灯盏乙素衍生物代谢性质的快速体外评价

目的应用肝微粒体模型研究以灯盏乙素及其苷元为先导的系列化合物代谢特征,筛选代谢性质优于灯盏乙素的化合物。方法采用UPLC-MS/MS法测定大鼠肝微粒体温孵体系中不同时间点各候选化合物的含量,筛选T1/2和CLint较优的候选化合物,比较候选化合物与灯盏乙素的酶促动力学特征及其转化情况。结果与灯盏乙素及其苷元相比,候选化合物W11的半衰期较长、清除率较低;W11酶促动力学参数Vmax为(10.25±0.93)μmol·min-1·g-1,Km为(4.48±0.10)μmol·L-1,CLint为(2.29±0.23)L·min-1·g-1;灯盏乙素酶促动力学参数Vmax为(45.95±9.50)μmol·min-1·g-1,Km为(10.19±1.66)μmol·L-1,CLint为(4.48±0.20)L·min-1·g-1;W11可能代谢为M1(W11脱掉甲基后分子质量为577的化合物),并释放出灯盏乙素。结论候选化合物W11可能具有优于灯盏乙素的代谢性质并能释放活性代谢产物灯盏乙素。

灯盏乙素、灯盏乙素苷元及四乙酰灯盏乙素苷元联合三氧化二砷对乳腺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的探讨灯盏乙素及其衍生物和三氧化二砷单独及联合用药对乳腺癌细胞的作用。方法将体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞分成对照组和用药组,每组设6个复孔。用药组为灯盏乙素及其衍生物(灯盏乙素苷元与四乙酰灯盏乙素苷元)单独用药,以及与5μM三氧化二砷一起联合用药。用MTT法测试它们对乳腺癌MDAMB-231细胞的抑制作用。结果灯盏乙素单独用药时,剂量为10μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)时,对MDAMB-231细胞的抑制率分别为(0.01±5.56)%、(18.18±3.46)%、(35.72±5.27)%;灯盏乙素与5μM As_2O_3联合用药时,抑制率分别为(13.55±3.54)%、(32.6±5.09)%、(35.29±6.96)%。灯盏乙素苷元单独用药时,剂量为10μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)时,对MDA-MB-231细胞的抑制率分别为(1.13±5.46)%、(1.68±6.55)%、(3.86±5.51)%;与5μM As_2O_3联合用药时,抑制率分别为(17.90±2.41)%、(28.13±4.63)%、(34.94±2.41)%。四乙酰灯盏乙素苷元单独用药时,剂量为1μmol·L^(-1)、5μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)时,对MDA-MB-231细胞的抑制率分别为(0.76±5.07)%、(1.34±4.07)%、(-0.40±7.59)%;与5μM As_2O_3联合用药时,抑制率分别为(16.52±5.91)%、(17.25±3.89)%、(13.62±7.24)%.结论单独用药时,灯盏乙素对MDA-MB-231细胞的抑制作用大于灯盏乙素苷元及四乙酰灯盏乙素,糖基的去除和乙酰化使其作用减弱;与三氧化二砷联用时,灯盏乙素及灯盏乙素苷元对细胞有显著的抑制作用。其中,灯盏乙素苷元单独使用无抑制活性,却能显著增强三氧化二砷对细胞的抑制作用。灯盏乙素苷元与三氧化二砷联合用药具有治疗乳腺癌的应用前景。

基于豚鼠主动全身过敏实验和大鼠脑缺血再灌注炎症反应比较灯盏花素注射液和合成灯盏乙素注射液的安全性和有效性

[目的]比较盏花素注射液(BI)和合成灯盏乙素注射液(SSI)的安全性和抗炎疗效。[方法]豚鼠主动全身过敏实验:将豚鼠随机分为阴性对照组(氯化钠注射液),阳性对照组(牛血清白蛋白),BI低(BI-L,5 mg/kg)、高(BI-H,20 mg/kg)剂量组,SSI低(SSI-L,5 mg/kg)、高(SSI-H,20 mg/kg)剂量组,隔日致敏1次,共3次,于末次致敏后第12天激发,观察豚鼠是否出现过敏反应症状;抗大鼠脑缺血再灌注炎症反应实验:制备SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分成假手术组、模型组、尼莫地平组(1 mg/kg)、BI-L(2.1 mg/kg)、BL-H(4.2 mg/kg)、SSI-L(2.1 mg/kg)、SSI-H(4.2 mg/kg)剂量组,分别在连续给药1、3、7、14 d后检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)含量。[结果]豚鼠主动全身过敏实验:BI-L组1只弱阳性,5只阳性;BL-H组3只阳性,3只强阳性;SSI-L组5只阳性,1只强阳性;SSI-H组1只阴性,1只弱阳性,4只阳性。抗大鼠脑缺血再灌注炎症反应实验:与模型组相比,给药1 d后,BI-L组脑梗死体积显著减小(P<0.01),给药14 d后,尼莫地平组、BI-L组和SSI-H组脑梗死体积显著减小(P<0.05或P<0.01)。给药1 d后,TNF-α含量除SSI-H组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-6、IL-1β含量除SSI-L组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。给药3 d后,IL-10含量除SSI-L组,其他给药组均显著增加(P<0.05或P<0.01)。给药14 d后,TNF-α、ICAM-1、IL-1β含量给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-6含量除BI-L组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-10含量除BI-L组,其他给药组均显著增加(P<0.05或P<0.01)。[结论]SSI高剂量组过敏反应发生率较低,其安全性更好;BI低剂量组起效更快,SSI高剂量组作用更加持久。

灯盏乙素通过调控TGF-β信号通路抑制脏器纤维化的研究进展

灯盏乙素(SCU)在抑制脏器纤维化方面的研究取得了显著的进展,文章对灯盏乙素通过TGF-β信号通路在调控脏器纤维化中的作用机制进行深入探讨,并详述了灯盏乙素对肝、肺、心脏和肾等脏器纤维化的抑制效应,为揭示灯盏乙素在治疗脏器纤维化疾病中的机制提供了深刻的认识。

灯盏乙素对激活的小胶质细胞中PI3K表达和磷酸化水平的影响

目的:探究灯盏乙素对激活的小胶质细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化PI3K(p-PI3K)水平的影响。方法:用大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)法制备脑缺血模型,大鼠随机分成假手术组(Sham)、脑缺血组(MCAO)、脑缺血+灯盏乙素组(MCAO+S)。利用糖氧剥夺(OGD)法制备BV2小胶质细胞缺血缺氧损伤模型,随机分成对照组(Control)、OGD组、OGD+灯盏乙素组(OGD+S)。运用免疫荧光双标染色和Western Blot法检测不同组中小胶质细胞PI3K及PI3K磷酸化水平的变化。结果:体内和体外免疫荧光及Western Blot结果均显示,激活的小胶质细胞中PI3K磷酸化水平明显增加(P<0.05),灯盏乙素干预后PI3K磷酸化水平进一步升高(P<0.05);PI3K在各组间无明显变化(P>0.05)。结论:灯盏乙素可能通过上调激活的小胶质细胞中PI3K的磷酸化水平,对脑缺血发挥积极的治疗作用。

灯盏乙素对脑缺血大鼠小胶质细胞SIRT1/NF-κB通路的影响

目的:探究灯盏乙素干预大鼠脑缺血小胶质细胞(MG)中沉默信息调节因子2相关酶1/核因子κB(SIRT1/NF-κB)信号通路的表达变化。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、大脑中动脉闭塞组(MCAO组)、MCAO+灯盏乙素干预组(MCAO+S组)。Western Blot和免疫荧光染色检测大鼠脑缺血皮质区SIRT1、NF-κB(p65)的表达变化和NF-κB磷酸化水平(p-p65)。结果:Western Blot和免疫荧光染色结果显示灯盏乙素干预显著促进大鼠脑缺血后缺血皮质区SIRT1的表达,显著降低NF-κB的磷酸化水平(P<0.05)。结论:灯盏乙素对脑缺血大鼠小胶质细胞SIRT1/NF-κB信号通路具有调控作用。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

灯盏乙素通过细胞转运途径对阿尔茨海默病大鼠β-淀粉样蛋白跨血脑屏障的影响

目的:探讨灯盏乙素对阿尔茨海默病(AD)大鼠β-淀粉样蛋白(Aβ)跨血脑屏障(BBB)的影响及其机制。方法:无特定病原体(SPF)级SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组、灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组以及阳性对照组,除假手术组大鼠外,其余组大鼠侧脑室注射Aβ_(1-42)氯化钠溶液建立AD大鼠模型,灯盏乙素低剂量和高剂量组大鼠分别灌胃灯盏乙素5 mg/kg和10 mg/kg,阳性对照组灌胃盐酸多奈哌齐0.9 mg/kg,持续30 d,观察大鼠行为能力以及血脑屏障通透性,进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、闭合蛋白-5(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)、低密度脂蛋白相关蛋白(LRP-1)以及p糖蛋白(P-gp)表达情况。结果:模型组神经元细胞排列疏松、紊乱,细胞数量减少,可见明显空泡化,灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组及阳性对照组神经元细胞数量增多,空泡化细胞减少,细胞排列稍整齐致密。灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素高剂量组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期、伊文思蓝含量、Aβ斑块面积以及MMP-9蛋白相对表达量均低于模型组,穿过平台的次数以及LRP-1、P-gp、Claudin-5、Occludin蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05)。结论:灯盏乙素可减轻AD大鼠神经元病理损伤,保护血脑屏障。

酶解法与LC-MS-MS相结合研究灯盏乙素在健康人体内的药代动力学

目的：建立β-葡萄糖醛酸苷酶解法与LC-MS-MS法相结合测定人体血浆中灯盏乙素的苷元,研究健康男性单剂量口服灯盏花素分散片的药代动力学。方法血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解,甲醇蛋白沉淀,色谱柱为Agilent ZOR BAX SB C18（2．1 mm×150 mm,5μm）,运用乙腈-甲醇-水洗脱,多反应监测（MRM）灯盏乙素苷元（[M - H]-,m/ z 285．0/136．8）和内标槲皮素（[ M - H]-, m/ z 301．1/120．8）。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,采用该方法测定血浆中灯盏乙素苷元,使用DAS 1.0软件处理数据,计算药代动力学参数。结果灯盏乙素苷元在4．01～513．38μg·L-1范围内线性良好,日内日间精密度小于7．22%,提取回收率大于84．23%。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg 后,以灯盏乙素苷元为检测对象的主要药动学参数为：Cmax （μg·L^-1）：159．97±58．14； AUC（0-19）（μg·L^-1·h）：1151．37±279．80；AUC（0- ∞）（μg· L^-1·h）：1194．13±264．51；Tmax （h）：6．33±1．67；T1/2（h）：2．83±0．60。结论建立的酶解与LC-MS-MS 相结合分析方法准确灵敏,适用于灯盏乙素人体内的药代动力学研究。

用灯盏乙素定量人血浆中异灯盏乙素的LC/MS/MS方法探讨

目的探讨用灯盏乙素定量人血浆中异灯盏乙素的LC/MS/MS方法。方法用AgiLent SB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇∶水∶甲酸(55∶43∶2)。采用电喷雾离子源(ESI),以选择反应监测(SRM)方式对灯盏乙素和异灯盏乙素及其苷元进行一级和二级质谱分析,离子反应分别为m/z 463→287和m/z 287→123。结果根据所得色谱和质谱数据,推断灯盏乙素可能的代谢产物和异灯盏乙素的结构,并测定人血浆中异灯盏乙素的浓度。结论用灯盏乙素定量异灯盏乙素的方法是可行的。

灯盏乙素酯类前药的合成、理化性质及降解研究

目的对口服难吸收中药活性成分灯盏乙素进行结构改造,为寻找和设计合理前药及其剂型提供依据。方法通过先成盐后酯化的方法合成灯盏乙素乙酯、苄酯并改进文献方法合成羟乙酰胺酯,用质谱和氢谱确证结构。研究3种前药在不同pH水溶液中的稳定性、溶解度、分配系数和在人血浆中的降解。制备灯盏乙素羟乙酰胺酯环糊精包合物和乳剂,比较包合物和乳剂在肠液中对该前药的保护作用,考察该前药在不同肠段黏膜匀浆中的降解情况。结果合成的3种前药经确证为目标物;灯盏乙素羟乙酰胺酯在缓冲液(pH 4.2)和水中的溶解度比灯盏乙素分别提高近10倍和35倍,分配系数也由原来的-2.56提高到1.48;该酯水溶液的稳定性较好(t1/2≈16 d,pH4.2),在人血浆的半衰期最短(t1/2≈7 m in),但在肠黏膜匀浆中的降解可能影响酯的吸收,不同肠段黏膜匀浆降解羟乙酰胺酯的次序为:十二指肠>回肠≥空肠>结肠。乳剂在肠黏膜匀浆中对前药有显著的保护作用,包合物次之。结论与灯盏乙素乙酯和苄酯比较,羟乙酰胺酯的理化性质较好,但其在肠道中的稳定性有待提高,可以选择乳剂或结肠定位给药减少前药的降解。

灯盏乙素在兔体内药代动力学(英文)

目的 建立测定灯盏乙素血浆浓度的固相萃取 高效液相色谱 (SPE HPLC)法 ,并研究家兔iv灯盏花素的药代动力学。方法 采用甲醇 水 磷酸为流动相 ,NucleosilC1 8色谱柱为固定相 ,紫外检测波长 335nm ,外标法定量。给家兔分别iv灯盏花素 1 0 ,2 0和 40mg·kg-1 ,SPE HPLC法检测血浆药物浓度。结果 线性范围 0 0 2～ 1 0 0mg·L-1 ,最低检测浓度 0 0 2mg·L-1 ,方法回收率 96 1 5 %～ 99 31 % ,日内、日间RSD值均小于 1 0 %。家兔iv灯盏花素时 ,灯盏乙素血浆浓度变化符合三房室模型。灯盏乙素低、中剂量组的主要药代动力学参数无显著性差异 ,而高剂量组与低、中剂量组比较差异显著。结论 该法准确、灵敏、简便 ,适用于灯盏乙素血浆浓度的测定。灯盏花素经兔iv后的药代动力学符合三房室模型 ,剂量为 1 0～ 2 0mg·kg-1 时 ,药物的体内变化为线性动力学过程 ,而 40mg·kg-1

高效液相质谱联用法(HPLC-MS)测定灯盏乙素血药浓度及其临床药代动力学研究

目的:研究灯盏花素片在中国人体内的药代动力学。方法:2 0名健康志愿者单剂量口服12 0mg灯盏花素片,用高效液相 质谱联用法测定血浆中灯盏乙素总苷元。结果:本实验建立的血药浓度测定方法,血浆中杂质不干扰样品的测定,线性范围为0 .0 12 6～3.2 4mg·L-1;日内和日间精密度均小于12 .0 %。2 0名健康受试者单剂量口服灯盏花素片(12 0mg)后,主要药代动力学参数:Tmax =7.0±2 .3h、Cmax=0 .9±0 .5mg·L-1、AUC0 -tn =5 .6±1.6mg·h·L-1、AUC0 -∞=5 .8±1.6mg·h·L-1、MRT0 -tn=8.0±1.1h、MRT0 -∞=8.6±1.4h。结论:建立的LC MS法适用于灯盏乙素人体药代动力学研究。灯盏花素片口服药代动力学特点是达峰时间较长,约占受试者总人数4 5 %的药时曲线有双峰现象。

灯盏乙素在大鼠体内药代动力学及组织分布的研究

目的:研究灯盏乙素在大鼠体内药代动力学和组织分布特性,为临床合理用药提供科学依据。方法:灌胃给予80 mg.kg-1的灯盏乙素,HPLC测定大鼠体内灯盏乙素的血药浓度及组织中的浓度,血浆样品用固相萃取的方法处理,其他生物样品用液-液萃取法处理。结果:灯盏乙素在血浆和组织匀浆中线性范围分别为10～1 280ng.mL-1(R2>0.99)和40～1 280 ng.g-1(R2>0.99),最低检测限分别为10 ng.mL-1和40 ng.g-1,日内、日间精密度均小于8%。主要药代动力学参数:达峰时间tmax为(7.7±1.0)h,峰浓度Cmax为(288.0±75.2)ng.mL-1,药时曲线下面积AUC0～t为(5.6±1.6)μg.mL-1.h,MRT0～t为(17.5±1.4)h。结论:灯盏乙素口服后在体内呈非房室模型,药时曲线有双峰现象。

灯盏乙素聚乙二醇前药的合成与表征

目的:合成黄酮类化合物灯盏乙素聚乙二醇前药。方法:以聚乙二醇单甲醚2000为原料,与琥珀酸酐反应后再与N-羟基琥珀酰亚胺缩合得到活泼酯,最后与灯盏乙素反应得到目标化合物。结果:分别用FT-IR、1HNMR和质谱对其结构进行了表征,并初步测定了其在水中的溶解度。结论:高分子前药水溶性大大提高,为延长药物体内半衰期及提高生物利用度提供了可能。

不同分子量灯盏乙素-PEG酯的合成、性质及小肠吸收研究

为探讨小分子药物PEG化（PEGylation）对口服吸收的影响规律，合成了多种分子量的灯盏乙素PEG衍生物。对产物在不同条件下的理化常数、稳定性及大鼠在体小肠吸收情况进行了考察。灯盏乙素经PEG化后水溶性提高，并获得了适于口服吸收的理想的分配系数。体外试验中，该类衍生物表现出前药的特性，在pH7．4的PBS缓冲液中t1/2超过12h（37℃），而在血浆中则快速降解释放出灯盏乙素，t1／2约为1．5～3h；灯盏乙素经PEG化后，口服吸收明显增加，但PEG化物的吸收随PEG片断分子量的增大而减少。综合考虑反应收率、产物稳定性和口服吸收等情况，用于灯盏乙素修饰的PEG分子量应在400～1000 Da之间。

灯盏乙素对大鼠肝线粒体氧化损伤的抑制作用

运用Fe2 + Vc损伤体系诱导大鼠肝线粒体氧化损伤 ,并研究了灯盏乙素的抑制作用 .采用分光光度法测定脂质过氧化物丙二醛 (MDA)含量、膜蛋白巯基含量及线粒体肿胀度 ,利用荧光染料Rhodamine12 3对线粒体进行标记 ,跟踪线粒体膜电位的变化 .研究发现 2 0～ 5 0 μmol/L的灯盏乙素能抑制MDA的生成并促使膜巯基含量下降 ,对线粒体肿胀和膜电位的降低都有一定的抑制作用 ,并呈剂量依赖关系 .结果表明灯盏乙素是一种有效的抗氧化剂 。

高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax的表达变化及灯盏乙素的影响

目的观察高血脂大鼠缺血侧大脑皮质额叶内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化,探讨灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法大鼠建立高血脂模型后,线栓法阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注损伤模型,HE染色观察大脑皮质额叶的病理变化,免疫组织化学和免疫印迹法观察Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,同时结合神经行为学评分和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠的神经行为及脑梗死灶体积的变化。结果与假手术组相比,生理盐水组大鼠脑组织损伤加重,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增高,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显增加(P<0. 05)。与生理盐水组相比,灯盏乙素治疗组脑组织损伤减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显降低(P<0. 05)。结论灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax的表达实现的。

灯盏乙素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的观察灯盏乙素对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法给雄性小鼠尾静脉注射卡介苗(BCG,每鼠0.025 mg),12 d后尾静脉注射脂多糖4μg,建立小鼠免疫性肝损伤模型,在注射LPS前,小鼠灌胃给予不同剂量的灯盏乙素(50 mg.k·g 1,100 mg.k·g 1),1次/d,连续12 d。测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)活性,计算肝脏、脾脏、胸腺指数,并进行肝脏病理组织检查。结果灯盏乙素可显著抑制免疫性肝损伤小鼠血清ALT活性,灯盏乙素能显著降低肝损伤小鼠的肝脏指数和脾指数,减轻肝组织病理损伤程度。结论灯盏乙素对BCG+LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用。