高效液相色谱-串联质谱法检测牛组织和奶中咪多卡残留的研究

建立了一种检测牛组织和牛奶中咪多卡残留检测的高效液相色谱-串联质谱法。牛组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪)和奶在NaAc缓冲体系中酶解,经HCl溶液提取,WCX固相萃取柱净化,以0.3%甲酸水溶液(含20 mM甲酸铵)和0.3%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,在HILIC色谱柱上分离,在电喷雾正离子(ESI^(+))模式下,用多反应监测(MRM)模式检测,同位素内标法定量。结果表明:咪多卡在2.5~1000 ng/mL的浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数(R^(2))大于0.99;咪多卡在牛组织和奶中的检测限均为10μg/kg,定量限均为20μg/kg;咪多卡在牛组织和奶中20~4000μg/kg添加浓度水平上的回收率在70.9%~109%范围内;批内RSD在0.55%~9.59%之间,批间RSD在2.21%~12.1%之间。该方法具有灵敏度高、定量准确,重复性好等特点,可以满足牛组织和奶中咪多卡残留检测的要求。

液相色谱串联质谱法测定牛组织中氨丙啉残留量

建立了牛组织中氨丙啉残留量的液相色谱串联质谱测定方法。样品经磷酸盐缓冲液提取后用HLB小柱净化,甲醇洗脱,洗脱液氮吹后用0.1%甲酸-甲醇（90∶10,V/V）溶解,进行LC-MS/MS分析。采用XBridgeTMC18色谱柱分离,用0.1%甲酸-甲醇（90∶10,V/V）作为流动相等度洗脱,电喷雾正离子（ESI＋）模式电离,多反应监测（MRM）模式检测,外标法定量。氨丙啉浓度在5~2000 mg/L范围内具有良好的线性关系,线性相关系数大于0.999;方法检出限为3.50 mg/kg;定量限为11.7 mg/kg。3种组织（牛肉、牛肝和牛肾）添加浓度为25,250,500和750 mg/kg时,平均回收率在81.6%~92.8%之间,批内和批间相对标准偏差均小于15%。

氟佐隆在牛组织中残留消除规律的研究

为研究氟佐隆在牛组织中的残留消除规律,1.5 mg/kg体重氟佐隆皮下注射干奶期荷斯坦奶牛,分别于用药后2周、6周、8周、10周、12周和16周用高效液相色谱法(HPLC)检测牛肌肉、肝脏、肾脏和不同部位脂肪中氟佐隆的残留量。HPLC方法的检测限(LOD)为0.02 mg/kg,定量限(LOQ)为0.08 mg/kg。结果表明,氟佐隆残留消除速度较慢,在脂肪组织中的残留量远高于其他组织。氟佐隆在组织中的残留量:脂肪>肝脏>肾脏>肌肉。肌肉中残留量在用药后8周达到峰值,12周后低于检测限;肝脏和肾脏中残留水平在用药后10周达到峰值,16周后接近或低于检测限;脂肪组织中10周后达到峰值,16周后仍高于检测限。皮下、腹部和肾脏脂肪中的残留量没有明显差异(P>0.05)。1.5 mg/kg体重皮下给药后氟佐隆在牛组织中的残留量均不超过JECFA规定的残留限量。

高效液相色谱法测定牛组织中三氯苯唑及其代谢物残留量的研究

建立了一种可同时检测牛组织中三氯苯唑及其代谢物三氯苯唑酮药物残留的高效液相色谱-紫外检测法。牛组织样品经乙腈提取,异辛烷去脂肪,PPL柱净化。以0.02 mol/L乙酸铵溶液和乙腈溶液为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长296 nm。结果表明,三氯苯唑、三氯苯唑酮在20~1200 ng/m L范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,R2均大于0.999。方法的最低定量限为50μg/kg。三氯苯唑、三氯苯唑酮在50~600μg/kg的浓度添加水平上,其回收率在70%~100%范围内,批内、批间的相对标准偏差小于20%。

牛组织高质量总RNA和mRNA的提取

实验以牛肌肉、肝脏等组织为材料,分别应用一步法和磁珠法提取总RNA和mRNA,通过反复试验分别改进提取过程中的部分操作步骤。结果表明:提取的的RNA和mRNA具有较好的均一性和完整性,符合进一步研究的需要。为不具备专用RNA操作间的实验室开展此方面的工作提供参考。

重金属元素铅和镉在肉牛组织中的积累与分布

以10头牛的肠、胃、肝脏、肌肉、脾脏、肾脏、心脏和胰脏等组织为研究对象,检测其铅和镉含量。结果表明:牛的肾脏、肝脏对镉有着较强的富集能力,均值分别达到209.4和44.5μg.kg-1,与其他器官相比达到显著水平(P<0.05);而牛肚、牛肠、肌肉、脾脏、心脏、胰脏中的镉累积量较低,尤其是肌肉,最低可至0.22 ng.kg-1。牛肚、肾脏对铅有较强的积累,与其他器官相比达到极显著(P<0.01),且其他器官中的铅含量相对较低。这一结论为制定牛肉制品,特别是可食用组织器官的重金属元素限量标准提供了理论依据,并为家畜可食用组织器官的重金属风险评估提供了参考。

抗IVM多克隆抗体检测牛组织中IVM残留的研究

用自制的抗伊维菌素(IVM)多克隆抗体检测牛肌肉和肝脏中IVM的残留,将IVM以5.0ng/g、10.0ng/g、20.0ng/g和40.0ng/g的量分别添加至经处理的各空白组织中,用竞争ELISA法测得IVM在肌肉和肝脏中的回收率为93.9%-98.3%,变异系数为2.1%-5.1%,最低检测限为0.94ng/g。

贵州牛组织镉污染与饲养环境的相关性研究

目的:通过设立研究点的方法,研究了贵州地区不同污染水平下牛组织中镉的含量和与饲养环境的相关性。结果:①贵州牛的组织Cd的污染情况较严重,在不同污染水平条件下养殖的牛的肾脏和肝脏,Cd的平均含量均超过国家肉类制品卫生限量标准。②贵州在表介质具有高Cd含量的背景分布特征,三个研究区内土壤中Cd的含量均超过我国《土壤环境质量标准》中三级土壤的最高限量值。在中度污染区和污染区牛饲料都存在着Cd的污染,尤其是污染区,其饲料中镉的含量严重超过国家限量标准。③牛组织镉元素含量与饲养环境中的土壤、饲料和饮用水源镉含量和污染程度密切相关,其相关系数r>0.92。结论:贵州的高镉地质背景,以及饲养环境和饲料镉污染是牛组织中镉的含量高的重要因素。应从牛肉产品安全生产的各个环节,加强饲养环境质量管理和污染控制技术的研究,减少污染物从家畜饲养环境向家畜体内的迁移和蓄积。

牛组织重金属含量与饲养环境的相关性

通过选择不同污染程度的区域进行取样,分析了贵州地区不同污染水平下牛组织中重金属(Cu、Zn、Pb、Cd)的含量和与饲养环境的相关性。结果表明:贵州不同污染水平下牛组织中的Cu、Zn基本符合国家食品卫生要求,Pb只有污染地区的肝脏和肾脏超过限量标准,Cd污染较严重,除非污染区肝脏外,牛肾脏和肝脏中Cd的平均含量均超过国家肉类制品卫生限量标准,但肌肉组织符合卫生标准;牛组织重金属元素含量与饲养环境中的土壤、饲料和饮用水源的重金属含量和污染程度密切相关,尤其是肾脏组织,其相关系数r>0.78。饲料向牛组织的重金属迁移系数,随饲料元素含量的增加而逐渐降低,其中Cd的迁移系数最大,Pb的迁移系数最低;必需元素和有害元素在不同组织中的比值,随污染程度的增加而降低。肾脏的Cu/Cd和Zn/Cd值比其它组织低得多,Cd主要在肾脏中蓄积,Cu主要在肝脏组织蓄积,Zn主要在肌肉和肝脏,Pb主要在肾脏和肝脏。

固相萃取-高效液相色谱法同时测定牛组织中三氮脒和氯化氮氨菲啶残留

建立了固相萃取-高效液相色谱同时检测牛组织中三氮脒(DIM)和氯化氮氨菲啶(ISM)残留的分析方法。针对不同的组织样品采用不同比例的水-乙腈溶液提取药物,结合Oasis WCX固相萃取小柱净化富集。采用Spherisorb CN柱(250 mm×4.6 mm,5μm)对药物进行分离,以乙腈和0.05 mol/L甲酸铵溶液(pH 2.4)为流动相,梯度洗脱,紫外检测波长为380 nm。牛组织中DIM和ISM的检出限(S/N≥3)为0.01 mg/kg,定量限(S/N≥10)为0.025 mg/kg。牛组织中DIM和ISM在各自的线性范围内线性关系良好(r≥0.999 3)。DIM和ISM在低、中、高添加水平下的回收率为82.2%~97.6%,日内精密度和日间精密度分别为0.3%~5.2%(n=5)和1.3%~5.2%(n=15)。结果表明,建立的方法重复性好,灵敏度高,操作简便,适用于牛组织中DIM和ISM的残留检测。

用新的灵敏的生物法测定牛组织中的舒巴克坦

本文介绍了一种测定舒巴克坦的生物杯碟新法,它可检出牛肌肉、脂肪、肾及肝组织中低于0.0μg/g的舒巴克坦,并被用于人组织及体液的测定。此法不同于以前所描述的所有方法,因它是基于舒巴克坦抑制那些混和在琼脂平板上的无细胞β-内酰胺酶的。此法且不受氨苄青霉素存在的影响,即使氨苄青霉素量10倍于舒巴克坦也无妨。本文讲述了分析技术的正确性及精密度。此分析法能应用于组织采血的研究。舒巴克坦(CP-45899)是一种新的半合成β-内酰胺酶抑制剂。

超高效液相色谱-串联质谱法检测牛组织中常山酮残留量

为了建立牛组织中常山酮残留量的超高效液相色谱-串联质谱检测方法,将牛组织中的常山酮经蛋白酶酶解后,采用乙酸乙酯提取,HLB固相萃取柱净化,超高效液相色谱-串联质谱法进行检测。在0.5 ng/mL~50 ng/mL线性范围内,常山酮的回归方程呈良好的线性关系,R2>0.998,牛组织样品在添加水平为0.5、5μg/kg时,回收率为73.2%~93.60%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.91%~7.96%,方法检出限为0.25μg/kg,定量限为0.5μg/kg。本试验适用于牛组织中常山酮残留量的检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪牛组织中甲基盐霉素残留量

建立超高效液相色谱-串联质谱法测定猪牛组织中甲基盐霉素残留量。猪、牛组织中残留的甲基盐霉素,经乙腈溶液提取,硅胶固相萃取柱净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。甲基盐霉素在5 ng/mL~250 ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,甲基盐霉素在猪、牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中的检测限均为2.5μg/kg,定量限均为5.0μg/kg,猪牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中5.0 ng/g~100 ng/g添加浓度范围内的回收率均值为71.9%~88.4%,批内批间RSD值均<15%。

牛不同组织中稳定性同位素氢、氧、硫组成探讨

为研究牛不同组织中氢、氧、硫稳定同位素的组成变化情况以及品种对其的影响,利用同位素比率质谱仪测定了不同部位脱脂牛肉、牛尾毛、血液、肝脏中的δ2H值和δ34S值及牛肉抽提水中的δ2H,δ18O值。结果显示,品种因素不影响组织中的硫同位素组成,但对氢同位素组成的影响尚不确定;肌肉不同部位、血液、肝脏、牛尾毛之间的δ2H值、δ34S值均有极显著差异,但各组织间的δ34S、δ2H值相关关系不明显;肉品水中δ2H值与δ18O值存在较强的相关关系。这些结果说明稳定性同位素氢、硫在牛不同组织中的分馏效应是不一致的,在进行牛肉溯源研究时,应根据研究目的和研究对象选择合适的组织。

稳定性同位素碳、氮在牛不同组织中的变化规律

稳定同位素分析是追溯食品来源的一种有效技术。本文主要探讨了在相同饲养条件下,牛不同组织中碳、氮同位素组成的变化情况以及品种对其影响。利用同位素比率质谱仪测定了不同部位脱脂牛肉、不同部位粗脂肪、牛尾毛、血液、肝脏及饲料中的δ13C值和δ15N值,并进行了统计分析。结果表明,品种因素不影响组织中的碳、氮同位素组成;肌肉不同部位、血液、肝脏、牛尾毛之间的1δ3C值无显著差异,而肝脏中的δ15N值极显著地高于其他组织;不同部位粗脂肪间的δ13C值也无显著差异。结果说明稳定性同位素碳、氮在牛不同组织中的分馏效应是不一致的。

饲料中添加蒙脱石对肉牛组织中镉铅铜铁锌含量的影响

本研究通过在精饲料中添加蒙脱石喂养杂交牛的方法,探讨蒙脱石对动物体内必需微量元素铜、铁、锌及有害元素镉、铅含量的影响。结果表明:与对照相比,喂蒙脱石的杂交牛日增重提高了14.96%(P<0.01),饲料转化率提高了9.22%(P<0.05);肾脏和脾脏中铅含量显著增加(P<0.05),肾脏、肝脏、脾脏和肠中镉的含量极显著增加(P<0.01),而血液中镉含量显著降低(P<0.01),其余组织中镉和铅的含量变化不显著;脾脏铜和铁含量极显著减少(P<0.01),肾脏中锌含量极显著增加(P<0.01),肝脏和肌肉组织中铁含量显著增加(P<0.05),其余各组织中的变化不显著(P>0.05)。结论:在饲料中添加蒙脱石,可在不同程度上改变铅、镉、铜、锌、铁在动物体内各器官和组织中的分布水平,但不能有效降低肉牛各组织中铅、镉的蓄积。

HIFU在牛肝组织中的传播衰减研究

运用辐射压力法研究高强度聚焦超声在牛肝组织中的传播衰减。在室温 2 0℃下 ,利用 4种治疗超声换能器 ,在不同的换能器表面输出声功率下 ,分别测量 2 0、4 0、6 0、80 m m不同厚度新鲜离体牛肝在放入脱气水前后的声辐射力 F、F′,然后计算出声衰减。使用治疗超声换能器 4 ,对于不同辐照深度 ,以声强 ISATA=2 2 .0× 10 3W/cm2、辐照时间 5 s的超声剂量定点辐照新鲜离体牛肝 ,以断层方式剖开后测量凝固性坏死组织体积。研究结果表明 ,对于一个具体的治疗超声换能器 ,在牛肝厚度一定时 ,辐射力穿透率 F′/F法与换能器表面声强及样品近治疗超声换能器表面声窗面积无关。采用最小 F′/F法拟合得出辐射力穿透率随牛肝厚度增加呈指数规律递减 ,且与凝固性坏死组织体积随牛肝厚度 (辐照深度 )增加呈指数规律递减趋势一致。采用最小二乘法拟合得出高度聚集超声在牛肝组织中传播的声衰随频率近似线性增加且呈幂函数关系。

牛眼组织中的自由基测定

使用顺磁共振仪,测定比较了真空低温条件下冻干的正常牛眼7种组织中的自由基含量。结果显示,从7种组织中均获得了明确的自由基信号(g因子=2.0048),但不同眼组织中的自由基含量差异颇大。每克干重的虹膜、睫状体、脉络膜、巩膜、视网膜、角膜和晶状体之自由基含量依次为1.74(±0.27)×10^(16)自旋数(N)、1.71(±0.18)×10^(16)N、1.54(±0.23)x10^(16)N、1.00(±0.09)×10^(15)、7.29(±1.43)×10^(14)N,4.45(±0.92)×10^(14)N和1.06(±0.16)×10^(14)N。

牛肾组织及其培养物的不同消化法效果评价

为了比较不同消化液及消化方式对牛肾皮质组织和培养后形成单层细胞的消化分散效果并确定最适消化液和消化方式,分别用0.25%胰蛋白酶和0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA两种消化液,消化牛肾皮质组织及其培养形成的单层牛肾皮质细胞。牛肾皮质组织采用热(37℃)和冷(4℃)两种消化方式;经培养形成单层的牛肾皮质细胞采用室温(25℃)消化。结果显示,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液热消化牛肾组织时,分散获得牛肾皮质细胞的活细胞数、存活率、贴壁率均优于其他消化方法,差异显著(P<0.05)。培养形成的单层牛肾皮质细胞用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液的消化速度明显快于用单一0.25%胰蛋白酶消化液的消化速度,统计学分析显示具有显著性差异(P<0.01),两种消化液消化所得细胞的存活率及贴壁率前者要更高,差异显著(P<0.05)。

组织工程牛心包补片在法洛四联症分期矫治中的应用

背景:行法洛四联症矫治手术时,对右室流出道狭窄较严重的病例,常需要行右室流出道补片加宽成形,目前采用的加宽材料有生物补片及人造织物补片等。目的:比较涤纶人造血管片和组织工程牛心包补片在法洛四联症分期矫治手术中加宽右室流出道的早期临床效果。方法:25例已行一期分流手术后再行二期心内矫治的法洛四联症患者,按照不同的二期手术时间分为两组:2007年4月至2010年7月接受二期手术的14例患者以涤纶人造血管片加宽右室流出道;2010年8月至2011年9月接受二期手术的11例患者,采用商品化的组织工程牛心包补片加宽右室流出道。比较两组术后早期的临床效果。结果与结论:25例患者中,仅涤纶人造血管片组术后死亡1例,术后开胸止血1例,所有均未出现免疫排斥反应和毒性反应。组织工程牛心包补片组术后呼吸机使用时间、体外循环稳定后测量的右心室与左心室收缩压比值、右心室流出道压差、心包腔引流量、术后ICU治疗时间和术后住院天数均少于涤纶人造血管片组(P<0.05)。说明采用组织工程牛心包补片加宽右室流出道的患者术后恢复较采用涤纶人造血管片的患者快,右室流出道疏通效果好,提示组织工程牛心包补片是法洛四联症患者分期矫治手术中加宽右室流出道的一种较理想材料。