固态发酵三七渣产灵芝三萜的工艺条件优化

该研究通过单因素试验考察发酵温度、接种量、发酵时间对固态发酵三七渣生产灵芝三萜的影响,并采用响应面法对其发酵工艺条件进行优化。结果表明,发酵温度、接种量、发酵时间对灵芝三萜含量影响均极显著(P<0.01),这3个因素对于发酵培养物中灵芝三萜含量影响程度排序为:接种量>发酵时间>发酵温度。发酵温度和接种量之间的交互作用对灵芝三萜含量的影响极显著(P<0.01);而接种量和发酵时间、发酵时间和发酵温度之间的交互作用对灵芝三萜含量的影响不显著(P>0.05)。在实验室小试条件下最佳发酵工艺条件为:发酵温度30℃,发酵时间16 d,接种量为11%。在此优化条件下,灵芝三萜含量为(4.110±0.186)mg/g,比优化前提高了12.0%。

灵芝三萜提取工艺的优化

以灵芝孢子粉为原料,使用体积分数为70%的乙醇为提取剂,采用酶解与超声辅助提取相结合的方法,将不同液固比、超声时间、酶解时间和酶用量设定为4个因素,进行单因素试验并设计响应面试验,以确定最优提取方式及其影响因素.利用大孔树脂层析法对灵芝三萜进行分离纯化,通过优化分离纯化工艺,确定最佳洗脱树脂、洗脱液体积分数、上样液流速以及上样液质量比.采用高效液相色谱法分析灵芝总三萜的组分差异.通过预实验分析,与单一提取法相比,酶+超声辅助提取更高效.采用乙醇为提取剂提取灵芝中三萜类化合物可提高三萜的纯度.最优条件下可实现对三萜含量的快速、精确测定,为灵芝三萜的分离纯化提供理论依据.

保健食品中灵芝三萜含量测定的方法研究

目的:为解决灵芝孢子粉类产品中灵芝三萜含量测定中室间和室内对比误差较大的问题,研究了以《NY/T 3676—2020灵芝中总三萜含量的测定分光光度法》为代表的紫外分光光度法测定过程中提取试剂、温度、显色剂用量、提取溶液测试体积及样品称样量等因素对实验结果的影响。方法:灵芝孢子粉的乙酸乙酯溶液超声60 min并过滤后,量取适量毫升滤液蒸干后,加入0.40 mL 5%香草醛-冰乙酸与1.00 mL高氯酸于60℃水浴中加热15 min,取出,冰水浴冷却后加入5.00 mL冰乙酸,15 min后以1 cm比色皿于548 nm波长测定吸光度。结果:确定了以紫外分光光度法测定灵芝三萜含量时最佳提取溶剂为乙酸乙酯,显色反应时最佳水浴温度为60℃,5%香草醛-冰乙酸溶液与高氯酸最适用量分别为0.40 mL和1.00 mL,最适宜的提取液适用量为0.5 mL。要保持含量测定的稳定性,其称样量是整个实验的关键,且与样品本身含量有关。结论:该方法可广泛应用于各类灵芝孢子粉中灵芝三萜含量的测定。

贵州灵芝三萜提取及其配制酒抗氧化性研究

以贵州灵芝为原材料,采用有机溶剂浸提法提取其有效成分灵芝三萜,通过单因素试验和正交试验得到优化工艺参数,在此基础上制备灵芝三萜配制酒并考查其稳定性和抗氧化性。结果表明,浸提法最优工艺条件为提取温度75℃,料液比1∶35,乙醇体积分数75%,提取时间2.0 h,在此条件下灵芝三萜得率为1.15%。抗氧化试验结果表明,灵芝三萜酒对DPPH自由基、羟自由基和ABTS^(+)自由基清除率分别为85.2%,36.8%和63.5%,Fe^(3+)还原力为0.965,表明灵芝三萜配制酒具有较好的抗氧化能力。为品质可控的灵芝三萜配制酒的开发和应用提供了基础数据。

灵芝三萜类物质液态发酵研究进展

灵芝三萜类活性成分主要来源于灵芝子实体、孢子及菌丝体。液态发酵合成灵芝三萜因生产周期短、发酵条件易控制、活性成分稳定等优点逐渐受到关注。近年来,除了在培养基和环境条件等方面对灵芝三萜液态发酵调控参数进行优化外,添加外源物提升灵芝三萜产量也是一种很好的调控手段。本文就灵芝三萜生物合成途径、液态发酵高产灵芝三萜的培养条件调控、外源物对液态发酵高产灵芝三萜的影响以及代谢通量在灵芝三萜液态发酵合成方面的应用前景进行介绍。

灵芝三萜结构和生物活性及高产三萜菌株的研究进展

灵芝(Ganoderma spp.)是著名的药用真菌,含有多种活性化合物,灵芝三萜是其主要的活性代谢成分之一,具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖等功能。笔者总结了灵芝三萜的分离纯化、结构、生物活性及高产三萜育种工作的研究进展,并对今后灵芝的研究工作进行展望,以期为灵芝三萜的开发利用提供参考。

灵芝三萜真空耦合超声提取工艺优化及其抗帕金森病活性

目的优化灵芝三萜真空耦合超声提取工艺,并考察其抗帕金森病活性。方法在单因素试验基础上,以超声时间、超声温度、乙醇体积分数、料液比为影响因素,灵芝三萜得率为评价指标,正交试验优化真空耦合超声提取工艺。采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠帕金森病模型评价灵芝三萜抗帕金森病活性。结果最佳条件为超声时间60 min,超声温度60℃,乙醇体积分数95%,料液比1∶20,灵芝三萜得率为0.887%。与模型组比较,灵芝三萜组小鼠转棒时间、悬挂时间延长(P<0.05,P<0.01),Nissl、TH阳性细胞数及TH阳性纤维数增加(P<0.05,P<0.01)。结论该方法稳定可靠,可用于真空耦合超声提取具有较强抗帕金森病活性的灵芝三萜。

补料方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的影响

在50 L发酵罐中采用4种补料培养方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜进行比较。结果表明,通过补料可以明显地促进灵芝菌丝体的生长和灵芝三萜的合成,同时,不同的补料方式对菌丝体生长和灵芝三萜合成有不同的影响。采用指数补料方式可获得较高的菌丝体干质量,并提高灵芝三萜含量,与传统的发酵方式相比,采用此补料策略取得了较好的效果。发酵终点灵芝菌丝体干质量达到17.68 g/L,灵芝三萜含量达到4.58 g/100 g干菌丝体,分别比分批发酵提高了65.70%和100.88%。

大孔树脂分离提取发酵液中灵芝三萜类物质

利用大孔树脂富集提取发酵液中灵芝三萜。通过比较4种大孔树脂对灵芝三萜的吸附和解吸性能,发现AB-8树脂最适合灵芝三萜的提取。结果表明:控制体积流量为2 mL/min、pH值2,AB-8树脂的饱和吸附量达到最大,为8.837 mg/g(以干树脂质量计)。确立了最佳洗脱方案,依次用水、体积分数20%、40%、95%乙醇溶液分段洗脱。

灵芝三萜对大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究

目的:研究灵芝三萜对肝纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将44只SD大鼠随机分为6组,正常组、模型组、苦参素对照组、灵芝三萜小、中、大剂量组。大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)油溶液造模连续10周。于造模后第4周开始以小、中、大剂量灵芝三萜进行灌胃,剂量分别为45,90,180mg·kg-1,同时苦参素以100mg·kg-1灌胃。至第10周末处死全部大鼠,收集血清检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT);肝组织进行HE染色,RT-PCR检测转化生长因子β1 mRNA(TGF-β1 mRNA)的表达,Western-Blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果:与模型组相比灵芝三萜治疗组能够显著降低大鼠血清中AST、ALT、GGT以及肝组织中TGF-β1 mRNA、MMP-2的表达。病理切片清楚地显示灵芝三萜能够显著减轻大鼠肝纤维化的程度。结论:灵芝三萜对CCl4所致的大鼠肝纤维化有明显地保护作用,其机制可能是通过抑制TGF-β1 mRNA的表达和降低MMP-2的表达来减少胶原纤维地合成。

灵芝三萜类成分药理活性研究进展

灵芝作为我国药食两用传统名贵中药,化学成分主要有三萜类、多糖、有机酸、生物碱、氨基酸等,其中灵芝三萜类化合物主要包括灵芝酸和灵芝醇。该文总结了近几年灵芝三萜在抗肿瘤、抗炎、保肝、保肾、调节免疫、降血脂、降血糖、抗菌等方面药理活性研究,以期为高品质灵芝核心功效评价提供参考依据;也为灵芝在保健食品和临床医学中的应用提供科学依据。

超声辅助提取灵芝三萜的工艺研究

以赤灵芝为原料,对超声辅助提取灵芝三萜的工艺进行了研究。结果表明,生长50d的灵芝其灵芝三萜的提取率最高,其超声提取的最佳工艺参数为:超声功率为250W,乙醇浓度为75%,超声时间为50min,料液比为1:25,提取温度为80℃,此条件下灵芝三萜提取率为1.141%。

灵芝三萜化学成分研究进展

灵芝为担子菌纲,多孔菌科(Polyproraceae)灵芝属(Ganoderma)真菌赤芝(Ganoderma lucidum)和紫芝(G.japonicum)的总称。灵芝属真菌国内有二十多种,包括赤芝、黄芝、紫芝、黑芝、薄盖灵芝、树舌等,多分布于云、贵、冀、吉、苏、浙、闽等省。灵芝在我国已有悠久的药用历史,始载于《神农本草经》,具有补中益气、滋外强壮、扶正固本、延年益寿等功效,列为名贵药材。由于野生灵芝生长分散。

液体发酵生产灵芝三萜酸的过程调控研究进展

灵芝三萜酸是灵芝发挥免疫调节功能的特征性成分之一。目前三萜酸的来源包括子实体提取、灵芝孢子粉破壁提取、液体发酵等,其中液体发酵工艺因具有周期短、发酵条件易精确控制,并可实现工业化生产等优点,成为国内外研究的热点。该文从过程发酵条件和外源诱导子2个方面对三萜酸液体发酵调控进行综述,为提高三萜酸产量提供发酵技术参考,并对相关研究工作进行展望。

正交试验优化灵芝三萜白蛋白纳米体制备工艺及其分子表征

研究用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)为载体包裹灵芝三萜制备纳米体的工艺与其分子表征;采用去溶剂化-化学交联法制备灵芝三萜白蛋白纳米体,以白蛋白纳米体包封率为主要评价指标,采用正交试验设计法优化灵芝三萜白蛋白纳米体的配方。结果表明:将BSA 50 mg溶于5 m L去离子水中,取灵芝三萜8 mg溶于25 m L无水乙醇中,水相以400 r/min持续搅拌的同时以1 m L/min的速率滴加灵芝三萜乙醇溶液,加入0.25%的戊二醛溶液125μL,室温条件下固化12 h,减压浓缩除去乙醇,得到的灵芝三萜白蛋白纳米体粒径为(189±11.13)nm,多分散指数为0.227±0.016,Zeta电位为(-31.4±6.74)m V,包封率为(80.10±1.05)%,载药量为(11.36±0.13)%,纳米体溶液于4℃放置30 d,稳定性良好。

灵芝三萜对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用

目的观察灵芝三萜对α-萘异硫氰酸酯所致大鼠急性黄疸模型的退黄降酶作用。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、α-萘异硫氰酸酯肝损伤模型组、灵芝三萜高、中、低(200、100、50 mg/kg)剂量组和阳性药物组(赤丹退黄颗粒)。各治疗组大鼠连续灌胃给药7 d,除正常对照组外,第4天给药后2 h,各给药组及模型组灌胃给予α-萘异硫氰酸酯橄榄油溶液(60 mg/kg)。末次给药后2 h,腹腔注射10%乌拉坦溶液麻醉大鼠,开腹分离总胆管,引流胆汁,记录胆汁流量;取血分离血清,以血清肝功能指标、肝组织超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量以及肝脏组织病理学的改变为观察指标。结果与模型组比较,灵芝三萜能明显提高胆汁淤积大鼠的胆汁流量,可不同程度的降低丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、碱性磷酸酶,r-谷酰胺转肽酶活性和丙二醛含量,升高超氧化物歧化酶活性,肝脏病理组织学检查表明,灵芝三萜能明显减轻肝细胞变性、坏死和肝小胆管增生。灵芝三萜高、中、低剂量组之间存在一定的量效关系。结论灵芝三萜具有降低实验性胆汁淤积大鼠血清胆红素、转氨酶和改善肝脏组织损伤的作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关。

灵芝三萜对心肌缺血大鼠心脏的保护作用

目的探讨灵芝三萜对结扎冠状动脉后造成心肌缺血大鼠心电图(ECG)、心肌酶与心功能、血清黏着斑激酶(FAK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及心肌梗死面积的影响和作用机制。方法SPF级、雄性Sprague-Dawlay大鼠30只(体重大约220 g)用随机数字原则平均分成假手术组、缺血组、灵芝三萜组。缺血组以左冠脉结扎手术法建立缺血模型,同时用BL-420F生物信号采集放大系统描记ECG,判断模型建成的依据是:以Ⅱ导联为准,出现ST段向上抬高(呈弓背形)或明显的病理性Q波。灵芝三萜组手术操作同缺血组,灌胃灵芝三萜。假手术组在手术具体操作方面为打开胸腔后冠状动脉仅穿线并不真正结扎缺血组和假手术组,灌胃生理盐水。28 d后观察每组ECG改变、血清SOD、MDA、FAK变化及心肌梗死面积及心功能和心肌酶的各项指标。结果与缺血组比较,灵芝三萜组心电出现ST段抬高明显抑制;梗死面积显著减少(P<0.05);血清FAK与MDA显著下降;血清SOD值明显增大;心肌酶学指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸肌酶(CK)-同工酶(MB)、CK、α-羟丁酸脱氢酶(HBD)显著下降;心功能数据显示:左心室射血分数(LVEF)显著增加,而左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)显著减少(均P<0.05);结论灵芝三萜可通过调节氧化应激(升高SOD、降低MDA)改善大鼠心肌缺血症状;减少FAK抑制心肌凋亡并经整合素信号通路而减弱心肌梗死,进而达到保护心肌作用。

灵芝三萜对小鼠肝损伤的预防和保护作用研究

目的研究灵芝三萜对四氯化碳(CCl4)所致的小鼠肝损伤的预防和保护作用。方法将小鼠随机分为正常组,模型组,灵芝三萜高、中、低剂量组5组。小鼠皮下注射CCl4油溶液造模。以高、中、低剂量灵芝三萜进行灌胃,剂量分别为180,90,45 mg/kg。收集血清检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)。结果与模型组相比灵芝三萜治疗组能够显著降低小鼠血清中AST、ALT、GGT。病理切片清楚地显示灵芝三萜能够显著减轻小鼠肝损伤的程度。结论灵芝三萜对CCl4所致的小鼠肝损伤有明显的保护作用。

HPLC法和UV-VIS法测定灵芝孢子粉中灵芝三萜及灵芝多糖的含量

目的建立测定灵芝孢子粉中的两个有效成分灵芝三萜及灵芝多糖含量的方法,为进一步开发和应用灵芝孢子粉提供依据。方法以灵芝酸C2为标准品,通过HPLC法对灵芝孢子粉中灵芝酸C2的含量进行测定。色谱条件为:检测波长254nm;流动相为甲醇:水=55∶45,各加1%冰醋酸;柱温40℃;流速0.7mL/min。以葡萄糖为标准品,采用硫酸-蒽酮比色法,通过UV-VIS法对灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量进行测定。结果HPLC法测得三批灵芝孢子粉中灵芝酸C2含量约为0.129‰,0.108‰和0.094‰,灵芝酸C2在7.35～147μg/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,回收率为95.9%,95.6%和96.4%。UV-VIS法测得三批灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量约为1.152%,1.129%和1.007%,葡萄糖在14.9～119.1μg/mL的范围内,浓度和吸光度呈线性关系,r=0.9991,回收率为95.0%,95.1%和95.2%。结论方法简便、准确,可用于灵芝孢子粉中灵芝三萜和灵芝多糖的含量测定。

灵芝三萜对口腔黏膜癌防治作用及机理的研究

目的:探讨灵芝三萜对口腔黏膜癌的防治作用及其作用机理。方法:建立金黄地鼠颊囊动态癌变模型60只,分2组:实验组(灵芝三萜组)和对照组(未服用灵芝三萜组),每组各30只,对所取标本进行病理检验,并采用免疫组化技术检测bcl-2和survivin在两组动物模型中的表达变化。结果:病理结果显示随DMBA涂药时间的延长,两组动物模型的病变呈加重趋势(P<0.01),第6、9、12周实验组的病变程度明显低于对照组(P<0.05);从总体上看两组颊囊癌变过程中不同组织学发生情况有显著差异(P<0.01)。Bcl-2在上皮异常增生阶段、survivin在上皮单纯增生和异常增生阶段,实验组的表达强度明显低于对照组。结论:灵芝三萜对口腔黏膜癌具有抑制作用,其作用机制可能与凋亡调节基因survivin、bcl-2的下调有关。