抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析

目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫荧光、免疫沉淀和质谱分析、流式细胞术、免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性。结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用。结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值。

滋养层细胞表面抗原-2促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的实验研究

目的研究滋养层细胞表面抗原-2(Trop2)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及可能的调控机制。方法先应用免疫组织化学方法检测Trop2在鼻咽癌组织及对照鼻咽上皮中的表达。随后在鼻咽癌CNE-2细胞中,应用转染技术分别上调和下调Trop2的表达,通过EdU染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、实时荧光定量聚合酶链反应、细胞迁移实验(Transwell法)、细胞侵袭实验检测Trop2对鼻咽癌细胞行为学的影响,并采用Western印迹技术检测Trop2对E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响。结果Trop2在鼻咽癌组织中高表达,且与患者的淋巴结转移及肿瘤分期显著相关。Trop2过表达可以上调鼻咽癌细胞的增殖能力和鼻咽癌细胞中干细胞基因Nanog、OCT4 mRNA的表达。Trop2过表达可以增强鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力。与对照组相比,高表达Trop2细胞组E-cadherin表达下调,N-cadherin表达上调,低表达Trop2细胞组则相反。结论Trop2在鼻咽癌组织中表达增加,可能是鼻咽癌肿瘤干细胞的特征基因,其可能通过诱导上皮质细胞-间充质转化过程促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭。

泛素特异性肽酶22、滋养层细胞表面抗原-2表达与鼻咽癌临床病理特征的关系及对预后的影响

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)、滋养层细胞表面抗原-2(Trop2)表达与鼻咽癌(NPC)病人临床病理特征的关系及对预后的影响。方法选取2014年1月至2016年6月安阳市眼科医院NPC病人及其组织标本92例作为观察组,另选取同期慢性鼻咽炎病人及其组织标本95例作为对照组,检测对比两组USP22、Trop2蛋白表达水平及USP22、Trop2诊断价值。比较不同临床病理特征病人USP22、Trop2蛋白表达水平及其与NPC临床病理特征关联性。并对比不同USP22、Trop2表达水平病人3年无进展生存期及总生存期。结果观察组USP22(59.78%比12.63%)、Trop2(66.30%比15.79%)蛋白阳性表达率高于对照组(P<0.05);logistic回归显示:TNM分期、淋巴结转移、分化程度等3个因素均为USP22、Trop2蛋白表达的影响因素或关联因素(P<0.05);USP22、Trop2联合诊断准确性、敏感性高于二者单一诊断;TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、淋巴结转移的NPC病人组织标本中USP22、Trop2蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者(P<0.05);USP22、Trop2蛋白水平与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);USP22、Trop2蛋白阳性表达病人3年总生存率、无进展生存率低于阴性表达病人(P<0.05);USP22蛋白、Trop2蛋白高危组、低危组生存率对比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Trop2、USP22蛋白表达水平在NPC病人中呈异常高表达状态,与TNM分期、分化程度、淋巴结转移存在一定关联性,加强Trop2、USP22蛋白表达水平联合检测,对早期识别NPC、评估预后具有重要指导意义。

人滋养层细胞表面抗原-2、细胞周期蛋白D1表达水平对胆囊癌患者组织分化程度的影响

目的探究人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平对胆囊癌患者组织分化程度的影响。方法选取本院2014年6月～2017年12月胆囊癌患者114例设为研究组,组织分化程度:低分化46例,中分化42例,高分化26例。另选同期胆囊良性病变患者117例设为对照组,均检测TROP2、Cyclin D1蛋白表达情况,比较两组TROP2、Cyclin D1阳性表达率,对比研究组不同组织分化程度患者TROP2、Cyclin D1阳性表达率。结果研究组TROP2、Cyclin D1阳性表达率较对照组高(P <0.05);研究组低分化患者TROP2、Cyclin D1阳性表达率较中/高分化患者高(P <0.05)。结论胆囊癌患者TROP2、Cyclin D1呈异常高表达,且组织分化程度越低,其表达越高,可为胆囊癌患者早期诊断及预后情况评估提供参考依据。

RNA干扰下调人滋养层细胞表面抗原-2基因表达对前列腺细胞侵袭及尿激酶纤溶酶原激活物蛋白的影响

目的 观察人滋养层细胞表面抗原-2（Trop-2）基因对人前列腺细胞侵袭的影响,并探讨其分子机制.方法 采用TROP-2基因小于扰RNA（siRNA）转染处理人前列腺PC-3细胞后,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测TROP-2基因mRNA和蛋白水平;采用Transwell小室法试验检测癌细胞侵袭能力;采用Western blot法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）蛋白变化.结果 siRNA转染组细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.01）.siRNA转染组穿过滤膜的细胞数明显下降,且呈浓度依赖性（P＜0.01）.Transwell小室试验结果显示,Con-A、Con-B、siRNA（5nmol/L）、siRNA（10 nmol/L）、siRNA（20 nmol/L）组穿膜细胞数分别为（128.16 ±3.89）、（127.58 ±3.56）、（102.56 ±3.28）、（76.38 ±3.25）和（39.89±3.18）个.Western blot结果显示,TROP-2 siRNA转染组uPA蛋白表达明显下调,且与浓度相关.结论 TROP-2基因在人前列腺癌细胞侵袭中发挥重要的作用,采用siRNA转染可抑制前列腺细胞侵袭,下调uPA表达,是其重要机制之一.

上调人滋养层细胞表面抗原-2基因对人前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的 观察过表达人滋养层细胞表面抗原-2（TROP-2）基因对人前列腺癌细胞的迁移和侵袭及上皮-间充质转化的影响.方法 将TROP-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建TROP-2基因过表达真核表达质粒.PC-3细胞分为3组：空白对照组、空载对照组和TROP-2过表达组.转染PC-3细胞后,采用Western blot法观察TROP-2蛋白表达,采用Transwell方法检测癌细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot法检测癌细胞E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白表达.结果 成功构建TROP-2基因真核表达质粒.与空白对照组和空载对照组比较,TROP-2过表达组TROP-2蛋白明显升高.Transwell迁移实验结果显示,空白对照组、空载对照组和TROP-2过表达迁移细胞数分别为（132.6±2.2）、（130.8±1.8）和（189.6±2.6）个.与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;Transwell侵袭试验显示,空白对照组、空载对照组和TROP-2过表达迁移细胞数分别为（118.16±1.96）、（117.52±1.85）和（166.38±1.65）个.与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.Western blot结果显示,与空白对照组比较,TROP-2过表达细胞组E-钙黏蛋白表达降低,而N-钙黏蛋白表达增高.结论 TROP-2过表达可促进入前列腺癌细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与促进上皮-间充质转化有关.

核苷(酸)类似物序贯联合干扰素α-2b治疗低水平乙型肝炎表面抗原慢性乙型病毒性肝炎的效果观察

目的观察核苷(酸)类似物(NAs)序贯联合干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗低水平乙型肝炎表面抗原(HBsAg)慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的效果,为临床提供参考。方法选取2016年1月至2021年12月东莞市长安医院收治的80例低水平HBsAg CHB患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组患者单用NAs治疗,观察组患者在NAs治疗基础上序贯联合IFNα-2b治疗。比较两组患者HBsAg转阴情况、HBsAg水平、谷丙转氨酶(ALT)水平、血清乙型肝炎病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)水平,分析观察组患者不良反应发生情况。结果治疗12、24周,两组患者HBsAg转阴率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗48周,观察组患者HBsAg转阴率高于对照组(P<0.05)。治疗48周,观察组患者HBsAg水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(均P<0.05)。两组患者血清ALT水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。两组患者血清HBV-DNA水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。观察组部分患者发生流感样症状、食欲下降、乏力、白细胞计数降低、血小板减少等不良反应,但均能耐受,无严重不良反应发生。结论NAs序贯联合IFNα-2b治疗低水平HBsAg CHB患者能提高HBsAg转阴率,降低HBsAg水平,安全性良好,但对血清ALT水平、HBV-DNA水平影响不明显。

血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18、微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病周围神经病变的关系

目的探究血清长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)及微小RNA-185-5p水平与老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)的关系及其预测价值评估。方法以2020年3月至2021年8月保定市第一中心医院收治的老年T2DM患者为研究对象,选择其中发生周围神经病变的75例患者为DPN组,选择未发生周围神经病变的82例患者为非DPN组。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p的水平通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)进行检测;相关性通过Pearson法进行分析;T2DM合并DPN的影响因素通过多因素logistic回归进行分析;受试者操作特征曲线分析血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN的诊断价值。结果DPN组患者血清LncRNA HCG18水平高于非DPN组,血清miR-185-5p水平低于非DPN组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。DPN组患者血清LncRNA HCG18与miR-185-5p水平呈显著负相关(r=-0.407,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,LncRNA HCG18、miR-185-5p为T2DM合并DPN发生的影响因素(P<0.05)。血清LncRNA HCG18、miR-185-5p对T2DM患者发生DPN预测的曲线下面积分别为0.841(95%CI 0.775~0.906)、0.857(95%CI 0.793~0.922)。结论老年DPN患者血清LncRNA HCG18水平升高,miR-185-5p水平降低,对老年T2DM患者发生DPN有一定的诊断价值。

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P<0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

白细胞介素-2、白细胞介素-4、癌胚抗原、糖类抗原19-9联合检测对结直肠癌的诊断价值及对疗效的预测价值

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)联合检测对结直肠癌的诊断价值及对疗效的预测价值。方法选取136例结直肠癌患者和50例健康体检者,比较两组受试者以及不同疗效结直肠癌患者血清IL-2、IL-4、CA19-9、CEA水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估IL-2、IL-4、CEA、CA19-9单独及联合检测对结直肠癌的诊断价值及对疗效的预测价值。结果结直肠癌患者血清IL-2水平明显低于健康者,IL-4、CEA、CA19-9水平均明显高于健康者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。ROC曲线显示,IL-2、IL-4、CEA、CA19-9联合检测诊断结直肠癌的AUC为0.910(95%CI:0.853~0.966),高于各指标单独检测,此时的灵敏度为0.971,特异度为0.820。136例结直肠癌患者治疗后,有效95例,无效41例,分别作为有效组和无效组,无效组患者血清IL-2水平明显低于有效组,IL-4、CEA、CA19-9水平均明显高于有效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。ROC曲线显示,血清IL-2、IL-4、CEA、CA19-9联合检测预测结直肠癌患者疗效的AUC为0.956(95%CI:0.925~0.987),高于各指标单独检测,此时的灵敏度为0.902,特异度为0.916。结论血清IL-2、IL-4、CEA、CA19-9联合检测对结直肠癌的诊断价值及对疗效的预测价值均较高,临床可通过检测上述指标来为结直肠癌的诊疗提供参考。

滋养层细胞表面抗原2蛋白在鼻咽癌中的表达及其与微血管密度的关系

目的:研究滋养层细胞表面抗原2(Trop2)蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其与肿瘤微血管密度(MVD)的关系,探讨Trop2蛋白在鼻咽癌发生发展的作用及临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测40例鼻咽癌组织及20例慢性鼻咽炎组织中Trop2蛋白的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算MVD,统计分析鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与临床病理参数及MVD之间的关系。结果:与慢性鼻咽炎组织比较,Trop2蛋白在鼻咽癌组织中的表达明显升高(P<0.05)。Trop2蛋白在鼻咽癌组织中的表达与患者性别、年龄无关(P>0.05),与鼻咽癌TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与MVD呈显著正相关关系(r=0.579,P<0.05)。结论:鼻咽癌组织中Trop2蛋白的表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移及MVD密切相关。Trop2蛋白可通过促进肿瘤内血管增生,从而促进鼻咽癌的生长和侵袭转移。

孕早期先兆流产患者抗滋养层细胞膜抗体、糖类抗原12-5、雌孕激素水平及其对保胎失败的预测效能

目的 探讨孕早期先兆流产患者抗滋养层细胞膜抗体(ATA)、糖类抗原12-5(CA12-5)、雌孕激素水平及其对保胎失败的预测效能。方法 选取141例孕早期先兆流产患者为观察组,122例孕早期健康孕妇为对照组,均检测血清ATA、血清CA12-5、雌二醇、孕酮水平。根据保胎结局,将观察组患者分为保胎成功组(115例)与保胎失败组(26例),采用多因素Logistic回归模型分析各指标与患者保胎结局的关系,并采用受试者工作特征曲线分析ATA阳性与血清CA12-5、雌二醇、孕酮水平联合检测对孕早期先兆流产保胎失败的预测效能。结果 观察组血清雌二醇、孕酮水平均低于对照组(均P<0.05),ATA阳性率和血清CA12-5水平均高于对照组(均P<0.05)。观察组保胎失败率为18.44%(26/141);保胎成功组雌二醇、孕酮水平均高于保胎失败组,ATA阳性率和血清CA12-5水平均低于保胎失败组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,ATA阳性、血清CA12-5水平升高是孕早期先兆流产保胎失败的危险因素,血清雌二醇、孕酮水平升高是其保护因素(均P<0.05)。ATA阳性与血清CA12-5、雌二醇、孕酮水平联合预测孕早期先兆流产保胎失败的灵敏度与曲线下面积均高于或大于各指标单独预测(均P<0.05)。结论 孕早期先兆流产患者血清雌二醇、孕酮水平降低,而ATA阳性率和血清CA12-5水平升高,其中保胎失败患者上述指标的变化较保胎成功者更为明显。以上4项指标对孕早期先兆流产患者保胎失败均具有一定的预测价值,且四项指标联合预测时的预测效能更佳。

滋养层细胞表面抗原2与肿瘤的研究现状

人滋养层细胞表面抗原2（human trophoblast cell-surface antigen 2,TROP2）又称GA733-1和EGP-1,是一种单次跨膜表面糖蛋白,属于GA733基因家族的一员。TROP2其名源于其在胚胎滋养层细胞和绒毛膜癌中的高表达。研究证实TROP2在许多实体肿瘤中高表达,而在正常上皮或癌旁组织中低表达或不表达,参与多种肿瘤的恶性进展。本文综述近年来关于TROP2与肿瘤的研究进展。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

滋养层细胞表面抗原2和DNA甲基转移酶1在鼻咽癌中的表达及与其临床病理特征的相关性分析

目的分析滋养层细胞表面抗原2(Trop2)和DNA甲基转移酶1(DNMT1)在鼻咽癌(NPC)中的表达及与其临床病理特征的相关性分析。方法回顾性分析本院2014年5月-2019年5月临床确诊的131例鼻咽癌患者的临床资料,对其癌组织及癌旁组织进行染色,检测Trop2及DNMT1的表达水平,并结合其鼻咽黏膜组织病理分期情况,分析Trop2、DNMT1的表达与其病理特征的相关性。结果 Trop2、DNMT1的阳性定位均于细胞膜,颜色自浅黄色至棕褐色不等,NPC癌组织中Trop2、DNMT1的高表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);TNM分期处于Ⅲ~Ⅳ期、伴随淋巴结转移的NPC患者Trop2、DNMT1的表达更高(P<0.05);NPC患者的Trop2、DNMT1表达与其TNM分期、淋巴结转移程度呈正相关(P<0.05)。结论 NPC患者Trop2、DNMT1的表达与疾病严重程度具有相关性,Trop2、DNMT1表达水平越高,患者病情越严重。

槲皮素对大肠癌细胞SW-480增殖、侵袭力及其表面抗原-2表达的影响

目的观察槲皮素(Que)对大肠癌细胞增殖、侵袭力的影响,并探讨其可能机制。方法加入不同浓度的Que培养大肠癌细胞SW-480后,用软琼脂克隆培养试验检测SW-480的增殖能力,用Boyden小室模型法检测SW-480侵袭力,用荧光实时定量RT-PCR检测SW-480的滋养层细胞表面抗原2(TROP-2)mRNA,以Western blot法检测SW-480的TROP-2蛋白。结果SW-480加入Que培养后,恶性增殖和穿膜细胞数均明显下降,且呈剂量依赖性(P均<0.01);同时其TROP-2 mRNA和蛋白表达水平均明显下调,且呈时间和剂量依赖性(P均<0.01)。结论Que可明显抑制大肠癌SW-480细胞的增殖、侵袭力,其机制可能与下调TROP-2基因表达有关。

LncRNA HIF1A-AS2通过抑制miR-138-5p促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)缺氧诱导因子-1α-反义链2(hypoxia-inducible factor 1 alpha antisense RNA 2,HIF1A-AS2)对滋养层细胞侵袭和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和机制。方法比较20个子痫前期(preeclampsia,PE)胎盘(PE组)和20个正常胎盘(对照组)组织中HIF1A-AS2及其预测的靶基因miR-138-5p的表达水平。选用人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/Svneo,在转染HIF1A-AS2过表达质粒、miR-138-5p拟似物和抑制物及各自阴性对照的HTR-8/SVneo细胞中,通过CCK-8检测细胞增殖、Transwell实验检测侵袭、Western blot检测细胞EMT标记分子和转录因子表达来研究HIF1A-AS2和miR-138-5p对滋养层细胞的作用和机制。通过荧光素酶基因报告实验验证HIF1A-AS2和miR-138-5p的结合关系。结果 PE胎盘中HIF1A-AS2显著降低(P<0.05),而miR-138-5p的表达显著增高(P<0.05)。过表达HIF1A-AS2能够抑制miR-138-5p的表达(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力(P<0.05),上调EMT标记分子Vimentin和N-cadherin以及EMT转录因子Twist1的表达水平(P<0.05)。此外,miR-138-5p抑制物与过表达HIF1A-AS2对HTR-8/SVneo细胞的作用相同,而miR-138-5p拟似物能够减弱过表达HIF1A-AS2对该细胞的作用。另外,HIF1A-AS2和miR-138-5p在HTR-8/Svneo细胞中可以直接结合。结论 LncRNA HIF1A-AS2能够促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化,其作用可能通过抑制miR-138-5p水平来实现。

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响

目的:探讨丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响.方法:应用ELISA方法检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果,随后应用RT-PCR法分析感染对细胞proM-MP-2和proMMP-9mRNA表达的影响.结果:感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(MMP-2:t=4.186,P<0.05;MMP-9:t=2.325,P<0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proMMP-2和proMMP-9mRNA表达弱于对照组,但差异不明显(proMMP-2:t=1.196,P>0.05;proMMP-9:t=1.417,P>0.05).结论:丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌能力下降,为非特异性.

瘦素、胰岛素及IGF-2影响滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的机制

目的:探讨瘦素、胰岛素及IGF-2对滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的影响是否与PI3K/PKB/mTOR信号途径存在联系。方法:应用Western blot检测瘦素、胰岛素及IGF-2作用后滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白的表达,以及分别加入PI3K的特异性抑制剂LY294002和mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素后对PKB和P70S6K蛋白表达的影响。结果:瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达与对照组相比明显增加(P<0.05)。瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组分别加入LY294002和雷帕霉素,PKB和P70S6K蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:瘦素、胰岛素及IGF-2可能通过PI3K/PKB/mTOR信号通路促进滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达。

上皮细胞黏附分子和滋养层细胞表面抗原2在大鼠梗阻性肝损伤动物模型中的研究

目的探讨上皮细胞黏附分子(EpCAM)及滋养层细胞表面抗原2(TROP2)与大鼠梗阻性肝组织损伤进程的关系。方法 48只实验大鼠分对照组、结扎组和再通组3组,各16只。对照组行开关术,结扎组行硅胶管置入胆管结扎术,再通组硅胶管置入胆管结扎术后7 d行再通。观察3组血清酶学变化、大鼠胆管结扎及再通前后肝脏形态组织学改变以及EpCAM和TROP2的表达分布情况。结果结扎组中EpCAM和TROP2含量随结扎时间延长,其阳性细胞比率逐渐上升,而再通组中EpCAM和肝损伤组织变化进程不完全一致。结论 EpCAM可作为判断梗阻性肝损伤中损伤进程的指标,而TROP2与梗阻性肝损伤中修复进程密切相关。