低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。

抑制连接蛋白43介导半通道活性促进脂多糖诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成牙本质分化过程中的作用和机制。方法:建立SD大鼠上颌第一磨牙损伤模型,免疫荧光(im munofluorescence,IF)染色检测Cx43在牙髓组织损伤后修复中的表达模式变化。分别采用0、1、10、100和1 000 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,筛选最适浓度,随后抑制和过表达hDPCs中Cx43的表达。实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法检测Cx43和成牙本质分化相关因子牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP-1)、成骨相关转录因子(osterix,Osx)表达及细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)活性变化。进一步对hDPCs施以特异性Cx43通道抑制剂,检测Cx43介导的通道活性在hDPCs成牙本质分化中的作用,初步探讨Cx43调节LPS诱导的hDPCs成牙本质分化的作用和机制。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学处理。结果:IF结果显示,在健康牙髓组织中,Cx43主要表达于成牙本质细胞层,牙损伤3~24 h,Cx43表达减弱,随后逐渐上调,直至正常水平;损伤后3天~2周,表达呈下调趋势,并且表达于成牙本质细胞层和固有牙髓中。以10 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,可显著上调DSPP的mRNA表达(P<0.01)。抑制Cx43,可显著上调hDPCs内LPS诱导的DSPP、DMP-1和Osx mRNA表达(P<0.05);过表达Cx43,则显著抑制LPS诱导的成牙本质分化相关因子表达(P<0.01)和DSPP荧光强度。以10 ng/mL LPS激活hDPCs内ERK信号,过表达Cx43可显著减弱LPS诱导的ERK信号活性(P<0.01)。抑制Cx43介导的半通道,促进LPS诱导的hDPCs成牙本质分化相关因子mRNA表达和ERK信号活性(P<0.05);而阻断Cx43介导的细胞间通道,则抑制成牙本质分化。结论:Cx43参与调控牙髓组织的损伤后修复,并且其表达整体呈下调趋势;抑制Cx43或阻断HC,可促进LPS诱导的ERK信号活性和hDPCs成牙本质分化。

基于核壳结构微囊构建三维牙髓细胞球及初步体外研究

目的:利用同轴静电液滴技术设计并制备一种用于牙髓干细胞(DPSCs)三维细胞球体构建、培养的核壳微囊。方法:获取临床收集DPSCs并通过流式细胞仪进行细胞鉴定;构建核壳微囊,调节内外相溶液浓度、流速和细胞密度等参数,对比微囊形貌及尺寸筛选最佳制备条件;活/死染色和CCK-8实验检测微囊内的细胞球的细胞活性,免疫荧光染色观察细胞骨架。结果:成功分离培养DPSCs,构建以海藻酸钠(Alg)为壳层和羧甲基纤维素(CMC)为核层的载细胞微囊。当细胞密度为1×108个/mL时,微囊内的DPSCs在24 h内能自发形成直径为(101.93±10.11)μm的单一球体。活/死染色显示培养7 d内细胞存活率未明显降低(P>0.05),CCK-8显示培养4 d时细胞增殖率增加至(114.91±7.70)%(P<0.05),7 d时增长至(169.05±5.29)%(P<0.001)。细胞在微囊内形成致密结构。结论:该方法制备的核壳微囊可以促进DPSCs形成三维细胞球并长期存活。

研磨处理可注射牙髓细胞外基质促进牙髓再生

背景:可注射细胞外基质材料用于牙髓组织再生时,首先需要经过胃蛋白酶消化,再与其他基质成分如水凝胶结合使用,而这也意味着天然细胞外基质材料所保留的微环境遭到破坏。目的:探讨研磨处理条件下制备的可注射牙髓细胞外基质材料用于牙髓组织再生的效果。方法:(1)将获取的猪牙来源牙髓组织经过脱细胞处理后制备成牙髓脱细胞基质材料,经过液氮冷冻、高速研磨处理后,制备成可注射牙髓细胞外基质材料,比较可注射牙髓细胞外基质材料和天然牙髓细胞外基质在细胞黏附效率和微结构方面的差异,免疫组化分析可注射牙髓细胞外基质中的细胞外基质蛋白质成分;(2)将接种有牙髓干细胞的可注射牙髓细胞外基质材料注入到牙本质基质材料构建的牙髓腔中,植入裸鼠皮下1,3,5周后取材,观察可注射牙髓细胞外基质材料的体内改建速率及其在裸鼠皮下的异位牙髓组织再生能力。结果与结论:(1)与天然牙髓细胞外基质相比,可注射牙髓细胞外基质材料显著提高了细胞黏附率,并保留了与天然牙髓细胞外基质相似的多孔胶原结构;(2)与天然牙髓细胞外基质相比,免疫组化染色显示可注射牙髓细胞外基质材料中层粘连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和整合素β1的表达没有显著变化,而纤连蛋白的表达显著下降;(3)体内实验显示,可注射牙髓细胞外基质材料具有优异的成血管能力,并促进了牙髓样组织的形成。结果表明,研磨处理的可注射牙髓细胞外基质材料可促进牙髓再生。

circRNA_079813抑制牙髓细胞损伤的机制研究

目的探讨circRNA_079813对脂多糖(LPS)诱导的人牙髓细胞(hDPCs)损伤的作用和机制。方法原代分离培养脱落乳牙牙髓细胞,用免疫荧光化学法鉴定原代分离培养的hDPCs。将培养的hDPCs分为vector组、过表达circRNA_079813的重组载体组(circRNA_079813组)、腺相关病毒(AAV)空载体组(AAV-Null组)、Smad1过表达重组AAV载体组(AAV-Smad1组)、小干扰RNA(siRNA)沉默Smad1的重组载体组(si-Smad1组)以及siRNA阴性对照组(si-NC组)。另外,将hDPCs分为空白对照组(Control组)、LPS组、LPS+vector组、LPS+circRNA_079813组、LPS+circRNA_079813+si-NC组、LPS+circRNA_079813+si-Smad1组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测hDPCs的增殖活力和凋亡水平。ELISA法检测白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。检测碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP蛋白表达水平以及茜素红S(ARS)染色程度以评估成骨分化能力。Western blot检测runt相关转录因子2(RUNX2)以及Smad1的蛋白水平。结果在LPS诱导的hDPCs中过表达circRNA_079813可增加hDPCs的增殖活性,提高成骨分化能力,抑制hDPCs的凋亡和炎症反应,提高Smad1和RUNX2的蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。在LPS基础上过表达Smad1与过表达circRNA_079813对hDPCs的影响一致(P<0.05),而沉默Smad1逆转了过表达circRNA_079813的上述效果(P<0.05)。结论过表达circRNA_079813通过Smad/RUNX2信号通路改善LPS诱导的hDPCs损伤。

Toll样受体3处理的脐带间充质干细胞与人牙髓细胞共培养对细胞矿化与抗炎修复能力的影响

目的:探究Toll样受体3(TLR3)处理的人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)与人牙髓细胞(hDPCs)共培养后,对细胞矿化能力及抗炎修复能力的影响。方法:从健康新生儿的脐带组织中分离培养hUCMSCs,采用流式细胞术和免疫荧光染色检测细胞表面标记物CD34、CD45、CD90及CD105的表达,以对hUCMSCs进行鉴定;以TLR3激动剂Poly(I:C)(10μg/mL)处理hUCMSCs,建立hUCMSCs与h DPCs的共培养体系,测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)水平,茜素红染色和Von Kossa染色观察各组细胞矿化情况;利用脂多糖(LPS,10μg/mL)刺激hDPCs模拟牙髓炎症反应,MTT法检测各组细胞的增殖活性,RT-qPCR法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)、骨钙素(OCN)及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达情况。结果:分离的hUCMSCs中CD34和CD45呈阴性表达,CD90和CD105呈阳性表达,表明成功分离出hUCMSCs;与单独培养的hUCMSCs和hDPCs比较,hUCMSCs与hDPCs共培养体系内细胞ALP染色加深,ALP活性升高,有较多的矿化结节形成(P<0.05);与hUCMSCs与hDPCs共培养比较,经Poly(I:C)处理的hUCMSCs与h DPCs共培养中细胞ALP活性进一步升高,矿化结节形成更多(P<0.05)。相较于未经LPS刺激的细胞,经LPS刺激后的各组细胞增殖活性降低,细胞中TNF-α、IL-6及IL-10的mRNA相对表达量均升高,DSPP、DMP-1、OCN及OPN的mRNA相对表达量均下降(P<0.05);在LPS刺激下,相较于hUCMSCs与hDPCs共培养下,经Poly(I:C)处理的hUCMSCs与h DPCs共培养中的细胞增殖活性较高,TNF-α、IL-6的mRNA相对表达量均下降,IL-10 mRNA相对表达量进一步升高,同时,DSPP、DMP-1、OCN及OPN的mRNA相对表达量也均升高(P<0.05)。结论:TLR3激动剂Poly(I:C)处理的hUCMSCs与hDPCs共培养,可增强细胞的矿化能力,抑制LPS刺激下炎症因子水平,并促进炎症状态下牙本质形成相关基因的表达,这可能有利于牙髓炎症下的抗炎修复。

不同浓度葡萄糖对人牙髓细胞增殖凋亡及矿化的影响

目的:探讨人牙髓细胞(hDPCs)在不同浓度葡萄糖作用下,细胞增殖凋亡及矿化情况。方法:体外培养的第4代hDPCs分为正常组、高糖1组和高糖2组,分别用含葡萄糖浓度为0、5.5、40和50 mmol/L的培养基培养,21 d后CCK-8实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测DMP1和DSPP mRNA相对表达量;茜素红染色观察矿化结节情况,试剂盒检测MDA含量及SOD和ALP活性,Wester blot检测Bcl-2、Bax及DSPP和DMP1蛋白相对表达量。结果:正常组矿化结节明显,其余2组矿化结节少。正常组细胞存活率、SOD和ALP活性、DMP1和DSPP mRNA相对表达量、Bcl-2以及DMP1和DSPP蛋白相对表达量均高于高糖1组(P<0.05)和高糖2组(P<0.05),而细胞凋亡率、MDA含量、Bax蛋白相对表达量均低于高糖1组(P<0.05)和高糖2组(P<0.05),以上指标差异在高糖2组比1组更明显(P<0.05)。结论:高糖抑制人牙髓细胞增殖和矿化,可能是高糖增强氧化应激反应引起。

高糖诱导人牙髓细胞钙化的初步探究

目的:观察高糖对体外培养的人牙髓细胞(hDPCs)增殖以及钙化结节形成的影响。方法:采用改良组织块法,体外培养人牙髓原代细胞并常规传代,并对其进行波形丝蛋白和角蛋白的免疫组化染色鉴定组织来源。使用不同含糖量的培养基体外培养的hDPCs分为5.5mmol/L正常对照组和15、25、35、45mmol/L实验组,用MTT方法检测各组hDPCs增殖水平;采用茜素红染色法检测各组hDPCs体外培养28d后钙化结节的形成情况。结果:分离培养的人牙髓细胞,抗波形蛋白阳性,抗角蛋白阴性,具有持续增殖能力;用MTT法检测不同浓度葡萄糖对hDPCs的增殖影响中发现,25mmol/L组在第1、3、5、7天时均有促进牙髓细胞增殖的作用,与对照组(5.5mmol/L)相比差异具有统计学意义(P<0.05)。用茜素红染色检测不同浓度葡萄糖对hDPCs钙化结节的形成的影响发现,仅有15和25mmol/L组与对照组相比,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高糖对人牙髓细胞钙化作用有明显的影响,并和高糖的浓度密切相关。适宜浓度的高糖可以有效促进人牙髓细胞的生长与增殖,并促进细胞钙化结节的形成。

miR-506-3p/AFF4/NF-κB信号通路调控牙髓细胞增殖及凋亡的分子机制

目的研究miR-506-3p对牙髓细胞(hDPCs)增殖、凋亡的调控机制。方法运用脂质体将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-506-3p组(转染miR-506-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-506-3p组(转染anti-miR-506-3p)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-AF4/FMR2家族成员(AFF)4组(转染pcDNA-AFF4)、miR-506-3p+pcDNA组(共转染miR-506-3p mimics和pcDNA)、miR-506-3p+pcDNA-AFF4组(共转染miR-506-3p mimics和pcDNA-AFF4)转染至hDPCs;核因子(NF)-κB信号通路抑制剂SN50(10μmol/L)处理hDPCs细胞24 h。实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术检测细胞miR-506-3p、AFF4的表达,细胞增殖率和凋亡率;Western印迹检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤基因(bcl-2)、bcl-2相关X基因(bax)、AFF4、磷酸化核因子抑制蛋白-κB(p-IκBα)、磷酸化IKB激酶复合物(p-IKKβ)的蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果与miR-NC组相比,miR-506-3p组hDPCs细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,PCNA、bcl-2蛋白明显下调,bax蛋白明显上调(P<0.05),而过表达AFF4则具有相反的作用,且miR-506-3p可靶向负调控AFF4。另外,过表达miR-506-3p可促进p-IκBα、p-IKKβ的蛋白表达,而过表达AFF4则可抑制p-IκBα、p-IKKβ的蛋白表达。抑制NF-κB信号通路具有与过表达AFF4相似的促进hDPCs细胞增殖,抑制凋亡作用。过表达AFF4能够减弱miR-506-3p对hDPCs细胞的增殖抑制、凋亡促进作用。结论miR-506-3p可抑制hDPCs细胞增殖,促进凋亡,其机制与靶向AFF4激活NF-κB信号通路有关。

人牙髓细胞与PLGA微球材料复合构建后的形态学观察

目的:观察不同浓度的人牙髓细胞(HDPCs)在可注射聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)微球支架上的黏附生长,通过形态学观察进一步探讨PLGA微球作为组织工程支架材料用于牙髓组织再生的可行性。方法:取第4代HDPCs以3种不同浓度(2×10^(5)细胞/ml、1×10^(5)细胞/ml、5×10^(4)细胞/ml)接种于PLGA微球,在不同的时间点应用倒置显微镜下观察细胞与材料复合生长的情况,体外培养8周后,终止培养,常规固定、石蜡包埋,组织学切片,分别应用免疫组织化学染色检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白(DMP-1)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)三种蛋白表达情况,并对阳性率进行统计。同时应用扫描电镜观察超微结构。结果:通过显微镜特异性观察细胞在材料表面的黏附状况,结果显示随着时间的推移细胞的生长状况整体较为良好。免疫组化结果显示牙髓组织与HDPCs-微球复合体三种蛋白表达均为阳性,将细胞最高浓度组三种蛋白的阳性率进行统计学分析,结果显示无统计学差异(P>0.05)。在培养8周之后通过显微镜观察细胞和微球之间的融合度较高,但微球局部有凹陷。通过形态学观察细胞与PLGA微球材料复合生长良好,结合前期定量检测结果显示PLGA微球有利于牙髓细胞黏附生长。结论:支架材料PLGA微球能够应用在组织工程化牙髓—牙本质复合体的构建,但下一步需要对微球材料进行改性,希望能够更加全面的将其应用于组织工程牙髓—牙本质复合体的构建之中,这也在临床中有极其重要的应用价值和实践意义。

兔牙髓细胞的体外增殖及鉴定

背景:牙髓干细胞的多分化潜能、高扩增速率和容易获取使之成为引人注目的间充质干细胞来源。目的:观察兔牙髓细胞增殖特性并进行细胞表面标志物的鉴定。方法:体外分离培养兔牙髓细胞,采用酶解组织块法培养细胞至第3代观察细胞形态变化、计数细胞活率、细胞克隆形成率、细胞生长曲线、细胞增殖周期以及细胞表面标志物的鉴定。结果与结论:酶解组织块法可以较快的收获各代兔牙髓细胞。第3代到第6代细胞活率分别比为94.7%∶95.8%∶95.2%∶95.3%,细胞的克隆形成率为18个/2000;细胞的生长曲线基本符合间充质细胞特征,细胞周期G0/G1期大于80%;免疫细胞化学vimentin、CD44、osteonectin、Dsp均为阳性表达。证实兔牙髓细胞中可分离培养出牙髓干细胞,并能在体外有效增殖。

胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。

脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。

脂多糖对大鼠牙髓细胞ALP、BSP、DSPP表达的影响

目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠牙髓细胞牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达的影响。方法:采用组织块法获得大鼠牙髓细胞,体外常规培养并进行鉴定,以含0.1、1、10、100和10000 ng/mL牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的LPS作用牙髓细胞1、3、5 d,用实时定量PCR检测DSPP、ALP、BSP mRNA表达的变化,采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:镜下贴壁后的细胞形态多样,多呈成纤维样细胞形态,还有部分多角形细胞,胞质突起。实时定量PCR结果显示,与对照组相比,1、10 ng/mL LPS组大鼠牙髓细胞DSPP、ALP、BSP的mRNA表达增高,100、10000 ng/mL LPS组DSPP、ALP、BSP的mRNA表达均降低;在1、3、5 d时,1、10、100和10000 ng/mL LPS组mRNA表达逐渐减少。0.1 ng/mL LPS对mRNA的表达无显著影响。3种因子呈现相似的表达变化趋势。结论:低剂量P.g LPS能促进牙髓细胞ALP、BSP、DSPP的表达,高剂量时则抑制ALP、BSP、DSPP的表达;随着培养时间的延长,促进作用逐渐减弱,抑制作用逐渐增强。

体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法 ,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长 ,形成细胞结节 ,并可进一步钙化 ;与成牙本质细胞相似 ,它们具有高碱性磷酸酶活性 ,可合成Ⅰ型胶原 ,其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征 ,胞间基质中可见膜被基质小泡 ,某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化 ,此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖。

骨碎补对体外培养人牙髓细胞增殖及超微结构的影响

目的:探讨骨碎补对体外培养的人牙髓细胞增殖及超微结构的影响。方法:组织块法体外培养人牙髓细胞。水提醇沉法提取骨碎补有效成分,以不同浓度骨碎提取液作用于体外培养的人牙髓细胞。MTT法检测骨碎补各浓度组对人牙髓细胞增殖的作用。扫描电镜和透射电镜下观察骨碎补对人牙髓细胞超微结构的影响。结果:原代培养的人牙髓细胞呈梭形或多角形。各浓度骨碎补均对体外培养的人牙髓细胞有促增殖作用,其中以100mg.L-1质量浓度组促增殖作用最明显。电镜下实验组人牙髓细胞表面枝状嵴丰富,细胞周围可见细胞外基质;细胞浆内有丰富粗面内质网和游离的核糖体,核内常染色质均匀分散,异染色质少。结论:骨碎补对体外培养的人牙髓细胞有明显的促增殖作用。

IL-6对人牙髓细胞、牙周膜细胞生长影响的实验研究

目的：了解ＩＬ－６对构成牙髓、尖周组织主要细胞生长的影响，揭示ＩＬ－６在牙髓、尖周病变过程中的作用。方法：应用细胞培养技术，采用ＭＴＴ比色法进行细胞生长及存活状态测定。结果：ＩＬ－６抑制牙髓细胞、牙周膜细胞的生长，并呈时间和剂量依赖关系，两细胞间无显著差异。结论：ＩＬ－６可能对牙髓。

氢氧化钙对人牙髓细胞碱性磷酸酶基因表达的作用

氢氧化钙具有促进牙髓碱性磷酸酶活性的作用,这种作用是直接或间接则不清楚。本文采用以反转录PCR获得的大鼠L/B/K-ALPcDNA为分子探针,观察到氯氧化钙可促进人牙髓细胞ALP基因表达,从而从分子水平上证实氢氧化钙对ALP基因的直接作用。

3D打印明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞的黏附增殖作用

目的探讨3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架对人牙髓细胞(HDPCs)的细胞毒性,及不同接种方法对细胞黏附生长的差异。方法组织块酶消化法分离培养HDPCs,利用Bioplotter三维生物打印机进行明胶海藻酸钠凝胶支架的3D打印,选取第3代HDPCs,Cell Counting Kit-8试剂检测不同浓度材料浸提液对细胞增殖的影响,扫描电镜观察、台盼蓝染色计数比较直接滴加低浓度细胞悬液与高浓度细胞浓缩液接种法,对细胞在材料表面黏附与增殖作用的差异。结果不同浓度的材料浸提液均对HDPCs细胞毒性为0,具有促进细胞增殖的作用。HDPCs在3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架上生长良好,先滴加高浓度的细胞浓缩液可以更有效的促进细胞对材料的黏附,5d后材料表面的细胞计数结果较滴加低浓度细胞悬液显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 3D打印的明胶海藻酸钠凝胶支架具有良好的生物相容性,具有促进HDPCs增殖的作用,可作为牙再生的支架材料,选择高浓度细胞浓缩液接种细胞更有利于细胞黏附。

二氯化钴诱导化学缺氧对人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的:研究二氯化钴(CoCl2)诱导化学缺氧对人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)增殖和迁移的影响。方法:改良组织块法体外培养获得的人DPCs,通过CoCl2化学模拟缺氧作用后,采用MTT法检测化学缺氧对人DPCs增殖的影响,Transwell法观察化学缺氧对人DPCs迁移能力的影响。结果:CoCl2诱导的化学缺氧可抑制人DPCs的增殖,并呈浓度依赖性;同时对DPCs的迁移有抑制作用。结论:CoCl2诱导化学缺氧能抑制DPCs的增殖和迁移。