烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌细胞上皮间质转化和血管生成并增强其侵袭和转移

目的探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达,免疫组织化学染色法检测ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白表达,用χ^(2)检验分析其与临床病理特征的关系,并采用Spearman相关分析法分析蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法评估ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的异常表达与乳腺浸润性导管癌患者无病生存期之间的关系,Cox回归模型分析ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的表达和临床病理参数与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系。结果与癌旁组织相比,ALKBH5、MMP9和VEGF的mRNA和蛋白在乳腺浸润性导管癌组织高表达,E-cadherin表达降低。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白在低分化乳腺癌组织、淋巴结有转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的表达率较高;肿瘤直径越大,ALKBH5和VEGF表达率越高。E-cadherin在高分化乳腺癌组织、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期表达率较高。Spearman相关分析结果显示,乳腺浸润性导管癌中ALKBH5与E-cadherin表达呈负相关,ALKBH5与MMP9和VEGF表达均呈正相关。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白高表达者的无病生存率均分别低于低表达者,E-cadherin蛋白高表达者无病生存率高于低表达者。Cox回归模型分析显示,ALKBH5和淋巴结转移是乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素。结论ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌侵袭和转移可能与增强乳腺导管癌细胞的EMT和血管生成有关。

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对胃癌细胞增殖、迁移和血管生成的影响。方法基于公共数据库分析LncRNA TUG1在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA TUG1在胃癌细胞系中的表达;采用si-TUG1、si-NC转染胃癌细胞SGC-7901,分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、克隆形成实验、Transwell实验和基质胶成管实验分析敲低lncRNA TUG1对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。基于公共数据库分析烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)基因与lncRNA TUG1的相关性。采用放线菌素D实验验证ALKBH5与lncRNA TUG1的调控关系。通过细胞功能实验分析敲低ALKBH5对胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和血管生成的影响。结果lncRNA TUG1在胃癌组织和胃癌细胞系中均表达上调;敲低lncRNA TUG1后,SGC-7901细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均较对照细胞下降,差异有统计学意义(P<0.05)。数据库分析结果显示,在胃癌中,ALKBH5与lncRNA TUG1表达呈正相关(r=0.37,P<0.05)。与对照细胞相比,敲低ALKBH5的SGC-7901细胞lncRNA TUG1的RNA稳定性下降,且细胞增殖、集落形成、迁移、血管生成能力均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过诱导lncRNA TUG1表达,促进胃癌细胞的增殖、集落形成、迁移和血管生成。

miR-455-5p在乳腺癌组织中表达及对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的观察miR-455-5p在乳腺癌组织中表达变化及对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,探讨其在乳腺癌进展中的作用及可能的下游调控机制。方法取30例乳腺癌患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-445-5p相对表达量。取对数生长期正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞,采用实时荧光定量PCR法检测miR-445-5p相对表达量。将乳腺癌MCF-7细胞分为过表达组和空载组,分别转染miR-18a-5p-eGFP质粒和NC-eGFP空载质粒。转染48 h,采用CCK-8法检测2组细胞培养0、24、48、72、96 h的细胞增殖情况,采用划痕试验检测细胞迁移距离,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt, p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR蛋白相对表达量。结果乳腺癌组织miR-445-5p相对表达量(2.10±0.23)高于癌旁正常组织(1.05±0.11)(P<0.05)。乳腺癌MCF-7、MDA-MB-453细胞miR-445-5p相对表达量(2.92±0.24、2.83±0.29)高于正常乳腺MCF-10A细胞(1.03±0.12)(P<0.05),MCF-7细胞与MDA-MB-453细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染48 h,过表达组miR-445-5p相对表达量(5.85±0.49)高于空载组(1.02±0.09)(P<0.05)。转染后48、72、96 h,过表达组细胞增殖的光密度值(3.64±0.35、5.36±0.52、7.96±0.68)均高于空载组(2.23±0.24、3.65±0.33、5.42±0.47)(P<0.05)。转染后24 h,过表达组细胞迁移距离[(428.38±45.76)μm]大于空载组[(335.17±32.88)μm](P<0.05)。转染后48 h,过表达组侵袭细胞数[(135.15±13.57)个]多于空载组[(112.26±10.24)个](P<0.05),细胞凋亡率[(4.73±0.52)%]低于空载组[(12.77±1.09)%](P<0.05)。转染48 h,过表达组细胞PTEN蛋白相对表达量(0.52±0.08)低于空载组(1.02±0.22)(P<0.05),PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白相对表达量(1.83±0.15、1.62±0.15、1.25±0.08、1.79±0.25)均高于空载组(0.98±0.09、1.03±0.11、1.01±0.12、1.05±0.27)(P<0.05),p-mTOR蛋白相对表达量(0.93±0.08)与空载组(1.03±0.17)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌组织及乳腺癌MCF-7细胞miR-455-5p表达上调;过表达miR-455-5p可促进MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭,抑制其凋亡,其机制可能与抑制PTEN,并进一步激活PI3K/Akt信号通路有关。

子宫内膜异位症相关的卵巢癌分子标志物的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)最常见于卵巢,其恶变可诱发子宫内膜异位症相关的卵巢癌(EAOC)。目前,AT富集相互作用结构域1A(ARID1A)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶(PIK3CA)、第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)、错配修复蛋白、微小RNA(miRNA)作为EAOC可能的肿瘤标记物受到广泛关注。本文将对这些因子在EAOC发生发展过程中的作用及其可能的机制做一综述,以期为EAOC的早期诊断、治疗和预后提供新途径。