刀豆化学成分及其雌激素样活性研究

目的研究刀豆化学成分及其雌激素样活性。方法刀豆75%乙醇提取物采用多种色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用稳定转染雌激素受体报告基因(ER-Luc)的人乳腺癌细胞(MCF-7)细胞评价雌激素样活性。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为山柰酚-3-O-洋槐糖苷(1)、kaempferol3-O-[O-β-D-apio-D-furanosyl(1→2)-O-[α-L-rhamno-pyranosyl(1→6)]-β-D-galactopyranoside(2)、山柰酚-3-O-(2′-O-β-D-葡酰)-β-D-洋槐糖苷(3)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、槲皮素-3-O-(6″-O-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(5)、异杨梅苷(6)、杨梅素-3-O-芸香糖苷(7)、(3-ethenylphenyl)-1,2-ethanediol(8)、1,3,6-三没食子酰基葡萄糖苷(9)、breyniosideA(10)、4-hydroxy-3-methoxyphenol-1-O-β-D-(6′-O-galloyl)glucoside(11)、maesopsin-6-O-β-D-glucopyranoside(12)。化合物1、3~5、8~9在浓度为50μmol/L,化合物2、12在浓度为100μmol/L时表现出雌激素样活性。结论所有化合物均为首次从刀豆属植物中分离得到。化合物1、3~5、8~9雌激素样活性强于2、12。

葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性

目的:研究葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性。方法:去卵巢大鼠、幼年小鼠、成年小鼠和雌激素化小鼠灌胃给予葛根素和葛根总异黄酮150～600mg/kg,连续5～9天后,阴道脱落细胞检查和子宫重量法判断雌激素样作用。结果:葛根素和葛根总异黄酮能明显增加去卵巢大鼠阴道涂片中角化细胞数量,部分恢复去卵巢大鼠的性周期;使去卵巢大鼠和幼年小鼠子宫重量明显增加,这种作用呈明显的剂量依赖性。对正常成年小鼠的子宫生长无明显影响,在合用雌二醇时,葛根素和葛根总异黄酮均使雌二醇的促子宫生长作用明显减弱。结论:葛根素和葛根总异黄酮对雌激素低下动物显示弱雌激素活性,对正常雌激素水平动物无明显雌激素样活性,而在合用雌二醇时,则部分抑制雌二醇的促子宫生长作用,提示葛根素和葛根总异黄酮具有雌激素受体部分激动剂的特性。

DBP、DEHP及其代谢物MBP、MEHP的体内雌激素样活性分析

[目的 ]探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)和邻苯二甲酸 2 乙基己基酯 (DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单丁酯 (MBP)和邻苯二甲酸 单 乙基己基酯 (MEHP)的雌激素样活性。 [方法 ]按照经济合作与发展组织 (Or ganizationforEconomicCooperationandDevelopment ,OECD)推荐的标准试验方法 ,采用背部皮下注射的方式对出生后 18d雌性未成熟大鼠连续给药 3d ,末次给药 2 4h后处死 ,观察化学物对大鼠体重、子宫重量、滤纸吸干后子宫重和子宫粘液重量等相关指标的变化。 [结果 ]虽然未观察到DBP、MBP、DEHP及MEHP有明显的促子宫增重作用 ,但MBP和MEHP对未成熟雌性大鼠的毒性大于DBP和DEHP ,40～ 10 0 0mg/kgMBP和 10 0 0mg/kgMEHP可减缓大鼠的体重增长速度 ,2 0 0和10 0 0mg/kgMEHP则可明显降低大鼠子宫的粘液分泌量。 [结论 ]DBP、DEHP及其代谢产物MBP和MEHP均无雌激素样活性 ,MBP可减缓大鼠体重增长速度 。

子宫营养试验检测对-壬基酚的雌激素样活性

目的 :检测对 -壬基酚 (p- NP)的雌激素样活性。方法 :采用子宫营养试验 ,以使此法作为我国筛查环境内分泌干扰物 (EEDs)的常规方法。未成年 SD雌性大鼠 (2 1d～ 2 2 d) 10 0只 ,分为 p- NP 6 0 m g/ kg、 12 0 m g/ kg和 2 4 0 m g/ kg3个剂量组 ,溶剂对照组 (花生油 )和阳性对照组 (苯甲酸雌二醇 ,E2 B) 0 .4 m g/ kg,每天一次灌胃给药 ,连续给 3d和 7d。于末次给药的第 2 4 h处死动物 ,取子宫。结果 :3d和 7d两个时段 ,E2 B、 p- NP 12 0 mg/ kg和 2 4 0 mg/ kg 2个剂量组子宫湿重、子宫 /体重比、平滑肌厚度和宫腔上皮高度与溶剂对照组相比均增高 (P<0 .0 1) ,且有明显的剂量效应关系。给 p- NP7d的未成年 SD雌性大鼠阴道开口时间提前。结论 :p- NP具有弱雌激素样活性 ,3d幼雌

薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究

目的:对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选,探讨其作用机制。方法:首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选;以质粒p ERE-TAL-luc、pβgal-Control、p CXN2-h ERα或p CXN2-h ERβ共转染的HEK293细胞株为模型,采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术,评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果:薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加(P<0.01),且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖(P<0.01);ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,分别由ERα和ERβ介导时,与正常组相比,薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加,在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖,首次发现薏苡仁具有雌激素样作用,且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。

子宫营养试验检测双酚A的雌激素样活性

目的 :采用子宫营养试验 ,检测双酚A(BisphenolA ,BPA)的雌激素样活性 ,初步探讨其作用机制。方法 :未成年SD雌性大鼠 (2 1d) 10 0只 ,分为BPA 2 0 0mg/kg、4 0 0mg/kg和 80 0mg/kg 3个剂量组 ,溶剂对照组 (花生油 )和阳性对照组 (苯甲酸雌二醇 ,EstradiolBenzoate,E2 B) 0 .4mg/kg ,每天一次灌胃给药 ,连续给予 3d和 7d。于末次给药的第 2 4h处死动物取子宫。结果 :3d和 7d两个时段 ,E2 B、BPA 4 0 0mg/kg和 80 0mg/kg 2个剂量组子宫湿重、子宫 /体重比、平滑肌厚度和宫腔上皮高度与溶剂对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,有明显的剂量效应关系。给予BPA 7d还使未成年SD雌性大鼠阴道开口时间提前。结论 :BPA具有弱雌激素样效应 ,子宫湿重增加可能与平滑肌增生有关。

子宫增重法检测壬基酚、双酚A雌激素样活性及其联合作用

目的应用子宫增重法检测壬基酚（NP）、双酚A（BPA）的雌激素样活性并评价其联合作用。方法选择性未成熟雌性昆明种小鼠110只，体重10—13g，按体重随机分为11组：NP240mg／kg、120mg／k卧60mg／kg剂量组，BPA480mg／kg、240mg／kg、120mg／kg剂量组，联合240mg／kgBPA＋120mg／kgNP、120mg／kgBPA＋60mg／kgNP、60mg／kgBeA＋30mg／kgNP剂量组，阴性对照组、阳性对照组（苯甲酸雌二醇1．47μg／10g），皮下注射染毒3d，称子宫湿重，计算子宫重量系数。用金正均法评价联合作用的性质。结果NP和BPA可致子宫重量系数增大，呈剂量-效应关系（分别为r=0．8192，P〈0．01；r=0、6898，P〈0．01）；两者联合染毒致子宫重量系数增大，亦呈剂量一效应关系（r=0．5465，P〈0、01）。各染毒组与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），其联合作用性质在混合低剂量组呈协同作用（Q=1．41），混合中、高剂量组呈相加作用（Q=0.88，Q=0.87）。结论NP、BPA具有雌激素样活性，其联合作用性质在较低剂量呈协同作用，较高剂量呈相加作用。

白藜芦醇类似物的合成及雌激素样活性研究

目的设计合成白藜芦醇的类似物,进行体外雌激素样活性评价。方法取代溴苄经磷酰化、缩合、脱甲基制得目标分子(1-9),并用人乳腺癌细胞增殖试验测定其体外雌激素样活性。结果目标化合物经核磁共振等确证其结构;白藜芦醇类似物具有不同程度的雌激素样活性,其中以4,4'-二羟基二苯乙烯(2)最高。相对增殖率结果提示:白藜芦醇、2和4为雌激素受体的全激动剂,3,7,8和9为雌激素受体的部分激动剂,1,5和6为雌激素受体的弱激动剂。结论首次报道白藜芦醇类似物的体外雌激素样活性,有进一步研发的价值。

用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性

目的 观察常用有机磷农药对MCF 7细胞增殖以及对雌激素受体基因和pS2基因表达的影响。方法 选用乐果、乙酰甲胺磷、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、对氧磷 6种有机磷农药进行MCF 7人乳腺癌细胞增殖实验和转录活化实验。结果 6种有机磷农药不能诱导MCF 7人乳腺癌细胞增殖 ,但乐果却能使pS2基因表达上调。结论 乐果可能具有拟雌激素样活性 ,且引起pS2基因表达上调不通过雌激素受体介导。

中药痤疮饮性激素样活性的实验研究

为观察中药痤疮饮是否具有性激素样活性 ,我们开展了 2个实验。实验 1,即先给雄性去睾大鼠痤疮饮、睾酮并设对照组 ,然后取其精囊腺及前列腺称重 ;实验 2 ,先给雌性小鼠不同剂量的痤疮饮、雌二醇并设对照组 ,然后取其子宫称重。实验 1显示单给睾酮组大鼠精囊腺和前列腺重量明显高于其它 3组 ;实验 2 ,痤疮饮组子宫重量明显高于对照组 ,但显著低于雌二醇组。痤疮饮既有抗雄激素活性 ,又有温和的雌激素样活性。

报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究

目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究。方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERELuc,用脂质体转染法将pERELuc及内对照质粒phRLSV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达。结果转染pERELuc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11molLE2可引起报告基因的表达,至1×10-9molL可达到最大表达值,而未转染pERELuc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达。1×10-6molL以上NP和BPA出现雌激素样作用。NP的雌激素样活性略强于BPA。结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用。

报告基因方法检测壬基酚、双酚A抗雄激素样活性的体外研究

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转染人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40的CHO细胞,在给予1×10-7mol/L二氢睾酮(DHT)后给予不同浓度的壬基酚(NP)及双酚A(BPA),检测报告基因表达活性。[结果]浓度均>1×10-6mol/L的NP、BPA可抑制1×10-7mol/LDHT产生的雄激素样作用,两者具有抗雄激素活性,但较雄激素拮抗剂氟他安(FLU)弱,BPA的抑制作用强于NP。[结论]NP、BPA有一定的抗雄激素活性,BPA的抑制作用强于NP。

从雌激素样活性解析中药诱导神经干细胞增殖及分化

中医药治疗神经退行性疾病的临床历史悠久,而近年来中药诱导神经干细胞增殖和分化的现代药理学研究进展迅速。为了发掘传统中医学理论的有关阐述与现代药理学研究成果的内在联系,笔者通过总结中药诱导神经干细胞增殖与分化的研究进展,以中医滋补肝肾理论及益气活血理论为出发点,结合雌激素诱导神经干细胞增殖与分化的研究成果,提出中药雌激素样活性滋补肝肾是中药诱导神经干细胞增殖分化的机制之一。

用MCF-7细胞检测多氯联苯拟雌激素样活性

目的观察多氯联苯(PCB)对MCF-7细胞增殖及生长曲线的影响。方法选用多氯联苯(1254)进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验。结果PCB组细胞增殖指数均明显高于溶剂对照组,10ng/LPCB可诱导MCF-7细胞最大增殖(P<0.01)。生长曲线分析也显示,PCB、E2生长曲线明显上移,有明显刺激MCF-7细胞增殖的类雌激素活性。结论提示PCB具有拟雌激素样活性。

对异黄酮改构化合物F11雌激素样活性的研究

目的探讨异黄酮改构化合物F11对去势大鼠阴道、子宫及乳腺的影响。方法选用Wistar大鼠,制作去势模型分为生理盐水组、雌二醇组、F11组、假手术组,腹腔给药每日1次,连续给药12周,观察大鼠阴道细胞、子宫湿重/体重比值及乳腺组织形态学变化。结果 F11可促进阴道上皮细胞角化,提高子宫湿重/体重比值,减缓去势大鼠乳腺组织的萎缩。结论 F11有类似雌激素样作用。

ThermalShift高通量筛选法快速筛选覆盆子中雌激素样活性化合物

[目的]从覆盆子中筛选具有雌激素样活性的化合物。[方法]基于配体=受体理论,以人源雌激素受体亚型的配体结合域(hERα-LBD、hERβ-LBD)为靶点,以17β-雌二醇(E_2)为阳性对照,采用Thermal Shift高通量筛选方法筛选覆盆子中具有雌激素样活性的化合物。[结果]山柰酚明显提高雌激素受体配体结合域的(hERα-LBD、hERβ-LBD)热稳定性。[结论]山柰酚能与hERα-LBD和h ERβ-LBD结合,具有雌激素样活性。

祛膜颗粒在去势大鼠模型激素样活性的实验研究

目的初步研究祛膜颗粒在去势大鼠模型的激素样活性作用。方法制备去势大鼠动物模型,灌胃给予祛膜颗粒(5.5,11,22 g生药/kg)连续10 d后,观察各组大鼠阴道上皮角化细胞、子宫壁厚度、子宫水分摄取增加百分率的变化;采用化学发光法测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平;采用免疫组化法观察子宫雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的变化。结果祛膜颗粒能使去势大鼠阴道涂片出现角化细胞;祛膜颗粒(5.5,11 g生药/kg)子宫水分摄取增加百分率升高,其中祛膜颗粒(11 g生药/kg)明显升高(P<0.05);祛膜颗粒(5.5,11,22 g生药/kg)子宫壁厚度升高,其中祛膜颗粒(11 g生药/kg)明显升高(P<0.05)。祛膜颗粒(5.5和11 g生药/kg)能升高血清E2水平(P>0.05),祛膜颗粒(5.5,11和22 g生药/kg)能降低血清P水平(P>0.05);祛膜颗粒能增加子宫组织ER、PR的表达量。结论祛膜颗粒在一定剂量下可表现出较弱的雌激素样活性。

怀地黄雌激素样活性筛选的实验研究

目的对鲜地黄、生地黄、熟地黄和地黄叶进行了雌激素样活性筛选。方法首先通过小鼠子宫增重实验和MCF-7细胞增殖实验对选定的四种药材进行雌激素样活性筛选;接着采用ICI182,780拮抗实验及以pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞,以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测进行了雌激素样作用机制初探。结果鲜地黄水提物和生地黄水提物能够诱导性未成熟雌性小鼠子宫系数的增加,且两者均能够促进MCF-7细胞的增殖,当与雌激素受体阻断剂ICI182,780同时干预时两者对细胞的促增殖作用被抑制;ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,由ERβ介导时,鲜地黄水提物与生地黄水提物的荧光素酶活性均显著高于正常组。结论鲜地黄水提物和生地黄水提物体内、体外均具有雌激素样活性,且都主要通过ERβ介导发挥。不同炮制品中鲜地黄的雌激素样作用最强,生地黄其次,熟地黄没有雌激素样作用,提示地黄炮制后会使其雌激素样作用发生改变。

不同产地10种卷柏雌激素样活性筛选的实验研究

目的:研究不同产地的10种卷柏雌激素样活性。方法:采用MCF-7细胞增殖实验与小鼠子宫增重实验结合,进行不同产地卷柏雌激素样活性筛选;结合血清药理学实验综合评价雌激素样活性;以p ERE-TAL-luc、pβgal-Control、p CXN2-h ERα或p CXN2-h ERβ转染HEK293细胞,雌激素应答元件(ERE)调控的报告基因瞬时表达检测,探讨卷柏发挥雌激素样作用的途径。结果:卷柏属植物卷柏(JB6)和江南卷柏(JB7)能明显升高小鼠的子宫系数,与空白组相比有显著性差异(P<0.01);JB6和JB7可显著促进MCF-7细胞增殖;JB6和JB7不论由雌激素受体(ER)α或ERβ介导均具有雌激素活性,与ERα的亲和力高于ERβ。结论:JB6和JB7具有雌激素样活性,其中JB6的雌激素样作用强于JB7。卷柏激活基因转录发挥雌激素样作用主要是通过ERα介导的。

高血压病方剂雌激素样活性补肾功效分析

高血压病的发病源于复杂的内因及外因。肾为先天之本,肾气亏虚是各种证型高血压病的重要发病因素。雌激素与中医补肾理论有着内在联系。雌激素样活性物质广泛存在于中药中,发挥补肾的作用。《中华人民共和国药典》中收录的高血压病中成药组方多含较高的雌激素样活性,后者的功效随处方治则的变化而同中有异。从现代药理学的研究成果分析,雌激素样活性物质的治疗机制包含了活血化瘀的功效。