氧+inhibitor NC组和低氧+inhibitor组。采用RT-qPCR法检测各组细胞中miR-151表达水平,MTT法检测各组细胞存活率,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9及上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。采用生物信息学分析预测miR-151下游靶基因,并结合STRING数据库对交集靶基因进行蛋白-蛋白互作(PPI)网络分析。结果:与正常组比较,子痫前期组产妇胚胎组织中miR-151表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,低氧组HTR-8/SVneo细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数及细胞中MMP-2、MMP-9、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05),miR-151和E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与低氧组比较,低氧+inhibitor组HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显升高(P<0.05),miR-151和E-钙黏蛋白水平明显降低(P<0.05),而低氧+inhibitor NC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析,miR-151下游有34个潜在靶基因,其中环指CCCH-型锌指蛋白域蛋白1(RC3H1)、AGO_(2)、AGO3、脆性X相关蛋白1(FXR1)和转化因子2β(TRA2B)可能是关键潜在靶基因。结论:miR-151在子痫前期患者胎盘组织中高表达,下调miR-151表达可促进低氧条件下滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭。

吴茱萸碱对高糖诱导的滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制

目的 基于晚期糖基化终末产物(AGE)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路探讨吴茱萸碱对高糖诱导的滋养层细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及潜在机制。方法 将人滋养层细胞HTR-8/SVneo分为对照组、高糖组、吴茱萸碱低浓度组(2μmol/L)、吴茱萸碱高浓度组(4μmol/L)、pc-NC组(转染pc-NC质粒+4μmol/L吴茱萸碱)、pc-RAGE组(转染pc-RAGE质粒+4μmol/L吴茱萸碱)。除对照组外的其余各组细胞均在高糖(25 mmol/L葡萄糖)环境下培养,除对照组、高糖组外的其余各组细胞均转染相应质粒和(或)接受相应药液干预。检测各组细胞的存活率、凋亡率、划痕愈合率、侵袭数,以及AGE、RAGE、核因子κB p65(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白及mRNA的表达情况。结果 与对照组比较,高糖组细胞的存活率、划痕愈合率、侵袭数和MMP-2、MMP-9蛋白及m RNA的表达水平均显著降低(P<0.05),其凋亡率,AGE、RAGE蛋白及mRNA的表达水平,NF-κB p65 mRNA的表达水平和NF-κB p65蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05);与高糖组比较,吴茱萸碱低、高浓度组细胞上述指标均显著改善,且高浓度组的效果显著优于低浓度组(P<0.05);过表达RAGE会减弱吴茱萸碱对高糖诱导的滋养层细胞上述指标(AGE mRNA及蛋白除外)的改善作用(P<0.05)。结论 吴茱萸碱可促进高糖诱导的滋养层细胞增殖、迁移、侵袭,改善其功能损伤,上述作用与抑制AGE/RAGE信号通路有关。

苦参碱调节Notch信号通路对高糖诱导的滋养层细胞增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱调节Notch信号通路而对高糖诱导的滋养层细胞增殖和凋亡产生的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo培养至对数期,以高糖诱导损伤,然后用不同浓度的苦参碱处理细胞并用CCK-8法检测其活性。依据结果将HTR-8/SVneo分为ctrl组(5 mmol/L葡萄糖培养)、HG组(25 mmol/L葡萄糖培养)、低浓度苦参碱组(1.00 mmol/L)、高浓度苦参碱组(1.50 mmol/L)、高浓度苦参碱(1.50 mmol/L)+Jagged1组(500μg/L Notch信号通路激活剂)。CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞中MDA和SOD活性;western blot检测Notch1、PCNA、BAX、Bcl-2蛋白表达。结果与ctrl组比较,HG组HTR-8/SVneo的细胞存活率、SOD水平、PCNA、Bcl-2蛋白表达降低,而细胞凋亡率、MDA水平、Notch1、BAX蛋白表达升高(P<0.05);与HG组比较,低浓度苦参碱组、高浓度苦参碱组细胞存活率、SOD水平、PCNA、Bcl-2蛋白表达升高,而细胞凋亡率、MDA水平、Notch1、BAX蛋白表达降低(P<0.05);Jagged1减弱了高浓度苦参碱对HTR-8/SVneo细胞增殖的促进和凋亡的抑制作用。结论苦参碱可能会通过抑制Notch信号通路而改善高糖诱导的滋养层细胞的增殖,并抑制细胞凋亡。

熊果酸对妊娠期糖尿病期间高糖诱导的滋养层细胞损伤的改善作用及其机制探讨

目的研究熊果酸对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响,并初步探讨可能的潜在机制。方法将人HTR-8/SVneo滋养层细胞系分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、模型组(25 mmol/L葡萄糖)、低剂量组(25 mmol/L葡萄糖+1μmol/L熊果酸)、中剂量组(25 mmol/L葡萄糖+3μmol/L熊果酸)、高剂量组(25 mmol/L葡萄糖+5μmol/L熊果酸)。分别采用细胞计数试剂盒-8、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测和流式细胞术检测细胞活力、细胞毒性和凋亡。采用酶联免疫吸附试验和相应试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-1β、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。蛋白免疫印迹用于分析Toll-样受体4(TLR4)/髓系分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组细胞活力、Bcl-2蛋白表达,以及IL-10、SOD和CAT水平均显著降低,而LDH释放量、细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达及TNF-α、IL-1β和MDA水平均显著升高(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞活力、Bcl-2蛋白表达,以及IL-10、SOD和CAT水平均显著升高,而LDH释放量、细胞凋亡率、Bax、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达及TNF-α、IL-1β和MDA水平均显著降低(P<0.05)。结论熊果酸对能够通过抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡来防止GDM期间高糖诱导的滋养层细胞损伤,这可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路激活来实现。

miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

miR-517在子痫前期患者胎盘外泌体中的表达及其对滋养层细胞侵袭与T细胞增殖的影响

目的 探讨在子痫前期(PE)患者的胎盘组织与胎盘外泌体中微小RNA-517(miR-517)的表达及其对滋养层细胞侵袭与T细胞增殖的影响。方法 收集2020年5月至2021年5月于海南医学院第二附属医院确诊为PE的患者50例(PE组)和50例健康孕产妇(NP组)的胎盘绒毛组织和外周血,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组胎盘绒毛组织中miR-517的表达差异;分离外周血中的胎盘外泌体,采用透射电子显微镜(TEM)与纳米示踪技术(NTA)分析外泌体形态、大小分布及浓度,蛋白质印记法(Western blot)检测外泌体标志性蛋白CD63、肿瘤易感基101(TSG101)和胎盘特异性蛋白胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的表达;体外培养人绒毛滋养层细胞HTR-8与人T细胞系Jurkat T细胞,将过表达miR-517的miR-517 mimic与阴性对照序列miR-NC转染至上述细胞中,并按细胞处理方式的不同将HTR-8与Jurkat T细胞各分为5组:对照组、miR-517 mimic组、miR-NC组、NP-外泌体组、PE-外泌体组;qPCR检测各组HTR-8或Jurkat T细胞中miR-517的表达水平,CCK-8检测其增殖能力;Transwell检测各组HTR-8细胞的侵袭能力。结果 与NP组比较,PE组胎盘组织与胎盘外泌体中miR-517的表达均明显降低(P<0.05),且胎盘外泌体具有典型的圆盘状或新月形的双层膜结构,颗粒直径在30~150 nm, CD63、TSG101、PLAP表达升高(P<0.05);与对照组比较,miR-517 mimic组与NP-外泌体组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖及侵袭能力均明显升高(P<0.05),Jurkat T细胞的增殖能力却明显降低(P<0.05),miR-NC组均无明显改变(P>0.05),PE-外泌体组中miR-517水平无明显差异(P>0.05),但HTR-8细胞增殖及侵袭能力均降低(P<0.05),而Jurkat T细胞的增殖能力却明显升高(P<0.05)。与NP-外泌体组比较,miR-517 mimic组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖、侵袭能力均明显升高(P<0.05),而Jurkat T细胞的增殖能力却降低(P<0.05),PE-外泌体组中miR-517表达和HTR-8细胞增殖、侵袭能力均明显降低(P<0.05),但Jurkat T细胞的增殖能力却升高(P<0.05)。结论 在PE患者胎盘组织与胎盘外泌体中表达下调的miR-517可能通过调控滋养层细胞侵袭与T细胞增殖参与影响PE的发生与发展。

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组:空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升高(P<0.05);Fyn mRNA和蛋白的表达及活性水平均明显升高(P<0.05);ERK1/2及STAT3的磷酸化水平均不同程度增加(P<0.05)。结论本研究首次在滋养层细胞中检测到miR-125a-3p的表达。miR-125a-3p通过作用于Fyn和ERK1/2-STAT3信号通路可抑制滋养层细胞的增殖、侵袭,促进其凋亡。

circIRAK3靶向miR-942-5p/LITAF轴调控滋养层细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT

目的探讨环状RNA circIRAK3对滋养层细胞生物学行为的影响及其潜在分子调控机制。方法采集19例正常足月妊娠孕妇和25例早发型子痫前期(PE)孕妇的血液和胎盘组织样本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析circIRAK3的表达量,受试者工作特征曲线(ROC)分析其对PE的诊断价值。体外培养人滋养层细胞HTR-8/SVneo,通过CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验评估细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot实验检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验分析并验证circIRAK3的调控机制。结果circIRAK3在PE患者血液和胎盘组织样本中高表达,且血液中circIRAK3的表达对PE具有一定诊断价值(AUC=0.882)。细胞功能研究显示,过表达circIRAK3能够抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭。调控机制分析显示,miR-942-5p是circIRAK3的靶miRNA,而脂多糖诱导肿瘤坏死因子α(LITAF)是miR-942-5p的靶基因,circIRAK3可作为miR-942-5p的分子海绵上调LITAF的表达;过表达miR-942-5p或抑制LITAF表达均能减弱circIRAK3对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论circIRAK3通过靶向miR-942-5p上调LITAF的表达,从而抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭,提示circIRAK3可能参与PE的发病。

CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。

微小miR-184在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制探究

目的:探究微小miR-184(miR-184)在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法:利用定量的反转录(PCR)技术检测62例女性滋养层细胞组织中微小miR-184的表达,以分析和观察女性滋养层细胞组织中的miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和滋养层细胞系(Swan71)两种细胞中的表达水平和对细胞增殖与凋亡的作用机制。结果:miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和人滋养层细胞(Swan71)两种细胞中的相对表达水平在滋养层细胞中比在正常的上皮组织细胞中更高(均P<0.05);转染小干扰RNA(siRNA)沉默miR-184促使miR-184的表达能够抑制HTR8/SVneo和Swan71细胞的增殖,利用si-miR-184的转染降低miR-184的表达水平能够阻碍女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01),而miR-184的过度表达能够明显推动女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01)。结论:通过抑制miR-184表达可以调控和诱导滋养层细胞凋亡的保护作用。

HIF-1α在奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的机制研究

为探究HIF-1α在CoCl_(2)影响奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的作用,揭示奶牛胎盘在缺氧条件下的形成机制,从早期妊娠奶牛胎盘中分离纯化奶牛胎盘滋养层细胞(BTCs),用吉姆萨染色法观察细胞形态,免疫荧光法检测上皮细胞标志蛋白角蛋白7(CK7)、Thy/CD90蛋白表达,后将pCI-neo-hTERT质粒转染至BTCs,用qPCR和Western Blot法检测细胞TERT mRNA及蛋白表达,用CCK8法测定细胞增殖率,用ELISA法检测细胞分泌胎盘催乳素(PL)的能力,进一步利用siRNA沉默细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,ELISA法检测细胞分泌血管内皮生长因子(VEGFA)能力,通过划痕试验及Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果显示,分离纯化的BTCs为典型上皮样细胞,存在一定数量的双核细胞,并表达上皮细胞标志蛋白CK7,未见Thy/CD90表达,转染后的细胞可稳定表达端粒酶(TERT)mRNA及蛋白,连续传代50代未见细胞老化现象,且增殖率显著高于原代BTCs(P<0.05),分泌PL能力较原代BTCs无显著差异(P>0.05)。经CoCl_(2)处理后发现,BTCs细胞活力随CoCl_(2)处理浓度及时间的增加而降低,HIF-1αmRNA及蛋白表达随CoCl_(2)浓度的增加而减少(P<0.05),400μmol/L CoCl_(2)作用于BTCs 24 h建立缺氧模型,VEGFA分泌和迁移侵袭能力在BTCs缺氧状态下显著升高(P<0.05),而将HIF-1α基因沉默后显著降低了BTCs分泌VEGFA和迁移侵袭能力(P<0.05)。总之,通过外源性TERT基因转导建立了永生化的BTCs(Bovine trophoblast cells),永生化后的细胞具有与原代细胞相似的生物学特性,BTCs在缺氧条件下具有更强的VEGFA分泌能力及迁移侵袭能力,且与HIF-1α基因表达的上调有关。

子痫前期患者胎盘组织中抑微管装配蛋白1表达对滋养层细胞的影响及其机制

目的:探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织中抑微管装配蛋白1(STMN1)表达对滋养层细胞侵袭和迁移功能的影响,并阐明其相关机制。方法:选取17名健康妊娠孕产妇(对照组)和15例PE患者(PE组)的胎盘组织。将人滋养层HTR-8细胞分为siRNA-STMN1组(转染siRNA-STMN1)、siRNA-NC组(转染阴性对照序列siRNA-NC)、pcDNA3.1-STMN1组(转染pcDNA3.1-STMN1)和pcDNA3.1-NC组(转染阴性对照序列pcDNA3.1-NC)。采用免疫组织化学(IHC)染色观察2组研究对象胎盘组织中STMN1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达强度,CCK-8法检测各组HTR-8细胞增殖率,细胞划痕实验检测各组HTR-8细胞迁移能力,Transwell小室实验检测各组HTR-8细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象和各组HTR-8细胞中STMN1 mRNA表达水平,Western blotting检测2组研究对象和各组HTR-8细胞中STMN1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PE组患者收缩压、舒张压和尿蛋白水平均明显升高(P<0.01),新生儿体质量增加(P<0.05)。IHC染色观察,与对照组比较,PE组患者胎盘绒毛组织中STMN1和E-cadherin蛋白表达强度增加,N-cadherin蛋白表达强度降低。CCK-8法检测,与siRNA-NC组比较,siRNA-STMN1组HTR-8细胞增殖率降低(P<0.05);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-STMN1组HTR-8细胞增殖率升高(P<0.05)。细胞划痕实验检测,与siRNA-NC组比较,siRNA-STMN1组HTR-8细胞迁移率降低(P<0.05);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-STMN1组HTR-8细胞迁移率升高(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与siRNA-NC组比较,siRNA-STMN1组侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-STMN1组侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,PE组患者胎盘组织中STMN1 mRNA表达水平降低(P<0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA-STMN1组HTR-8细胞中STMN1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-STMN1组HTR-8细胞中STMN1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,PE组患者胎盘组织中STMN1蛋白表达水平降低(P<0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA-STMN1组HTR-8细胞中STMN1和N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-STMN1组HTR-8细胞中STMN1和N-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:PE患者胎盘组织中STMN1表达明显减少,STMN1可能通过调控滋养层细胞的EMT进程抑制细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力,从而参与PE的发生发展。

沉默T-cadherin对ox-LDL诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo生物学行为的影响

目的 探讨沉默T-钙黏蛋白(T-cadherin)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo生物学行为的影响。方法 将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白对照组、ox-LDL组、Tcadherin小干扰RNA(siRNA)阴性对照组、T-cadherin siRNA组。各组细胞转染后,实时荧光定量PCR检测各组Tcadherin mRNA水平;MTT法检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室实验、划痕实验分别检测细胞侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹实验检测细胞胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达水平。结果 与空白对照组相比,ox-LDL组和T-cadherin siRNA阴性对照组T-cadherin mRNA、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高,克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05);与ox-LDL组和T-cadherin siRNA阴性对照组相比,T-cadherin siRNA组T-cadherin mRNA、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低,克隆形成率、侵袭细胞数、划痕愈合率、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 沉默T-cadherin可抑制ox-LDL诱导的HTR-8/SVneo细胞异常凋亡,并促进细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

滋养层细胞在先兆流产合并宫腔积血中的研究进展

先兆流产合并宫腔积血是妊娠期常见疾病,其发病机制与母胎界面微环境失衡、子宫螺旋动脉重塑受阻有关。滋养层细胞是母胎界面微环境的最外层,其增殖、迁移及侵袭与正常妊娠密切相关,在免疫耐受与调节、子宫螺旋动脉重塑、维持母胎界面微环境等方面发挥着不可替代的作用。近年来滋养层细胞已经成为自身免疫性疾病等领域的研究主线,研究发现其在先兆流产合并宫腔积血的诊治中发挥重要作用。本文就滋养层细胞在先兆流产合并宫腔积血中的研究进展进行综述。