麦冬多糖对烟曲霉菌性角膜炎小鼠炎症反应的影响

目的探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制。方法通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10)。低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼。激动剂组小鼠用50μL浓度为20 g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃。对照组和模型组小鼠分别用50μL生理盐水滴眼。各组小鼠均给药1周。治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分。采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65的mRNA水平;采用Western blot分析角膜TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达。结果与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P<0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P<0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P<0.05)。与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P<0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P<0.05)。与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P<0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P<0.05)。结论OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤。

百里醌对烟曲霉菌角膜炎的抗炎作用及其机制

目的 探讨百里醌(TQ)在体内、体外真菌性角膜炎模型中的抗炎作用及其机制。方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和小鼠体内Draize试验筛选出TQ的安全抗炎浓度。建立小鼠真菌性角膜炎模型,给予小鼠角膜3.75 mg/L TQ(TQ组)或体积分数0.001二甲基亚砜(DMSO组)结膜下注射。显微镜下观察两组小鼠角膜炎症情况并进行临床炎症评分;采用苏木精-伊红(HE)染色法和髓过氧化物酶(MPO)实验观察TQ对小鼠角膜中性粒细胞募集的影响;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测各组人角膜上皮细胞(HCECs)环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)蛋白和mRNA的表达水平。结果 当TQ浓度低于3.75 mg/L时,HCECs存活率≥95%,健康小鼠角膜未见荧光素钠染色,HCECs和小鼠角膜均不受TQ影响。与DMSO组相比,TQ组小鼠角膜炎症减轻,临床评分降低(F3 d=2.01,P<0.01;F5 d=3.00,P<0.01),中性粒细胞的募集和活性降低(t=6.55,P<0.001)。PCR和ELISA检测结果显示,与DMSO组相比较,TQ组HCECs中COX-2、IL-1β及IL-6 mRNA和蛋白的表达均明显降低(t=6.12~15.06,P<0.001)。结论 TQ可以通过减少中性粒细胞的聚集、降低炎症因子的表达,在真菌性角膜炎中发挥抗炎作用。

白及多糖在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的研究白及多糖(BSP)在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎机制,探讨BSP对真菌性角膜炎的治疗作用。方法建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,使用BSP水溶液局部滴眼处理,裂隙灯下观察感染后第1、3、5天小鼠角膜的炎症程度,反转录-聚合酶链反应法检测小鼠角膜中炎症因子和模式识别受体Dectin-1的mRNA水平,酶联免疫吸附试验和蛋白免疫印迹法检测炎症因子和Dectin-1蛋白的表达。结果BSP处理的小鼠角膜炎症评分在感染后第3、5天明显低于对照组(F=6.64、11.58,P<0.05)。16 g/L的BSP水溶液可以降低小鼠角膜中炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α以及模式识别受体Dectin-1的mRNA和蛋白表达水平,差异均具有统计学意义(F=2.21~97.39,P<0.05)。结论BSP通过下调炎症因子水平和抑制模式识别受体Dectin-1的表达在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中发挥抗炎作用。

血小板细胞膜仿生纳米系统在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的:构建一种血小板细胞膜包覆聚乳酸–羟基乙酸聚合物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)的仿生纳米系统(PLTm@PLGA),评估其在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用。方法:制备并表征PLTm@PLGA。通过CCK-8、溶血试验检测生物安全性。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测烟曲霉菌刺激RAW264.7细胞后炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,观察治疗效果并进行炎症评分。结果:PLTm@PLGA呈球形,表现为典型的“壳–核”结构,其粒径为234.3 ± 8.9 nm。PLGA、PLTm@PLGA无明显细胞毒性,血液相容性好。PLTm@PLGA显著抑制RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达。PLTm@PLGA处理组临床炎症评分显著下降。结论:PLTm@PLGA具有良好生物相容性,抑制促炎细胞因子表达,减轻了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。

刺芒柄花素在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中保护作用的研究

刺芒柄花素(Formononetin, FMN),又称芒柄花素、芒柄花黄素,是一种异黄酮类中药单体,主要存在于黄芪、红车轴草、葛根等豆科植物中。最近的大量研究表明,刺芒柄花素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗菌、抗肿瘤和雌激素样作用等,药用价值高。然而,刺芒柄花素在真菌性角膜炎中的作用尚未被报道。本文旨在研究刺芒柄花素在烟曲霉菌性角膜炎中的保护作用。方法:在体外使用CCK-8试剂盒检测刺芒柄花素的毒性作用。用灭活的烟曲霉菌菌丝预先刺激RAW264.7细胞1小时,随后将刺芒柄花素溶液或DMSO溶液加入共培养7小时,通过PCR检测RAW264.7细胞炎症因子的mRNA表达水平。为了进一步明确刺芒柄花素在体内对角膜炎的治疗作用及炎症因子水平的影响,我们将烟曲霉菌孢子通过角膜基质内注射建立小鼠烟曲霉菌角膜炎模型,并使用刺芒柄花素溶液或DMSO溶液局部点眼治疗,通过PCR实验检测炎症因子的表达水平。结果:刺芒柄花素对RAW264.7细胞的存活能力影响小。与DMSO处理组相比,刺芒柄花素处理可以降低灭活菌丝刺激导致的细胞中炎症因子的表达升高。此外,在体内实验中,刺芒柄花素可以减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减低感染角膜中炎症因子的表达。结论:刺芒柄花素可以降低小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症因子表达水平起到抗炎保护作用。

烟曲霉菌免疫磁珠富集方法建立研究

目的:建立免疫磁珠富集烟曲霉菌的实施方案。方法:通过对免疫磁珠加入量、免疫磁珠和烟曲霉菌液孵育时间的探究,制定了免疫磁珠富集烟曲霉菌的最佳实施办法,同时对此富集技术方法学进行敏感性、特异性的验证。结果:当免疫磁珠加入量为100μL、免疫磁珠与烟曲霉菌液孵育时间30min,免疫磁珠富集烟曲霉菌的效果最好,与常规检测方法比较,提高了检测敏感性,同时具有强的特异性。结论:经探究建立了免疫磁珠富集烟曲霉菌的最佳实验方案。

烟曲霉菌性脊柱炎一例

患者男,43岁,因“腰痛伴腰部活动受限6月”入院。患者于6个月前无明显诱因出现腰背部疼痛,伴腰部活动受限,并逐渐加重。无双下肢放射痛及麻木、无力,无低热、盗汗、消瘦等,考虑“腰椎间盘突出症”。予以药物治疗后,疼痛症状缓解不明显,3个月前上述症状明显加重,遂就诊。查体:腰椎前屈、后伸活动明显受限,拾物试验(+),其余查体无异常。实验室检查:降钙素原和红细胞沉降率增高;白细胞计数和C反应蛋白水平正常;G试验、RBPT试验和SAT试验均阴性。

抗烟曲霉菌单克隆抗体鉴定和初步应用

目的 :制备抗烟曲霉菌单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测烟曲霉菌抗原方法。方法 :用基因重组烟曲霉菌半乳糖甘蛋白 (AFMP1)抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体 ,选择针对不同抗原决定簇单抗配对 ,建立双抗夹心ELISA法检测烟曲霉菌抗原。结果 :筛选出 3株稳定分泌抗烟曲霉菌单抗杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定分别为IgG1、IgG2a、IgG2b ,抗体亲和常数分别为 1 2× 10 10 、4 5 6× 10 9和 1 81× 10 10 mol/L ,免疫印迹证实单抗特异性识别烟曲霉菌培养上清和细胞裂解产物 ,相加试验表明 3株单抗是针对不同抗原决定簇 ,组成配对双抗夹心ELISA法 ,检测最高灵敏度为 0 1ng/ml,可测范围为 0 1～ 6 0ng/ml。结论 :3株杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高 ,组成配对夹心ELISA法可用于快速检测烟曲霉菌抗原。

补中益气汤合用两性霉素B治疗肺部烟曲霉菌感染1例

1病例资料 患者王某,男性,85岁,住院号：271767。以＂反复咳嗽咳痰10余年,复发伴胸闷气短2 d＂于2012年3月19日入院。入院症见：咳嗽、咯白色泡沫痰、胸闷、气促、口唇紫绀、小便量少、大便稀溏、舌淡胖苔白腻,脉细弱。既往高血压病史10余年。查体：肺气肿体征、双肺呼吸音粗、可闻及湿啰音,心界向左下扩大、心律不齐。查血常规：WBC 17.26×109/L,N 92.9%,RBC 2.83×1012/L,HGB 82 g/L。生化全套示：Crea 131μmol/L,BUN16.5 mmol/L,TP 49 g/L,ALB 20 g/L;CPR 144 mg/L。

烟曲霉菌孢子对哮喘大鼠气道炎症和气道反应性的影响

目的研究大鼠哮喘模型接触烟曲霉菌孢子后的气道炎症和气道反应性的改变。方法70只健康雄性Wistar大鼠随机分为Ⅰ和Ⅱ两大组(每组35只),每组下分为空白对照组(5只)、哮喘组(10只)、孢子滴鼻对照组(10只)和孢子滴鼻哮喘组(10只)。以卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立大鼠哮喘模型,分别在OVA激发前(Ⅰ组)或激发后(Ⅱ组)予烟曲霉菌孢子滴鼻。通过BCA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中总蛋白浓度以观察支气管上皮损伤情况,并进行BALF细胞计数和分类。通过测定跨肺压和气体流速来计算大鼠气道阻力和予以不同浓度乙酰胆碱(Ach)刺激后的气道反应性变化。结果在Ⅰ组中,激发前孢子滴鼻哮喘组(CA组)BALF上清中总蛋白浓度较未用孢子滴鼻的哮喘组(A1组)明显增多[(1.125±0.254)μg/mL比(0.825±0.173)μg/mL,P<0.01],且CA组大鼠在给予10μg/kg和100μg/kg Ach后的气道阻力[(0.997±0.196)cm H2O.mL-1.s-1,(1.123±0.142)cm H2O.mL-1.s-1]均较A1组[(0.655±0.089)cm H2O.mL-1.s-1,(0.687±0.048)cm H2O.mL-1.s-1]显著升高(P均<0.05)。但在Ⅱ组中,激发后孢子滴鼻哮喘组(AC组)BALF上清中总蛋白浓度,基础气道阻力和给予Ach后气道阻力与哮喘组(A2组)比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。CA组BALF细胞总数和细胞分类与A1组间差异无统计学意义,但AC组BALF中性粒细胞较A2组明显升高[(2.488±0.420)×106比(0.936±0.459)×106,P<0.05]。结论哮喘大鼠在雾化激发前接触烟曲霉菌孢子,能加重其支气管上皮损伤和增加气道反应性。

烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活

目的研究天然免疫NOD1信号通路在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中是否得以激活。方法小鼠分为正常对照组和感染组,感染组小鼠经鼻滴入烟曲霉菌孢子24 h、48 h、72 h后分别处死,碾碎肺组织平板培养以检测其肺组织烟曲霉菌负荷,观察肺组织病理学改变,RT-PCR检测NOD1及RIP2 mRNA表达量、Western Blot检测胞核NF-κBp65和胞浆TNF-α在小鼠肺组织中的含量。结果①感染组小鼠肺组织48 h时Af负荷达最高且可见严重的充血和出血,有大量的炎症细胞浸润,72 h时Af负荷迅速下降且未见菌丝形成,仅见轻微的充血、出血和炎症反应;正常组烟曲霉菌培养阴性且肺组织结构正常;②RT-PCR及Western Blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点NOD1 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κBp65和TNF-α的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),前三者均在48 h表达最高,TNF-α在72 h表达最高(P<0.05)。结论NOD1信号通路在烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中得以活化,其介导的天然免疫对抗烟曲霉菌感染和保护小鼠肺组织起了一定的作用。

烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制。方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h)。同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞。应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达。结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P<0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性。PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用。HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加。结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展。

肉桂醛对烟曲霉菌体外生物膜的影响

目的探讨肉桂醛对烟曲霉菌生物膜(BF)的体外作用。方法体外建立烟曲霉菌BF;采用2倍稀释法测定肉桂醛的最低抑菌浓度(MIC);结晶紫法评价不同浓度的肉桂醛对烟曲霉菌BF的影响;扫描电镜观察BF的形态学变化。结果烟曲霉菌可在体外形成生物膜;肉桂醛对受试烟曲霉菌的MIC为256μg/mL;在1 MIC、1/2 MIC、1/4 MIC时,生物膜量分别为0.81±0.11、1.13±0.18和1.59±0.11,与阳性对照组(2.18±0.15)相比,差异有统计学意义(P<0.05);电镜下可见肉桂醛作用后生物膜结构变稀疏松散。结论肉桂醛对烟曲霉菌具有抗菌活性,亚抑菌浓度的肉桂醛对生物膜具有一定的破坏作用,其中浓度越高作用越强。

烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化

目的从烟曲霉菌培养上清液中分离纯化具有抗真菌活性的肽类物质 (FIP)。方法用离子交换柱层析法分离 ,用反相高效液相色谱法进一步纯化 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确定相对分子质量。结果从烟曲霉菌培养上清液中分离出一种具有抗真菌活性的FIP。纯化后得到高活性的精制FIP ,其相对分子质量约为 8kD ,MTT法测定结果表明 ,FIP对 5种真菌均具有明显的抗真菌效应。结论烟曲霉菌培养上清液中含有抗真菌活性的肽类物质。

下呼吸道烟曲霉菌分离株耐药性及基因型观察

目的探讨下呼吸道烟曲霉菌烟曲霉菌耐药性和基因同源性。方法从31例下呼吸道烟曲霉菌感染患者的痰液或肺泡灌洗液中分离烟曲霉菌,采用CLSI M38-A2微量液基稀释法测定其对伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净的敏感性;采用随机扩增DNA多态性(RAPD)基因分型技术获得受试菌株的RAPD指纹图并进行同源性聚类分析。结果 31株受试烟曲霉对伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、卡泊芬净、米卡芬净的耐药率分别为3.2%、12.9%、25.8%、0、0;31株烟曲霉共分为10种基因型(A^J),其中B型10株,为主要流行型别;其余分别为A型5株,E型3株,F型4株,C、H、I型各2株,D、G、J型各1株。结论下呼吸道烟曲霉菌感染患者烟曲霉菌基因型以B型为主,伏立康唑、卡泊芬净、米卡芬净对烟曲霉菌的抑菌效果较好。

肉鸭烟曲霉菌的分离与鉴定

烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus）系子囊菌纲（Asycetes）曲霉属的真菌,在潮湿环境中普遍存在,是禽类曲霉菌病最常见的病原,该菌1863年首次发现于鸨的肺脏,在曲霉菌属中致病性较高,对养禽业危害严重[1～3]。

烟曲霉菌感染激活小鼠肺组织TLR3信号通路的研究

目的 TLR3介导的天然免疫通路是抗感染重要的天然免疫机制,本文研究鼻感染烟曲霉菌是否能激活小鼠肺组织TLR3天然免疫信号通路。方法小鼠分正常组和感染组,感染组经鼻感染烟曲霉菌孢子,正常组经鼻滴入等量的生理盐水,8 h、24 h和48 h后处死小鼠,分离肺组织,取100 mg肺组织RT-PCR检测TLR3、TRIF及IFN-βmRNA水平、Western blot检测胞核IRF3的含量。取24 h、48 h和72 h小鼠肺组织制作病理切片,100 mg肺组织碾碎接种蔡氏培养基平板以检测肺组织烟曲霉菌载荷。结果感染组小鼠肺组织烟曲霉菌负荷72 h时显著下降,正常组烟曲霉菌培养阴性;正常组小鼠肺组织结构正常,感染组小鼠24 h时肺组织可见严重的炎症反应及出血,72 h时肺组织炎症反应减轻;RT-PCR及Western blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点TLR3 mRNA、TRIF mRNA、IRF3和IFN-βmRNA的表达量均显著高于正常对照组(P<0.05),均在24 h达到最高峰(P<0.05)。结论烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中TLR3信号通路得以激活,其介导的天然免疫对感染烟曲霉菌的清除和保护小鼠肺组织起了一定的作用。

继发呼吸道烟曲霉菌感染的中毒性表皮坏死松解型药疹1例

大疱性表皮坏死松解型药疹属于重症药疹,死亡率为25%~40%,其致病药物以解热镇痛药、抗癫痫药、磺胺药及抗生素多见。临床上大疱性表皮坏死松解型药疹皮疹发展迅速,在数日内累及全身,引起弥漫性紫红色斑、水疱、大疱,皮肤糜烂渗出,伴有多处黏膜受损,常合并发热及内脏损害。对于本病的治疗,目前普遍认为及早给予足量糖皮质激素是治疗的关键,同时应加强支持治疗,纠正水电解质平衡,适当使用抗生素防治感染及加强皮肤、黏膜护理。本病的主要死因是感染及多脏器衰竭。

四君子汤对烟曲霉菌毒性代谢产物的抑制作用

目的探讨中药方剂四君子汤对烟曲霉菌合成毒性代谢产物的抑制作用。方法不同剂量四君子汤处理的5×106烟曲霉菌孢子用DMEM液培养48 h,收集不同组的培养液滤液,计算其不同组培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率;比较抑制50%细胞生长的不同组培养液滤液的稀释度;观察100μl 0.3%H2O2在沙氏固体培养板上对一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子的抑菌圈大小。结果四君子汤处理的烟曲霉菌孢子培养液滤液作用的HeLa细胞和红细胞生存率显著高于无药物处理组(P<0.05),抑制50%细胞的药物组孢子培养液滤液的稀释度低于无药物组,结果均呈现剂量-效应关系;100μl 0.3%H2O2在沙氏固体培养板上作用一定剂量四君子汤处理的烟曲霉菌孢子所产生抑菌圈直径显著大于无药物处理组(P<0.05),结果呈现剂量-效应关系。结论中药方剂四君子汤可以抑制烟曲霉菌培养时毒性代谢产物的产生,治疗烟曲霉菌所致的肺部感染具有潜在的应用价值。

烟曲霉菌致脑肺多发性脓肿1例报告

报道1例有长期饮酒史,肝肾功能严重损害,在应用泰能在内的广谱抗生素和激素后并发烟曲霉菌感染性脑、肺脓肿的病人。经二性霉素B药物治疗和脑、肺脓肿及时手术引流治疗,感染控制,肝肾功能恢复正常。