脂肪酸对牛樟芝液态发酵产三萜的影响

为提高牛樟芝菌丝体产三萜类化合物的能力,以5种常见的脂肪酸为外源添加物,筛选出促进牛樟芝菌丝体生长和提高总三萜得率的最优培养基及培养方法,并对比分析空白对照组和添加脂肪酸的实验组所得菌丝体形态、发酵液颜色及黏度的差异。研究结果表明:不同脂肪酸的添加对牛樟芝菌丝体产三萜均有促进作用,其中亚麻酸对三萜生产的促进效果最强,其他脂肪酸的促进效果排序为亚油酸>油酸>硬脂酸>软脂酸;在添加亚麻酸的最优条件下(添加2.0 g/L亚麻酸、培养8 d)获得最大三萜得率为(5.0±0.1)%,是空白对照组的2.1倍。该研究方法操作容易,成本较低,效果显著,是促进牛樟芝菌丝体生长和三萜合成的有效策略,为牛樟芝三萜的规模化发酵提供参考和借鉴。

添加牛樟芝多糖和锌对麻黄肉鸡屠宰性能、肉品质及肌肉抗氧化能力的影响

本研究旨在探究饲粮中添加牛樟芝多糖和锌对麻黄肉鸡生长性能、屠宰性能及肌肉品质、抗氧化能力的影响,为牛樟芝多糖和锌在肉鸡生产中的应用提供理论依据。选取35日龄健康的麻黄肉鸡公鸡180羽,随机分为如下3组:饲喂基础饲粮的对照、饲喂添加500 mg/kg牛樟芝多糖(ACP)的基础饲粮组(ACP处理)、饲喂添加500 mg/kg牛樟芝多糖+100 mg/kg锌的基础饲粮组(ACP+锌处理),每组设6个重复,每个重复设10羽鸡。试验期为28 d,其间记录鸡的生长性能相关指标;63日龄时,每个重复分别选取1~2羽鸡屠宰、采样,测定与屠宰性能、肉品质及肌肉抗氧化性能相关的指标。结果显示,与对照相比,ACP、ACP+锌处理胸肌在屠宰后45 min测量所得pH值(pH45 min值)显著升高(P<0.05),且滴水损失率显著降低(P<0.05)。与对照、ACP+锌处理相比,ACP处理胸肌的咀嚼性显著升高(P<0.05)。与对照相比,ACP、ACP+锌处理胸肌中的丙二醛含量均显著降低(P<0.05)。由结果看出,在饲料中单独添加牛樟芝多糖或联合添加牛樟芝多糖+锌均可以减少肉鸡胸肌的滴水损失,调节其pH值,提高肌肉品质和肉鸡胸肌的抗氧化能力。

牛樟芝的质量标准研究

目的:建立牛樟芝药材的质量标准。方法:建立牛樟芝药材性状及显微鉴别特征、水分、总灰分、黄曲霉毒素、基因序列鉴定及浸出物含量以制定相应项目的合理限度。结果:性状及显微鉴别方法专属性强,15批样品的水分、总灰分和浸出物平均值分别为13.0%、3.1%、40.4%。结论:制定的鉴别项、检查项、含量项等方法可应用于牛樟芝药材的质量控制。

高黎贡牛樟芝线粒体全基因组特征及系统发育分析

为了解高黎贡牛樟芝线粒体基因组的特征及系统发育,本研究利用高通量测序技术对高黎贡牛樟芝线粒体基因组进行测序组装、注释并对其组成特征与其他多孔菌目真菌的线粒体基因组进行比较分析。结果显示:(1)获得完整的高黎贡牛樟芝线粒体基因组,其大小为110713 bp。共编码82个基因(53个蛋白编码基因、27个tRNA基因、2个rRNA基因),有较为显著的A-T偏好。(2)与11个近缘物种线粒体基因组共线性分析,发现高黎贡牛樟芝线粒体基因组与其他线粒体基因组有32个同源区域,同源区域的相对位置在多孔菌目种间变化很大,在进化过程中发生频繁的基因重排。(3)选择压力分析显示,15个核心编码基因的Ka/Ks<1,各物种在氨基酸水平上纯化选择起主导作用;系统发育分析表明,高黎贡牛樟芝线粒体基因组与台湾牛樟芝关系最近,形成独立分支。结果表明:高黎贡牛樟芝线粒体基因组与台湾牛樟芝线粒体基因组相比基因顺序没有发生变化,但存在一段4209 bp的片段缺失,该分析支持高黎贡牛樟芝成为一个独立新种。

牛樟芝种质资源分析及其Antcin类化合物对乳腺癌细胞的影响

收集牛樟芝种质资源并研究其Antcin类化合物对乳腺癌细胞转移、侵袭等作用,为开发乳腺癌治疗药物提供理论思路。本研究分别采用ISSR、ITS-RFLP和BOX-PCR技术对6株牛樟芝菌株进行种质资源分析,并开展牛樟芝Antcin类化合物对乳腺癌细胞转移、侵袭等作用研究。结果表明,ISSR法和BOX-PCR技术能从条带的特异性对供试菌株进行分类;利用8条多态性ISSR引物对供试菌株进行PCR扩增,共获得812条多态性条带,其多态性条带比例达41%,表明其遗传多样性较为丰富,与外源菌株(金福菇)相比遗传相似系数为0.34;6株供试菌株间具有不同程度亲缘关系,且在遗传相似系数0.48处可聚为3类;通过多种方式比较,AC002、AC003、AC004和AC005可聚为一类。5μmol·L^(-1)ATB+20μmol·L^(-1)ATH、10μmol·L^(-1)ATB、40μmol·L^(-1)LATH对乳腺癌MDA-MB-231细胞无细胞毒性,ATB+H组在48 h时相对阴性处理癌细胞迁移降低48.2%(P<0.05),且显著抑制MDA-MB-231细胞的成球,从而抑制癌细胞在体内的成瘤,且能显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P<0.05),与阳性对照(TAM)无显著性差异(P>0.05)。牛樟芝ATB+ATH能为开发乳腺癌治疗药物提供理论支撑。

2种樟树叶片基质添加对牛樟芝三萜含量及抗氧化活性影响

比较分析在大米培养基中添加2种樟树不同浓度叶片匀浆对牛樟芝三萜含量及抗氧化活性的影响,筛选出最适的培养条件,为牛樟芝人工培养及樟属植物资源开发利用提供参考。以大米培养基为对照,分别添加0、0.5、1、2、3、4 g共6个浓度的牛樟和香樟叶片匀浆基质,测量了6种不同处理下牛樟芝的生长特性及三萜含量,并比较其对DPPH自由基清除能力和总还原能力,以评价牛樟芝的抗氧化活性。结果表明:不同浓度的牛樟和香樟叶片匀浆基质添加均能显著提高牛樟芝的生长和生物活性,各处理分别在9~27 d完成高峰生长。经过生长特性因子综合评价得出,在大米培养基中添加3 g香樟基质显著促进了牛樟芝的生长,较对照提高了4倍,为促进牛樟芝生长的最优处理;添加1 g牛樟基质显著提高了牛樟芝的三萜含量、DPPH清除能力及总还原能力,较对照分别提高了5.2、15.8和23倍,为提高牛樟芝三萜含量及抗氧化活性的最优处理。

牛樟芝培养物对产蛋高峰后期蛋鸡生产性能、蛋品质及血清抗氧化指标的影响

试验旨在探究牛樟芝培养物对产蛋高峰后期蛋鸡生产性能、蛋品质及血清抗氧化指标的影响。选取体况和产蛋性能相近的处于产蛋高峰后期(400日龄)海兰白蛋鸡288只,随机分为4组,分别为对照组及牛樟芝低、中、高剂量组。对照组蛋鸡饲喂基础饲粮,牛樟芝低、中、高剂量组蛋鸡分别在基础饲粮中添加50、100 mg/kg和200 mg/kg牛樟芝培养物。预试期7 d,正试期28 d。结果显示:与对照组相比,牛樟芝培养物组产蛋率、日均采食量和日均产蛋重均略有提高,50 mg/kg和100 mg/kg牛樟芝培养物组料蛋比略有降低,但差异不显著(P>0.05);牛樟芝培养物对蛋品质无显著影响(P>0.05);随牛樟芝培养物添加量的增加暗红色肝脏占比逐渐增大,200 mg/kg牛樟芝培养物组暗红色肝脏占比达到83.33%;随牛樟芝培养物添加量的增加,蛋鸡肝脏组织切片病变情况得以减轻或消失;200 mg/kg牛樟芝培养物组超氧化物歧化酶(SOD)含量显著高于50 mg/kg组和对照组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性各组间差异不显著(P>0.05);饲粮中添加50 mg/kg和100 mg/kg牛樟芝培养物,72只蛋鸡饲喂28 d分别可以额外获得34.4元和58.4元利润。综上所述,牛樟芝培养物可改善产蛋高峰后期蛋鸡生产性能,减少蛋鸡脂肪肝发生率,改善血清抗氧化指标,并增加养殖户的养殖收益,其中以牛樟芝100 mg/kg组经济效益最好。

封面:药用真菌——高黎贡牛樟芝

高黎贡牛樟芝(Taiwanofungus gaoligongensis)是担子菌门(Basidiomycota)多孔菌类的药用真菌,隶属于台芝属(Taiwanofungus)。台芝属是2004年从薄孔菌属(Antrodia)中独立出来的新属,包含台湾牛樟芝(T.camphoratus)、香杉芝(T.salmoneus)以及高黎贡牛樟芝。2018年,高黎贡牛樟芝作为台芝属的新种被发现,其分布地位于云南省西北部的高黎贡山。

添加牛樟和阴香基质对高黎贡牛樟芝萜类化合物生物合成途径的影响

为了研究添加牛樟和阴香嫩枝叶粉末对高黎贡牛樟芝萜类化合物的影响,使用Illumina高通量测序平台对添加牛樟、阴香嫩枝叶和薏仁(对照组)粉末培养液体培养后的菌丝体进行转录组测序,并分析萜类化合物合成途径关键基因表达情况。结果显示:(1)在添加牛樟枝叶粉末(BSNZZ-NF)和阴香枝叶粉末(BSNZZ-YF)下,共有446个差异表达基因,261个上调、185个下调;对差异表达基因的GO富集分析发现,与氧化还原过程及各种氧化还原酶相关的基因被显著富集;KEGG pathway富集分析发现,DEGs显著富集在酪氨酸、乙醛酸和二羧酸、丙酸三个代谢通路中。(2)在高黎贡牛樟芝转录组数据中,共筛选出43条参与萜类化合物合成的甲羟戊酸(MVA)途径的转录序列,添加牛樟基质后,HBD9、HMG-CoA、GGT3和OCS表达量明显上调,HBD12、TPS5和SE基因表达量下调;添加阴香基质后,AACT1、HBD5、HBD8、HBD12、FPPS1表达量明显上调,HMGS、HMG-CoA、IDI表达量下调。(3)有bHLH、bZIP、MYB等14个转录因子与高黎贡牛樟芝萜类化合物生物合成相关,14个转录因子在添加牛樟和阴香粉末后均具有不同程度的表达。本研究为进一步揭示参与高黎贡牛樟芝萜类生物合成相关转录因子反应机制提供了参考。

牛樟芝总三萜提取工艺优化及其抗氧化活性研究

牛樟芝是我国台湾特有的珍稀药食两用真菌,含有丰富活性成分,具有抗癌、抗肿瘤和保肝等多种药理作用,三萜类化合物被认为是牛樟芝中的重要药用物质,不同提取工艺对牛樟芝总三萜得率影响不同.为探究牛樟芝总三萜最佳提取工艺及其抗氧化活性.选取不同提取溶剂、温度、时间、液料比,采用单因素试验方法和正交试验方法探究不同因素对牛樟芝总三萜得率的影响,并通过高效液相色谱(HPLC)分析不同溶剂提取工艺之间的成分差异,比较分析其抗氧化活性.结果表明,牛樟芝总三萜提取最佳工艺为:二氯甲烷为提取溶剂、液料比1∶320 g·mL^(-1)、45℃提取5 h.在此条件下,牛樟芝总三萜得率为10.16±0.077 6%,通过HPLC分析,所得粗提物成分丰富且具有较好的抗氧化活性,其中DPPH清除能力的IC50值达0.137 6,总还原能力达58.03%.通过对牛樟芝提取工艺优化显著提高了牛樟芝总三萜得率,为牛樟芝活性成分提取、化合物分离及开发利用提供理论参考.

Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对大鼠肝CYP450酶活性的作用

目的:研究牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶活性的影响。方法:建立大鼠肝微粒体体外代谢的HPLC法,采用Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶的作用。(1)分别精密称取美托洛尔、奥美拉唑、非那西汀、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、硝苯吡啶各适量,配制Cocktail混合探针底物溶液。(2)设活性组、无活性组和抑制剂组,活性组:大鼠肝微粒体活性未进行灭活处理;无活性组:大鼠肝微粒体被灭活,其他同活性组;抑制剂组(分别为奎宁丁、噻氯匹定、α-萘黄酮、二乙氨基二硫代甲酸钠、磺胺苯吡唑、酮康唑组):在活性组的基础上加抑制剂各2.5μl。检测各组CYP2D6、CYP2C19、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP3A4/5亚酶的相对活性。结果:与无活性组比较,活性组中CYP2D6、CYP2C19、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP3A4/5相对酶活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与活性组比较,牛樟芝高、中、低剂量组中CYP1A2和CYP3A4/5相对酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);CYP2C9相对酶活性降低,但差异无统计学意义(P>0.05);高、中剂量组中CYP2D6相对酶活性降低,高剂量组中CYP2E1、低剂量组中CYP2C19相对酶活性降低,高剂量组中CYP2C19相对酶活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶中CYP1A2、CYP3A4/5、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1的代谢活性在一定浓度范围内有抑制作用,而对CYP2C19亚酶的代谢活性在一定浓度范围内有促进作用。

牛樟芝萃取物对大鼠心肌缺血-再灌注损伤保护作用的研究

研究旨在探讨牛樟芝萃取物对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。通过建立大鼠心肌缺血-再灌注模型,并给予不同剂量的牛樟芝萃取物预处理,记录其心电图变化,检测血清生化指标和心肌组织中炎症因子的含量,使用HE染色观察心肌组织病理形态学变化,使用Western blot法检测心肌组织中MIRI相关蛋白的表达调控。结果表明,牛樟芝萃取物能够降低心电图ST段的抬高程度,能降低血清中丙二醛的含量,提高过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性,减少肌酸激酶和肌酸激酶同工酶的释放。同时,该萃取物还能有效降低心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平,通过调控Nrf2和HO-1蛋白因子的表达,对心肌组织的MIRI起到了保护作用。

不同碳氮源对牛樟芝菌丝体生长的影响

为研究不同碳氮源对牛樟芝菌丝体生长的影响,采用不同碳源（甘露醇、麦芽糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、肌醇、果糖、可溶性淀粉）、不同氮源（麦芽浸粉、酵母提取物、番茄浸粉、马铃薯浸粉、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉浸粉、酪蛋白胨、麦芽浸粉肉汤）及不同浓度果糖（0．2%~3．2%）对牛樟芝菌丝体进行培养,观测其菌落大小、菌落长势、生长速率及菌丝生长指数。结果表明,以麦芽浸粉与酵母提取物为氮源,9种糖类中果糖作为碳源时,牛樟芝菌丝生长速度最快,培养30d时的菌丝生长速率为1．47mm/d,且菌丝呈红色,与野生牛樟芝子实体颜色接近。以麦芽糖和果糖为碳源,9种提取物中牛肉浸粉作为氮源时,牛樟芝生长最佳,培养30d时的菌丝生长速率为1．51mm/d,但其菌丝呈黄白色。果糖浓度在4%以内,生长的各个指标均随着果糖浓度的升高而升高。本研究为今后研究牛樟芝菌种扩繁、大规模发酵及椴木接种提供了实验依据。

牛樟芝药用功能成分作用及应用进展

牛樟芝(Antrodia cinnamomea)是珍贵的药用大型真菌,野生子实体专性寄生于台湾特有牛樟树心材内壁。文章综述了牛樟芝的分类、形态、生境生态等方面的研究进展,并阐述了其在药用化学成分、药理作用、毒性安全评价及药物应用等方面的研究应用前景。

牛樟芝ITS序列分析及液体发酵菌丝体总三萜含量测定

为筛选富萜牛樟芝(Antrodia cinnamomea)菌株,对收集的3株牛樟芝菌株(AC620,AC1404,AC001)进行ITS序列分析,通过香草醛-冰醋酸法对牛樟芝液体发酵菌丝体总三萜含量进行分析。ITS序列分析结果表明菌株AC1404和AC001的ITS序列完全相同,长度均为593 bp,AC 620菌株的长度为581 bp。供试菌株AC001、AC1404和AC620菌丝体中的三萜含量分别为34.30、18.47和16.68 mg·g-1(DW),菌株AC001与AC1404和AC620间菌丝三萜含量差异极显著(P<0.01)。

牛樟芝总三萜超声提取及体外活性研究

为有效利用牛樟芝资源,以人工固体培养牛樟芝菌丝体为原料,采用响应面法优化牛樟芝总三萜超声辅助提取工艺,比色法评价牛樟芝总三萜体外抗氧化活性,滤纸片法研究牛樟芝总三萜的体外抑菌活性。结果表明,超声辅助提取牛樟芝总三萜的最佳工艺条件为:提取时间41 min、提取功率80 W、料液比1∶20,总三萜得率为3.84%±0.18%。牛樟芝三萜提取物具有较强的还原能力,并能有效清除DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基,其半清除浓度(EC_(50))分别为0.29、0.50、0.33mg·m L^(-1),且清除率与质量浓度存在剂量效应关系;牛樟芝总三萜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌均具有明显的抑制作用,同浓度下对金黄色葡萄球菌具有较高的抑菌活性。本研究结果为人工固体栽培牛樟芝活性成分的综合开发利用提供了依据。

牛樟芝萜烯合成酶基因的克隆与鉴定

为了研究牛樟芝(Antrodia camphorata)倍半萜的生物合成,通过对牛樟芝基因组分析获得倍半萜类合成酶基因(AcTPS2),利用RT-PCR克隆获得其全长cDNA,对其进行生物信息学分析和表达谱分析。结果显示:AcTPS2基因cDNA全长1 068bp,Blast比对发现,AcTPS2含倍半萜类合成酶所独具的富含天冬氨酸序列DXXXD及萜类合成酶特有的RRDTSG-LDL保守序列;系统进化分析显示,AcTPS2基因与其他真菌的倍半萜聚为一类;表达谱分析显示,以甘露糖作为碳源、以酪蛋白胨作为氮源能够有效促进AcTPS2基因的诱导表达。研究结果可为以后牛樟芝倍半萜类生物合成提供一定的参考依据。

牛樟芝液体培养基优化及饮品加工工艺研究

通过对牛樟芝液体培养基进行优化,试验结果为,麦芽糖的添加量为3.0%,酵母浸膏添加量控制在0.65%,维生素B_1添加量0.65%,牛樟芝菌丝体鲜重达到最高值14.58 g/100 mL,且牛樟芝菌丝体的生长状况良好。此外,以综合评价为指标,在前期单因素试验的基础上,采用正交试验,分别考察蔗糖、食盐柠檬酸+柠檬酸钠、果胶+黄原胶质量添加量对牛樟芝饮品感官品质的影响。试验结果表明,牛樟芝菌丝饮品最佳添加比例即蔗糖的添加量为4%,食盐添加量控制在0.03%,柠檬酸0.4%+柠檬酸钠0.04%,果胶0.04%及黄原胶0.09%。此配方,制得的牛樟芝菌丝饮品的外观、口感及风味的综合值均保持在最高。

牛樟芝胶囊对大鼠四氯化碳肝损伤的保护作用研究

目的:观察牛樟芝胶囊对四氯化碳(CCl_4)所致大鼠肝损伤的保护作用,并与甘草酸二铵胶囊作用效果进行比较。方法:用CCl_4制备大鼠中毒性肝损伤模型,观察牛樟芝胶囊对大鼠血清中ALT、AST和乳酸脱氢酶(LDH)变化的影响,以及对肝脏病理损伤的作用。结果:模型对照组与阴性对照组比较,动物体质量降低,肝脏绝对质量(15.13±2.01)g和相对质量(4.32±0.36)g/100 g增高,ALT(189.9±50.4)IU·L^(-1)、AST(249.1±47.6)I U·L^(-1)、LDH(1 740.8±522.0)IU·L^(-1)均显著增高(P<0.05),肝组织病理损伤明显加重,肝损伤模型成立。中剂量牛樟芝胶囊(1.08 g·kg^(-1))可使肝损伤大鼠的ALT(126.7±31.4)IU·L^(-1)、AST(175.2±38.9)IU·L^(-1)、LDH(1 013.7±342.5)IU·L^(-1)明显降低(P<0.05);高剂量牛樟芝胶囊(1.62 g·kg^(-1))可使肝损伤大鼠的ALT(138.0±50.0)IU·L^(-1)和AST(189.1±56.7)IU·L^(-1)明显降低(P<0.05),肝组织病理损伤明显改善(P<0.05),优于甘草酸二铵胶囊。结论:牛樟芝对大鼠CCl_4肝损伤有保护作用。

3种樟属植物对皿式培养牛樟芝菌丝生长的影响

【目的】研究3种樟属植物对皿式培养牛樟芝(Antrodia camphorata)菌丝生长的影响,为牛樟芝的人工培养提供科学依据。【方法】以实验室保存的牛樟芝为研究材料,首先在基因组水平对其进行分子鉴定,然后在皿式培养基中分别添加一系列浓度的牛樟、香樟和樟树木屑的热水提取物、乙醇提取物,比较牛樟芝菌丝的扩散直径和菌丝状态,分析3种樟属植物对牛樟芝菌丝生长的影响。【结果】(1)经鉴定本研究用的牛樟芝为模式菌株BCRC35396,GeneBank登录号为AY378094。(2)香樟的热水提取物最能促进牛樟芝菌丝的扩散,牛樟次之,樟树最弱;综合考虑菌落的生长状态,樟树的添加是最优的,牛樟次之,香樟最差。(3)3种樟属植物乙醇提取物添加至培养基后,樟树最能促进牛樟芝菌丝的扩散,牛樟和香樟作用效果类似,次于樟树;添加樟树乙醇提取物后菌落生长状态最优,牛樟次之,香樟最差。【结论】本研究认为在牛樟芝皿式培养时可以添加牛樟或樟树木屑提取物来促进牛樟芝菌丝体的生长。该研究为牛樟芝的皿式培养提供理论基础和技术支撑。