不同分期痛风性关节炎患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平观察

目的观察不同分期痛风性关节炎(GA)患者NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平。方法回顾性选取2022年7月至2023年7月在河北省沧州中西医结合医院接受治疗的96例GA患者作为研究对象。依据GA临床分期,分为急性关节炎期组(n=38)、间歇期组(n=26)、慢性关节炎期组(n=32)。另选取同期于本院体检中心体检的健康者35名设为对照组。观察各组NALP3炎性体及外周血γδT细胞水平,分析各组GA患者的临床指标,包括血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血清C反应蛋白(CRP)水平及白细胞计数(WBC)。采用Pearson相关性分析急性关节炎期患者外周血γδT细胞及其亚型、NALP3炎性体与临床指标的关系。结果各组NALP3、γδT1细胞比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组Caspase-1、ASC、γδT细胞、γδT2细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组Caspase-1水平均高于对照组,γδT细胞和γδT2细胞比例均低于对照组,且病情程度越高,Caspase-1水平越高,γδT细胞和γδT2细胞比例越低;急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组ASC水平均高于对照组,但急性关节炎期组低于间歇期组、慢性关节炎期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组血尿酸、WBC、血肌酐水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,急性关节炎期组、间歇期组、慢性关节炎期组的血尿酸、WBC、血肌酐水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),且病情程度越高,血尿酸、WBC、血肌酐水平越高。相关性分析显示,γδT细胞在淋巴细胞中的比例及γδT1细胞在γδT细胞中的比例与血尿酸、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC、CRP指标无明显相关性;γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关(P<0.05)。相关性分析显示,NALP3 mRNA表达与血肌酐、总胆固醇、甘油三酯、WBC指标无明显相关性;与血尿酸、CRP呈正相关(P<0.05)。结论NALP3炎性体及外周血γδT细胞参与GA的发展,Caspase-1、γδT细胞和γδT2细胞可作为痛风的急性炎症标记物,而ASC不能作为痛风的急性炎症标记物,同时γδT2在γδT细胞中的比例与甘油三酯、WBC呈负相关,NALP3 mRNA表达与血尿酸、CRP呈正相关,为临床病情评估和治疗提供参考。

左旋紫草素基于调节NF-κB途径和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤作用

目的探究左旋紫草素对急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤的作用及其作用机制。方法选取SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、左旋紫草素低剂量组和左旋紫草素高剂量组4组,每组12只。采用胆胰管逆行注射5%牛磺酸钠溶液构建急性胰腺炎模型,左旋紫草素低剂量组和高剂量组在造模前1 h及造模后分别腹腔注射左旋紫草素(10、20 mg/kg),模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠溶液。采用HE染色观察胰腺及心肌组织病理变化,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹(Western blot)分析NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴相关蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠的胰腺及心肌组织出现明显的病理损伤,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、ASC蛋白的相对表达水平显著升高(P<0.01),而IκBα的相对表达水平显著降低(P<0.01),且血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,左旋紫草素低剂量组和高剂量组大鼠的胰腺及心肌组织损伤程度减轻,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的相对表达水平显著降低(P<0.01),IκBα的相对表达水平显著升高(P<0.01),血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著降低(P<0.01),且左旋紫草素高剂量组的效果优于低剂量组。结论左旋紫草素能够通过调节NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤,为左旋紫草素在急性胰腺炎的治疗提供重要的参考。

NLRP3炎性体在痛风性关节炎患者炎症反应中的机制研究

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体在痛风性关节炎(GA)患者发病机制中的作用。方法:用RT-PCR法检测44例急性痛风性关节炎(AGA)患者、52例非急性痛风性关节炎(NAGA)患者和50名健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)、半胱天冬酶-1(CASP1)的mRNA表达水平,用Western blot法检测AGA、NAGA患者和健康体检者PBMCs中NLRP3、PYCARD、CASP1、NF-κB(p105/p50)蛋白表达水平,用ELISA法检测AGA、NAGA患者和健康体检者血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达水平。结果:NAGA组患者NLRP3的mRNA表达显著低于健康对照组与AGA组(P<0.01),AGA、NAGA组患者PYCARD的mRNA表达均显著高于健康对照组(P<0.01),AGA组患者CASP1的mRNA表达显著高于健康对照组与NAGA组(P<0.01);AGA、NAGA组患者NLRP3、CASP1蛋白表达均显著低于健康对照组(P<0.05),AGA、NAGA组患者PYCARD、NF-κB(p105/p50)蛋白表达均显著高于健康对照组(P<0.05);AGA、NAGA组患者血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1表达均显著高于健康对照组(P<0.01),NAGA组患者IL-1β、IL-6表达均显著高于AGA组(P<0.01)。结论:NLRP3炎性体各基因mRNA、蛋白表达及与其相关联的致炎与抗炎性因子在GA患者中表达异常,提示NLRP3炎性体在GA患者的炎症反应中发挥重要的作用。

痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性

目的探讨痛风患者外周血NALP3炎性体与炎性因子、糖脂代谢的相关性。方法分别选择102例痛风患者(痛风组)、154例高尿酸血症患者(高尿酸血症组)和107例健康体检人群(对照组)作为研究对象,收集3组受试对象年龄、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、尿酸(UA)、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)等临床资料,采用RT-PCR和Western blot检测各组患者外周血NALP3mRNA和蛋白表达。另利用100μg/mL尿酸盐刺激对照组全血6h,再次检测刺激组与未刺激组外周血单个核细胞(PBMCs)NALP3mRNA和蛋白表达。结果痛风组和高尿酸血症组BMI、FPG、LDL-C、TG、TC、UA、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白(CRP)明显高于对照组,脂联素(APN)明显低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05);痛风组FPG、LDL-C、TG、TC、UA、IL-1β、CRP明显高于高尿酸血症组,APN明显低于高尿酸血症组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。NALP3mRNA在痛风组(0.846±0.130)、高尿酸血症组(0.700±0.126)的表达明显高于对照组(0.231±0.049),痛风组NALP3mRNA表达量明显高于高尿酸血症组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组外周血经尿酸盐刺激后,刺激组NALP3mRNA和蛋白表达较相应空白组显著升高(均P<0.05)。痛风组和高尿酸血症组NALP3mRNA表达与FPG、UA、TNF-α、IL-1β、CRP呈正相关,与APN呈负相关(均P<0.05)。校正BMI、FPG、TG、TC等混杂因素后,结果显示NALP3mRNA不是高尿酸血症发生的危险因素,而NALP3mRNA表达≥0.808是痛风发生的危险因素(P<0.05)。结论痛风患者NALP3表达明显升高,NALP3可能参与痛风的发病和进展。

NLRP3炎性体与代谢性疾病的研究进展

代谢性疾病是由体内氨基酸、葡萄糖和脂质代谢紊乱引起的一类疾病,慢性炎症反应是其重要特征之一.Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体是位于细胞内的一种蛋白质复合体,主要功能为活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)以间接调控白介素1β(IL-1β)、IL-18和IL-33等的成熟和分泌.NLRP3炎性体是炎性体相关研究的热点,多种内源性或外源性危险信号通过激活这一蛋白质复合体上调炎性因子的表达水平,从而促进多种代谢性疾病的发生发展.本文对NLRP3炎性体的结构、功能、调节以及在代谢性疾病中的作用做一综述,以期为代谢性疾病的防治提供新靶点.

萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎NALP3炎性体信号通路的影响

目的研究萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用及机制。方法 Wistar大鼠,♂,72只,随机分组后,各用药组大鼠预先灌胃给予不同剂量萆薢总皂苷,随后右侧踝关节腔注射尿酸钠诱导急性痛风性关节炎。观察大鼠步态,测定关节肿胀度,HE染色进行病理学分析。ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-18表达。Western blot法检测滑膜组织中pro-IL-1β、NALP3炎性体相关蛋白变化。结果萆薢总皂苷各浓度和秋水仙碱均可改善大鼠步态。TSD高、中剂量组与秋水仙碱类似,可降低大鼠关节肿胀度,病理学检查踝关节病变好转,血清TNF-α、IL-1β、IL-18明显减少,滑膜组织pro-IL-1β、NALP3、ASC、caspase-1前体和活性形式蛋白表达降低。结论萆薢总皂苷对大鼠急性痛风性关节炎具有防治作用,机制可能是抑制NALP3炎性体装配和激活,以及抑制炎性细胞因子的表达。

痛风性关节炎患者NLRP3炎性体基因转录剪接体mRNA表达与临床检测指标的相关分析

目的探讨痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain,leucine rich repeat and pyrin domain containing,NLRP3)炎性体基因及其转录剪接体的改变与GA患者临床实验指标的关系。方法用半定量聚合酶链反应RT-PCR检测44例急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者、52例非急性痛风性关节炎(non-acute gouty arthritis,NAGA)患者和50名健康体检(healthy control,HC)者PBMCs中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白[PYRIN-PAAD-DAPIN domain(PYD)and a C-terminal caspase recruitment domain(CARD),PYCARD]、半胱天冬酶1(caspase 1,CASP1)基因及其转录剪接体mRNA表达水平;检测AGA、NAGA患者与HC血常规、肝肾功能、血脂指标,比较上述3组指标的差异并分析NLRP3炎性体各基因及其转录剪接体mRNA表达与各指标的相关性。结果 NAGA组NLRP3 mRNA表达量显著低于HC组与AGA组(P<0.05),AGA组、NAGA组NLRP3-2、3、4 mRNA表达量均显著高于HC组(P<0.05);AGA组、NAGA组PYCARD、PYCARD-1、PYCARD-2 mRNA表达量均显著高于HC组(P<0.05);AGA组CASP1 mRNA表达量显著高于HC组与NAGA组(P<0.05),AGA组CASP1-6 mRNA表达量显著低于HC组(P<0.05),NAGA组CASP1-7 mRNA表达量显著低于HC组(P<0.05),AGA组CASP1-gamma mRNA表达量显著高于HC组与NAGA组(P<0.05)。AGA组、NAGA组血常规、肝肾功能、血脂指标与HC组比较差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示NLRP3炎性体部分基因及其转录剪接体mRNA表达与AGA组、NAGA组部分临床实验指标具有相关性(P<0.05),与HC组临床实验指标均未见相关性(P>0.05)。结论 NLRP3炎性体基因转录剪接体mRNA在GA患者中表达异常,提示在GA患者的炎症反应中NLRP3炎性体基因转录剪接体可能发挥重要的调控作用;GA患者临床实验指标与HC组比较存在差异,且NLRP3炎性体部分基因及其转录剪接体与GA患者部分临床实验指标具有相关性。

大鼠急性心肌梗死后NLRP3炎性体-IL-1β信号轴激活与End-MT的关系

目的:研究在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)引发的心肌纤维化过程中,NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,End-MT)是否存在同一性。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)与AMI组(n=15),术后28 d采用Masson染色检测心肌纤维化水平;Western blot检测NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1)、内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)及间充质细胞标志物(α-SMA和FSP1)的表达;酶联免疫吸附法检测NLRP3炎性体下游因子IL-1β的表达。结果:与假手术组相比,冠脉结扎组AMI大鼠心肌纤维化水平、End-MT进展程度、NLRP3炎性体活性及caspase-1和IL-1β的表达均显著增加(P<0.05)。结论:NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与End-MT进程具有显著同一性,提示NLRP3炎性体-IL-1β作为激活End-MT的潜在靶点将为研究AMI后心肌纤维化及心力衰竭提供新的理论依据。

NLRP3炎性体加重小鼠脑缺血再灌注损伤的机制探讨

目的探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体(NLRP3蛋白、IL-1β、IL-8)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用和机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组和格列本脲(NLRP3抑制剂)组各20只,每组中一半小鼠通过大脑中动脉栓塞法构建缺血再灌注(IR)模型,其余接受假手术处理。格列本脲组术前30 min腹腔注射500 mg/kg格列本脲。造模成功后对小鼠进行神经学评分,2,3,5,-氯化三苯基四氮唑染色,并计算缺血梗死面积,HE染色观察病理变化,TUNEL染色观察各组神经元凋亡情况,Western Blot检测小鼠脑组织NLRP3蛋白表达,ELISA检测小鼠脑组织中IL-1β、IL-18浓度。结果各组IR小鼠脑损伤程度均重于假手术小鼠,但是对照组IR小鼠脑损伤程度比格列本脲组严重。HE染色和TUNEL染色显示,IR小鼠脑组织出现明显损伤,神经元凋亡数量明显增多,格列本脲可减轻IR造成的病理损伤程度。与对照组相比,格列本脲组的脑组织NLRP3蛋白表达及IL-1β、IL-18升高程度明显降低(P均<0.05)。结论 NLRP3炎性体可促进小鼠脑IR损伤,主要通过增加细胞因子释放和促进神经元凋亡实现的。

NLRP3/Caspase-1炎性体通路在大鼠根尖周炎中表达的研究

目的:研究大鼠实验性根尖周炎中NLRP3/Caspase-1炎性体通路的表达。方法:30只大鼠双侧下颌第一磨牙开髓后封入PBS缓冲液棉球,玻璃离子封闭髓腔,分别于开髓后0、7、14、21d和28d处死大鼠,分离双侧下颌骨。组织学处理后HE染色观察根尖周组织炎症状况,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR分别检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表达情况。结果:NLRP3、Caspase-1和IL-1β在炎性根尖周组织中均有表达;与对照组相比,三者表达水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);其中Caspase-1和IL-1β阳性细胞数与NLRP3阳性细胞数呈显著正相关(P<0.01)。结论:根尖周组织中存在着NLRP3/Caspase-1炎性体通路,提示该通路在根尖周组织固有免疫中可发挥重要作用。

炎性体及其在痛风发病中的作用

炎性体(inflammasome)是一种多蛋白复合体,它能介导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(capsase-1)激活,促进致炎细胞因子IL-18和IL-1β分泌和成熟,在炎症反应和天然免疫中发挥主要作用。研究表明,炎性体在一些自身炎症性疾病中有着重要的作用。痛风是自身炎症性疾病的一种,近来的研究已确立炎性体活化与痛风发病的关系。本文就炎性体特别是NALP3炎性体的结构和功能及其在痛风中的作用作一综述。

炎性体相关细胞因子在脓毒症急性肾损伤中的变化和意义

目的：观察炎性体相关细胞因子在脓毒症急性肾损伤（AKI）患者中的变化情况，探讨其价值及意义。方法选择2014-03-2015-02哈尔滨医科大学附属一院ICU收治的非脓毒症非AKI患者29例作为ICU control组，脓毒症非AKI患者30例作为Sepsis not AKI组，脓毒症AKI患者34例作为Sepsis-induced AKI组，于患者入ICU第1天、3天和7天取血并收集清晨中段尿液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆和尿液中IL-1β、IL-18和IL-33，计算急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）评分；同时记录ICU住院时间、血清肌酐（SCr）水平和每天的尿量。计数资料使用χ^2检验，计量资料使用两组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果与ICU control组比较，Sepsis not AKI组APACHEⅡ评分、SCr水平、尿量和住ICU时间均无显著变化（均P＞0.05）；Sepsis-induced AKI组患者的APACHEⅡ评分、SCr水平显著升高（P＜0.05），尿量显著减少（P＜0.05），住ICU时间显著延长（P＜0.05）。在第1天、3天和7天， Sepsis not AKI组患者和Sepsis-induced AKI组患者的血浆IL-1β、IL-18和IL-33水平均比同时间点ICU control组患者显著升高（均P＜0.05），而Sepsis-induced AKI组患者的IL-1β、IL-18和IL-33血浆水平均高于同时间点Sepsis not AKI组患者（均P＜0.05）；Sepsis-induced AKI组患者的尿IL-1β、IL-18和IL-33水平均高于同时间点的ICU control组和Sepsis not AKI组患者（均P＜0.05），而ICU control组和Sepsis not AKI组患者同时间点的尿细胞因子水平差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论炎性体相关因子在脓毒症AKI患者中是上调表达的，炎性体的活化可能在脓毒症AKI的形成中起了重要作用。

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体信号通路观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠诱导的大鼠中性粒细胞炎性信号表达的影响,以期探明其抗炎的药效作用机制。方法健康雄性SD大鼠30只,按体质量分为5组,每组6只,GD高、中、低剂量组(4,8,16 g/kg)、秋水仙碱阳性对照组(3×10-4g/kg)均灌胃给药,正常组给予等容积的蒸馏水,每天1次,连续给药7 d。最后1次灌胃1 h后,所有大鼠乙醚麻醉,取血清备用。SD雄性大鼠20只,参照文献方法提取分离大鼠中性粒细胞,接种培养。细胞试验分为2个实验组(不加受体抑制剂,加NALP3受体抑制剂),每个实验组均含6个组,正常对照组加入正常大鼠血清,模型对照组,高、中、低剂量组,秋水仙碱组全部滴加200 mg/L的尿酸钠混悬液造模,同时滴加含药血清,置于CO2细胞培养箱中,孵育12 h取出。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(NF-κB)活性;蛋白印迹法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-12(caspase-12)信号衔接蛋白表达水平;反转录聚合酶链反应(RTPCR)观测NLRP3炎性体m RNA的表达。结果细胞造模12 h后,与正常组比较,模型组大鼠中性粒细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-KB、ASC(除了加NALP3受体抑制剂组)、NALP3 m RNA表达水平明显升高(P<0.05),Caspase-12表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,给药各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NALP3 m RNA及GD中、高剂量组NF-κB、ASC表达均明显降低(P<0.05),GD高、中剂量组caspase-12表达明显升高(P<0.05),而秋水仙碱组caspase-12表达无明显变化(P>0.05)。结论 GD抗炎作用机制可能与降低中性粒细胞NLRP3、ASC表达,抑制IL-1β分化成熟及NF-KB活化,降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。与秋水仙碱不同的是,GD能够增加caspase-12表达,负反馈抑制NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达,提示GD治疗痛风性关节炎新的抗炎机制。在加入NALP3受体抑制剂下,GD仍然能够降低模型大鼠中性粒细胞中TNF-α、NF-κB表达,提示GD可以通过另外信号通路发挥抗炎作用。

基于NLRP3炎性体信号通路研究桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响

目的:基于NLRP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins 3 inflammasome)信号通路观察桂枝芍药知母汤(GD)对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期探明其抗炎作用机制。方法:大鼠30只按体质量随机分为5组各6只,GD高、中、低剂量组(4、8、16 g·kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(3×10-4g·kg-1)均灌胃给药,正常组给予等容积蒸馏水,每天1次,连续给药7 d,最后1次灌胃1 h后所有大鼠乙醚麻醉取血清备用。SD雄性大鼠20只,参照文献方法提取分离大鼠巨噬细胞接种培养12 h。细胞试验分为2个实验组(不加受体抑制剂,加NALP3受体抑制剂),每个实验组均含6个组,正常对照组加入正常大鼠血清,模型对照组、高、中、低剂量组、秋水仙碱组全部滴加200μg·L-1的尿酸钠混悬液造模,同时滴加含药血清置于CO2细胞培养箱中孵育2 h取出。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定炎性因子白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-a,TNF-α)的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-KB(nuclear factor-kappa B,NF-KB)活性;Western免疫印迹(Western Blot)检测凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱天冬酶-12(Csapase-12)信号衔接蛋白表达水平;逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RTPCR)观测NLRP3炎性体mRNA的表达。结果:细胞造模12 h后与正常组比较,实验模型组大鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、NFKB、ASC、NALP3 mRNA表达水平明显升高,Csapase-12表达水平明显降低;与模型组比较,给药各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NALP3mRNA及GD中、高剂量组NF-KB、ASC表达均明显降低,GD高剂量组Csapase-12表达明显升高,而秋水仙碱组Csapase-12表达无明显增加。结论:GD抗炎作用机制可能与降低巨噬细胞NLRP3、ASC表达、抑制IL-1β分化成熟及NF-KB活化、降低NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达有关。与秋水仙碱不同的是,GD能够增加Capase-12表达,负反馈抑制NLRP3炎性体信号通路炎性因子表达,提示GD治疗GA新的抗炎机制。在加入NALP3受体抑制剂下,GD仍能降低模型大鼠巨噬细胞中TNF-α、NF-KB表达,提示GD可以通过另外信号通路发挥抗炎作用。

SREBP1在阿托伐他汀抑制NLRP1炎性体表达中的作用

目的:探讨固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)在阿托伐他汀抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体表达中的作用。方法:160 nmol/L佛波酯孵育THP-1细胞12 h,使其分化为巨噬细胞,更换无血清培养基,加入脂多糖和(或)阿托伐他汀进行处理。Real-time PCR检测细胞中NLRP1、SREBP1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中NLRP1、SREBP1蛋白的表达;检测SREBP1 siRNA预处理细胞后对阿托伐他汀抑制NLRP1表达的影响。结果:阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞NLRP1和SREBP1的mRNA和蛋白的表达;单独使用SREBP1 siRNA处理细胞可有效抑制NLRP1的表达,且与单独使用阿托伐他汀无明显差异;同时使用SREBP1 siRNA和阿托伐他汀处理细胞比单独使用一种对NLRP1的抑制作用更为显著。结论:阿托伐他汀可能通过SREBP1途径抑制NLRP1的表达,进而发挥抗炎效应。

人参皂苷对NLRP3炎性体激活的抑制作用

为筛选可抑制NLRP3炎性体激活的人参皂苷,在用ATP、尼日利亚菌素(nigericin)和二氧化硅(silica)等NLRP3炎性体诱导剂诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)中分别用17种人参皂苷(PPT,PPD,Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Re,Rg1,Rg2,Gg3,Rh1,Rh2,Ro,Rh2,Ro,c K,F1,F2)进行处理,通过对IL-1β的分泌量进行分析,明确具有抗炎作用的人参皂苷单体。在ATP诱导组中,IL-1β的分泌量在人参皂苷PPT、PPD和F1处理后下降最为明显(P<0.001);而在尼日利亚菌素诱导组中,除了PPT、PPD及F1外,Rg3对IL-1β的分泌也具有较高的抑制效果;在二氧化硅诱导组中,可抑制IL-1β的分泌的皂苷种类较多,包括PPT、PPD、Rd、Rg3、Rb3、Rb2、F2、Re、F1和Rh2(P<0.001)。本研究结果表明,PPT、PPD和F1对3种不同炎性体诱导剂引起的NLRP3炎性体激活均具有较强抑制作用(P<0.001)。

粪肠球菌LTA通过促进ROS的高表达活化NLRP3炎性体

目的:检测粪肠球菌脂磷壁酸LTA能否通过激活活性氧而活化NLRP3炎性体。方法:粪肠球菌LTA作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7,运用Western blot、ELISA及Real-time qPCR法检测NLRP3炎性体蛋白及mRNA的表达。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶氧化酶抑制剂DPI抑制活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生,荧光染色及流式细胞仪检测ROS的表达。结果:LTA作用于RAW264.7细胞24小时后,NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA的表达量均明显高于阴性对照组(P<0.05)。DPI可有效抑制ROS的产生,ROS表达被抑制后,NLRP3炎性体蛋白及mRNA的表达亦明显降低。结论:LTA是粪肠球菌活化NLRP3炎性体的毒力因子,主要借助于ROS的产生。

急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-1β水平的研究

目的:检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及血清白介素-1β(IL-1β)水平的变化,探讨该炎性体及IL-1β在AGA发病中可能的作用机制。方法:用RT-PCR法检测100名健康查体者(对照组)和100例AGA患者(观察组)治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14天(D14)NLRP3炎性体mRNA表达水平,同时用ELISA法测定相应IL-1β水平。比较两组患者生理指标和血生化指标的差异。结果:观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组caspase-1 mRNA表达水平,D0和D3与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。观察组血清IL-1β水平在D0、D3、D7与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:NLRP3炎性体及IL-1β在AGA患者治疗过程中水平异常,提示其在AGA发病中参与了炎症反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。

NALP3炎性体活化对脓毒症发病过程中HMGB1释放的调节作用

失控性全身炎性反应和免疫功能障碍是脓毒症发生的主要病理生理过程。HMGB1是脓毒症致死效应的最重要的晚期炎性递质,HMGB1由病原体或早期炎性反应分子活化免疫细胞释放,在脓毒症的发生、发展过程中它不仅发挥促炎效应,而且还与细胞免疫功能障碍密切相关。脓毒症和内毒素血症中HMGB1的分泌和释放继发于NALP3炎性体的活化。越来越多的证据表明,炎性体(尤其是NALP3炎性体)对单核/巨噬细胞释放HMGB1起着重要的调节作用。在炎性反应过程中,免疫细胞主动释放HMGB1的过程主要以一种炎性反应小体参与的、依赖caspase活化的方式进行。通过调节NALP3炎性体活化,抑制HMGB1释放,调节免疫功能紊乱状态,为脓毒症等免疫紊乱相关疾病的治疗提供了新的策略。

X线辐照激活NLRP3炎性体引起损伤肺组织细胞焦亡(pyroptosis)

目的建立放射性肺损伤模型,研究胱天蛋白酶1(caspase-1)依赖的程序性细胞死亡即细胞焦亡(pyroptosis)在放射性肺炎发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠胸腔15 Gy X线辐照5 d,处死小鼠。HE染色观察肺组织形态变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测辐照后肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织γ组蛋白2AX(γ-H2AX)、抗原KI-67(ki67)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC/TMS-1)的表达情况,实时荧光定量PCR检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的m RNA水平,采用免疫组织化学染色检测肺组织NLRP3、caspase-1和TMS1的表达情况,使用caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1活性;ELISA检测血清IL-1β和IL-18水平。结果辐照后小鼠肺泡壁毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;肺组织细胞TUNEL染色阳性指数升高,γ-H2AX和ki67的表达增强,提示细胞DNA遭到破坏且细胞增殖活性降低;肺组织细胞中IL-6、IL-8、TNF-α和MCP-1 m RNA水平增加;血清IL-1β和IL-18水平增加,肺组织NLRP3、caspase-1、ASC/TMS-1表达水平增加,caspase-1活性增强。结论辐照后,激活小鼠肺组织NLRP3炎性体诱导肺组织的细胞发生pyroptosis。