热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用

目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1-/-),分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株,应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量,应用流式细胞分析方法测定细胞周期;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值;采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率;采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量,比较各细胞株不同浓度H_(2)O_(2)处理后相对存活率,比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。结果基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因,Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白,HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比,H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.29,P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株培养24、48、72和96 h的细胞活力均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生型细胞株比较,H8和H9细胞株G1期细胞百分比显著升高,细胞周期抑制因子p53、p21的mRNA和蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),SA-β-gal染色阳性细胞比率显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.001);衰老相关炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、MCP1 mRNA相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(均P<0.001)。H8和H9细胞株ROS含量明显高于野生型细胞株,差异均有统计学意义(均P<0.001);H8和H9细胞株经NAC处理后p21蛋白相对表达量较未经NAC处理明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。H8和H9细胞株200、400、600、800μmol/L H 2O 2处理条件下细胞相对存活率明显低于野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论敲除HSF1可下调HSP的表达,激活ROS/P53/P21通路,诱导RPE细胞衰老,并增加RPE对氧化应激刺激的敏感性。HSF1在RPE细胞中可能具有抗衰老和抗氧化调控作用。

老年慢性心力衰竭患者嗜铬粒蛋白A和热休克转录因子1与心脏损伤的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(CHF)患者血清嗜铬粒蛋白A(CgA)和热休克转录因子1(HSF1)的水平变化与心肌重构及心肌损伤的关系。方法选择2019年1月至2022年5月太原市中心医院收治的老年CHF患者165例(疾病组),其中纽约心脏病协会心功能分级Ⅰ级28例,Ⅱ级29例,Ⅲ级65例和Ⅳ级43例。收集同期本院健康志愿者80例(对照组)。检测2组入院血清CgA和HSF1水平,心肌重构和心肌损伤指标,用Pearson分析血清CgA和HSF1与心肌重构及心肌损伤的相关性。随访1年,失访6例,根据是否发生主要不良心血管事件(MACE)分为MACE组51例和非MACE组108例。用单因素和多因素logistic回归分析,使用ROC曲线分析血清CgA和HSF1对MACE的预测价值。结果疾病组血清CgA、左心室质量指数(LVMI)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室后壁厚度(LVPWT)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)水平显著高于对照组,HSF1和左心室射血分数(LVEF)显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血清CgA与LVEF呈负相关,与LVMI、LVESV、LVPWT、cTnI、CK-MB和NT-proBNP呈正相关(P<0.01);血清HSF1与LVEF呈正相关,与LVMI、LVESV、LVPWT、cTnI、CK-MB和NT-proBNP呈负相关(P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,CgA、HSF1、LVEF、LVMI、LVESV、LVPWT和cTnI是老年CHF患者MACE发生的影响因素(P<0.05,P<0.01)。ROC曲线分析显示,血清CgA截断值为387.55μg/L,敏感性为74.51%,特异性为71.30%,曲线下面积为0.802(95%CI:0.751~0.855);血清HSF1截断值为2.34 ng/L,敏感性为74.51%,特异性为69.44%,曲线下面积为0.760(95%CI:0.707~0.812)。结论老年CHF患者血清CgA和HSF1水平与心肌重构及心肌损伤有密切关联,可作为预测MACE的有力工具。

妊娠期糖尿病171例血清热休克蛋白70、热休克转录因子1表达与妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病病人(GDM)血清热休克蛋白70(HSP70)、热休克转录因子1(HSF1)的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法选取2019年1月至2021年1月在首都医科大学大兴教学医院收治的171例GDM病人作为GDM组,根据GDM病人妊娠结局分为妊娠结局不良组(91例)和妊娠结局良好组(80例),另选取同期在该院产检的健康孕妇172例作为对照组,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清HSP70水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定血清HSF1 mRNA的相对表达量,比较两组实验室指标。采用Pearson法分析GDM病人血清HSP70、HSF1 mRNA水平与临床指标的相关性;使用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析HSP70、HSF1及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、胱抑素C对GDM病人发生不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,GDM组病人空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)及肌酐、尿酸、hs-CRP、胱抑素C、HSP70[(0.30±0.10)μg/L比(0.21±0.09)μg/L]、HSF1 mRNA水平(1.99±0.35比1.03±0.32)明显升高(均P<0.05);对照组发生不良妊娠结局有13例,发生率为7.56%,GDM组病人发生不良妊娠结局有91例,发生率为53.22%,GDM组病人发生不良妊娠结局发生率远高于对照组(P<0.05);与妊娠结局良好组比较,妊娠结局不良组病人血清HSP70[(0.33±0.14)μg/L比(0.27±0.05)μg/L]、HSF1 mRNA(2.22±0.30比1.73±0.41)明显升高(均P<0.05);GDM病人血清HSP70与HSF1 mRNA水平呈正相关(P<0.05),血清HSP70、HSF1 mRNA水平与空腹血糖、HbA1c、肌酐、尿酸、hs-CRP及胱抑素C均呈正相关(均P<0.05);ROC曲线分析结果表明,HSP70、HSF1、hs-CRP、胱抑素C预测GDM病人发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.62、0.69、0.60、0.58;血清HSP70联合HSF1 mRNA预测GDM病人发生不良妊娠结局的AUC为0.83,明显高于血清HSP70、HSF1 mRNA及hs-CRP、胱抑素C水平单独预测(均P<0.05)。结论GDM病人血清HSP70、HSF1呈高表达,且二者联合检测对妊娠结局具有较高的预测价值。

热休克转录因子2在高糖诱导的足细胞焦亡与损伤中的作用

目的探讨热休克转录因子2(HSF2)在糖尿病肾脏疾病(DKD)足细胞焦亡与损伤发生中的作用机制。方法将12只C57BL/6J雄性小鼠随机均分为对照组和DKD组,采用免疫组化(IHC)染色检测DKD组小鼠肾脏组织中HSF2的表达。体外培养永生化人足细胞,构建高糖诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高渗组(HO组)、高糖+过表达对照组(HG+OE-NC组)、高糖+HSF2过表达组(HG+OE-HSF2组)、低糖+敲低对照组(LG+si-NC组)、低糖+HSF2敲低组(LG+si-HSF2组)、空白对照组(con组)、敲低对照组(si-NC组)、HSF2敲低组(si-HSF2组)、HSF2敲低+ROS抑制剂组(si-HSF2+MT组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫荧光检测足细胞损伤相关蛋白zo-1、synaptopodin的表达水平;Western blot评估足细胞中HSF2蛋白、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和焦亡相关蛋白cleaved-Caspase-1、IL-1β蛋白的表达水平;线粒体超氧化物红色荧光探针试剂盒检测足细胞线粒体超氧化物(mtROS)水平。结果与对照组相比,DKD组小鼠肾组织中HSF2表达显著降低(P<0.05)。HG组足细胞NLRP3、Cleaved-Caspase-1、IL-1β相对表达水平均高于LG组、HO组和HG+OE-HSF2组,HSF2表达水平均低于LG组和HO组,synaptopodin、zo-1蛋白和mRNA相对表达水平均低于LG组和HG+OE-HSF2组(P<0.05)。与LG+si-NC组相比,LG+si-HSF2组足细胞synaptopodin、zo-1蛋白和mRNA相对表达水平均显著降低,NLRP3、IL-1β、Cleaved-Caspase-1相对表达水平均显著升高(P<0.05)。与LG组相比,HG组及LG+si-HSF2组足细胞mtROS均明显增加;与HG组相比,HG+OE-HSF2组足细胞mtROS明显减少;与con组相比,si-HSF2组和si-HSF2+MT组足细胞mtROS均明显增加(P<0.05)。结论HSF2通过调控ROS/NLRP3信号通路介导高糖诱导的足细胞焦亡与损伤。

热休克转录因子1对压力超负荷引起的心室重构和心力衰竭的影响

目的:探讨热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)对压力超负荷引起的心室重构和心力衰竭发生发展的影响及其机制。方法:将实验动物分成4组:HSF1基因敲除小鼠组(knockout组)、野生型小鼠组(wild-type组)、HSF1转基因小鼠组(transgene组)和假手术小鼠组(sham组),小鼠经缩窄升主动脉后,每周做心脏超声检测心脏功能和形态变化,分别于第1周、2周和4周末测量右侧颈动脉压后取材,用HE染色、Masson染色和Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色观察心脏形态变化和新生血管生成情况,用Western blotting检测磷酸化Akt和RT-PCR检测缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)mRNA的表达情况。结果:(1)在0-14 d,缩窄升主动脉的小鼠心室壁厚度值和新生血管数逐渐升高达高峰,14-28 d,逐渐降低,但同wild-type组比较,knockout组在每1个时期都显著降低,transgene组都显著升高;(2)knockout组小鼠左室射血分数第1周就开始下降,wild-type组小鼠从第2周开始下降,而transgene组未见到有下降;(3)磷酸化Akt和HIF-1mRNA在knockout组显著降低,transgene组显著升高;心脏纤维化和死亡率在knockout组显著升高,transgene组显著降低。结论:HSF1通过调控血管新生,改善了压力超负荷引起的心室重构和心力衰竭,其中调控HIF-1的表达可能起着重要作用。

衰老细胞中热休克转录因子1的异常调节和定位

为评估人热休克转录因子1(HSF1)在衰老细胞中呈现年龄依赖功能失调机制,通过凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)和RNA酶保护实验等了解低总体倍增水平(PDLs)的年轻和高PDLs的衰老IMR90双倍体人肺纤维母细胞的HSF1 DNA结合活性、HSF1蛋白质及其编码转录子mRNA水平和亚细胞分布.使用H2O2诱导年轻IMR90细胞成为“应激诱导早熟性老化(SIPS)”细胞,并与复制性衰老细胞比较HSF1 DNA结合活性、HSF1亚细胞分布和细胞内过氧化物含量.在不同年龄的IMR90细胞中,无论体内或体外,HSF1激活能力与细胞年龄呈反相关,但细胞内HSF1蛋白质与其mRNA水平并无改变.HSF1的亚细胞定位分析显示,HSF1主要存在于年轻细胞胞质中,热刺激促使三体形成和核转移;而在衰老细胞中,37℃时HSF1大部分存在于细胞核内,热刺激后形成三体,与DNA结合能力明显比年轻细胞弱;用H2O2诱导的应激成熟前老化细胞内,HSF1功能和亚细胞分布都与复制性衰老细胞相似.结果显示,细胞年龄与HSF1的激活和定位相关,而与HSF1含量无关,这些变化可能是通过氧化修饰所致.

热休克反应和热休克转录因子1对LPS诱导的TNF-α和IL-15表达的影响

【目的】观察热休克反应 (HSR)以及热休克转录因子 1(HSF1)对LPS诱导的TNF α和IL 15表达的影响。【方法】用 2 0 0ng/mlLPS处理热休克或未热休克的小鼠RAW 2 6 4 .7巨噬细胞 ,抽提细胞的总RNA进行RT PCR实验 ,观察TNF α和IL 15mRNA表达的情况 ;采用HSF1基因敲除小鼠经腹腔内注射LPS复制内毒素血症模型 ,抽提HSF1基因敲除小鼠 (HSF1-/ -)和野生型小鼠 (HSF1+ / + )肺组织的总RNA进行RT PCR实验 ,观察TNF α和IL 15mRNA表达的情况。用TESS分析IL 15的启动子 ,寻找热休克元件(Heatshockelement,HSE)。【结果】小鼠RAW 2 6 4 .7巨噬细胞受LPS刺激后 ,TNF α和IL 15mRNA的水平明显增加 ,而热休克抑制了LPS诱导的TNF α和IL 15mRNA的表达 ;腹腔注射LPS后 ,HSF1-/ -小鼠和HSF1+ / + 小鼠的肺组织中TNF α和IL 15mRNA的水平明显增加 ,HSF1-/ -小鼠的肺组织中TNF α和IL 15mRNA水平的增加明显高于HSF1+ / + 小鼠。经TESS软件分析发现IL 15的启动子区含有 2个HSE。【结论】HSR、HSF1抑制了LPS诱导的TNF α和IL 15的表达 ;HSF1可能通过与IL 15启动子区的HSE结合抑制LPS诱导的IL 15的表达。

热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控

目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。

小鼠热休克转录因子1真核表达载体的构建

背景:研究表明,热休克转录因子1具有热休克应答效应。目的:构建小鼠热休克转录因子1(heat shock transcription factor1,HSF1)真核表达载体。方法:克隆小鼠HSF1cDNA,将其插入载体pcDNA3.1,构建热休克转录因子1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1。结果与结论:构建的pcDNA3.1-HSF1重组体双酶切电泳后出现大小约5.5kb与1.5kb的2个片段,测序结果显示克隆的小鼠HSF1序列与Genbank中的一致,采用Westernblot法可检测到一条相对分子质量约72000的重组HSF1蛋白条带,说明成功构建小鼠HSF1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1。

肺癌中热休克转录因子2促进热休克蛋白的表达

目的探讨HSF2通过促进热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的表达对肺癌发生以及肿瘤细胞增殖的影响.方法选取肺癌旁组织,构建过表达HSF2真核载体(p IRES2-EGFP-HSF2),分别转染BEAS-2B、A549,检测其对细胞增殖及HSP表达的影响;转染p IRES2-EGFP-HSF2质粒的同时,共转染HSP27、HSP90的si RNA,检测其对细胞增殖的影响.结果过表达HSF2可增加BEAS-2B和A549细胞增殖速度(P<0.01),促进HSP27和HSP90的表达;转染HSP27、HSP90的si RNA均可减弱HSF2诱导的BEAS-2B和A549细胞增殖(P<0.01).结论 HSF2促进肺癌细胞增殖的作用可能主要是通过促进热休克蛋白的表达来实现.

热休克转录因子1在心肌及其他组织中的抗炎作用

人类的热休克转录因子1(HSF1)在多个器官组织中均有表达,参与调节热休克反应、诱导热休克蛋白的表达。它具有多种生物学功能,不仅能抗凋亡、保护缺血心肌细胞、抑制心肌纤维化、参与生长发育过程;而且还能对抗炎症反应,在心肌细胞炎症反应、肺部损伤和感染、内毒素血症、全身炎症反应综合征及其他炎症相关性疾病中发挥着举足轻重的作用。本文结合热休克反应和热休克蛋白,就HSF1在不同组织和病理过程中的抗炎作用、与各种炎性介质的关系及其相互作用的机制作一综述。

热休克转录因子2基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的:探讨热休克转录因子2(HSF2)基因多态性与噪声性听力损失的关系。方法:采用横断面流行病学研究方法对194例噪声暴露作业工人进行调查和听力测试,按听力学评价结果分为听力损失组(A组)和听力正常组(B组);用等位基因特异扩增法(ASA)检测其HSF2基因rs2243364位点和HSF2结合蛋白(HSF2BP)基因rs11908893位点的多态性。结果:HSF2基因rs2243364位点在2组均只存在TT一种基因型。HSF2BP基因rs11908893位点在A组TT、CC和CT基因型的频率分别为1.1%、0和98.9%,等位基因T和C的频率为50.5%和49.5%;在B组则分别为0、4.0%和96.0%,48.0%和52.0%。2个位点的基因型分布及其等位基因频率在2组间均差异无显著性意义,未发现2个位点中任一基因型的噪声性听力损失的危险度有升高。结论:HSF2基因多态性可能不是噪声性听力损失的遗传易感性因素。

虾夷扇贝热休克转录因子基因的克隆与转录表达研究

热休克转录因子能够调控真核细胞热休克蛋白的表达,在热休克反应中起重要作用。采用同源克隆和RACE方法得到了虾夷扇贝热休克转录因子1基因的cDNA全长序列。该序列长1944bp,其中5’和3’非编码区分别为54bp、318bp,编码区序列1572bp,包含一个编码523个氨基酸的开放阅读框。经序列比对及生物信息学分析发现,虾夷扇贝热休克转录因子1具有保守的DNA结合区域、HR-A/B和HR-C区域,与已知其他物种的热休克转录因子结构相似。该基因在虾夷扇贝6种组织中的实时荧光定量检测结果显示闭壳肌中mRNA相对表达量最高,血淋巴中表达量最低。

热休克转录因子1在卵巢高级别浆液性癌组织中的表达及意义

目的:探讨热休克转录因子1(heat-shock transcription factor 1,HSF1)在卵巢高级别浆液性癌组织中的表达以及与临床病理特征的相关性。方法:应用免疫组织化学方法检测79例卵巢高级别浆液性癌、17例卵巢交界性浆液性肿瘤、14例正常卵巢组织中HSF1的表达差异。分析卵巢高级别浆液性癌组织中HSF1表达情况与患者年龄、临床分期、淋巴结转移、ER、PR、p53、Ki-67的相关性。结果:HSF1在卵巢高级别浆液性癌组织中的阳性率82. 28%,高于卵巢交界性浆液性肿瘤的阳性率52. 94%及正常卵巢组织的阳性率7. 14%,差异有统计学意义(P <0. 05)。卵巢癌组织中HSF1的表达水平与患者临床分期、淋巴结转移、ER及Ki-67呈正相关,与患者年龄、PR、p53无关。结论:HSF1在卵巢高级别浆液性癌组织中表达增加,可能与卵巢癌的发生机制相关。HSF1与卵巢高级别浆液性癌患者临床分期、淋巴结转移、ER及Ki-67呈正相关,有助于辅助评估卵巢癌患者病情,为临床制定个体化治疗方案提供依据。

热休克转录因子1及热休克蛋白70与阿尔茨海默病的关系

阿尔茨海默病(AD)是痴呆中最常见的一种神经退行性疾病,越来越多的证据表明,AD是一种"蛋白质错误折叠障碍性疾病",具有蛋白质错误折叠、易聚集和成熟神经系统中选择性细胞丢失的共同特征。热休克蛋白(HSP)是细胞中一组重要的分子伴侣蛋白,它参与了辅助蛋白质合成、折叠、定位及转运等过程,并且在协助蛋白质水解、预防蛋白质错误折叠和聚集方面具有重要的作用,有研究证实HSP与AD存在密切的联系。HSP70是HSP中最保守、最丰富的一个伴侣蛋白。HSP70不但可抑制β-淀粉样肽(Aβ)相关的毒性作用,也在tau蛋白的聚积或降解中发挥重要作用。这些研究结果提示HSP70有可能成为AD治疗的新靶点,本文对HSP70及其上游调控因子HSF1与AD的关系作一综述。

双荧光素酶报告质粒检测小鼠巨噬细胞热休克转录因子1调控核转录因子kappa B活性的研究

目的:观察烧伤血清刺激后小鼠巨噬细胞NF-κB活性的变化,以及HSF1对NF-κB可能的凋控作用。方法:制作15%TBSAⅢ°烧伤小鼠模型,提取烧伤血清通过表达质粒与报告质粒共转染,检测烧伤血清诱导下NF-κB活性的变化以及过表达HSF1后NF-κB活性的变化规律结果:对比正常血清,烧伤血清刺激后相时荧光素酶活性早期即明显增加(p<0.05),这种变化在诱导后2 h即达到高峰,12 h后逐渐下降;过表达HSF1可以显著抑制烧伤血清引起这种活性变化(P<0.05)。结论:烧伤后NF-κB早期即活化,热休克反应可能通过HSF1途径抑制NF-κB的活性。

热休克转录因子1在肝细胞癌中的表达及意义

目的：用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法显示肝癌组织中热休克转录因子1（HSF1）的表达情况，探讨HSFl在肝细胞癌中的表达及意义。方法：收集肝癌患者40例手术肝癌标本及相应的癌旁组织作为对照。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测肝癌标本及相应的癌旁组织HSF1的表达，分析比较它们分别在肝癌标本及相应癌旁组织的表达情况及其与肝癌临床和病理特征的关系。结果：肝细胞癌肿瘤组织HSF1 mRNA表达显著高于癌旁组织，但HSF1表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小、包膜的完整与否、分级、癌栓形成及血清AFP水平未见明显相关性（P〉0．05）。结论：HSF1在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织，HSF1可能与PHC的发生密切相关。进一步探讨HSF1在PHC中的表达机制，有望为原发性肝癌的临床诊断与治疗提供依据。

先天性热休克转录因子4基因突变lopl 1小鼠白内障形成的分子机制

背景研究证实热休克转录因子4（HSF4）基因突变是造成先天性常染色体隐性遗传白内障小鼠——晶状体混浊11（10p11）小鼠白内障的主要原因，HSF4基因突变导致lopil小鼠白内障形成的分子机制是眼科学界关注的问题。目的探讨HSF4基因突变导致lopll小鼠白内障形成的分子机制。方法本研究选取lopll小鼠及野生型C57BL／6小鼠各24只，分别于出生后1、7、14d两种小鼠各取8只用CO，吸入法处死，制备晶状体切片，用常规组织病理学法观察lopll小鼠出生后不同时间晶状体的病理改变，计数晶状体上皮细胞（LECs）的数量；采用Westernblot法检测1日龄lopll小鼠及野生型C57BL／6小鼠晶状体中ⅨB一晶状体蛋白（CRYAB）的含量；用定量PCR（q-PCR）法分析两种小鼠晶状体中成纤维细胞生长因子（FGF）的表达。两种小鼠上述指标检测结果的差异比较采用独立样本t检验。实验动物的喂养和使用遵循ARVO声明。结果出生后1d的野生型C57BL／6小鼠LECs和晶状体纤维形态及排列规则，但lopll小鼠LECs增生明显，形态不规则；出生后7d的lopll小鼠晶状体纤维排列紊乱，可见空泡样变性。出生后1、7、14d的lopll小鼠每张切片上LECs数分别为（417±19）、（4674-16）、（489_±21）个，均明显多于同时间点野生型G57BL／6小鼠的（378_±13）、（391±9）、（395-±7）个，差异均有统计学意义（1d：t=6．696，P=0．000；7d：t=6．578，P=0．000；14d：t=7．240，P=0．000）。出生后1d的lopll小鼠晶状体中CRYAB蛋白表达较野生型G57BL／6小鼠明显减弱，而晶状体中FGF-1、FGF-4、FGF-7mRNA的相对表达量（表达倍数）分别为2．04±0．13、2．03±0．08和4．59±0．12，野生型C57BL／6小鼠相对表达量（表达倍数）分别为1．04±0．06、0．97±0．08和1．00±0．04，差异均有统计学意义（FGF-1mRNA：t=14．000，P〈0．01；FGF-4mRNA：t=15．510，P〈0．01；FGF-7mRNA：t=29．410，P〈0．01）。结论lopll基因突变影响小鼠晶状体的正常发育，其机制可能与影响晶状体蛋白的合成以及FGF的基因表达有关。

干扰和过表达热休克转录因子2对肠上皮细胞凋亡和迁移的影响

目的:通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰肠上皮细胞热休克转录因子2(heat shock transcription factor 2,HSF2)表达,研究不同HSF2水平对肠上皮细胞凋亡和迁移的影响.方法:(1)选取HT-29(人结肠癌细胞株)作为研究材料,丁酸钠(设置不同时间点/浓度)诱导细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡、周期.按实验结果选取最佳丁酸钠浓度及时间位点;(2)慢病毒载体介导的RNA干扰技术过表达和干扰结肠上皮细胞HSF2表达;用倒置荧光显微镜、Western blot法检测目的基因在细胞中的转染效率;(3)细胞迁移实验(划痕法/Transwell小室)检测过表达和干扰HSF2后细胞迁移能力的改变;(4)经过表达和干扰HSF2后的细胞,给予丁酸钠诱导凋亡,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期.结果:(1)MTT实验结果显示:阴性对照组(NC组)的HT-29细胞增殖活性在实验观察期间(0-96 h)不断升高,48 h后,实验组的细胞对4个丁酸钠浓度组均表现出明显的生长抑制,相对于NC组之间差异具有统计学意义(P<0.01),故丁酸钠对HT-29细胞的生长抑制作用呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示:NC组有少量凋亡,总凋亡率为0.548%±0.113%,而实验组经4个不同浓度丁酸钠处理48 h后,总凋亡率分别为51.588%±5.110%、77.732%±2.746%、90.115%±1.438%、94.247%±1.243%,与NC组之间差异具有统计学意义(P<0.01).而当丁酸钠浓度>2.5 mmol/L,凋亡率较1.25 mmol/L明显上升.细胞周期检测结果显示:与NC相比,1.25 mmol/L丁酸钠处理HT-29细胞48 h,G0/G1期HT-29细胞未显示出明显差异(P=1.00>0.05),即无明显细胞周期阻滞;而2.5、5.0、10 mmol/L以上浓度在各观察点均出现明显的细胞周期阻滞现象,呈明显的G1/G0期阻滞(P<0.01);(2)慢病毒载体转染效果检测:通过倒置荧光显微镜(×100)观察可发现,各组HT-29细胞经慢病毒载体转染后均有GFP表达,转染率达80%以上.用Western blot法检测结果显示:慢病毒构建载体能够在细胞中高效、稳定地过表达和干扰目的基因;(3)MTT法检测转染过表达和si RNA的HSF2细胞在丁酸钠诱导凋亡环境下活性变化,结果显示:过表达组细胞活性高于过表达对照组(P<0.05),干扰组的细胞活性低于干扰对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)细胞迁移实验发现:过表达组的细胞迁移能力较NC组明显增加,而干扰组则明显降低(P<0.05);(5)过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞周期的影响:NC组以及使用慢病毒载体处理的5组之间,各时间点细胞周期分布差异均无统计学意义(P>0.05);(6)过表达和干扰HSF2后丁酸钠诱导凋亡环境下细胞凋亡率的变化:过表达组总凋亡率低于过表达对照组(P<0.05);干扰组总凋亡率高于干扰对照组(P<0.05).结论:细胞发生凋亡时,HSF2可能对肠上皮细胞起保护作用,提示HSF2可能通过调控细胞周期来实现对细胞增殖的影响,但也可能还有其他途径;HSF2可能在凋亡损伤时对肠上皮细胞起修复作用.