紫花牡荆素对脂多糖诱导的BEAS-2B细胞损伤和NF-κB-Keap1-Nrf2/ARE通路的影响

目的:探讨紫花牡荆素(CAS)对脂多糖诱导的人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)损伤和NF-κB-Keap1-Nrf2/ARE通路的影响。方法:利用不同浓度的CAS预处理BEAS-2B细胞1 h、2 h、4 h,用1μg/ml脂多糖处理BEAS-2B细胞,构建细胞损伤模型,ELISA检测细胞上清炎症因子含量,筛选CAS最适作用浓度和时间;再将细胞分为正常组、模型组、Casticin组、ML385组、Casticin+ML385组、地塞米松组;流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测细胞上清炎症因子的浓度,Western blot检测细胞NF-κB p65、p-NF-κB p65、Keap1、Nrf2以及细胞核中的Nrf2蛋白水平。结果:CAS最适作用条件为10μmol/L、2 h;与正常组相比,模型组的细胞凋亡率、炎症因子含量、p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,Casticin组和地塞米松组的细胞凋亡率和炎症因子含量显著降低(P<0.01),Casticin组p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著升高(P<0.01);与ML385组相比,Casticin+ML385组的细胞凋亡率,炎症因子含量,p-NF-κB p65和Keap1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),细胞和细胞核中Nrf2蛋白的表达水平显著升高(P<0.01)。结论:CAS通过调节NF-κB-Keap1-Nrf2/ARE信号通路,抑制脂多糖诱导的细胞炎症。

牡荆素调控AMPK/NLRP3途径介导的细胞焦亡对大鼠急性咽炎的作用机制研究

目的:基于AMPK/NLRP3信号通路探究牡荆素对大鼠急性咽炎的影响及其调控机制。方法:60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、阿莫西林组和牡荆素低、中、高剂量组,每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用咽部定向喷射25%氨水的方法构建急性咽炎模型。牡荆素各剂量组大鼠分别腹腔注射3、6、12 mg/kg牡荆素;阿莫西林组大鼠给予0.36 g/kg阿莫西林灌胃;其余腹腔注射等量0.9%生理盐水。各组大鼠于给药干预7 d后进行行为状态评分、咽部组织病理学染色观察,并进行血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)检测,筛选出牡荆素最佳给药剂量;同时检测咽部组织焦亡相关蛋白及AMPK/NLRP3表达。随后将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、牡荆素组(腹腔注射12 mg/kg牡荆素)、牡荆素+CC(AMPK抑制剂)组(腹腔注射12 mg/kg牡荆素后,立刻注射20 mg/kgCC),每组各10只。除对照组外,其余各组大鼠均采用咽部定向喷射25%氨水的方法构建急性咽炎,造模后使用相应药物干预,1次/d,共干预7 d。苏木素-伊红(HE)染色观察咽部组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平;Western blot检测咽部组织AMPK/NLRP3通路及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与模型组相比,牡荆素各剂量组大鼠行为状态评分均显著降低(P<0.05),血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平降低(P<0.05),咽部组织病理性损伤明显减轻,且呈剂量相关性,筛选得出牡荆素12 mg/kg为最佳给药剂量。与模型组相比,牡荆素组大鼠咽部组织p-AMPK蛋白阳性率明显升高,NLRP3蛋白阳性率明显降低,细胞焦亡相关蛋白表达明显降低(P<0.05)。与牡荆素组相比,牡荆素+CC组大鼠咽部组织损伤程度加重,血清IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平,细胞焦亡相关蛋白和NLRP3蛋白表达显著升高,p-AMPK/AMPK降低(P<0.05)。结论:牡荆素能够通过调控AMPK/NLRP3信号通路,抑制细胞焦亡,进而改善大鼠急性咽炎。

紫花牡荆素对浅Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及机制研究

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探究紫花牡荆素(CAS)促进大鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组(生理盐水),模型组(5%羧甲基纤维素钠空白基质),CAS低、高剂量组(15 mL浓度为30、60 mmol/L的CAS药液),CAS高剂量+LY294002组[15 mL CAS药液(60 mmol/L)和PI3K抑制剂LY294002溶液(20μmmol/L)的混合溶液]和阳性对照组(厚涂京万红软膏0.5~1.0 cm),每组15只。除对照组外,其余各组均通过点燃皮肤表面混合烧伤燃料来构建浅Ⅱ度烧伤大鼠模型,并于烧伤后2 h内涂抹给药。给药28 d后,计算大鼠烧伤创面愈合率,观察大鼠烧伤创面中央组织病理变化,检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)水平,检测大鼠烧伤组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的磷酸化水平。结果与对照组比较,模型组大鼠皮肤组织表皮层和真皮浅层损伤、愈合状态较差,存在炎症细胞浸润且组织结构不完整等情况;血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、MMP-2、MMP-9水平均显著升高(P<0.05),血清中VEGF水平和烧伤创面中央组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05);与模型组比较,CAS低、高剂量组大鼠上述病理变化及血清和烧伤创面中央组织中上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且CAS高剂量组上述指标的变化较CAS低剂量组更明显(P<0.05);PI3K抑制剂LY294002的加入可逆转CAS对大鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用(P<0.05)。结论CAS可促进大鼠浅Ⅱ度烧伤创面的愈合,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

皂荚叶异牡荆素提取及抗氧化、抗菌性能研究

采用超声波预处理-乙醇回流法提取皂荚叶异牡荆素,在单因素试验基础上通过正交试验确定最优提取条件;测定提取物在不同的pH、温度、光照、金属离子及食品添加剂条件下对DPPH自由基的清除率,分析其抗氧化稳定性;并研究提取物对4种革兰氏细菌的抑制效果。结果表明:异牡荆素最优提取条件是乙醇体积分数100%、料液比1∶30(g/mL)、回流时间80 min、回流温度70℃;碱性、光照和金属离子Zn^(2+)、Cu^(2+)、Ca^(2+)、Al^(3+)、Fe^(3+)及H_(2)O_(2)对异牡荆素抗氧化稳定性影响较大,而金属离子Na^(+)、Co^(2+)、K^(+)、Mg^(2+)和温度对其影响较弱;体外抗菌试验证实,相比于其他3种测试菌,皂荚叶异牡荆素对大肠杆菌的抗菌活性最强。

基于Notch信号通路探讨牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用

目的基于Notch信号通路探究牡荆素对哮喘模型小鼠的改善作用及机制。方法采用卵清蛋白与氢氧化铝混悬液腹腔注射和卵清蛋白雾化激发的方法构建哮喘小鼠模型。将哮喘小鼠随机分为模型组、牡荆素组(40 mg/kg)、Notch激活剂组(1 mg/kg Jagged1)、牡荆素+Notch激活剂组(40 mg/kg牡荆素+1 mg/kg Jagged1),每组12只;另取12只小鼠设为对照组。各组小鼠灌胃/腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续14 d。末次给药后,检测小鼠静息每分钟通气量(VE)、呼气峰流速(PEF),观察肺组织病理形态并检测纤维化变性情况,测定外周血中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例并计算Th17/Treg值,测定血清中白细胞介素18(IL-18)、IL-6、IL-17、IL-10水平,检测肺组织中Notch1、Delta样配体4(DLL4)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生严重病理损伤及炎症细胞浸润;VE、PEF、外周血中Treg细胞比例、血清中IL-10水平均显著降低(P<0.05);肺组织中胶原容积分数(CVF),外周血中Th17细胞比例、Th17/Treg值,血清中IL-18、IL-6、IL-17水平,肺组织中Notch1、DLL4、Hes1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,牡荆素组小鼠肺组织病理损伤明显改善,上述指标变化趋势被显著逆转(P<0.05),且Notch激活剂Jagged1可显著逆转牡荆素对哮喘小鼠的上述药理功效(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Notch信号通路,改善哮喘小鼠肺功能、Th17/Treg免疫失衡及炎症反应,减轻肺组织病理损伤及纤维化。

牡荆素对脊髓损伤大鼠运动功能和炎症反应的影响

目的:探究牡荆素(VT)对脊髓损伤(SCI)大鼠和脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞的影响。方法:体内实验:将SD大鼠分为假手术组(sham组)、模型SCI组(SCI组)和VT低剂量组、VT中剂量组和VT高剂量组。采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠的运动功能;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠炎症因子基因和蛋白表达;苏木精—伊红(HE)染色观察脊髓组织结构。体外实验:将BV2小胶质细胞分为正常对照组(control组)、LPS组、VT低、中、高、剂量组和VT高剂量单独给药组,LPS诱导BV2小胶质细胞活化构建体外神经炎症模型;细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选VT安全浓度范围;RT-qPCR和蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测细胞炎症基因和蛋白表达水平。结果:体内实验:与SCI组比较,VT中、高剂量组的BBB评分明显升高,损伤第7天,VT中剂量组评分显著高于VT高剂量组(均P<0.05);VT中剂量组TNF-αmRNA表达较SCI组降低,VT中、高剂量组IL-10 mRNA表达较SCI组显著升高(均P<0.05);VT低剂量组、VT中剂量组和VT高剂量组的TNF-α蛋白水平显著降低(均P<0.05),VT各剂量组的IL-10蛋白水平显著升高(均P<0.05);HE结果显示,sham组脊髓组织结构完整,神经元数量较多、排列较为规则整齐;SCI组脊髓组织炎症细胞浸润,出现较多空洞,神经元减少萎缩且排列不整齐;与SCI组比较,VT治疗组损伤更小,炎症浸润减轻较为明显。体外实验:与LPS组相比,VT各剂量组的TNF-αm RNA表达显著降低(均P<0.05),且成剂量依赖性降低;VT各剂量组TNF-α蛋白表达量降低(均P<0.001)。结论:VT通过抑制大鼠炎症反应,减轻脊髓组织病理学损伤,改善损伤后脊髓局部微环境,从而保护受损脊髓神经元,达到促进运动功能恢复的作用。

牡荆素调控PERK-CHOP内质网应激途径对帕金森病模型小鼠神经功能的改善作用研究

目的探讨牡荆素调控蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-C/EBP同源蛋白(CHOP)内质网应激途径对帕金森病(PD)模型小鼠神经功能的改善作用。方法选取C57BL/6J小鼠60只,通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)构建PD小鼠模型,将小鼠随机分为激活剂组(50 mg/kg牡荆素+2 mg/kg的PERK激活剂CCT020312)、模型组、阳性对照组(20 mg/kg左旋多巴)、高剂量牡荆素组(50 mg/kg)、低剂量牡荆素组(25 mg/kg),每组12只,再选12只正常C57BL/6J小鼠,灌胃等体积的生理盐水作为对照组,以牡荆素、左旋多巴、CCT020312分组干预后,通过转棒实验、爬杆实验评估小鼠运动功能;HE染色观察脑部黑质区病理形态;免疫组化法检测小鼠脑组织黑质区TH表达;TUNEL染色检测小鼠海马区神经元凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;免疫印迹检测小鼠脑组织PERK、CHOP、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达。结果与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率、小鼠爬杆时间、黑质区病理损伤、脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平、脑组织CHOP、Bax、Caspase-3、PERK蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),下落潜伏期、TH阳性细胞数目显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量牡荆素组和阳性对照组小鼠爬杆时间、黑质区病理损伤、海马神经元凋亡率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平、脑组织Bax、Caspase-3、PERK、CHOP蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),下落潜伏期、TH阳性细胞数目显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);CCT020312减弱了高剂量牡荆素对PD小鼠海马区神经元凋亡、黑质区病理损伤和炎症的抑制作用。结论牡荆素可改善PD模型小鼠运动功能障碍,发挥神经保护作用,可能是通过抑制PERK-CHOP内质网应激途径实现。

基于细胞焦亡探讨牡荆素对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨牡荆素抑制细胞焦亡对小鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用C57小鼠建立肝脏缺血再灌注损伤模型,实验动物分为假手术组、模型组及牡荆素组;检测小鼠血清ALT、AST及IL-1β含量,qRT-PCR检测IL-1β与GSDMD mRNA的表达,western blot检测各组小鼠肝组织Caspase-1与GSDMD的表达。结果:与假手术组相比,模型组血清中ALT、AST与IL-1β水平明显升高;而与模型组相比较,牡荆素组ALT、AST与IL-1β水平明显降低(P<0.05)。同时,牡荆素可减少缺血再灌注诱导肝脏Caspase-1与GSDMD蛋白表达(P<0.05)。结论:牡荆素对小鼠肝缺血再灌注损伤具有明显的改善作用,其作用可能与抑制细胞焦亡有关。

牡荆素抗肥胖作用研究及其作用机制初探

目的:本研究旨在验证牡荆素对肥胖小鼠的疗效,并通过网络药理学与分子对接对其作用机制进行初步的研究。方法:通过给小鼠喂食高脂饲料造小鼠肥胖模型,随后喂食高脂饲料的同时给予牡荆素,对小鼠的体重进行称量,测定肝脏中的TC和TG含量,对肝脏和脂肪细胞进行H&E染色观察;利用网络药理学技术分析牡荆素治疗肥胖的关键通路。结果:使用高脂饲料喂养的小鼠在第4周与空白对照组之间存在明显的体重差异,表明造模成功;在给予牡荆素(3×10^(-2)mg·g^(-1))5周后,牡荆素组小鼠的体重增长趋势得到了显著的减缓;血脂水平的表明牡荆素能够减少肥胖小鼠肝脏中的TG和TC含量,从而降低肝脏脂肪滴并抑制脂肪细胞的增长。网络药理学KEGG富集结果显示PI3K-AKT通路可能是关键通路。结论:研究通过小鼠肥胖模型证实牡荆素在治疗肥胖方面的有效性。利用网络药理学和分子对接技术,发现牡荆素治疗肥胖的作用机制可能是通过PI3K/AKT等途径来实现的,这为膳食补充剂在肥胖治疗方面提供了有价值的数据参考。

紫花牡荆素抗肿瘤作用机制的研究进展

多甲氧基黄酮类化合物紫花牡荆素是中国传统中草药蔓荆子的主要活性成分之一,具有抗炎、抗肿瘤等功效。本文归纳总结紫花牡荆素抗肿瘤作用机制的研究进展,以期为紫花牡荆素抗肿瘤的进一步开发利用提供一定参考。

牡荆素调控Epac1/Rap1通路介导H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用机制

目的:研究Epac/Rap1信号通路在H9c2细胞缺氧复氧损伤中的作用,并探明牡荆素(vitexin,VT)调控Epac/Rap1信号通路保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用机制。方法:采用氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)构建H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤模型。实验随机分为7组:正常对照组、OGD组、OGD+VT组、OGD+Epac1激动剂(8-CPT)+VT组、OGD+Epac1抑制剂(ESI-09)+VT组、OGD+8-CPT+VT+PKA抑制剂(H-89)组、OGD+ESI-09+VT+H-89组。MTT检测细胞活力;LDH检测细胞损伤;Western blot检测H9c2细胞中Epac1及其下游Rap1-GTP、CaMK II和ERK蛋白的表达量;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中Epac1和Rap1蛋白的表达;PCR实时荧光定量检测H9c2心肌细胞中Rap1和Epac1的m RNA表达;钙离子荧光探针(Fluo-3 AM)检测细胞内[Ca^(2+)]i含量;Co-IP检测细胞中Epac1与Rap1的相互作用。结果:与正常对照组相比,OGD组H9c2心肌细胞在缺氧5 h复氧1 h后,LDH释放量显著升高,心肌细胞细胞活力显著降低,Epac1蛋白表达显著升高,Rap1活化,Rap1-GTP上调。VT(10μmol/L)可显著抑制OGD后H9c2心肌细胞Epac1的激活,继而抑制其下游Rap1活性形式Rap1-GTP的表达,另外CaMK II蛋白表达下调,但ERK磷酸化增加,同时减轻心肌细胞内钙超载;8-CPT可抵消VT的作用,ESI-09与VT联合处理后具有协同作用;H-89对心肌细胞Epac1及其下游相关蛋白表达无影响。结论:缺氧复氧可介导心肌细胞Epac1/Rap1信号通路激活,VT通过抑制Epac1/Rap1信号通路,下调CaMKⅡ蛋白表达,促进ERK磷酸化,对心肌细胞缺氧复氧损伤起保护作用。

紫花牡荆素调控PI3K/AKT通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究紫花牡荆素调控磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:肝癌细胞株HepG2、Hep3B经过培养并分为对照组、不同浓度紫花牡荆素(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)组、溶剂对照(体积分数0.1%的DMSO)组、溶剂+40μmol/L紫花牡荆素组、AKT激动剂SC-79(5μmol/L)+40μmol/L紫花牡荆素组。分组处理48 h后,检测细胞活力、细胞克隆数、细胞凋亡率及B淋巴细胞瘤基因(Bcl-2)、细胞色素C(CytC)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型caspase-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)的表达水平。结果:10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L紫花牡荆素以浓度依赖的方式降低HepG2、Hep3B的细胞活力;40μmol/L紫花牡荆素组HepG2、Hep3B的细胞克隆数及Bcl-2、CytC、p-PI3K、p-AKT的表达水平均低于对照组,Bax、Cleaved caspase-3的表达水平高于对照组(P<0.05);AKT激动剂SC-79削弱40μmol/L紫花牡荆素对HepG2、Hep3B的调控作用。结论:紫花牡荆素通过抑制PI3K/AKT通路抑制肝癌细胞增殖。

牡荆素鼠李糖苷通过EGFR抑制酒精引起的胃上皮细胞焦亡

目的探讨牡荆素鼠李糖苷(Vitexin-2″-o-rhamnoside,RHV)对酒精所致胃上皮细胞(human normal gastric epithelial cells,GES-1)焦亡是否有改善作用及其作用机制。方法GES-1细胞分别用不同浓度(0,200,400,600,800,1000 mmol/L)酒精干预,检测细胞存活率、焦亡相关蛋白的表达、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,筛选引起细胞焦亡的最佳干预浓度。GES-1细胞分别用800 mmol/L酒精干预0,2,4,6,8 h,CCK-8检测细胞存活率,筛选最佳干预时间。GES-1细胞分别用不同浓度RHV(5,15,30,60μmol/L)预处理,检测酒精引起的细胞存活率及焦亡相关蛋白的变化,筛选RHV的最佳干预浓度。采用网络药理学分析及分子对接预测RHV的可能作用靶点。GES-1细胞分别用酒精及联合RHV预处理干预,检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)的表达。GES-1细胞分别用不同浓度EGFR抑制剂(0,1,2,4,8,10 nmol/L)及激活剂(0,5,10,20μmol/L)处理,检测p-EGFR蛋白表达,观察核心靶点改变是否影响细胞焦亡。GES-1细胞分别用不同浓度RHV(0,15,30,60μmol/L)预处理,再用EGFR激活剂干预,检测p-EGFR的表达。Western blot和免疫荧光检测焦亡相关蛋白的表达,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH的释放量。结果酒精处理后GES-1细胞存活率呈剂量和时间依赖性降低(P<0.05),LDH释放量及cleaved caspase-1,GSDMD-N,NLRP3,IL-1β蛋白表达剂量依赖性增多(P<0.05),考虑模型的稳定性,后续实验选择800 mmol/L酒精干预4 h。RHV预处理后,酒精诱导的GES-1细胞存活率剂量依赖性升高(P<0.01),NLRP3,COX-2,cleaved caspase-1,IL-18蛋白表达剂量依赖性减少(P<0.05),RHV最佳干预浓度为60μmol/L。酒精性胃炎及牡荆素共同作用的核心靶点可能为IL-6,EGFR,IL-1β等,相关通路集中于氧化还原、代谢、受体活化及EGFR相关通路,且RHV与EGFR可能有较好结合性。与酒精单独处理比较,联合RHV预处理后p-EGFR水平升高(P<0.05)。EGFR抑制剂使酒精诱导的LDH释放量及p-EGFR,GSDMD-N,IL-1β蛋白表达剂量依赖性减少(P<0.05),而EGFR激活剂使p-EGFR和GSDMD-N表达增多(P<0.05)。30,60μmol/L RHV预处理使EGFR激活剂诱导的p-EGFR蛋白水平降低(P<0.05)。结论RHV可通过抑制EGFR磷酸化改善酒精诱导的GES-1细胞焦亡。

HPLC法测定清火胶囊中异牡荆素、异金雀花素含量

目的建立清火胶囊中异牡荆素、异金雀花素的HPLC分析方法。方法采用Waters C_(18)(250×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液(13.5∶86.5)为流动相等度洗脱,流速1mL·min^(-1),检测波长340nm。结果异牡荆素、异金雀花素分别在0.0323~0.9702μg、0.0083~0.2479μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为101.59%和98.79%,RSD分别为1.32%和1.68%(n=9);精密度、稳定性、重复性实验结果的RSD均小于1.00%。结论所建立的方法简单、稳定、灵敏,可用于清火胶囊的质量控制。

牡荆素调控PI3K/Akt通路对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的影响

目的探讨牡荆素对白介素-1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞凋亡的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养人关节软骨细胞并使用0~200μmol/L的牡荆素处理细胞,筛选最佳浓度;将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、牡荆素10μmol/L组、牡荆素50μmol/L组和牡荆素+PI3K抑制剂(LY294002)组,CCK-8法检测各组细胞增殖,流式检测细胞凋亡率,ELISA检测细胞上清液中IL-6和TNF-α的水平,硫代巴比妥酸法测定细胞上清液丙二醛(MDA)的含量,黄嘌呤氧化法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测细胞中磷酸化(p-)PI3K、PI3K、p-Akt、Akt和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-Caspase-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,IL-1β组细胞存活率、SOD活性和p-PI3K/PI3K(0.58±0.06比0.91±0.09)、p-Akt/Akt(0.15±0.03比0.69±0.08)蛋白表达水平降低,细胞凋亡率(38.21%±3.26%比2.88%±0.64%)、IL-6、TNF-α、MDA含量以及C-Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05);与IL-1β组比较,牡荆素10、50μmol/L组细胞存活率、SOD活性和p-PI3K/PI3K(0.71±0.08、0.87±0.09比0.58±0.06)、p-Akt/Akt(0.32±0.04、0.59±0.07比0.15±0.03)蛋白表达水平逐渐升高,细胞凋亡率(25.36%±2.94%、18.36%±1.95%比38.21%±3.26%)、IL-6、TNF-α、MDA含量以及C-Caspase-3蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05);与牡荆素50μmol/L组比较,牡荆素+LY294002组细胞存活率、SOD活性和p-PI3K/PI3K(0.61±0.07比0.87±0.09)、p-Akt/Akt(0.19±0.03比0.59±0.07)蛋白表达水平降低,凋亡率[(26.71%±2.78)%比(18.36%±1.95)%]、IL-6、TNF-α、MDA含量以及C-Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论牡荆素可能通过激活PI3K/AKT通路抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞的凋亡。

牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白1/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用

目的探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白1(Epac1)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路抑制大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法24只SD大鼠随机分为:假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建立MI模型,假手术组只穿线不结扎。检测大鼠心功能变化;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏病理学变化,天狼星红染色观察心脏纤维化,电镜观察心肌线粒体损伤情况;Western Blot检测Epac1、CaMKⅡ等蛋白变化。结果(1)大鼠MI 4周后,与假手术组比较MI组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)均降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)和舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)增加(P<0.01),牡荆素组大鼠心脏LVIDs、LVIDd、LVPWs和LVPWd较MI组降低,LVFS和LVEF均升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)牡荆素可降低大鼠心脏重量指数(P<0.01),并减小MI组大鼠心肌细胞横截面积,同时减轻大鼠左心室壁心肌纤维化程度(P<0.01),牡荆素组大鼠心肌胞浆内线粒体肿胀较MI组减轻,线粒体形态较完整,空泡形成较少;(3)Western Blot结果显示牡荆素抑制大鼠MI后Epac1激活(P<0.01),抑制其下游CaMKⅡ激活与细胞外调节激酶的磷酸化(P<0.01),同时可抑制B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)上调(P<0.05),上调Bcl-2(P<0.01),抑制凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase 3)的活化(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Epac1/CaMKⅡ通路,改善大鼠MI后心脏功能,抑制心肌肥大和纤维化。

加热温度对牡荆素-绿豆蛋白互作物结构和功能性的影响

为了探明在加工过程中,不同温度下牡荆素与绿豆蛋白作用形成的复合物结构和功能的变化。采用傅里叶红外光谱、扫描电镜、荧光光谱和SDS-PAGE等方法研究加热温度对牡荆素-绿豆蛋白互作物(VT-MBP)大分子结构的影响,分析VT-MBP在不同温度条件下的溶解性、乳化性、起泡性和抗氧化性等功能特性的变化。结果表明:加热温度改变了互作物的分子结构,随着温度的升高互作物二级结构中的α-螺旋、β-折叠含量降低。荧光光谱分析发现VT与MBP的互作机制为静态猝灭,且通过非共价的疏水相互作用结合。此外,在加热温度90℃时VT-MBP具有良好的乳化性、起泡性及泡沫稳定性。结论:加热温度对VT-MBP的结构和功能性具有显著影响。本研究结果为确定绿豆食品的最适加工温度以及开发功能型绿豆蛋白饮料提供理论依据。

紫花牡荆素通过上调miR-342-3p抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解

目的:探讨紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞miR-342-3p表达和糖酵解的影响,验证紫花牡荆素是否通过上调miR-342-3p表达抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解。方法:使用不同浓度(0,10,30,100 nmol/L)的紫花牡荆素处理HeLa细胞,采用紫花牡荆素(30 nmol/L)联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染HeLa细胞,随后用实时荧光定量PCR分析HeLa细胞miR-342-3p的表达水平,通过测定相对葡萄糖消耗量和相对乳酸产物,分析紫花牡荆素及紫花牡荆素联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染对宫颈癌HeLa细胞糖酵解的影响。结果:紫花牡荆素以浓度依赖方式上调HeLa细胞miR-342-3p表达水平,同时降低HeLa细胞的葡萄糖消耗量和抑制乳酸产生。此外,miR-342-3p模拟物协同紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生;相反miR-342-3p抑制物减弱紫花牡荆素上调miR-342-3p表达水平的作用和减弱紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生作用。结论:紫花牡荆素通过上调miR-342-3p表达水平抑制HeLa细胞糖酵解。

基于体外实验对牡荆素的结肠炎调控机制的研究

牡荆素是从牡荆叶子中提取出的一种天然化合物,具有多种生物活性。经研究发现牡荆素对结肠炎具有良好的调控作用,但其具体机制还有待深入探讨。文章通过建立LPS诱导的Caco-2细胞体外结肠炎模型研究牡荆素对肠上皮细胞炎症的直接调控作用机制;通过研究结肠炎患者粪便的体外发酵探讨牡荆素对肠道菌群的调控作用。细胞实验结果表明牡荆素下调了LPS导致炎症因子TNF-α和IL-1β的表达升高,提高了紧密连接蛋白Occludin的表达水平,并通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB炎症信号通路的激活发挥抑制炎症作用;体外发酵实验结果表明,牡荆素处理改善了结肠炎患者肠道菌群结构,降低了有害菌Escherichia-Shigella、Enterococcus和Clostridioides的丰度。综上所述,牡荆素可以通过抑制肠上皮细胞TLR4/MYD88/NF-κB炎症信号通路的激活和调节肠道菌群发挥结肠炎调控作用。

紫花牡荆素通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭

目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CAS处理后,MHCC97H细胞的miR-148a-3p和Wnt1 mRNA表达变化;迁移侵袭相关蛋白(MMP2、MMP9)和Wnt1蛋白表达量采用Western blot检测;Dual-Luciferase报告基因检测miR-148a-3p与Wnt13′-UTR的结合情况。结果CAS明显抑制MHCC97H细胞的生存活力,其对这种细胞的IC_(50)约为10.0μmol·L^(-1),亚细胞毒浓度的CAS(3.0μmol·L^(-1))可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力;miR-148a-3p mimic或CAS均能抑制MHCC97H细胞迁移和侵袭能力,且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用;过表达Wnt1能有效减弱CAS的抑制作用;CAS能明显上调MHCC97H细胞miR-148a-3p表达,同时Wnt1、MMP2和MMP9的表达呈现下降;Dual-Luciferase报告基因发现,miR-148a-3p可以直接靶向Wnt13′-UTR。结论CAS可通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路减弱肝癌细胞的迁移和侵袭。