基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

滋阴明目方对视网膜色素变性rd10小鼠PERK-ATF4信号通路的影响

目的研究滋阴明目方对视网膜色素变性小鼠的影响及其可能机制。方法将60只rd10小鼠随机分为模型组(等量生理盐水)、维生素A(Vitamin A,VitA)组[VitA 750 IU/(kg·d)]及滋阴明目方低、中、高剂量组[滋阴明目方水煎液13.5、27、54 g/(kg·d)],12只C57BL/6小鼠作为空白组(等量生理盐水),均灌胃干预28 d。HE染色观察视网膜组织病理改变,TUNEL法检测视网膜组织凋亡,微滴式数字PCR和免疫荧光双染检测视网膜组织蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)mRNA和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠视网膜明显萎缩、变薄,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞不可见,外核层消失,视网膜厚度减小(P<0.01),小鼠视网膜细胞数量明显减少,存在大量凋亡细胞;PERK、ATF4 mRNA和蛋白表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,VitA组和滋阴明目方各剂量组视网膜状况改善,厚度均增加(P<0.01);细胞数量增多,凋亡细胞减少;PERK、ATF4 mRNA表达量降低(P<0.01)。与模型组比较,VitA组和滋阴明目方中、高剂量组PERK、ATF4蛋白表达量降低(P<0.01);滋阴明目方低剂量组ATF4蛋白表达量降低(P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组视网膜厚度增加(P<0.05),滋阴明目方中、高剂量组ATF4蛋白表达量及PERK mRNA表达量降低(P<0.01)。与VitA组相比,滋阴明目方高剂量组ATF4蛋白表达量降低(P<0.05),滋阴明目方中、高剂量组PERK mRNA表达量降低(P<0.01)。结论滋阴明目方可改善小鼠视网膜的形态,减少视网膜组织的凋亡,其分子机制可能与调控PERK-ATF4信号通路有关。

滋阴明目方通过Akt/FoxO1/FasL通路抑制感光细胞凋亡治疗视网膜色素变性的机制研究

目的观察滋阴明目方对视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)小鼠视网膜组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、叉头框蛋白1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)以及凋亡相关因子配体(Fas ligand,FasL)表达的影响,探讨滋阴明目方抑制感光细胞凋亡的机制。方法将60只rd10小鼠随机分为模型组、滋阴明目方低剂量组[10 g/(kg·d)]、滋阴明目方中剂量组[20 g/(kg·d)]、滋阴明目方高剂量组[40 g/(kg·d)]、维生素A组[5 g/(kg·d)],每组12只;选取12只C57小鼠作为空白对照组(等量生理盐水),每组连续干预28 d。通过眼底照相观察小鼠眼底形态改变;进行视网膜电图检查并记录A波和B波振幅;HE染色观察病理形态学变化并测定外核层厚度;Western blot法检测小鼠视网膜组织p-Akt、FoxO1、FasL、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白(cysteine aspartate-specific protease,Caspase)-3和Caspase-8蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组小鼠视盘苍白、变形,血管萎缩,视网膜电图的A波与B波振幅均降低(P<0.01),视网膜结构模糊,各层界限不清,感光细胞大量丧失,外核层明显变薄(P<0.01),视网膜组织中p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方中、高剂量组及维生素A组小鼠眼底血管较清晰,无视盘苍白表现;视网膜各层结构清晰,细胞排列相对整齐。与模型组、滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方中、高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的B波振幅、视网膜外核层厚度明显升高(P<0.01);与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的A波与B波振幅均明显降低(P<0.01);与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方低、中、高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),FoxO1、FasL和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方高剂量组FoxO1、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01),维生素A组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论滋阴明目方可能通过调控Akt/FoxO1/FasL通路,增强p-Akt表达,抑制FoxO1及下游基因FasL、Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达,从而减少rd10小鼠视网膜细胞的凋亡,保护视网膜结构和功能,延缓RP的进展。

滋阴明目方结合中医灸法促进玻璃体切割术患者康复效果观察

目的观察滋阴明目方结合中医灸法促进玻璃体切割术患者康复效果。方法共纳入增生型糖尿病性视网膜病变患者97例(2020年2月—2021年12月收治),将患者以随机数字表法分成两组(对照组与观察组),对照组48例患者均行玻璃体切割术干预及常规术后干预,观察组49例患者在对照组干预基础上采取滋阴明目方结合中医灸法干预,数据观察:临床干预有效率、术后并发症发生率、干预前后中医证候积分变化及眼动脉血流动力学指标变化、术后患者生活质量评分(SF-36量表)及干预满意度评分、安全性情况。结果观察组患者有效率为95.92%(47/49),对照组患者有效率为81.25%(39/48),观察组有效率更高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组患者术后总并发症率更低,差异有统计学意义(P<0.05);干预前,两组患者中医证候积分、眼动脉舒张末期血流速度(Edv)与收缩期峰值血流速度(Psv)、平均血流速度(Vm)、搏动指数(PI)及阻力指数(RI)等眼动脉血流指标比较,差异无统计学意义(P>0.05),干预后各组患者中医证候积分、Edv、Psv、Vm、PI、RI等眼动脉血流指标均改善,观察组患者干预后中医证候积分、Edv、Psv、Vm、PI、RI等眼动脉血流指标均优于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组患者术后生活质量评分及干预满意度评分均更佳,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者血尿常规、血压及血糖、肝肾功能等检查均正常,无不良反应。结论滋阴明目方结合中医灸法可较好促进玻璃体切割术患者康复,患者干预效果提升,症状好转,生活质量改善,患者十分认可,且安全可靠,值得应用。

滋阴明目方在糖尿病视网膜病变患者中的应用

目的探讨滋阴明目方在糖尿病视网膜病变患者中的应用效果。方法选取2018年1月至2019年6月我院收治的糖尿病视网膜病变患者86例为研究对象,将其随机等分为对照组和观察组。两组根据病情均给予血糖控制药物,对照组给予羟苯磺酸钙胶囊,观察组给予滋阴明目方汤剂,观察并比较两组患者的疗效、生活质量评分。结果加服滋阴明目方汤剂后,观察组疗效优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组CLVQOL评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论滋阴明目方能够明显改善糖尿病视网膜病变患者生活质量,提高诊疗效果,对促进疾病康复进程具有积极意义。

滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

滋阴明目方对视网膜色素变性模型小鼠视网膜组织凋亡及内质网应激的影响

目的探讨滋阴明目方治疗视网膜色素变性的可能机制。方法将60只rd10小鼠采用随机数字表法分为模型组、维生素A组和滋阴明目方低、中、高剂量组,每组12只;另将12只C57BL/6小鼠作为空白组。滋阴明目方低、中、高剂量组小鼠分别给予滋阴明目方13.5、27.0、54.0 g/(kg·d)灌胃,维生素A组小鼠给予维生素A软胶囊750 IU/(kg·d)灌胃,空白组和模型组小鼠给予生理盐水13.5 ml/(kg·d)灌胃。各组均每天灌胃1次,共28天。运用眼底照相、光学相干断层扫描检测小鼠眼底、视网膜形态,TUNEL法检测小鼠视网膜组织细胞凋亡情况,微滴式数字PCR和免疫荧光双染检测小鼠视网膜组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达水平。结果模型组小鼠视盘色蜡黄,眼底萎缩样改变,可见大片色素沉着,视网膜血管变细,可见大量血管白鞘,视网膜细胞核排列紊乱,可见大量凋亡细胞;滋阴明目方各剂量组和维生素A组小鼠眼底状况较模型组均有不同程度改善,凋亡细胞减少,其中以滋阴明目方中、高剂量组改善较显著。与空白组比较,模型组小鼠视网膜厚度减少,GRP78、IRE1、ATF6、CHOP mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,维生素A组和滋阴明目方中、高剂量组视网膜厚度均增加,GRP78、IRE1、ATF6mRNA和蛋白表达均降低;滋阴明目方低、中、高剂量组CHOP mRNA和蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与维生素A组和滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组视网膜厚度增加(P<0.01)。与维生素A组比较,滋阴明目方中、高剂量组GRP78、ATF6、IRE1、CHOP mRNA表达降低,GRP78、CHOP蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方中、高剂量组CHOP蛋白表达降低(P<0.01)。结论滋阴明目方可以通过抑制内质网应激反应以减少视网膜组织的细胞凋亡,进而延缓视网膜病变进展,保护视功能,且具有剂量依赖性。