激活素受体样激酶1促进人脐静脉内皮细胞增殖和迁徙

目的:研究激活素受体样激酶1(ALK1)对人脐静脉内皮细胞的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),RT-PCR分析ALK1和ALK5在HUVEC激活状态下表达的变化。脂质体转染pcDNA3.1+ALK1到HUVECs,流式细胞仪检测HUVECs增殖的改变,boyden小室检测ALK1对HUVECs迁徙的影响。结果:ALK1在HU-VEC安静状态高表达,ALK1能促进HUVECs的增殖和迁徙。结论:ALK1通过促进内皮细胞的增殖和迁徙在血管重塑中发挥作用。

抗激活素受体相互作用蛋白1抗体的制备及应用

目的:制备抗激活素受体相互作用蛋白1(ARIP1)抗体并探讨其应用。方法:在大肠杆菌BL21中表达GST-ARIP1融合蛋白,以该蛋白作为抗原免疫新西兰家兔,制备抗ARIP1的多克隆抗体。应用该抗体进行免疫组织化学染色,分析ARIP1在小鼠脑组织的分布。结果:制备的兔抗ARIP1多克隆抗体可以特异识别ARIP1,而与ARIP2无交叉反应。初步应用制备的抗体进行免疫组织化学染色,ARIP1在小鼠大脑组织主要表达在下丘脑及海马。结论:成功地制备了抗ARIP1多克隆抗体,该抗体可用于ARIP1成熟蛋白表达的免疫组织化学染色分析。

激活素受体样激酶4,5和7抑制剂体外高通量筛选模型的构建

目的构建适于高通量筛选的激活素受体样激酶4(ALK4),ALK5和ALK7抑制剂的筛选模型。方法利用Bac to Bac昆虫杆状病毒表达系统,构建ALK4激酶结构域(ALK4kd),ALK5kd和ALK7kd及Smad2和Smad3蛋白的病毒表达系统,转染Sf9昆虫细胞,表达目的蛋白;通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和柱纯化,获得纯化的目的蛋白;分别以纯化的ALK4,ALK5,ALK7激酶片段与纯化的Smad3和ATP构建ALK4,ALK5,ALK7激酶活性测定体系,优化各反应底物浓度及反应条件,建立适于通量化分析的筛选模型;以已知ALK激酶抑制剂SB431542为工具分子,检测其对激酶的抑制活性,确证筛选模型的可靠性。结果经酶切和PCR鉴定,所得重组Bacmid均正确。转染Sf9昆虫细胞后纯化获得相应目的蛋白。经条件优化,反应体系中激酶和底物蛋白Smad3最佳浓度均为10 mg·L^(-1),ATP最佳初始浓度为10 nmol·L^(-1)。所得ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂筛选体系的Z′因子分别为0.71,0.51和0.74,符合高通量筛选要求。已知SB431542在所建模型上对ALK4kd,ALK5kd和ALK7kd的抑制活性IC50值分别为22,188和91 nmol·L^(-1)。结论成功构建了ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂的体外筛选模型。

激活素受体相互作用蛋白2在小鼠Hepa1-6细胞中的表达及调控

目的研究激活素受体相互作用蛋白2(ARIP2)在小鼠肝细胞中的表达及调控。方法采用半定量PCR技术检测ARIP2 mRNA在Hepal-6细胞中转录水平的动力学变化规律及其调控因素。结果Activin A刺激Hepal-6细胞ARIP2 mRNA的转录水平呈时间依赖性升高,刺激早期(4h)无明显变化,12h后显著升高。信号传导激动剂PMA和LPS刺激He- pal-6细胞24h,均可上调ARIP2 mRNA的转录水平,而A23187则抑制其转录。ARIP2过表达明显抑制Hepal-6细胞ActRIIA mRNA的转录水平,对ActRIIB则无影响。结论ARIP2作为激活素信号传导抑制蛋白,其表达受多种因素影响。ARIP2可能通过影响ActRIIA表达,参与激活素作用后期的信号传导负反馈调节过程。

激活素受体样激酶2及其在颅面部生长发育中的作用

人类的ALK2基因位于染色体2q23~24,其内含子大都在0.5~6.5 kb,其3’非编码区对ALK2基因表达起着重要的调节作用。ALK2蛋白由胞外区、跨膜区和富含丝氨酸-苏氨酸序列的胞内区组成,在组成上高度保守。ALK2是骨形态发生蛋白(BMP)家族受体中的一员并转导BMP信号。ALK2信号转导通路分为经典的Smad信号转导通路和非Smad信号转导通路,前者在促进骨、软骨和牙发生方面发挥着重要的作用。ALK2蛋白广泛表达于机体的不同组织,如骨、软骨、牙体和心脏等。ALK2在颅骨发生发育早期促进成骨,在成熟期抑制成骨;ALK2基因突变增强可导致异位骨化,体现了ALK2独特于其他BMP受体的重要生理病理学意义。

激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达

目的构建激活素受体相互作用蛋白(activin receptor interacting protein zip,ARIPzip)真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取RNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示,瞬时转染重组质粒的HEK293细胞中可有效表达ARIPzip。结论本研究成功构建了激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体,并能够在真核细胞中进行表达,为进一步研究ARIPzip的生物学功能奠定了基础。

胎儿生长受限胎盘及正常足月胎儿胎盘中激活素受体的表达水平及其临床分析

目的:检测胎儿生长受限胎盘及正常足月胎儿胎盘中激活素受体的表达,分析激活素受体表达与胎儿生长受限的关系。方法:选取16例足月胎儿生长受限胎盘作为观察组和正常足月胎盘组织15例作为对照组,胎盘组织采用HE染色法分析,胎盘组织中激活素受体的表达部位采用免疫组织化学法分析,并进行半定量分析,激活素受体在胎盘m RNA水平的表达采用PCR法分析。结果:两组激活素受体ⅠA、ⅠB表达差异不明显(P>0.05),观察组ⅡA、ⅡB在(++),(+++)的百分比均高于对照组(P<0.05),观察组ⅡA、ⅡB在(-)的百分比显著低于对照组(P<0.05);观察组胎盘组织激活素受体ⅠA、ⅠB基因表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组胎盘组织ⅡA、ⅡB表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:胎儿生长受限患者胎盘激活素水平明显要高于正常胎盘,激活素紊乱会导致胎儿生长受限。

MiR-145靶向作用激活素受体ⅠB抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨miR-145对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的调控作用。方法制备Ad-miR-145重组腺病毒,分离培养3周龄的SPF级ICR雌性小鼠卵巢颗粒细胞(mGC),以不同浓度的Ad-miR-145(0 mol、50 mol、100 mol)感染m GC,48 h后通过CCK-8增殖实验检测细胞的增殖活力;收集细胞通过TRIZOL法提取细胞总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测细胞增殖相关基因细胞周期蛋白cyclin D2 mRNA的表达情况;提取细胞蛋白,通过Western blot检测其中cyclin D2的蛋白水平;同时采用双荧光素酶报告基因调查miR-145对其预测靶基因激活素受体ⅠB(ACVRⅠB)的调控作用。结果成功获得滴度为8.91×10^(10) ifu/mL的高表达miR-145腺病毒,该腺病毒可在mGC中高表达miR-145;腺病毒介导的miR-145高表达可抑制m GC的增殖活力,并可抑制m GC中cyclin D2的m RNA和蛋白的表达;miR-145可抑制ACVRⅠB 3’-UTR的荧光素酶活性。结论 miR-145通过靶向作用ACVRⅠB抑制小鼠m GC增殖。

激活素受体样激酶2调控骨重塑的研究进展

激活素受体样激酶2(ALK2)是Ⅰ型骨形成蛋白(BMP)受体之一,在胚胎期和出生后骨量的调节中有明显作用,编码ALK2的基因特定位点的获得性突变还可引起人类进行性肌肉骨化症(FOP)。ALK2所介导的BMP信号通路可以负性调节骨量。以ALK2或其下游信号分子为靶点治疗骨缺损等疾病具有重要的实际意义和应用前景。本文阐述了骨重塑和BMP信号通路的基本过程,总结了ALK2对骨重塑不同阶段调控作用的研究现状,并概括了ALK2的病理性作用及其机制。

激活素A及其ⅡA型受体在小鼠肝损伤模型肝组织中的表达

目的:探讨激活素A及其ⅡA型受体在Con A诱导的小鼠肝损伤模型肝组织中的表达形式及其可能的作用。方法:小鼠尾静脉注射Con A(10 mg.kg-1),每周1次,连续4周,建立小鼠肝损伤模型(n=24),另设正常对照组(n=24),于末次注射后的24、72、120及168 h,各组(n=6)分批检测小鼠血清酶变化及肝脏组织病理损伤程度,同时采用荧光定量RT-PCR法检测激活素A及其ⅡA型受体的表达水平。结果:在末次注射后72 h肝组织病理损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,肝细胞索消失,细胞肿胀,呈气球样变,以后逐渐恢复;激活素A蛋白水平及其mRNA表达与其ⅡA型受体mRNA表达呈平行状态,于注射后72 h达高峰,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:激活素A与其ⅡA受体变化与肝组织病理损伤呈平行状态,提示激活素A可能参与了Con A诱导肝损伤模型小鼠的肝损伤。

激活素、抑制素及其受体与动物生殖作用的研究进展

激活素和抑制素均属于转化生长因子β(TGF-β)超家族成员的多功能生长和分化因子,具有多种生物学功能及广泛的生物学活性,其生理功能是通过受体与靶器官结合而实现的。作者主要就抑制素、激活素的结构特征、生理功能和对生殖的作用及其与受体的作用方式进行综述。

激活素A及其受体卵泡休止素在子痫前期胎盘中的表达

目的探讨激活素A的βA亚基及其Ⅰ型、ⅠB型和Ⅱ型受体,激活素A结合抑制蛋白卵泡休止素在子痫前期患者胎盘组织中的表达变化。方法采用逆转录半定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测妊娠26、32周和38周18例健康和18例子痫前期胎盘组织中激活素A及其Ⅰ型、ⅠB型和Ⅱ型受体,卵泡休止素的表达,并比较两者的不同。结果激活素Aβ亚基在孕26、32周和38周子痫前期胎盘组织中表达较健康妊娠胎盘明显升高(P<0.05),Ⅰ型、ⅠB型和Ⅱ型受体在孕26、32周子痫前期胎盘组织表达高于健康胎盘(P<0.05),卵泡休止素的表达同健康妊娠胎盘相比无明显变化。结论激活素A及其受体在子痫前期胎盘表达增高,子痫前期发病越早,增高越明显,因此激活素A可作为妊娠期高血压疾病早期诊断的候选指标。

抑制素受体和激活素受体在正常卵巢皮质上的表达及其意义

目的探讨卵泡期和黄体期抑制素受体β-多糖、抑制素结合蛋白（INHBP）和激活素受体（ACTR）在正常卵巢皮质上的表达变化及其与内分泌激素水平的关系。方法采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测21例卵泡期（卵泡期组）和21例黄体期（黄体期组）正常卵巢皮质中β-多糖、INHBP和ACTR基因表达水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）测定外周血血清雌二醇、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、抑制素B（INHB）、激活素A（ACTA）水平，并进行受体基因表达水平与激素水平间的相关性分析。结果（1）卵泡期组ACTRIA、ACTRIB、ACTRIIA、ACTRIIB基因表达水平分别为0．50±0．17、0．050±0．019、0．10±0．04、0．28±0．10，黄体期组分别为0．36±0．18、0．036±0．020、0．07±0．04、0．19±0．11，两组分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。卵泡期组β-多糖基因表达水平为0．26±0．10，黄体期组为0．17±0．09，两组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）卵泡期组卵巢皮质ACTRIA、ACTRIIA、β-多糖染色强度均高于黄体期组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）卵泡期组β-多糖基因表达水平与血清雌二醇、FSH、LH、INHB水平均呈正相关关系[r分别为0．53（P〈0．05）、0．74（P〈0．01）、0．85（P〈0．01）、0．76（P〈0．01）]。结论在卵泡期正常卵巢皮质上抑制素、激活素通过受体途径发挥抑制或促进FSH分泌的作用，从而影响卵泡发育。

激活素受体相互作用蛋白1,2在小鼠脑神经细胞中的共表达

目的探讨激活素受体相互作用蛋白1(activin receptor-interaction protein 1,ARIP1)和ARIP2在小鼠脑神经细胞中的共表达。方法 RT-PCR法检测C57BL小鼠小脑、垂体、大脑、脾脏、心脏、肾脏、肝脏、胰腺组织中ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录;以融合蛋白GST-ARIP1C和MBP-ARIP2C作为抗原免疫新西兰白兔,制备抗ARIP1和ARIP2抗体,经A蛋白亲和层析柱纯化后,ELISA法检测抗体的交叉反应;用制备的抗体,采用免疫组织化学染色检测ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织中的表达;RT-PCR法检测小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中激活素ⅡA型受体(activin receptorⅡA,ActRⅡA)、ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录。结果在小鼠大脑、小脑及垂体组织中可见ARIP1基因mRNA的转录,在小鼠各部位组织中均可见ARIP2基因mRNA的转录;制备的兔抗ARIP1和ARIP2抗体无交叉反应;ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织的海马和下丘脑同时表达;ActRIⅡA及ARIP1和ARIP2 mRNA在神经元样细胞系Neuro-2a细胞中共表达。结论 ARIP1和ARIP2可在小鼠脑神经细胞中共表达。

激活素ⅡA型受体在免疫细胞上的表达

目的 探讨激活素ⅡA受体 (ActRⅡA)在免疫细胞中的表达 ,揭示激活素 (Activin)对免疫细胞的作用方式。方法 以ActRⅡAC末端肽作为抗原免疫家兔制备特异性抗ActRⅡAC末端抗体 ,通过免疫细胞化学染色技术观察ActRⅡA在免疫细胞上的分布。RT PCR检测ActRⅡAmRNA表达情况 ,硝酸还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞产生NO水平。结果 采用特异性抗ActRⅡAC末端抗体进行免疫细胞化学染色 ,结果显示ActRⅡA在小鼠巨噬细胞上高水平表达 ,而在其它免疫细胞 (T、B、NK、DC)上未见表达。RT PCR检测结果进一步表明ActRⅡAmRNA在巨噬细胞中表达。硝酸还原酶法检测结果显示 ,激活素A能明显抑制LPS刺激的巨噬细胞NO的产生。结论 ActRⅡA主要在巨噬细胞上高水平表达 ,提示激活素可通过ActRⅡA介导的信号传导途径参与巨噬细胞功能调控。

患者卵巢组织中激活素A及其受体的表达水平与临床意义

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢组织中激活素A(ACTA)及其受体(ACTR)的表达水平及临床意义。方法:选取行腹腔镜卵巢楔形切除术的30例PCOS患者为研究对象,根据术后2年内是否妊娠分为妊娠组和未妊娠组,每组各15例。另选取同期15例行腹腔镜手术的子宫肌瘤、子宫内膜异位症患者为对照组。采用电化学发光发测定血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,计算LH/FSH值;采用免疫组化、实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定卵巢组织中ACTA、ACTR的表达水平,采用Spearman相关分析ACTA、ACTR与LH/FSH值的相关性。结果:妊娠组、未妊娠组患者FSH水平均低于对照组,且妊娠组低于未妊娠组(P<0.05);妊娠组、未妊娠组患者LH水平及LH/FSH值均高于对照组,且妊娠组高于未妊娠组(P<0.05)。免疫组化结果显示,三组患者ACTA、ACTR IIA、ACTR IIB蛋白阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RT-qPCR结果显示,妊娠组、未妊娠组ACTA mRNA相对值均低于对照组(P<0.05),且妊娠组低于未妊娠组(P<0.05);妊娠组、未妊娠组ACTR IIA、ACTR IIB mRNA相对值均高于对照组(P<0.05),且妊娠组高于未妊娠组(P<0.05)。患者ACTA水平与LH/FSH值呈负相关(P<0.05),ACTR IIA、ACTR IIB水平与LH/FSH值呈正相关(P<0.05)。结论:PCOS患者卵巢组织中ACTA水平降低,ACTR IIA、ACTR IIB水平升高,且均与LH/FSH值相关;术后2年未妊娠者卵巢组织中ACTA水平低于妊娠者,ACTR IIA、ACTR IIB水平高于妊娠者。

激活素A通过少突胶质细胞ACVR1C改善缺血性卒中小鼠神经功能的预后

目的 探讨缺血性卒中损伤过程中,激活素A的1C型受体(ACVR1C)在小鼠脑白质再髓鞘化和神经功能预后中的作用。方法 小鼠随机分为空病毒载体假手术组、腺相关病毒(AAV)假手术组、空病毒载体模型组、AAV模型组、空病毒载体激活素A组、AAV激活素A组。建立Acvr1c^(flox/flox)小鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R) 1至10 d的缺血性卒中模型,注射带cre重组酶的AAV-PDGFRα-cre和AAV-PLP-cre于小鼠侧脑室,条件性敲除少突胶质前体细胞和少突胶质细胞上Acvr1c。神经功能评分观察神经功能的预后;Western bolt检测ACVR1C蛋白和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果 随着再灌注时间的延长,激活素A在第7天时通过少突胶质细胞上的ACVR1C改善小鼠的行为学结果(P<0.05),在第10天时明显提高小鼠胼胝体中MBP蛋白表达水平(P<0.05)。结论 激活素A通过作用于少突胶质细胞上ACVR1C,促进缺血性卒中小鼠白质再髓鞘化并改善神经功能的预后。

激活素A对小鼠中性粒细胞活性的调控作用

目的:通过检测中性粒细胞激活素受体表达以及细胞活性,阐述激活素A调控中性粒细胞的作用。方法:分离小鼠腹腔中性粒细胞;通过免疫荧光细胞化学染色及流式细胞术检测中性粒细胞激活素ⅡA型受体(ActRⅡA)表达;激活素A刺激后,Western blot检测中性粒细胞Smad3表达;检测呼吸爆发、NO分泌及吞噬能力的变化以确定中性粒细胞活性。结果:分离的小鼠腹腔中性粒细胞纯度大于90%;免疫荧光细胞化学染色显示中性粒细胞可以表达ActRⅡA,流式细胞术检测结果显示Gr-1与ActRⅡA双阳性细胞约41.1%;激活素A刺激后,中性粒细胞p-Smad3表达上调,ROS及O2-产生升高(P<0.05),NO分泌增加(P<0.01),流式细胞术检测结果显示激活素A还可以明显促进中性粒细胞对荧光微球的吞噬(P<0.01)。结论:中性粒细胞可以表达激活素受体及其信号传导蛋白,激活素A对中性粒细胞活化及功能具有重要的调节作用。

心肺复苏大鼠模型中应用辣椒素结合通道受体激活剂olvanil和rinvanil诱导低温及复苏的疗效评价

目的 通过在心肺复苏大鼠模型中应用辣椒素结合通道受体激活剂olvanil和rinvanil,评价其诱导低温的疗效、心血管反应和大鼠生存时间.方法 15只大鼠随机分为3组：诱导6 min的心脏骤停,然后进行6 min的心肺复苏,复苏后30 min,3组大鼠分别接受olvanil、rinvanil和安慰剂持续治疗6 h.药物浓度逐步提高.检测体温、心电图、血流动力学参数、心功能和7天生存率.结果 药物组均成功诱导亚低温,体温约下降3 ℃.各组均出现了短时间的心律失常,表现为室性心动过速和室性早搏.药物组还出现了三度房室传导阻滞伴室性逸搏.在生存时间方面,rinvanil组有明显改善而olvanil组没有.结论 相对于olvanil和对照组,rinvanil能改善心功能,从而延长生存时间.

老年性骨质疏松症的骨保护素-NK-κB受体激活因子-RANK配体作用机制及影响因素研究进展

老年性骨质疏松症属于骨质疏松症(OP)Ⅱ型,常见于65岁以上且骨骼呈低转化者[1].OP是一类以骨密度降低及骨结构改变导致脆性骨折风险增加为特征的疾病,病因认为与骨吸收破骨细胞的形成增多和活性增强、成骨细胞的形成减少和活性降低有关系[2].本文围绕骨保护素(OPG)-NF-κB受体激活因子(RANK)-RANK配体(RANKL)与老年性OP的关系及影响因素的研究进展进行了综述,旨在为明确老年性OP的病因及发生机制提供参考.