HPLC-ELSD法测定龙泽熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

目的:以牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为指标,建立龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱串联蒸发光检测器,色谱柱为ChromCore AQ C 18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-5 mmol•L^(-1)醋酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~40 min,25%A;40~50 min,25%A→29%A;50~80 min,29%A;80~100 min,29%A→40%A),流速1.0 mL•min^(-1),柱温30℃,ELSD漂移管温度110℃,氮流量2.5L•min^(-1)。结果:牛磺熊去氧胆酸进样量在1.069~9.57μg内、牛磺鹅去氧胆酸进样量在0.74046~7.40464μg内,进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系;仪器精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2.0%;经低、中、高3个浓度的准确度试验考察,牛磺熊去氧胆酸的回收率为95.2%~97.7%,牛磺鹅去氧胆酸的回收率为91.9%~95.9%。测定样品42批次,牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量分别为0.18~0.43、0.10~0.44 mg•粒^(-1)。结论:本法适用于龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的质量控制,可为完善龙泽熊胆胶囊的质量标准提供科学的依据。

熊胆粉及其活性成分治疗神经系统疾病作用机制研究进展

熊胆粉活性成分熊去氧胆酸(ursodesxycholic acid, UDCA)、牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid, TUDCA)在不同的神经系统疾病动物模型中具有神经保护作用。其中UDCA、TUDCA可通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase, ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinasa, JNK)、p38 MAPK的磷酸化发挥抗神经炎症的作用;UDCA通过激活单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mechanistic target of rapamycin, mTOR)和抑癌基因诱导的假定激酶蛋白1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)/RBR E3泛素蛋白连接酶(RBR E3 ubiquitin-protein ligase, Parkin)信号通路,抑制小鼠帕金森病(parkinson’s disease, PD)中神经细胞凋亡,增加线粒体自噬起到改善线粒体功能障碍和神经保护的作用。熊胆粉、TUDCA通过上调G蛋白偶联受体(G protein-coupled bile acid receptor 5,TGR5)的表达抑制蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的激活及调控巨噬细胞的分化,减轻神经炎症反应,保护神经细胞;TUDCA下调蛋白激酶R样内质网激酶(protrin kinase R-like ER kinase, PERK)/PERK-真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)/转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)/C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein, CHOP)信号通路的表达,上调CIBZ基因的表达,激活核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/NADPH醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、TGR5/去乙酰化酶3(recombinant sirtuin 3)等信号通路,抑制内质网应激、氧化应激所引起的神经细胞调亡,TUDCA通过调节细胞自噬和能量代谢抑制细胞凋亡发挥神经保护作用。现将近年来对熊胆粉、UDCA、TUDCA治疗神经系统病作用机制进行综述,为熊胆粉及其活性成分的临床运用提供参考。

熊果酸及其氨基酸酯前体药物在大鼠体内的药动学研究

目的 建立测定大鼠血浆中熊果酸浓度的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,探讨熊果酸及其氨基酸酯前体药物在大鼠体内的药动学变化。方法 取雄性大鼠,经口给药70 mg·kg^(-1)(以熊果酸含量计)的熊果酸原料药,熊果酸-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯混合液,熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯盐酸盐-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯溶液。采用沉淀蛋白法处理血浆样品,以塞来昔布作为内标,色谱柱为Acquity UPLC~? BEH C18(50 mm×2.1 mm, 1.7μm)柱,流动相为体积分数0.025%氨水乙腈-10 mmol·L^(-1)乙酸铵-体积分数0.1%氨水溶液(体积比70∶30),流速0.4 mL·min^(-1),采用大气压化学电离源,负离子多反应监测模式扫描。结果 血浆中熊果酸在质量浓度100~10 000μg·L^(-1)内线性良好。与原料药比较,熊果酸-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯混合液组和熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯盐酸盐-维生素E琥珀酸聚乙二醇酯溶液组的熊果酸生物利用度分别提高了8.43倍和19.52倍(P<0.05)。结论 经口给药后熊果酸在大鼠体内的生物利用度较低,前体药物熊果酸苯丙氨酸肌氨酸酯可提高熊果酸的经口给药生物利用度。分析方法符合生物样品的测定要求,适用于大鼠血浆中熊果酸质量浓度的测定。

《熊出没·逆转时空》:儿童影视动画片的银幕转型

在当今的媒体环境中,动画片已经不再局限于电视荧屏,而是越来越多地进入电影院,成为大银幕上的一道亮丽风景线。这种转型不仅改变了动画片的播放方式和观看体验,也对动画片的创作方式、内容表达和市场策略提出了新的挑战。以中国知名动画品牌《熊出没》系列的2024年春节档电影版《熊出没·逆转时空》为例,深入探讨儿童影视动画片的银幕转型过程及其影响。《熊出没·逆转时空》不仅在技术和艺术上达到了新的高度,而且在市场上也取得了显著的成功,为国产动画片的银幕转型提供了有益的经验和启示。

临夏盆地中新世一可能的新犬熊

报道了甘肃临夏盆地具体产地未知的一件犬熊下颌。该下颌展现出进步的牙齿特征,与过去发现于欧洲以及南亚的马德里犬熊Magericyon近似。这件犬熊化石指示东亚的犬熊多样性比以往认知的更高,但还需要更多具有明确层位信息的犬熊化石来进一步揭示东亚犬熊的演化。

熊果酸调控TLR4/MyD88/NF-κB通路改善GDM大鼠糖脂代谢及炎症反应和氧化应激

目的探讨熊果酸(UA)基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路对于妊娠期糖尿病(GDM)大鼠糖脂代谢、炎症反应和氧化应激的作用。方法建立妊娠期糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(GDM组)、UA低剂量组(UA-L组)、UA中剂量组(UA-M组)、UA高剂量组(UA-H组)和二甲双胍组,另设置普通饲料喂养的正常组(NC组),每组10只。收集样本测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肝酯酶(HL)、脂蛋白酯酶(LPL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白水平。结果与NC组比较,GDM组FBG、TG、TC、LDL-C、TNF-α、IL-2、IL-1β和MDA水平和TLR4、MyD88和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,FINS、HL、LPL、IL-4、CAT、SOD、GSH-Px水平和PPARγ蛋白表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与GDM组比较,UA各组及二甲双胍组FBG、TG、TC、LDL-C、TNF-α、IL-2、IL-1β、MDA水平和TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著下降,FINS、HL、LPL、IL-4、CAT、SOD、GSH-Px水平和PPARγ蛋白表达显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05);各组HDL-C水平无显著差异(P>0.05);二甲双胍组与UA-H组上述指标均无显著差异(P>0.05)。结论UA可能通过下调TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白表达,改善GDM大鼠糖脂代谢、炎症反应和氧化应激。

傅里叶变换红外光谱结合化学计量学快速预测熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸与牛磺鹅去氧胆酸含量

目的:建立用于熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)及牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)含量预测的傅里叶变换红外光谱预测模型,对熊胆粉进行快速质量评价。方法:以高效液相色谱法测定的98批熊胆粉中TUDCA及TCDCA含量为化学参考值;采集样品的红外光谱,筛选最佳光谱预处理方法、光谱波段及主因子个数,建立TUDCA和TCDCA含量预测的偏最小二乘回归模型。结果:熊胆粉中TUDCA和TCDCA红外定量分析模型的校正集相关系数(R2)分别为0.9446和0.9382,校正集均方根误差(RMSEC)依次为0.9551%和1.2854%,验证集R2分别为0.9121和0.8410,验证集均方根误差(RMSEP)依次为1.3058%和1.8748%。配对t检验结果表明预测值与实测值之间无显著性差异。结论:所建立的2个PLSR模型稳定,预测结果准确,可用于熊胆粉中TUDCA及TCDCA的快速定量分析。

熊果酸联合索拉非尼通过抑制Nrf2/HO-1/GPX4信号通路诱导肝癌细胞铁死亡

目的探究熊果酸(UA)能否增敏索拉非尼(SOR)抑制肝癌细胞生长及调控机制。方法使用UA或SOR单药处理或两药联合处理HepG2肝癌细胞,通过CCK-8实验、EdU荧光染色实验和克隆集落形成实验来检测单药处理或联合处理对HepG2细胞增殖及克隆集落形成能力的影响;使用CompuSyn软件计算两药联合指数(CI);通过FerroOrange染色分析肝癌细胞铁死亡情况;通过Western blot实验检测HepG2细胞中Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达情况。结果UA显著增强SOR抑制HepG2细胞增殖及克隆集落形成的能力,两药联用具有明显的协同作用;UA促进SOR诱导的肝癌细胞铁死亡;联合UA治疗使SOR对Nrf2/HO-1/GPX4信号通路的抑制作用进一步增强。结论UA显著提高肝癌细胞对SOR治疗的敏感性,两药联用可能是治疗肝癌的有效策略。

中药联合熊脱氧胆酸治疗老年女性原发性胆汁性肝硬化失代偿期的临床疗效

目的 观察中药联合熊脱氧胆酸(UDCA)治疗老年女性原发性胆汁性肝硬化(PBC)失代偿期患者的临床疗效。方法将收集的老年女性PBC失代偿期患者72例随机分为治疗组和对照组,每组36例。治疗组予失笑散合二至丸颗粒联合UDCA治疗,对照组予失笑散合二至丸颗粒模拟剂联合UDCA治疗。疗程均为6个月,观察中医证候疗效及不良反应发生率,比较相关生化指标、肝硬度值(LSM)、蔡尔德-特科特-皮尤改良评分(CTP)的变化情况。结果 (1)最终完成试验者64例,治疗组32例、对照组32例。(2)治疗前与治疗6个月组内比较,两组总胆红素(TBil)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、白球比(A/G)水平差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗6个月比较,上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前与治疗6个月组内比较,两组雌二醇(E2)水平差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗6个月比较,E2水平差异有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗前与治疗6个月组内比较,两组LSM水平差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗6个月比较,LSM水平差异有统计学意义(P<0.05)。(4)治疗前与治疗6个月、随访1年组内比较,两组CTP的A级构成比均增加,差异有统计学意义(P<0.05);组间治疗6个月、随访1年比较,治疗组CTP的A级构成比均明显高于对照组(P<0.05)。(5)治疗组、对照组总有效率分别为93.75%、68.75%;组间中医证候疗效比较,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。(6)两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 中药(失笑散合二至丸)联合UDCA治疗老年女性PBC,能改善患者的肝功能储备及临床症状,保肝利胆且不良反应较少。

小熊会“打包”

熊妈妈到獾奶奶家去,獾奶奶做了好多巧克力甜点。熊妈妈回家的时候,带了一大包回来,她对小熊说:“瞧,我把好东西给你打包啦!”“太好啦!”小熊真快乐。熊爸爸到森林餐厅吃饭,有喷香的蘑菇笋,有蜜甜的浆果汁,有菠萝饭……

两只小熊的争吵

风景优美的树林里住着一对可爱的小棕熊兄弟,他们一只叫大熊,另一只叫胖熊。冰雪融化,又一年的春天来了,两只小熊也都渐渐长大,到了学本领的时候。一天,熊妈妈带着两只小熊来到了河边。大熊说:“妈妈,您要教我们游泳吗?我们去年就学会了。”熊妈妈说:“知道你们已经学会游泳了,你们都很棒!今年,妈妈想教你们捕鱼,这是你们一生都要用到的生存技能。”两只小熊一听要学习捕鱼了,都非常开心。

青南地区人熊冲突发生机制初探

人与棕熊的冲突日益严重,为探究青海省南部地区人熊冲突发生机制,2022年选取了青南地区玛沁县、玉树市、囊谦县3个人熊冲突严重的地区展开了调查。采用半结构化访谈法对70户牧民进行访谈,得到有效访谈共50户,并结合2021年玛沁县熊害卷宗21起,统计和分析青南地区人熊冲突现状,从而探究人熊冲突发生机制。结果表明:(1)青南地区人熊冲突事件4-11月份非冬眠期均有发生,主要集中于每年4-6月份;(2)玛沁县人熊冲突主要发生于雪山乡、下大武乡、优云乡等地;玉树市人熊冲突发生于上拉秀乡、下拉秀乡、巴塘乡等地;囊谦县人熊冲突主要发生于东坝乡、尕羊乡、白扎乡等地;(3)人熊冲突事件对人造成的损失主要包括家具受损、房屋受损、口粮受损;(4)棕熊栖息地减少、自然食物短缺及不易获得、牧民储存粮食的房屋简陋、房屋内食物易得以及不完善的生活垃圾、厨余垃圾的处理方式,从而驱使棕熊与人类之间不断发生冲突。

扁桃果皮熊果酸对酒精性肝损伤保护作用研究

文章研究扁桃果皮熊果酸对酒精肝损伤的保护作用,将小鼠分为正常对照组、模型对照组、联苯双酯阳性对照组(150 mg/kg)、熊果酸低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组,其中对正常对照组、模型对照组给予等体积蒸馏水,对其余组小鼠给予10 mL/kg扁桃果皮熊果酸连续灌胃30天。从第16天起,除正常对照组外,其他各组每天给药结束4 h后用30%乙醇(10 mL/kg)进行灌胃,建立小鼠酒精性肝损伤模型,测定小鼠肝脏指数、扁桃果皮熊果酸对小鼠血清谷氨酸氨基转移酶(Glutamate aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(Malonic dialdehyde,MDA)含量和小鼠肝组织SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活力、MDA和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量的影响,并用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)进行肝组织病理学切片分析。结果表明,扁桃果皮熊果酸可以有效降低小鼠肝脏指数,小鼠血清ALT、AST活力及MDA含量,提高小鼠血清SOD活力,也可以使小鼠肝组织MDA含量降低,SOD、GSH-PX活力及GSH含量升高,肝脏组织病理损伤减轻。结论扁桃果皮熊果酸对酒精性肝损伤有保护作用。

熊果酸通过抑制内质网应激和碳代谢对肝实质细胞脂滴积聚的抑制作用

目的本研究通过体内外实验分析熊果酸对非酒精性脂肪性肝病的干预作用,在影响脂滴形成的视角探讨其可能的作用机制。方法通过高脂饮食诱导C57BL/6小鼠形成脂肪肝小鼠模型,同时连续12周灌胃熊果酸进行干预。采用NAS评分标准对肝组织进行病理学改变的观察,检测血清中酶活力水平、血脂水平和肝组织中脂质水平的生化学指标。采用游离脂肪酸诱导AML12肝细胞建立脂滴积聚模型,油红O染色检测脂滴积聚水平。使用ATP试剂盒检测细胞ATP水平,DCFH-DA检测细胞活性氧水平,JC-10法检测细胞线粒体膜电位水平。通过mRNA-seq分析熊果酸对脂滴积聚模型差异基因表达的影响。结果动物实验证明,熊果酸降低了小鼠肝脏甘油三酯和血清胆固醇水平。体外实验证明,熊果酸可降低AML12细胞内脂质含量,减小脂滴的平均粒径,增加细胞内脂滴数量,提高细胞ATP水平,降低细胞活性氧和膜电位水平。mRNAseq结果表明,低水平的脂滴积聚会诱导内质网应激,激活未折叠蛋白反应、三羧酸循环和戊糖磷酸途径,同时影响糖酵解途径,综合导致脂肪酸合成和氧化的激活,而熊果酸会抑制这一整个过程。结论在肝细胞脂质沉积早期,熊果酸可能通过抑制中心碳代谢和未折叠蛋白反应,从而抑制脂肪酸氧化加剧。

牛磺熊去氧胆酸干预缺糖缺氧条件下脊髓神经元的凋亡

背景:牛磺熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸衍生物,在多种神经系统疾病模型中均有神经保护作用,但目前鲜有报道研究牛磺熊去氧胆酸对脊髓损伤的作用。目的:观察缺糖缺氧条件下牛磺熊去氧胆酸对脊髓神经元凋亡的作用,以及对脊髓损伤后小鼠运动功能恢复的影响。方法:①体外实验:从孕13.5 d的C57 BL/6小鼠胚胎中分离提取原代脊髓神经元,培养72 h后,分3组处理:正常组加入Neurobasal完全培养基,置于CO_(2)培养箱(体积分数5%CO_(2)+95%空气)内培养24 h;氧糖剥夺组加入无糖的Neurobasal培养基,置于三气培养箱(体积分数94%N2+5%CO_(2)+1%O_(2))培养12 h,更换为Neurobasal完全培养基后置于CO_(2)培养箱内培养12 h;实验组处理过程大致同氧糖剥夺组,其中在加入无糖Neurobasal培养基的同时加入牛磺熊去氧胆酸。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光染色检测细胞βⅢ微管蛋白表达。②动物实验:采用随机数字表法将60只C57 BL/6小鼠分为假手术组、脊髓损伤组与实验组,每组20只,脊髓损伤组与实验组采用Allen打击法建立T_(9)-T_(10)脊髓损伤模型,造模后第1天开始,实验组灌胃给予牛磺熊去氧胆酸溶液,假手术组与脊髓损伤组灌胃给予生理盐水,1次/d。连续给药14 d后,采用行为学和组织学方法评估脊髓组织修复情况。结果与结论:①体外实验:TUNEL染色、CCK-8与免疫荧光染色检测显示,氧糖剥夺组细胞凋亡数量高于正常组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达低于正常组(P<0.01);实验组细胞凋亡数量低于氧糖剥夺组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达高于氧糖剥夺组(P<0.01)。②动物实验:旷场实验BBB评分与后肢足迹实验显示,实验组小鼠行走与运动功能恢复程度好于脊髓损伤组。苏木精-伊红染色显示,脊髓损伤组小鼠脊髓损伤部位可见明显畸形和空洞,神经细胞数量明显减少;与脊髓损伤组比较,实验组脊髓损伤病变面积显著减小,脊髓畸形程度更小、空洞更少,神经细胞数量增加。免疫荧光染色显示,脊髓损伤组神经元胞核标记神经元细胞数量少于假手术组(P<0.01),实验组神经元胞核标记神经元细胞数量高于脊髓损伤组(P<0.01)。③结果表明:牛磺熊去氧胆酸能减少缺糖缺氧引起的脊髓神经元凋亡、轴突的丢失,促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复。

熊果酸改善精神分裂症小鼠脱髓鞘和脑组织间液引流紊乱

目的:探讨精神分裂症(schizophrenia,SZ)的髓鞘和脑组织间液(interstitial fluid,ISF)相关发病机制,探究熊果酸(ursolic acid,UA)对SZ中髓鞘损伤及其继发的ISF异常引流的治疗效果。方法:使用30只6~8周雌性C57BL/6J小鼠,体质量(20±2)g,随机分为UA治疗组、SZ模型组、对照组3组,每组10只:(1)对照组:腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)生理盐水,灌胃(intragastric,ig)给予1%(质量分数)羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na);(2)SZ模型组:ip给与2 mg/kg的地卓西平(dizocilpine maleate,MK-801),ig给与1%(质量分数)CMC-Na;(3)UA治疗组:ig给与25 mg/kg的UA,ip给与2 mg/kg的MK-801。治疗组先ig给药UA预治疗一周,然后对3组小鼠进行为期两周的药物干预。在造模完成后依次通过旷场测试和前脉冲抑制实验对小鼠进行行为学评价。行为测试后,通过向脑区注射荧光示踪剂来探究各组ISF分区引流的改变;通过免疫荧光探究各组脑内水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)极性分布的改变以及蛋白表达的变化;通过激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)髓鞘反射光成像研究鼠脑内髓鞘的变化。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)对计量数据进行组间比较,使用TukeyHSD进行组间两两比较。结果:旷场测试发现,模型组在旷场中运动的总路程[(7949.39±1140.55)cm vs.(2831.01±1212.72)cm,P<0.001]和中央区域停留时间[(88.43±22.06)s vs.(56.85±18.58)s,P=0.011]显著高于对照组,而治疗组在旷场中运动总路程[(2415.80±646.95)cm vs.(7949.39±1140.55)cm,P<0.001]和中央区域停留时间[(54.78±11.66)s vs.(88.43±22.06)s,P=0.007]较模型组显著降低。前脉冲抑制实验发现,模型组给与预脉冲时对震惊反射的抑制率均显著低于对照组(P均<0.001);治疗组上述指标较模型组显著增加(P均<0.001)。髓鞘反射光检测发现,模型组小鼠脑内存在显著的脱髓鞘,治疗组脑内脱髓鞘情况得到逆转。荧光示踪发现,模型组示踪剂向头侧皮层区的扩散面积和向尾侧丘脑区的返流面积均显著大于对照组[(13.93±3.35)mm 2 vs.(2.79±0.94)mm 2,P<0.001;(2.48±0.38)mm 2 vs.(0.05±0.12)mm 2,P<0.001],且脑区间引流分区明显破坏;治疗组示踪剂向头侧皮层区的扩散面积和向尾侧丘脑区的返流面积均较模型组显著减小[(7.93±2.48)mm 2 vs.(13.93±3.35)mm 2,P<0.001;(0.50±0.30)mm 2 vs.(2.48±0.38)mm 2,P<0.001]。免疫荧光染色发现,模型组小鼠脑内AQP4极性分布遭到破坏,且模型组AQP4蛋白表达量较对照组明显下降[(3663.88±733.77)μm 2 vs.(13354.92±4054.05)μm 2,P<0.001];治疗组较模型组AQP4极性分布得到改善,AQP4蛋白表达量较模型组显著升高[(11104.68±3200.04)μm 2 vs.(3663.88±733.77)μm 2,P<0.001]。结论:一定剂量的UA干预可以改善SZ小鼠的行为学表现,这种改善表现为运动亢进和焦虑症状得到缓解,感觉运动门控功能得到恢复;其机制可能是通过改善SZ小鼠的脱髓鞘病理改变及ISF分区引流紊乱。

熊果酸通过JAK1/STAT3缓解脂多糖诱导的BALB/c小鼠炎症反应

旨在通过脂多糖(LPS)建立RAW264.7细胞与BALB/c小鼠炎症模型进行体内外试验,探讨熊果酸对LPS诱导炎症的保护作用。体外采用MTT法测定熊果酸和LPS对RAW264.7细胞活力的影响,中性红测试熊果酸对LPS刺激RAW264.7细胞吞噬能力的影响,Griess法测定NO释放水平;荧光定量PCR(RT-qPCR)测定JAK激酶1(JAK1)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路和炎症因子mRNA表达水平。BALB/c小鼠灌胃熊果酸分为25 mg/kg的低剂量组(UA-L)、50 mg/kg的中剂量组(UA-M)和100 mg/kg的高剂量组(UA-H),每只小鼠200μL/d,灌胃7 d,腹腔注射LPS诱导炎症反应后采集脾脏,计算脾脏指数,使用流式细胞术测定脾脏T细胞分化和Th17/Treg平衡,RT-qPCR方法验证α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1、JAK1和STAT3的mRNA表达水平。结果:熊果酸在12.5μg/mL范围内对细胞活力无影响(P>0.05),LPS浓度为1μg/mL时,细胞存活率为54.55%;LPS刺激后RAW264.7细胞吞噬能力显著下降(P<0.05),NO释放水平显著上升(P<0.05);熊果酸干预后,细胞吞噬能力呈剂量依赖式上升,NO释放水平下降。RT-qPCR结果表明,RAW264.7细胞经LPS刺激后,一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1、IL-6、TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升(P<0.05);熊果酸干预后,上述因子mRNA表达水平均显著下降(P<0.05)。体内试验结果表明,腹腔注射LPS后,小鼠脾脏指数显著高于空白对照组(P<0.05),CD4^(+)/CD8^(+)和Th17/Treg细胞出现失衡;不同剂量熊果酸干预后脾脏指数均显著降低(P<0.05),对小鼠CD4^(+)和CD8^(+)细胞分化具有明显促进作用,同时改善Th17/Treg失衡;腹腔注射LPS的小鼠脾脏IL-1、TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升(P<0.05),提前饲喂熊果酸能改善这一情况。综上,熊果酸通过调节炎症因子、改善T细胞分化失衡,从而降低由LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠的炎症反应。

牛磺熊去氧胆酸通过抑制内质网应激诱导的凋亡促进类鼻疽菌的清除

目的 拟通过类鼻疽菌感染RAW264.7巨噬细胞模型,探讨牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)促进类鼻疽菌胞内清除的作用机制。方法 类鼻疽菌感染RAW264.7细胞后8 h,设置未感染组和类鼻疽菌感染组,在不同浓度TUDCA处理条件下,采用流式细胞仪检测类鼻疽菌诱导细胞凋亡的情况;同时使用另外一种内质网应激抑制剂4-PBA,通过Annexin-V/PI双染法和MTT细胞增殖实验分别检测类鼻疽菌感染对宿主细胞凋亡和增殖的影响;进一步使用siRNA干扰内质网应激关键基因CHOP,设置siC对照组和siCHOP干扰组,通过Western blot和流式细胞仪检测类鼻疽菌感染后Caspase-3、Caspase-12等细胞凋亡相关蛋白的表达水平及细胞凋亡情况;通过细菌胞内生存实验分析TUDCA通过抑制内质网应激减少其诱导的细胞凋亡、增强巨噬细胞对类鼻疽菌胞内清除作用的机制。结果 在不同浓度TUDCA处理下,100μmol/L或200μmol/L TUDCA可明显减少类鼻疽菌感染诱导的RAW264.7细胞凋亡数量(P<0.05)。分别使用两种内质网应激抑制剂TUDCA和4-PBA均可降低类鼻疽菌感染诱导的细胞凋亡(P<0.05)。在siC对照组,相较于未感染时类鼻疽菌感染后Caspase-3和Caspase-12表达明显增加。在siCHOP干扰组,细胞凋亡相关蛋白的表达显著低于siC对照组,TUDCA处理后细胞凋亡相关蛋白表达水平与未加TUDCA药物相比无明显差异。流式细胞仪检测结果也显示,TUDCA能够减少类鼻疽菌感染后诱导的细胞凋亡(P<0.05),但在siCHOP干扰组中,TUDCA对类鼻疽菌感染诱导的凋亡无明显改变。细菌胞内生存计数结果显示,在siC对照组加入TUDCA能够增加宿主细胞对类鼻疽菌的清除(P<0.05),而在siCHOP干扰组中TUDCA的处理对类鼻疽菌胞内增殖无明显影响。结论 在类鼻疽菌感染RAW264.7细胞模型中,TUDCA能够通过抑制巨噬细胞内质网应激诱导的凋亡,促进巨噬细胞对类鼻疽菌的胞内清除。

牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化

目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预,用Western blot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达,探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Western blot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默Herpud1的表达及用Transwell和Western blot检测沉默Herpud1后CFs纤维化指标的表达,探讨Herpud1在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Western blot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确Herpud1在TUDCA抑制CFs活化中的作用,用Western blot检测过表达Herpud1后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上,TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达;Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞;敲除Herpud1可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化;TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平;此外,过表达Herpud1还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调Herpud1基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。

代谢工程改造酿酒酵母高效合成熊果酸

熊果酸是一种五环三萜类化合物,具有抗炎、抗氧化等作用,广泛应用于医药、化妆品等领域。为提高酿酒酵母中熊果酸的产量,该研究采用了代谢工程的“推-拉”策略。首先,通过异源表达和优化CADDS、CaCYP716A83和HtCPR,实现了熊果酸的从头合成,其产量为5.4 mg/L。随后,通过扩大内质网面积,为膜蛋白酶提供更多的附着面积,熊果酸产量达到40.3 mg/L。由于熊果酸合成路径中涉及多个氧化还原反应,NADPH是必需的辅因子,强化NADPH供给后,熊果酸产量提升至48.2 mg/L。此外,通过优化电子传递链,利用细胞色素b5参与第二个电子向P450酶转移,增强反应中的电子供给,熊果酸产量达到74.6 mg/L。最后,将扩大内质网、增强NADPH及电子传递、调节CaCYP716A83和HtCPR拷贝数等策略进行迭代整合,熊果酸产量达到84.3 mg/L。该研究为构建高效合成萜类化合物的微生物细胞工厂提供了参考。