用Na_2SO_4提高牛眼透明质酸回收率的研究

通过 Ｎａ Ｃｌ和 Ｎ ａ２ Ｓ Ｏ ４ 溶解牛眼透明 质酸粗制品对透明质酸（ Ｈ Ａ ）提取率及纯度影响的比较研究，发现 Ｎ ａ２ Ｓ Ｏ ４ 比 Ｎ ａ Ｃｌ 对 Ｈ Ａ 提取率提高 ５ 倍以上，实验品的纯度达到 ９９３％ 。

从牛眼玻璃体中分离纯化透明质酸的新方法

为了得到一种简便的从动物组织中分离纯化透明质酸(HA)的新方法,用牛眼玻璃体为原料,对HA的分离纯化进行了研究。在ρ(NaHCO3)=7.56 g/L和ρ(Na2CO3)=1.06 g/L的碱性缓冲水溶液中,用胰蛋白酶水解牛眼HA提取物中的蛋白质,经氯苯除杂后,用乙醇析出并分离得到HA初级沉淀物,将其溶解于ρ(NaC l)=11.6 g/L,ρ(NaH2PO4.12H2O)=0.45 g/L,ρ(Na2HPO4.2H2O)=0.06 g/L的含盐磷酸盐水溶液中,再用3倍体积的乙醇析出并分离得到HA的首次纯化沉淀物,此纯化阶段分离系数(α)=19.03,蛋白质和HA中w(HA)=63.9%,HA回收率91.84%。其次,用含盐磷酸盐水溶液溶解HA的首次纯化沉淀物,再加入ρ(活性炭)=50 g/L及ρ(高岭土)=100 g/L进行吸附纯化,此纯化阶段分离系数(α)=27.69,HA回收率94.0%,w(DNA)=0%,蛋白质和HA中w(HA)=98.0%。最后,经50 000 Da透析袋用去离子水透析4 h,用乙醇析出并分离得到纯化了的HA沉淀,此纯化阶段分离系数(α)=17.64,HA回收率93.5%。最终HA沉淀经冷冻干燥后获白色粉末状HA纯化品,无水HA纯化品中w(HA)=99.77%,HA相对分子质量Mη=6.3×105。该方法牛眼玻璃体质量扩大至2 000 mL的扩试结果与小试结果相近。该文报道工作的新颖性,已为2007年4月18日由陕西省科学技术信息研究所查新中心出具的第2007360-3号《科技查新报告》所证实。

广东口岸首次截获美国苹果牛眼果腐病

苹果牛眼果腐病(Bull’s Eye Rot on Apple)是欧美苹果产区存在历史达百年、我国尚未分布的进境植物检疫性真菌病害,寄主植物包括苹果、梨等多种蔷薇科果树。2009年4月29日广东检验检疫局在全国首次从经高明口岸入境的美国苹果中截获该病,至2009年9月初,广东局累计有4个口岸从美国进口苹果中截获该病,共计8次。本文归纳了苹果牛眼果腐病的发生分布、寄主范围、病原菌及其形态特征、侵染为害特点及症状,提出了操作性强的检疫鉴定方法和程序,分析评估了该病的风险和经济意义。

基于改进DenseNet的牛眼图像特征提取方法

针对牛眼图像特征提取过程中由于梯度消失和过拟合造成的识别准确率较低的问题,提出一种基于改进DenseNet的牛眼图像特征提取方法。首先采用缩放指数线性单元(SeLU)激活函数防止网络梯度消失;其次通过DropBlock随机丢弃牛眼图像的特征块,从而防止过拟合,并加强网络的泛化能力;最后将改进后的稠密层进行叠加以组成改进的DenseNet(Dense convolutional Network)。在自建牛眼图像数据集上进行特征信息提取识别实验的结果表明,改进后的DenseNet识别准确率、精确率和召回率分别为97.47%、98.11%和97.90%;较改进前的网络在识别准确率、精确率和召回率上分别提升了2.52个百分点、3.32个百分点和2.94个百分点,可见改进后的网络具有较高的精度与鲁棒性。

大麻素对牛眼小梁细胞增殖、粘附和迁移的影响

目的:通过研究内源性大麻素物质(anandamine,AEA),对体外培养的牛眼小梁细胞的增殖、黏附以及迁移功能的影响,探讨AEA降低眼压的机制。方法:对牛眼小梁细胞进行体外原代培养及传代培养,应用免疫组化的方法(NES,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,化学及透射电镜观察。对3代牛眼小梁细胞分别以含AEA10,1,0.1,0μmol/L DMEM(含100ml/L小牛血清)培养液进行干预,分别于24,2h,2h后用MTT法计数细胞,再利用计算机统计软件进行数据分析,观察其对牛眼小梁细胞的增殖、粘附及迁移功能的影响。结果:内源性大麻素,在一定浓度范围内,对体外培养的牛眼小梁细胞的增殖、粘附及迁移功能均有较为明显的抑制作用(P<0.05)。结论:由此,可以了解到AEA可能是通过影响小梁细胞的增殖、粘附及迁移功能来改变房水流出途径的阻力,而降低眼内压。

血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛眼小梁细胞微管及微丝动力学影响的研究

目的 研究血管紧张素 (angiotensin ,Ang )对体外培养的牛眼小梁细胞骨架的动力学影响 ,探讨 Ang 对房水的调节作用及在青光眼发病机制中的意义。方法 (1)牛眼小梁细胞的体外培养 ,应用免疫组化方法 (NSE, 因子相关抗原染色 )细胞鉴定 ,光学及电子透射显微镜对细胞进行形态学及生长特性的观察 ;(2 )以含不同浓度 Ang -的培养液孵育小梁细胞 12～ 2 4h,(终浓度分别是 10 - 5、10 - 6、10 - 7m ol· L- 1 )。免疫组化法 (SABC)对α- sm ooth- actin、tubulin-α染色。结果以计算机图像分析系统分析 ,并统计学检验。结果 牛眼小梁细胞培养成功 ,成活率 80 %～ 10 0 % ,上皮型为主 ,Ang 产生明显的细胞收缩效应 ,actin是收缩的主要效应器。结论 体外培养牛眼小梁细胞技术是研究小梁细胞特性的重要实验技术。 Ang 可以引起小梁细胞的浓度依赖性的收缩 ,提示 Ang可能是房水排出途径的调节因子之一 。

牛眼透明质酸的毒性评价

目的对牛眼透明质酸的毒性进行评价。方法按照国家化妆品安全性评价程序和方法研究牛眼透明质酸对豚鼠皮肤和小鼠灌胃的急性毒性 ,对家兔皮肤和眼睛的刺激性 ,豚鼠的皮肤变态反应。结果对豚鼠经皮给药的LD50 >2 g/kg ,小鼠灌胃LD50 >10 g/kg ,对家兔眼及皮肤无刺激性 ,对豚鼠无变态反应 ,但有累积性致敏反应。结论牛眼透明质酸钠毒性及刺激性甚微 ,对皮肤的累积致敏反应可能与SO4 2 -有关。

内源性大麻素对体外培养的牛眼小梁细胞PGE2表达及细胞骨架的影响

目的:研究内源性大麻素N-花生四氢酸氨基乙醇(anan-damide,AEA)对体外培养的牛眼小梁细胞细胞骨架及PGE2表达的影响。方法:对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,并行鉴定。对传3代的牛眼小梁细胞分别施加AEA浓度分别为0,0.1,1.0,10μmol/L的无血清培养液,作用24h后提取细胞上清液,并将细胞置于倒置显微镜下摄像,计算机图像分析系统计算细胞面积。用ELISA法检测PGE2浓度的变化。结果:AEA可以产生明显的细胞舒张效应,呈浓度依赖性。而且在一定范围内可以成剂量依赖性的促进PGE2的表达。与对照组均有显著性差异(P<0.05)。结论:AEA可引起小梁细胞的舒张和促进PGE2的释放。

牛眼透明质酸的分离及性质测定

研究了牛眼透明质酸（ＨＡ） 的提纯方法， 采用０－１２５ ｍｏｌ／ＬＮａ２ＳＯ４ 取代０－１ ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 溶解粗品， 发现前者溶解液中有２ 个组分， 一个组分被十六烷基溴代吡啶（ＣＢＰ） 吸附回收， 产物呈纤维状， 另一组分保留在溶液中并能通过分级稀释而被沉淀回收， 产物呈粉末状； 而用０－１ ｍｏｌ／ｍｌ ＮａＣｌ 溶解粗品， 除了被ＣＢＰ吸附回收外， 保留在溶液中的ＨＡ 不能被回收； 与同类方法相比， 回收率提高１－７ 倍以上． 还分析了产物的性质， 与同类样品比较， 提高了纯度， 降低了提纯中有机溶剂的消耗．

硒对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-2和TIMP-1分泌的影响

目的:了解硒对体外培养牛眼小梁(TM)细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌的影响,探讨硒在原发性开角型青光眼(POAG)发病机制中的作用。方法:用含有1,2,5和10μg/L有机硒化合物(MSeA,甲基硒酸)的无血清DMEM分别孵育TM细胞,对照组(Co)加入不含实验药物的无血清DMEM分别孵育TM细胞24h,用免疫组织化学法对MMP-2进行定性和半定量检测,Western印迹法对TIMP-1进行定量检测。结果:硒化合物可减少MMP-2和TIMP-1的分泌。结论:硒通过改变MMP-2和TIMP-1的分泌,影响房水流出通路上细胞外基质之间相互转化的平衡,增加房水流出阻力,参与POAG的发病。

牛眼虹膜定位算法研究及其在肉食品追溯系统中的应用

为实现动物个体的精确鉴别,提高肉食品的安全性,将动物虹膜识别技术引入到肉食品供应链中,构建了基于虹膜识别的肉食品安全可追溯系统业务流程,实现了肉食品"从农场到餐桌"的安全保障;并以牛眼虹膜为例,根据其非同心椭圆的结构特征和图像仿射变换不变特征的原理,提出了一种牛眼虹膜快速定位方法。将牛眼虹膜内、外边界分别转化为圆形,对内边界采用灰度均值法粗定位与"三点定圆"精定位相结合的方法实现,对外边界设计了一种逐点扫描分层圆环算法来精确拟合。实验结果表明:该方法避免了虹膜信息丢失,减少了空间参数的选择运算。

牛眼透明质酸分级制备

采用分级分离并结合有机溶剂沉淀法，从牛眼中纯化出高纯度透明质酸。较其它方法简便，易形成规模，对提高资源利用率和经济效益有积极意义。

肿瘤坏死因子-α对体外培养的牛眼小梁细胞MMP_3,MMP_9和TIMP-2表达的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3,MMP9和TIMP-2表达的影响,探讨原发性开角型青光眼的发病机制。方法:对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法(NSE,Ⅷ因子相关抗原染色)鉴定细胞,化学及电子透射电镜对细胞进行形态学及生长特性的观察;对传3代的小梁细胞分别施加含TNF-α终浓度为0,12.5,25,50μg/L的培养液,48h后行MMP3和MMP9免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。分组提取细胞培养液用ELASA检测TIMP-2量的变化。结果:体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3及MMP9,TNF-α可增加MMP3及MMP9的表达,并且抑制TIMP-2的表达。结论:TNF-α在一定范围内可以增加MMP3及MMP9的表达(P<0.05),并抑制TIMP-2的表达(P<0.01),故TNF-α可以减少小梁细胞细胞外基质的堆积,使房水引流通畅,对激光小梁成形术的手术原理有一定的说明意义。

牛眼玻璃体透明质酸的研制及应用

从牛眼玻璃体制备了透明质酸,所得样品的理化分析结果表明其质量达到眼科用的要求,动物实验及眼科临床试用后认为其制剂可用于眼科临床。

牛眼前房小梁细胞体外培养的建立

牛眼前房小梁细胞体外培养的建立杨新光，李美玉，张东杲（唐都医院眼科西安７１００３８北京医科大学北大医院眼科）关键词细胞培养；小梁网；牛眼中图号Ｒ７７５．２前房角小梁网是房水排出的主要途径，也是目前认为原发性开角型青光眼的主要病变所在．房水流出通道的大...

花生四氢酸氨基乙醇对体外培养的牛眼小梁网细胞基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响

目的观察花生四氢酸氨基乙醇(AEA)对体外培养的牛眼小梁网细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法对牛眼小梁网细胞进行原代及传代培养,并进行鉴定。对传3代的牛眼小梁网细胞分别施加AEA浓度为0.0、0.1、1.0、10.0μmol·L-1的无血清培养液,作用24 h后提取细胞上清液,并制备10.0μmol·L-1作用6、12、18、24 h的细胞上清液,用酶联免疫吸附测定法检测AEA作用后细胞上清液中MMP-3及TIMP-1水平的变化。结果随着AEA浓度的增加,MMP-3及TIMP-1水平均逐渐增加,并呈剂量依赖性(P<0.05)。10.0μmol·L-1AEA作用6、12、18、24 h后的MMP-3、TIMP-1水平均高于0.0μmol·L-1组(P<0.05),且MMP-3、TIMP-1水平随着作用时间的延长逐渐增加,各时间点之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论AEA可以促进MMP-3的分泌,早期AEA可以抑制TIMP-1的分泌,进一步打破MMP-3及TIMP-1的平衡,影响细胞外基质的降解,从而起到降低眼压的作用。

进境美国苹果牛眼果腐病病原真菌(Neofabraea perennans)的鉴定

【目的】探明进境截获的美国苹果牛眼果腐病的病原真菌种类,为评估病菌的入侵风险提供科学依据。【方法】对苹果（Malus domestica）腐烂果实的症状特点、病菌的形态特征与培养特性进行观察,对分离物的致病性和DNA序列进行分析。【结果】32批次腐烂果实均表现果梗凹腐烂症状,病部较坚硬,病斑圆形褐色,中央色浅形似牛眼状。累计从病果上分离46株菌株,菌落圆形,气生菌丝稀少,白色至乳白色,加深至黄褐色至黑褐色,并形成深浅褐色相间同心轮纹,菌丝体最适生长温度15~20℃,经柯赫法则证实为病原菌。在病果及PDA上,病菌形成奶油色胶质状分生孢子盘,分生孢子梗瓶梗状,大型分生孢子及小型分生孢子圆柱形、直或下部稍弯曲、无色透明、单胞。基于β-微管蛋白基因序列的系统发育分析,8个代表性的分离物与已知的苹果牛眼果腐病菌Neofabraea perennans聚在同一簇。【结论】根据症状学、形态学与致病性及系统发育分析,将屡次从进境美国苹果中截获的苹果牛眼果腐病病原真菌鉴定为Neofabraea perennans,是我国高度关注的进境植物检疫性有害生物,对我国果树的生产存在安全隐患。

牛眼球内部结构标本的制作

人眼球体积小巧，内部结构精细复杂，在实验教学中很难观察清楚：对此，一般都用牛眼代替进行实验教学。然而．有关牛眼内部结构标本的制作方法鲜有报道，作者根据实验教学经验，介绍牛眼内部结构标本制作及实验教学方法。

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的 探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法 采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P<0.05),而促进透明质酸的合成(P<0.05)。0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅳ型胶原(P<0.05),而0.001mg/ml维拉帕米无此作用(P>0.05)。结论 维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。