麦冬多糖对烟曲霉菌性角膜炎小鼠炎症反应的影响

目的探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制。方法通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10)。低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼。激动剂组小鼠用50μL浓度为20 g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃。对照组和模型组小鼠分别用50μL生理盐水滴眼。各组小鼠均给药1周。治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分。采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65的mRNA水平;采用Western blot分析角膜TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达。结果与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P<0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P<0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P<0.05)。与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P<0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P<0.05)。与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P<0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P<0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P<0.05)。结论OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤。

血小板细胞膜仿生纳米系统在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

目的:构建一种血小板细胞膜包覆聚乳酸–羟基乙酸聚合物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)的仿生纳米系统(PLTm@PLGA),评估其在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用。方法:制备并表征PLTm@PLGA。通过CCK-8、溶血试验检测生物安全性。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测烟曲霉菌刺激RAW264.7细胞后炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,观察治疗效果并进行炎症评分。结果:PLTm@PLGA呈球形,表现为典型的“壳–核”结构,其粒径为234.3 ± 8.9 nm。PLGA、PLTm@PLGA无明显细胞毒性,血液相容性好。PLTm@PLGA显著抑制RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达。PLTm@PLGA处理组临床炎症评分显著下降。结论:PLTm@PLGA具有良好生物相容性,抑制促炎细胞因子表达,减轻了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。

刺芒柄花素在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中保护作用的研究

刺芒柄花素(Formononetin, FMN),又称芒柄花素、芒柄花黄素,是一种异黄酮类中药单体,主要存在于黄芪、红车轴草、葛根等豆科植物中。最近的大量研究表明,刺芒柄花素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗菌、抗肿瘤和雌激素样作用等,药用价值高。然而,刺芒柄花素在真菌性角膜炎中的作用尚未被报道。本文旨在研究刺芒柄花素在烟曲霉菌性角膜炎中的保护作用。方法:在体外使用CCK-8试剂盒检测刺芒柄花素的毒性作用。用灭活的烟曲霉菌菌丝预先刺激RAW264.7细胞1小时,随后将刺芒柄花素溶液或DMSO溶液加入共培养7小时,通过PCR检测RAW264.7细胞炎症因子的mRNA表达水平。为了进一步明确刺芒柄花素在体内对角膜炎的治疗作用及炎症因子水平的影响,我们将烟曲霉菌孢子通过角膜基质内注射建立小鼠烟曲霉菌角膜炎模型,并使用刺芒柄花素溶液或DMSO溶液局部点眼治疗,通过PCR实验检测炎症因子的表达水平。结果:刺芒柄花素对RAW264.7细胞的存活能力影响小。与DMSO处理组相比,刺芒柄花素处理可以降低灭活菌丝刺激导致的细胞中炎症因子的表达升高。此外,在体内实验中,刺芒柄花素可以减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减低感染角膜中炎症因子的表达。结论:刺芒柄花素可以降低小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症因子表达水平起到抗炎保护作用。

多西环素对大鼠烟曲霉菌性角膜炎中炎症细胞及MCP-1的抑制作用

目的:研究多西环素对烟曲霉菌性角膜炎中炎症细胞及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 :取健康SD大鼠64只,随机分为对照组和多西环素组,每组32只。两组均建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,多西环素组给予0.3g/L多西环素眼液点眼,对照组给予眼液溶媒点眼。分别于第3、第5、第7、第10天观察角膜炎症指数,分别采用荧光定量PCR(qPCR)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MCP-1基因和蛋白的表达水平。结果:多西环素组第3、第5、第7天的炎症指数均低于对照组(P<0.05),各时间点炎症细胞计数均明显少于对照组(P<0.05);与对照组比较,多西环素组第3、第5、第7天MCP-1表达量减少(P<0.05)。结论:多西环素作用于大鼠烟曲霉菌性角膜炎可减少炎症细胞的浸润,并抑制炎症因子MCP-1的表达。

黄芩素在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

黄芩素(Baicalein, BE)是从双子叶唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis)的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类天然小分子化合物。研究发现黄芩素在感染性疾病中具有抗真菌,抗炎,抗氧化,调节机体免疫功能等作用。但在真菌性角膜炎中尚未有研究,本文就黄芩素在烟曲霉菌性小鼠角膜炎模型中的作用进行研究。方法:体外实验用烟曲霉菌感染HCECs后,再用黄芩素处理,PCR和ELISA评估IL-1β,TNF-α,IL-6的mRNA及蛋白的表达。体内实验用烟曲霉菌菌丝感染C57BL/6小鼠角膜制造烟曲霉菌角膜炎模型,再用黄芩素或DMSO处理,PCR和ELISA评估IL-1β,TNF-α,IL-6的mRNA及蛋白的表达。结果:黄芩素通过降低IL-1β,TNF-α,IL-6mRNA及蛋白减轻角膜炎的炎症反应。结论:黄芩素通过抑制促炎因子表达减轻小鼠角膜炎炎症反应。

木犀草素通过TLR4/MyD88信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎的调控作用

目的:探讨木犀草素通过Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化因子88 (MyD88)信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎(AFK)的调控作用,阐明其抑制AFK炎症反应的机制。方法:100只SD大鼠随机选取15只作为假手术组[未注入烟曲霉菌(AF)孢子混悬液],其余85只大鼠采用AF孢子混悬液注入法建立AFK模型。建模成功的72只大鼠随机分为模型组14只、低剂量木犀草素组14只、中剂量木犀草素组14只、高剂量木犀草素组15只和脂多糖(LPS)+木犀草素组15只。低、中和高剂量木犀草素组大鼠给予浓度为5、10和20 g·L~(-1)木犀草素溶液局部滴眼50μL,假手术组和模型组大鼠给予等量1%DMSO溶液局部滴眼,LPS+木犀草素组大鼠给予20 g·L~(-1)木犀草素溶液50μL和LPS溶液1.0μg局部滴眼,连续7 d。观察各组大鼠角膜大体变化并评估各组大鼠角膜炎症指数;制备各组大鼠角膜组织标本,采用HE染色法观察角膜组织病理形态表现;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠角膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素12(IL-12)水平,采用Western blotting法检测各组大鼠角膜组织中TLR4、MyD88和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠角膜组织上皮完整,无炎性细胞浸润;模型组和LPS+木犀草素组大鼠角膜呈现白色致密溃疡灶,水肿且表面无光泽,虹膜不可见,LPS+木犀草素组溃疡灶面积更大;低、中和高剂量木犀草素组大鼠角膜溃疡灶面积逐渐变小,病变减轻。HE染色,模型组和LPS+木犀草素组大鼠角膜均可见胶原纤维肿胀、排列紊乱,大量炎性细胞浸润;低、中和高剂量木犀草素组上述变化均减轻,其中高剂量木犀草素组减轻最为明显。与模型组比较,低、中和高剂量木犀草素组大鼠角膜炎症指数和角膜组织中IL-1β、TNF-α、IL-12水平及TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.05);LPS+木犀草素组上述指标均高于模型组和低、中及高剂量木犀草素组(P<0.05)。结论:木犀草素对AFK大鼠具有治疗作用,可有效抑制角膜炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88信号通路相关蛋白表达及其下游炎症因子有关。

硫酸软骨素在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)是一种天然存在的糖胺聚糖,主要存在于软骨,皮肤,血管,韧带和肌腱中。目前研究发现CS具有抗炎、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种药理学活性。但是在真菌性角膜炎中尚未有研究,本文就CS在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中的治疗作用进行相关研究。方法:体外实验用烟曲霉菌感染巨噬细胞后,用CS处理,用PCR方法检测TLR-2、Dectin-1、LOX-1的mRNA的表达。体内实验用烟曲霉菌孢子感染C57BL/6小鼠角膜制造烟曲霉菌角膜炎模型,然后使用CS或PBS处理,用PCR方法检测TLR-2、Dectin-1、LOX-1的mRNA的表达。结果:CS降低了TLR-2、Dectin-1、LOX-1的mRNA表达,减轻了烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。结论:CS通过抑制模式识别受体的表达减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。

红细胞膜仿生纳米颗粒通过减轻炎症反应在真菌性角膜炎中发挥保护作用

目的:探究红细胞膜仿生纳米颗粒在真菌性角膜炎中的保护作用及机制。方法:首先通过角膜荧光素钠染色实验探究红细胞膜仿生纳米颗粒对小鼠角膜的毒性。在体内,用烟曲霉菌孢子感染C57BL/6小鼠角膜,构建烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,用PBS或者红细胞膜仿生纳米颗粒处理,用裂隙灯显微镜拍摄感染后1、3、5天角膜照片并进行临床评分,用RT-PCR检测感染后第3天角膜TNF-α、CCL-2的mRNA表达。在体外,用烟曲霉菌菌丝刺激HCECs后,用红细胞膜仿生纳米颗粒处理,通过RT-PCR检测HCECs中TNF-α、CCL-2的mRNA表达。结果:红细胞膜仿生纳米颗粒对小鼠角膜安全无毒,点眼后角膜未出现荧光素钠染色。较PBS对照组相比,红细胞膜仿生纳米颗粒组小鼠角膜溃疡程度显著减轻,炎症反应水平下降。红细胞膜仿生纳米颗粒降低TNF-α、CCL-2的mRNA表达。结论:红细胞膜仿生纳米颗粒通过减轻炎症反应在烟曲霉菌性角膜炎中发挥保护作用。